三唑啉二酮加成物、三唑啉二酮加成物的制造方法、烯化合物的制造方法、及烯化合物的分析方法

摘要

本发明提供具有稳定性的三唑啉二酮加成物及其制造方法、以及烯化合物的制造方法、及烯化合物的分析方法。制成下述三唑啉二酮加成物，其能够在使用时一边恢复为三唑啉二酮化合物一边反应，并且直至使用时具有稳定性。具体而言，形成下述式(1)表示的三唑啉二酮加成物。式(1)中，R1为有机基团，A为包含至少一个芳香环的三环以上的稠环。

说明书

技术领域

本发明涉及三唑啉二酮加成物、三唑啉二酮加成物的制造方法、烯化合物的制造方法、及烯化合物的分析方法。

背景技术

近年来，血液中的维生素D、维生素D代谢物的分析的必要性越发提高。并且，作为维生素D、维生素D代谢物的分析方法，提出了使用库克森(Cookson)型衍生化试剂进行衍生化、然后对该衍生物进行分析的方法(参见专利文献1、非专利文献1～4)。

具体而言，库克森(Cookson)型衍生化试剂在温和的条件下与维生素D等二烯衍生物极快速地进行狄尔斯-阿尔德反应，定量地生成烯化合物(参见非专利文献1～4)。发挥该反应特性，使难以直接定量的维生素D等与库克森(Cookson)型衍生化试剂反应，转化为分析灵敏度高的烯化合物，然后对该烯化合物进行定量。

作为上述的库克森(Cookson)型衍生化试剂，例如，可举出PTAD(4-苯基-1，2，4-三唑啉-3，5-二酮)、DAPTAD(4-(4’-二甲基氨基苯基)-1，2，4-三唑啉-3，5-二酮)等三唑啉二酮化合物。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开2015-166740号公报

非专利文献

非专利文献1：S.Ogawa等人，Rapid Commun.Mass Spectrom，27(2013)2453-2460

非专利文献2：S.Ogawa等人，Biomed.Chromatgr.，30(2016)938-945

非专利文献3：S.Ogawa等人，J.Pharm.Biomed.Anal.，136(2017)126-133

非专利文献4：K.D.Bruycker等人，Chem.Rev.，116(2016)3919-3974

发明内容

发明要解决的课题

然而，三唑啉二酮化合物不稳定，在分离的过程伴有高比率的分解。另外，分离后的稳定性也低，因此处于作为化合物的处理性也低的状况。因此，为了以制造原料或定量试剂的形式处理三唑啉二酮化合物，要求更高的稳定性。

本发明是鉴于上述背景技术而做出的，其目的在于提供具有稳定性的三唑啉二酮加成物及其制造方法、以及使用该三唑啉二酮加成物的烯化合物的制造方法、及二烯化合物的分析方法。

另外，本发明的目的在于提供从三唑烷二酮化合物(其为三唑啉二酮化合物的前体)稳定性高地制造来自三唑啉二酮化合物的烯化合物的方法。

用于解决课题的手段

已知三唑啉二酮化合物与蒽等多环式芳香族烃可逆地进行狄尔斯-阿尔德反应而生成加成物(例如，参见N.Roy等人，Chem.Asian.J，6(2011)2419-2425，V.D.Kiseleva等，Russ.J.Phys.Chem.A，88(2014)2073-2080等)。即，暂时得到的三唑啉二酮加成物通过加热而发生恢复为起始原料的三唑啉二酮化合物和多环式芳香族烃的反应(逆狄尔斯-阿尔德反应)。

本申请的发明人着眼于上述特性，发现通过将不稳定的三唑啉二酮化合物转化为稳定的加成物，并在使用时一边恢复至三唑啉二酮化合物一边反应，从而能够确保三唑啉二酮化合物的稳定性，由此完成了本发明。

另外，本申请的发明人发现，若使用三唑烷二酮化合物(其为三唑啉二酮化合物的前体)在体系内生成三唑啉二酮化合物之后、立即与二烯反应，则能够稳定性高地制造烯化合物，从而完成了本发明。

即本发明为下述式(1)表示的三唑啉二酮加成物。

[化学式1]

(式中，R

上述式(1)中的R

可以为下述式(2)表示的三唑啉二酮加成物。

[化学式2]

(式中，R

可以为下述式(3)表示的三唑啉二酮加成物。

[化学式3]

(式中，R

本发明的另一方案为三唑啉二酮加成物的制造方法，其中，将下述式(4)表示的三唑啉二酮化合物和含有至少两个芳香环的稠环化合物供于狄尔斯-阿尔德反应，从而得到三唑啉二酮加成物。

[化学式4]

(式中，R

上述三唑啉二酮加成物的制造方法还可以包括对上述三唑啉二酮加成物进行纯化的纯化工序。

本发明的另一方案为三唑啉二酮加成物的制造方法，其中，使下述式(7)表示的三唑烷二酮化合物与含有至少两个芳香环的稠环化合物在氧化剂的存在下反应，从而得到三唑啉二酮加成物。

[化学式5]

(式中，R

上述氧化剂可以为高价碘化合物。

上述氧化剂可以为下述式(8)表示的高价碘化合物。

[化学式6]

(式中，X及Y合并为一个氧原子、或者彼此相同或不同地为选自由羟基、烷氧基、酰基氧基、酰基氨基、对甲苯磺酰基氨基、甲磺酰基氨基、磺酰基氧基、及卤素基团组成的组中的基团，Ar表示选自由苯基、杂环基、及被烷基、烷氧基、卤素基团等取代的苯基组成的组中的基团。)

上述三唑啉二酮加成物的制造方法还可以包括对上述三唑啉二酮加成物进行纯化的纯化工序。

本发明的另一方案为烯化合物的制造方法，其中，使下述式(1)表示的三唑啉二酮加成物与下述式(5)表示的二烯化合物反应，从而得到下述式(6)表示的烯化合物。

[化学式7]

(式中，R

[化学式8]

(式中，R

[化学式9]

(式中，R

本发明的另一方案为烯化合物的分析方法，其中，使下述式(1)表示的三唑啉二酮加成物与下述式(5)表示的二烯化合物反应而得到下述式(6)表示的烯化合物，然后对得到的该烯化合物进行分析。

[化学式10]

(式中，R

[化学式11]

(式中，R

[化学式12]

(式中，R

上述分析可以为使用高效液相色谱的方法。

上述二烯化合物可以为维生素D3或25-羟基维生素D3。

本发明的另一方案为烯化合物的制造方法，其中，使下述式(7)表示的三唑烷二酮化合物与下述式(5)表示的二烯化合物在氧化剂的存在下反应，从而得到下述式(6)表示的烯化合物。

[化学式13]

(式中，R

[化学式14]

(式中，R

[化学式15]

(式中，R

上述氧化剂可以为高价碘化合物。

上述氧化剂可以为下述式(8)表示的高价碘化合物。

[化学式16]

(式中，X及Y合并为一个氧原子、或者彼此相同或不同地为选自由羟基、烷氧基、酰基氧基、酰基氨基、对甲苯磺酰基氨基、甲磺酰基氨基、磺酰基氧基、及卤素基团组成的组中的基团，Ar表示选自由苯基、杂环基、及被烷基、烷氧基、卤素基团等取代的苯基组成的组中的基团。)

本发明的另一方案是烯化合物的分析方法，其中，使下述式(7)表示的三唑烷二酮化合物与下述式(5)表示的二烯化合物在氧化剂的存在下反应而得到下述式(6)表示的烯化合物，然后对得到的该烯化合物进行分析。

[化学式17]

(式中，R

[化学式18]

(式中，R

[化学式19]

(式中，R

上述氧化剂可以为高价碘化合物。

上述氧化剂可以为下述式(8)表示的高价碘化合物。

[化学式20]

(式中，X及Y合并为一个氧原子、或者彼此相同或不同地为选自由羟基、烷氧基、酰基氧基、酰基氨基、对甲苯磺酰基氨基、甲磺酰基氨基、磺酰基氧基、及卤素基团组成的组中的基团，Ar表示选自由苯基、杂环基、及被烷基、烷氧基、卤素基团等取代的苯基组成的组中的基团。)

上述分析可以为使用高效液相色谱的方法。

上述二烯化合物可以为维生素D3或25-羟基维生素D3。

发明的效果

本发明的三唑啉二酮加成物是下述化合物，其能够在使用时一边恢复为三唑啉二酮化合物一边反应，并且直至使用时维持稳定性。因此，能够使不稳定的三唑啉二酮化合物的稳定性提高，能够提高三唑啉二酮化合物的处理性。

另外，本发明的三唑啉二酮加成物通过加热容易恢复为三唑啉二酮化合物，并与二烯化合物反应而生成分析灵敏度高的烯化合物。因此，本发明的三唑啉二酮加成物是作为二烯化合物的定量试剂非常有意义的化合物。

此外，由于本发明的三唑啉二酮加成物为三唑啉二酮化合物的等价体，因此除了上述二烯化合物的定量试剂外，还可以用于各种烯化合物的制造。

另外，若使用三唑烷二酮化合物(其为三唑啉二酮化合物的前体)，将三唑烷二酮化合物与二烯一同加入而进行氧化反应，则能够在体系内一边生成三唑啉二酮化合物一边立即与二烯反应，从而得到烯化合物。由此，能够削减作为不稳定的三唑啉二酮化合物存在的时间，能够高产率地得到来自三唑啉二酮化合物的烯化合物。

具体实施方式

以下，对本发明的实施方式进行说明。需要说明的是，以下说明的实施方式并不限定本发明。

＜三唑啉二酮加成物的制造方法(1)＞

本发明的第1三唑啉二酮加成物的制造方法是使下述式(4)表示的三唑啉二酮化合物与含有至少两个芳香环的稠环化合物进行狄尔斯-阿尔德反应而得到三唑啉二酮加成物的、三唑啉二酮加成物的制造方法。

[化学式21]

(式中，R

[三唑啉二酮化合物]

上述式(4)中的R

进一步优选地，上述式(4)中的R

此外，上述式(4)中的R

因此，作为本发明的第1三唑啉二酮加成物的制造方法中使用的三唑啉二酮化合物，特别优选选自由4-苯基-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(PTAD)、4-甲基-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(MTAD)、4-[2-(6,7-二甲氧基-4-甲基-3-氧代-3,4-二氢喹喔啉基)乙基]-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(DMEQTAD)、4-(4-硝基苯基)-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(NPTAD)、4-二茂铁基甲基-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(FMTAD)、4-(6-喹啉基)-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(QTAD)、4-(4’-二乙基氨基苯基)-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(DEAPTAD)、4-(4’-二甲基氨基苯基)-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(DAPTAD)、及4-(4’-二甲基氨基甲基苯基)-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮组成的组中的化合物。这些化合物可成为库克森型衍生化试剂。

此外，上述式(1)中的R

[含有至少两个芳香环的稠环化合物]

作为含有至少两个芳香环的稠环化合物，例如可举出具有以下骨架的化合物。本发明中，具有这些骨架的稠环化合物的一部分氢可以被选自由可具有取代基的碳原子数为1～20的烷基、芳烷基、链烯基、苯基、酰基、卤素基团、可具有取代基的氨基、硝基、及杂环基组成的组中的取代基所取代。作为选自由烷基、芳烷基、链烯基、苯基、酰基、卤素基团、可具有取代基的氨基、硝基、及杂环基组成的组中的取代基可具有的取代基，例如，可举出：甲基、乙基、丙基、丁基、异丁基、叔丁基、氯甲基、2-氯乙基、3-氯丙基、2-氯丙基、1-氯丙基、溴甲基、2-溴乙基、3-溴丙基、2-溴丙基、1-溴丙基等烷基；苄基、苯乙基、3-苯基丙基、4-甲基苄基、4-甲基苯乙基等芳烷基；乙烯基、烯丙基、丙烯基、环丙烯基、2-氯乙烯基、3-氯烯丙基、肉桂基、苯乙烯基等链烯基；苯基、甲苯基、二甲苯基、三苯甲基等苯基；甲酰基、乙酰基、丙酰基、苯甲酰基、丙烯酰基、甲基丙烯酰基等酰基；氯基、溴基、氟基、碘基等卤素基团；氨基、甲基氨基、二甲基氨基、乙基氨基、二乙基氨基等氨基；硝基；喹啉基、吡啶基、吡咯烷基、吡咯基、呋喃基、噻吩基、二甲基吡啶基等杂环基；等等。另外，选自碳原子数为1～20的环状烷基、苯基及杂环基中的至少一种可以与具有这些骨架的稠环化合物稠合。

[化学式22]

[反应条件]

(反应溶剂)

第1三唑啉二酮加成物的制造方法中，作为将上述式(4)表示的三唑啉二酮化合物与含有至少两个芳香环的稠环化合物供于狄尔斯-阿尔德反应时使用的溶剂，优选为选自由酯类、含有卤素的烃类、芳香族烃类、酮类、酰胺类、烷基腈类、二烷基醚类、及脲类组成的组中的至少一种。需要说明的是，也可以将反应的二烯化合物本身用作溶剂。

上述式(4)表示的三唑啉二酮化合物与含有至少两个芳香环的稠环化合物的狄尔斯-阿尔德反应是可逆反应。因此，为了使反应向产物体系平衡移动，优选能够使产物结晶化的溶剂。即，在三唑啉二酮加成物的制造中，优选选择使加成物结晶化的溶剂，而在三唑啉二酮加成物与二烯化合物的反应中，优选选择将加成物溶解的溶剂。

例如，可举出乙酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸丁酯、乙酸异丙酯、四氢呋喃(THF)、2-甲基四氢呋喃(2-甲基THF)、1,4-二氧杂环己烷、叔丁基甲基醚、1,2-二甲氧基乙烷、二甘醇二甲醚、丙酮、二乙基酮、甲基乙基酮、二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、1,2-二氯乙烷、氯苯、甲苯、二甲苯、均三甲苯、二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基乙酰胺(DMA)、二甲基亚砜(DMSO)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)、1,3-二甲基-2-咪唑啉酮(DMI)等非质子性溶剂，这些非质子性溶剂可以单独使用或者以混合溶剂的形式使用。

这些之中，从产物的结晶性、产率、稳定性、安全性、价格的观点考虑，优选使用选自由二氯甲烷、氯仿、乙腈、1,2-二甲氧基乙烷、甲苯、氯苯、及乙酸乙酯组成的组中的至少一种。

相对于1质量份的反应基质而言，反应中使用的溶剂的量优选为5～1000体积量。

(反应温度)

上述式(4)表示的三唑啉二酮化合物与含有至少两个芳香环的稠环化合物反应的温度优选在-10～60℃的范围内，进一步优选在0～40℃的范围内。

(反应时间)

另外，上述式(4)表示的三唑啉二酮化合物与含有至少两个芳香环的稠环化合物反应的时间优选为10分钟～48小时，进一步优选在1～10小时的范围内。

(装料量)

在上述式(4)表示的三唑啉二酮化合物与含有至少两个芳香环的稠环化合物的反应时，相对于1当量的三唑啉二酮化合物而言，稠环化合物的使用量优选在1.0～10000当量的范围内。

(其他)

出于将因反应而产生的水除去的目的，可以在反应溶剂中添加分子筛等脱水剂来实施反应。

[晶析条件]

第1三唑啉二酮加成物的制造方法中，使上述式(4)表示的三唑啉二酮化合物与含有至少两个芳香环的稠环化合物反应而得到三唑啉二酮加成物，就得到的三唑啉二酮加成物而言，也可以使其晶析而以固体形式得到。

(晶析溶剂)

作为用于使所得到的三唑啉二酮加成物晶析的溶剂，例如，可举出二氯甲烷、氯仿、二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、二甲基亚砜、乙腈、1,2-二甲氧基乙烷、甲苯、二甲苯、氯苯、均三甲苯、乙酸乙酯、己烷、庚烷、戊烷、环戊烷、环己烷、异己烷、异辛烷、癸烷等非质子性溶剂、以及水、甲醇、乙醇、2-丙醇、2-丁醇、丁醇等质子性溶剂，这些溶剂可以单独使用或以混合溶剂的形式使用。

相对于得到的三唑啉二酮加成物1质量份而言，晶析中使用的溶剂的量优选为5～1000体积量。

(晶析温度)

使三唑啉二酮加成物晶析的温度优选在-10～40℃的范围内。

(晶析时间)

另外，使三唑啉二酮加成物晶析的时间优选为30分钟～24小时，进一步优选为1～10小时的范围。

[纯化工序]

第1三唑啉二酮加成物的制造方法还可以包括对得到的三唑啉二酮加成物进行纯化的纯化工序。作为纯化方法，没有特别限定，例如，可举出硅胶柱色谱。作为洗脱溶剂，可以使用低极性溶剂与高极性溶剂的混合溶剂。作为低极性溶剂，例如，可举出己烷、庚烷等，作为高极性溶剂，例如，可举出乙酸乙酯、四氢呋喃等。

＜三唑啉二酮加成物的制造方法(2)＞

本发明的第2三唑啉二酮加成物的制造方法是使下述式(7)表示的三唑烷二酮化合物与含有至少两个芳香环的稠环化合物在氧化剂的存在下反应而得到三唑啉二酮加成物的、三唑啉二酮加成物的制造方法。

[化学式23]

(式中，R

[三唑烷二酮化合物]

第2三唑啉二酮加成物的制造方法中，作为起始物质的上述式(7)的化合物为含有尿唑基的三唑烷二酮化合物，即，为具有1,2,4-三唑烷-3,5-二酮基的三唑烷二酮化合物。

上述式(7)中的R

进一步优选地，上述式(7)中的R

特别优选地，上述式(7)中的R

其中，作为本发明的第2三唑啉二酮加成物的制造方法中使用的三唑烷二酮化合物，最优选4-(4’-二甲基氨基苯基)-1,2,4-三唑烷-3,5-二酮(DMU)、或4-(4’-二甲基氨基甲基苯基)-1,2,4-三唑烷-3,5-二酮。

[氧化剂]

就第2三唑啉二酮加成物的制造方法中使用的氧化剂而言，只要能够使上述式(7)表示的三唑烷二酮化合物与含有至少两个芳香环的稠环化合物反应而生成三唑啉二酮加成物即可，没有特别限定，优选为高价碘化合物。若为高价碘化合物，则能够将三唑烷二酮化合物顺利地转化为三唑啉二酮加成物。

此外，高价碘化合物中，更优选下述式(8)表示的化合物。

[化学式24]

(式中，X及Y合并为一个氧原子、或者彼此相同或不同地为选自由羟基、烷氧基、酰基氧基、酰基氨基、对甲苯磺酰基氨基、甲磺酰基氨基、磺酰基氧基、及卤素基团组成的组中的基团，Ar表示选自由苯基、杂环基、及被烷基、烷氧基、卤素基团等取代的苯基组成的组中的基团。)

作为上述式(8)表示的化合物，例如，可举出亚碘酰苯、二乙酸碘苯、二(三氟甲磺酸)碘苯、二对甲苯磺酸碘苯、二甲磺酸碘苯、二氯碘苯、二溴碘苯等。这些之中，从产率、稳定性、价格的观点考虑，特别优选亚碘酰苯、或二乙酸碘苯。

相对于作为起始原料的三唑烷二酮化合物而言，氧化剂的使用量优选为1～10摩尔当量，进一步优选为1～5摩尔当量。若为1～5摩尔当量的范围，则容易将反应后存在的氧化剂及其分解物除去，因此优选。

[含有至少两个芳香环的稠环化合物]

作为第2三唑啉二酮加成物的制造方法中可使用的含有至少两个芳香环的稠环化合物，与上述第1三唑啉二酮加成物的制造方法中使用的同样。

[反应条件]

(反应溶剂)

第2三唑啉二酮加成物的制造方法中，上述式(7)表示的三唑烷二酮化合物与含有至少两个芳香环的稠环化合物在氧化剂的存在下反应时使用的溶剂与上述的第1三唑啉二酮加成物的制造方法中使用的溶剂同样。另外，其使用量也与上述的第1三唑啉二酮加成物的制造方法同样。

(反应温度)

上述式(7)表示的三唑烷二酮化合物与含有至少两个芳香环的稠环化合物反应的温度与上述的第1三唑啉二酮加成物的制造方法同样。

(反应时间)

另外，上述式(7)表示的三唑烷二酮化合物与含有至少两个芳香环的稠环化合物反应的时间与上述的第1三唑啉二酮加成物的制造方法同样。

(装料量)

在上述式(7)表示的三唑烷二酮化合物与含有至少两个芳香环的稠环化合物的反应时，稠环化合物的使用量与上述的第1三唑啉二酮加成物的制造方法同样。

(其他)

与上述的第1三唑啉二酮加成物的制造方法同样地，出于将因反应而产生的水除去的目的，可以在反应溶剂中添加分子筛等脱水剂来实施反应。

[晶析条件]

与第1三唑啉二酮加成物的制造方法同样地，第2三唑啉二酮加成物的制造方法也可以使得到的三唑啉二酮加成物晶析而以固体形式得到。晶析中使用的溶剂的种类、其使用量、晶析温度、晶析时间与第1三唑啉二酮加成物的制造方法同样。

[纯化工序]

第2三唑啉二酮加成物的制造方法还可以包括对得到的三唑啉二酮加成物进行纯化的纯化工序。作为纯化方法，没有特别限定，可以与上述的第1三唑啉二酮加成物的制造方法同样。

＜三唑啉二酮加成物＞

本发明的三唑啉二酮加成物为下述式(1)表示的三唑啉二酮加成物。

[化学式25]

(式中，R

本发明的三唑啉二酮加成物通过加热而发生恢复至作为起始原料的、上述式(4)表示的三唑啉二酮化合物和含有至少两个芳香环的稠环化合物的反应(逆狄尔斯-阿尔德反应)。因此，成为下述化合物：使用时一边恢复至三唑啉二酮化合物一边进行反应，并且直至使用时维持稳定性。

恢复反应中的温度在-78～200℃的范围内，反应时间在0.01～48小时的范围内。作为对利用逆狄尔斯-阿尔德反应从三唑啉二酮加成物生成三唑啉二酮化合物的最佳溶剂，例如，可举出乙腈、乙酸乙酯、二氧杂环己烷、丙酮等。逆狄尔斯-阿尔德反应中，三唑啉二酮加成物的浓度越高则越能够以高浓度生成三唑啉二酮化合物，因此三唑啉二酮加成物的浓度优选为1mmol/L以上，更优选为5mmol/L以上、特别优选为10mmol/L以上。另外，逆狄尔斯-阿尔德反应为吸热反应，因此高温时有利于三唑啉二酮化合物的生成。

上述式(1)表示的本发明的三唑啉二酮加成物可利用上述的本发明的三唑啉二酮加成物的制造方法得到。

上述式(1)中的R

作为本发明的三唑啉二酮加成物，例如，可举出下述式(2)表示的化合物。

[化学式26]

(式中，R

上述R

另外，作为本发明的三唑啉二酮加成物，例如，可举出下述式(3)表示的化合物。

[化学式27]

(式中，R

上述R

＜烯化合物的制造方法(1)＞

本发明的第1烯化合物的制造方法是使上述式(1)表示的三唑啉二酮加成物与下述式(5)表示的二烯化合物反应而得到下述式(6)表示的烯化合物的、烯化合物的制造方法。

[化学式28]

(式中，R

[化学式29]

(式中，R

就上述式(5)及式(6)中的R

[二烯化合物]

从产物的有用性、产率、安全性、价格的观点考虑，上述式(5)表示的二烯化合物优选为选自由高分子或低分子的天然产物、包含医药品的生理活性化合物、功能性材料、及它们的中间体组成的组中的化合物。作为这样的化合物，例如，可举出具有取代基的蒽衍生物、喹啉衍生物、维生素、氨基酸、类固醇等。

[反应条件]

(反应溶剂)

作为上述式(1)表示的三唑啉二酮加成物与上述式(5)表示的二烯化合物反应时使用的溶剂，可以使用与上述的本发明的第1三唑啉二酮加成物的制造方法中、上述式(4)表示的三唑啉二酮化合物与含有至少两个芳香环的稠环化合物反应时使用的溶剂同样的溶剂。

如上文所述，上述式(4)表示的三唑啉二酮化合物与含有至少两个芳香环的稠环化合物的狄尔斯-阿尔德反应为可逆反应。因此，为了使反应向产物体系平衡移动，优选能够使产物结晶化的溶剂。即，在上述的三唑啉二酮加成物的制造中，优选选择使加成物结晶化的溶剂，在使上述式(1)表示的三唑啉二酮加成物与上述式(5)表示的二烯化合物反应而得到烯化合物的反应中，优选选择将加成物溶解的溶剂。

本发明的第1烯化合物的制造方法中，从溶解性、沸点、产率、安全性、价格的观点考虑，优选使用选自由氯仿、乙腈、1,2-二甲氧基乙烷、乙酸乙酯、二甲基亚砜(DMSO)组成的组中的至少一种。

相对于1质量份的反应基质而言，反应中使用的溶剂的量优选为5～1000体积量。

(反应温度)

上述式(1)表示的三唑啉二酮加成物与上述式(5)表示的二烯化合物反应的温度优选在20～350℃的范围内，进一步优选在40～200℃的范围内。

(反应时间)

另外，上述式(1)表示的三唑啉二酮加成物与上述式(5)表示的二烯化合物反应的时间优选为1分钟～12小时，进一步优选在1分钟～8小时的范围内。

(装料量)

在上述式(1)表示的三唑啉二酮加成物与上述式(5)表示的二烯化合物的反应时，就上述式(5)表示的二烯化合物的使用量而言，相对于1当量的三唑啉二酮加成物，上述式(5)表示的二烯化合物优选在1～10当量的范围内，进一步优选在1～5当量的范围内。

＜烯化合物的分析方法(1)＞

本发明的第1烯化合物的分析方法是下述二烯化合物的分析方法，其中，使上述式(5)表示的二烯化合物与上述式(1)表示的三唑啉二酮加成物反应而得到上述式(6)表示的烯化合物，然后对得到的该烯化合物进行分析。

(分析方法)

作为分析方法，没有特别限定，从测定的灵敏度、精度、容易性的观点考虑，优选使用质谱或高效液相色谱的方法。

(二烯化合物)

本发明的第1烯化合物的分析方法中能够应用的二烯化合物没有特别限定，从本发明的上述式(1)表示的三唑啉二酮加成物能够作为库克森(Cookson)型衍生化试剂发挥作用的方面考虑，优选维生素D3或25-羟基维生素D3。

＜烯化合物的制造方法(2)＞

本发明的第2烯化合物的制造方法是使上述式(7)表示的三唑烷二酮化合物与上述式(5)表示的二烯化合物在氧化剂的存在下反应而得到上述式(6)表示的烯化合物的、烯化合物的制造方法。

〔反应式〕

以下示出本发明的第2烯化合物的制造方法的代表性反应式。需要说明的是，以下为本发明的一例，本发明不限于以下内容。

[化学式30]

[三唑烷二酮化合物]

本发明的第2烯化合物的制造方法中，作为起始物质的上述式(7)的化合物与作为上述本发明的第2三唑啉二酮加成物的制造方法的起始物质的化合物同样。

因此，本发明的第2烯化合物的制造方法中，作为通过氧化反应而在体系内生成的三唑啉二酮化合物，特别优选选自由4-苯基-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(PTAD)、4-甲基-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(MTAD)、4-[2-(6,7-二甲氧基-4-甲基-3-氧代-3,4-二氢喹喔啉基)乙基]-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(DMEQTAD)、4-(4-硝基苯基)-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(NPTAD)、4-二茂铁基甲基-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(FMTAD)、4-(6-喹啉基)-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(QTAD)、4-(4’-二乙基氨基苯基)-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(DEAPTAD)、4-(4’-二甲基氨基苯基)-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(DAPTAD)、及4-(4’-二甲基氨基甲基苯基)-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮组成的组中的化合物。

[二烯化合物]

上述式(5)表示的二烯化合物与上述的本发明的第1烯化合物的制造方法中使用的化合物同样。

[氧化剂]

就本发明的第2烯化合物的制造方法中使用的氧化剂而言，只要能够使上述式(7)表示的三唑烷二酮化合物与上述式(5)表示的二烯化合物反应而生成上述式(6)表示的烯化合物即可，没有特别限定，优选与上述的本发明的第2三唑啉二酮加成物的制造方法中使用的化合物同样。即，优选高价碘化合物，在高价碘化合物中，进一步更优选上述式(4)表示的化合物。

关于氧化剂的使用量，也与上述的本发明的第1烯化合物的制造方法同样，相对于作为起始原料的三唑烷二酮化合物而言，优选为1～10摩尔当量，进一步优选为1～5摩尔当量。

[反应条件]

(反应溶剂)

作为本发明的第2烯化合物的制造方法中使用的溶剂，可以使用与上述的第1三唑啉二酮加成物的制造方法中、使上述式(4)表示的三唑啉二酮化合物与含有至少两个芳香环的稠环化合物反应时使用的溶剂同样的溶剂。

其中，从氧化反应的促进、相对于氧化反应的稳定性、及生成的烯化合物的稳定性的观点考虑，优选使用选自由二氯甲烷、乙腈、1,2-二甲氧基乙烷、四氢呋喃(THF)、甲苯、乙酸乙酯、氯苯、及二甲基亚砜(DMSO)组成的组中的至少一种。

相对于1质量份的反应基质而言，反应中使用的溶剂的量优选为1～5000体积量。

(反应温度)

上述式(7)表示的三唑烷二酮化合物与上述式(5)表示的二烯化合物反应的温度优选在-10～60℃的范围内，进一步优选在10～40℃的范围内。

(反应时间)

另外，上述式(7)表示的三唑烷二酮化合物与上述式(5)表示的二烯化合物反应的时间优选在30分钟～48小时的范围内，进一步优选在1～10小时的范围内。

(装料量)

在上述式(7)表示的三唑烷二酮化合物与上述式(5)表示的二烯化合物的反应时，就上述式(5)表示的二烯化合物的使用量而言，与上述的第1三唑啉二酮加成物的制造方法同样地，相对于1当量三唑烷二酮化合物而言，优选二烯化合物在1～10摩尔当量的范围内，进一步优选在1～5摩尔当量的范围内。

实施例

接着，对本发明的实施例进行说明，但本发明并不限定于这些实施例。

＜实施例1＞

[蒽加成物(DAP-A)的合成]

在遮光容器中，将蒽81mg(0.45mmol)溶解于干燥乙腈10mL中，得到溶解有蒽的乙腈溶液。进一步加入4-(4’-二甲基氨基苯基)-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(DAPTAD)98.2mg(0.45mmol)，于20℃搅拌4小时，得到悬浮液。

将得到的悬浮液过滤，对固体进行己烷洗涤，然后进行干燥，由此得到三唑啉二酮加成物。得到的三唑啉二酮加成物为5,10-二氢-2-(4-二甲基氨基苯基)-5,10[1’,2’]-苯并-1H-[1,2,4]三唑并[1,2-b]酞嗪-1,3(2H)-二酮(DAP-A)，75mg，产率为42％。

〔反应式〕

以下示出实施例1中实施的反应式。

[化学式31]

〔物性评价〕

对得到的DAP-A实施各种分析。将结果示于以下。

Mp：217～218℃

IR(KBr)：1780，1717cm

δ7.20-7.75(m，8H)，

6.50-7.15(m，4H)，

6.25(s，2H)，

3.00(s，6H)

＜实施例2＞

[9-甲基蒽加成物(DAP-MA)的合成]

在遮光容器中，将9-甲基蒽87mg(0.45mmol)溶解于干燥乙腈5mL中，得到溶解有9-甲基蒽的乙腈溶液。进一步加入4-(4’-二甲基氨基苯基)-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(DAPTAD)98.2mg(0.45mmol)，于20℃搅拌2小时，得到悬浮液。

将得到的悬浮液过滤，对固体进行己烷洗涤，然后进行干燥，由此得到三唑啉二酮加成物。得到的三唑啉二酮加成物为5,10-二氢-2-(4-二甲基氨基苯基)-5-甲基-5,10[1’,2’]-苯并-1H-[1,2,4]三唑并[1,2-b]酞嗪-1,3(2H)-二酮(DAP-MA)，95mg，产率为51.4％。

〔反应式〕

以下示出实施例2中实施的反应式。

[化学式32]

〔物性评价〕

对得到的DAP-MA实施各种分析。将结果示于以下。

Mp：＞218℃

IR(KBr)：1765，1708cm

δ7.10-7.75(m，8H)，

6.50-7.20(m，4H)，

6.25(s，1H)，

3.00(s，3H)，

2.70(s，3H)

＜实施例3＞

[9-苯基蒽加成物(DAP-PA)的合成]

在遮光容器中，将9-苯基蒽0.50g(1.97mmol)溶解于二氯甲烷50mL中，得到溶解有9-苯基蒽的二氯甲烷溶液。进一步加入分子筛

将得到的反应液过滤，向滤液中加入己烷100mL，在冰冷却下搅拌2小时，接着，进行过滤而将不溶物滤除。向得到的滤液中加入己烷200mL，于室温搅拌30分钟。将析出的晶体过滤、减压干燥，由此得到三唑啉二酮加成物。得到的三唑啉二酮加成物为5,10-二氢-2-(4-二甲基氨基苯基)-5-苯基-5,10[1’,2’]-苯并-1H-[1,2,4]三唑并[1,2-b]酞嗪-1,3(2H)-二酮(DAP-PA)，0.54g，产率为58.6％。

〔反应式〕

以下示出实施例3中实施的反应式。

[化学式33]

〔物性评价〕

对得到的DAP-PA实施各种分析。将结果示于以下。

Mp：＞200℃

IR(KBr)：1774，1714cm

δ6.25-8.10(m，17H)，

2.80(s，6H)

＜实施例4＞

[9,10-二苯基蒽加成物(DAP-DPA)的合成]

在遮光容器中，将9,10-苯基蒽0.75g(2.27mmol)溶解于甲苯75mL中，得到溶解有9,10-二苯基蒽的甲苯溶液。进一步加入4-(4’-二甲基氨基苯基)-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(DAPTAD)0.495g(2.27mmol)，于室温搅拌3小时，得到反应液。

将得到的反应液过滤，用硅胶柱(甲苯～甲苯/乙酸乙酯＝10：1)对滤液进行纯化，由此得到三唑啉二酮加成物。得到的三唑啉二酮加成物为12-二氢-2-(4-二甲基氨基苯基)-6,11-二苯基-5,12-亚乙烯基-1H-苯并[g][1,2,4]三唑并[1,2-b]酞嗪-1,3(2H)-二酮(DAP-DPA)，43mg，产率为3.4％。

〔反应式〕

以下示出实施例4中实施的反应式。

[化学式34]

〔物性评价〕

对得到的DAP-DPA实施各种分析。将结果示于以下。

Mp：＞200℃

IR(KBr)：1764，1705cm

δ7.30-8.00(m，16H)，

6.70-7.30(m，4H)，

5.50-5.80(m，2H)，

2.90(s，6H)

＜实施例5＞

[9-甲基蒽加成物(DAP-MA)与TTB的反应(烯化合物的合成)]

将9-甲基蒽加成物(DAP-MA)10mg(0.024mmol)和反式,反式-二苯基丁二烯(TTB)10mg(0.048mmol)溶解于二甲基亚砜(DMSO)0.2g中，得到DMSO溶液。

将得到的DMSO溶液于120℃搅拌3小时，结果生成了作为烯化合物的TTB-DAPTAD加成物、即顺式-2-(4-二甲基氨基苯基)-5,8-二苯基-1H-[1,2,4]三唑并[1,2-a]哒嗪-1,3(2H)-二酮(DAPTAC)。关于转化率，按以下的条件进行高效液相色谱(HPLC)分析，结果为60％。

(分析条件)

试样浓度：0.05％

进样量：1.0μL

波长：254nm

流速：1.0mL/min

流动相：0～15min(CH

15～20min(CH

柱温：30℃

填充剂：X Bridge C18 5μm(4.6×150)

保留时间：DAPTAC：7.2min

TTB：11.4min

将反应液浓缩，通过硅胶柱色谱(洗脱溶剂：乙酸乙酯)对浓缩残渣进行纯化，得到DAPTAC的纯品。

〔反应式〕

以下示出实施例5中实施的反应式。

[化学式35]

〔物性评价〕

对得到的DAPTAC，实施各种分析。将结果示于以下。

Mp：174～177℃

IR(KBr)：1772，1700cm

δ7.10-7.75(m，12H)，

6.50-6.85(m，2H)，

6.00(s，2H)，

5.51(s，2H)，

2.90(s，6H)

＜实施例6＞

[9-苯基蒽加成物(DAP-PA)与维生素D3的反应(烯化合物的合成)]

将9-苯基蒽加成物(DAP-PA)50mg(0.106mmol)和维生素D340mg(0.103mmol)溶解于1,2-二甲氧基乙烷(DME)5mL中，得到DME溶液。将得到的DME溶液于70℃搅拌5小时，得到反应液。

将得到的反应液在与实施例5相同的条件下进行高效液相色谱(HPLC)分析，结果，作为烯化合物的维生素D3加成物、即(5S,7S)-2-[4-(二甲基氨基)苯基]-5-[(E)-[(1R,3as,7aR)-1-[(1R)-1,5-二甲基己基]八氢-7a-甲基-4H-茚-4-亚基]甲基]-5,6,7,8,9,10-六氢-7-羟基-1H-[1,2,4]三唑并[1,2-b]酞嗪-1,3(2H)-二酮以51.4mg(产率82.7％)而含有。另外，维生素D3以2.44mg(回收率：6.1％)而含有。

将得到的反应液减压浓缩，通过硅胶柱(洗脱溶剂：己烷/乙酸乙酯＝4/1→2/1)对浓缩残渣进行纯化，由此将维生素D3加成物分离。

〔反应式〕

以下示出实施例6中实施的反应式。

[化学式36]

〔物性评价〕

对得到的维生素D3加成物实施各种分析。将结果示于以下。

Mp：125～129℃

IR(KBr)1762，1697cm

δ7.25(d，J＝15Hz，2H)，

6.75(d，J＝15Hz，2H)，

4.75-5.25(m，2H)，

3.75-4.30(m，2H)，

3.00(s，6H)，

0.25-2.25(m，40H)

＜实施例7＞

[9,10-二苯基蒽加成物(DAP-DPA)与维生素D3的反应(烯化合物的合成)]

将9,10-二苯基蒽加成物(DAP-DPA)50mg(0.106mmol)和维生素D3 40mg(0.103mmol)溶解于1,2-二甲氧基乙烷(DME)5mL中，得到DME溶液。将得到的DME溶液于70℃搅拌5小时，得到反应液。

将得到的反应液按以下的条件进行高效液相色谱(HPLC)分析，结果，作为烯化合物的维生素D3加成物、即(5S,7S)-2-[4-(二甲基氨基)苯基]-5-[(E)-[(1R,3as,7aR)-1-[(1R)-1,5-二甲基己基]八氢-7a-甲基-4H-茚-4-亚基]甲基]-5,6,7,8,9,10-六氢-7-羟基-1H-[1,2,4]三唑并[1,2-b]酞嗪-1,3(2H)-二酮以51.4mg(产率82.7％)而含有。需要说明的是，维生素D3以2.44mg(回收率：6.1％)而含有。

(分析条件)

试样浓度：0.05％

进样量：1.0μL

波长：254nm

流速：1.0mL/min

流动相：0～15min(CH

15～20min(CH

柱温：30℃

填充剂：X Bridge C18 5μm(4.6×150)

保留时间：维生素D3加成物：13.2min

维生素D3：18.7min

〔反应式〕

以下示出实施例7中实施的反应式。

[化学式37]

＜实施例8＞

[9-苯基蒽加成物(DAP-PA)的合成]

在500mL的玻璃制四颈瓶中安装机械搅拌器和温度计，组装成反应装置。向烧瓶中加入4-(4’-二甲基氨基苯基)-1,2,4-三唑烷-3,5-二酮(DMU)4.00g(18.2mmol；1.0eq.)、亚碘酰苯4.00g(18.2mmol；1.0eq.)、9-苯基蒽4.63g(18.2mmol；1.0eq.)、无水硫酸镁4.0g、及通过氮鼓泡除去了溶解氧的乙酸乙酯400mL，于室温进行搅拌。此时，反应混合物成为紫色的悬浮液，1小时后成为粉红色的悬浮液。

搅拌24小时以上，然后，向反应混合物中加入庚烷400mL，用蒸发器浓缩至210g左右。此时，发生加成物的析出，成为浆料状。

用桐山漏斗(

＜实施例9＞

[9-苯基蒽加成物(DAP-PA)的合成]

在1000mL的玻璃制四颈瓶中安装机械搅拌器和温度计，组装成反应装置。向烧瓶中加入4-(4’-二甲基氨基苯基)-1,2,4-三唑烷-3,5-二酮(DMU)10.00g(45.4mmol；1.0eq.)、亚碘酰苯9.99g(45.4mmol；1.0eq.)、9-苯基蒽11.55g(45.4mmol；1.0eq.)、无水硫酸镁10.0g、及通过氮鼓泡除去了溶解氧的乙酸乙酯1000mL，于室温进行搅拌。此时，反应混合物成为紫色的悬浮液，1小时后成为粉红色的悬浮液。

搅拌24小时以上，然后，向反应混合物中加入庚烷1000mL，用蒸发器浓缩至500g左右。此时，发生加成物的析出，成为浆料状。

用桐山漏斗(

＜实施例10＞

[9-甲基蒽加成物(DAP-MA)的合成]

在500mL的玻璃制四颈瓶中安装机械搅拌器和温度计，组装成反应装置。向烧瓶中加入4-(4’-二甲基氨基苯基)-1,2,4-三唑烷-3,5-二酮(DMU)5.00g(22.7mmol；1.0eq.)、亚碘酰苯5.00g(22.7mmol；1.0eq.)、9-甲基蒽4.36g(22.7mmol；1.0eq.)、无水硫酸镁5.0g、及通过氮鼓泡除去了溶解氧的乙酸乙酯500mL，于室温进行搅拌。此时，反应混合物成为紫色的悬浮液，1小时后成为浅紫红色的悬浮液。

搅拌24小时以上，然后，向反应混合物中加入庚烷500mL，用蒸发器浓缩至250g左右。此时，发生加成物的析出，成为浆料状。

用桐山漏斗(

＜实施例11＞

[9-氯甲基蒽加成物(DAP-CMA)的合成]

在500mL的玻璃制四颈瓶中安装机械搅拌器和温度计，组装成反应装置。向烧瓶中加入4-(4’-二甲基氨基苯基)-1,2,4-三唑烷-3,5-二酮(DMU)5.00g(22.7mmol；1.0eq.)、亚碘酰苯5.00g(22.7mmol；1.0eq.)、9-氯甲基蒽5.15g(22.7mmol；1.0eq.)、无水硫酸镁5.0g、及通过氮鼓泡除去了溶解氧的乙酸乙酯500mL，于室温搅拌。此时，反应混合物成为紫色的悬浮液，1小时后成为浅紫红色的悬浮液。

搅拌24小时以上，然后，向反应混合物中加入庚烷500mL，用蒸发器浓缩至250g左右。此时，发生加成物的析出，成为浆料状。

用桐山漏斗(

＜实施例12＞

[9-溴蒽加成物(DAP-BA)的合成]

在500mL的玻璃制四颈瓶中安装机械搅拌器和温度计，组装成反应装置。向烧瓶中加入4-(4’-二甲基氨基苯基)-1,2,4-三唑烷-3,5-二酮(DMU)5.00g(22.7mmol；1.0eq.)、亚碘酰苯5.00g(22.7mmol；1.0eq.)、9-溴蒽5.84g(22.7mmol；1.0eq.)、无水硫酸镁5.0g、及通过氮鼓泡除去了溶解氧的乙酸乙酯500mL，于室温进行搅拌。此时，反应混合物成为紫色的悬浮液，1小时后成为浅紫红色的悬浮液。

搅拌24小时以上，然后，向反应混合物中加入庚烷500mL，用蒸发器浓缩至250g左右。此时，发生加成物的析出，成为浆料状。

用桐山漏斗(

＜实施例13＞

[9-乙酰基蒽加成物(DAP-AcA)的合成]

在500mL的玻璃制四颈瓶中安装机械搅拌器和温度计，组装成反应装置。向烧瓶中加入4-(4’-二甲基氨基苯基)-1,2,4-三唑烷-3,5-二酮(DMU)5.00g(22.7mmol；1.0eq.)、亚碘酰苯5.00g(22.7mmol；1.0eq.)、9-乙酰基蒽5.00g(22.7mmol；1.0eq.)、无水硫酸镁5.0g、及通过氮鼓泡除去了溶解氧的乙酸乙酯500mL，于室温进行搅拌。此时，反应混合物成为紫色的悬浮液，1小时后成为浅紫红色的悬浮液。

搅拌24小时以上，然后，向反应混合物中加入庚烷500mL，用蒸发器浓缩至250g左右。此时，发生加成物的析出，成为浆料状。

用桐山漏斗(

＜实施例14＞

[9-(4’-二甲基氨基苯基)蒽加成物(DAP-DMAPA)的合成]

在500mL的玻璃制四颈瓶中安装机械搅拌器和温度计，组装成反应装置。向烧瓶中加入4-(4’-二甲基氨基苯基)-1,2,4-三唑烷-3,5-二酮(DMU)5.00g(22.7mmol；1.0eq.)、亚碘酰苯5.00g(22.7mmol；1.0eq.)、9-(4’-二甲基氨基苯基)蒽6.75g(22.7mmol；1.0eq.)、及无水硫酸镁5.0g、通过氮鼓泡除去了溶解氧的乙酸乙酯500mL，于室温进行搅拌。此时，反应混合物成为紫色的悬浮液，1小时后成为浅紫红色的悬浮液。

搅拌24小时以上，然后，向反应混合物中加入庚烷500mL，用蒸发器浓缩至250g左右。此时，发生加成物的析出，成为浆料状。

用桐山漏斗(

＜实施例15＞

[9-(4’-硝基苯基)蒽加成物(DAP-NPA)的合成]

在500mL的玻璃制四颈瓶中安装机械搅拌器和温度计，组装成反应装置。向烧瓶中加入4-(4’-二甲基氨基苯基)-1,2,4-三唑烷-3,5-二酮(DMU)5.00g(22.7mmol；1.0eq.)、亚碘酰苯5.00g(22.7mmol；1.0eq.)、9-(4’-硝基苯基)蒽6.80g(22.7mmol；1.0eq.)、无水硫酸镁5.0g、及通过氮鼓泡除去了溶解氧的乙酸乙酯500mL，于室温进行搅拌。此时，反应混合物成为紫色的悬浮液，1小时后成为浅紫红色的悬浮液。

搅拌24小时以上，然后，向反应混合物中加入庚烷500mL，用蒸发器浓缩至250g左右。此时，发生加成物的析出，成为浆料状。

用桐山漏斗(

＜实施例16＞

[9-苯基蒽加成物(DAP-PA)的纯化]

将硅胶(Wakosil C-300；富士胶片和光)150g湿式填充于玻璃制柱

将实施例9中得到的紫色固体即DAPTAD-苯基蒽加成物(DAP-PA)3.00g溶解于氯仿10mL中，然后填充于柱中。然后，使用己烷/乙酸乙酯＝7/3进行洗脱。

用蒸发器将含有目标加成物的点的组分400mL浓缩后，于室温实施15小时以上的真空干燥，由此以白色固体形式得到DAPTAD-苯基蒽加成物(DAP-PA)。产量为1.02g，产率为34％，HPLC纯度为98.2％。

＜实施例17＞

[9-苯基蒽加成物(DAP-PA)的纯化]

将硅胶(Wakosil C-300；富士胶片和光)150g湿式填充于玻璃制柱

将实施例9中得到的紫色固体即DAPTAD-苯基蒽加成物(DAP-PA)3.00g溶解于氯仿10mL中，然后填充于柱中。然后，使用己烷/四氢呋喃＝5/5进行洗脱。

用蒸发器将含有目标加成物的点的组分600mL浓缩后，于室温实施15小时以上的真空干燥，由此以白色固体形式得到DAPTAD-苯基蒽加成物(DAP-PA)。产量为1.55g，产率为52％，HPLC纯度为98.8％。

＜实施例18＞

[向DMU与TTB的混合溶液中加入PIDA，得到DAPTAC]

将4-(4’-二甲基氨基苯基)-1,2,4-三唑烷-3,5-二酮(DMU)0.10g(0.45mmol)、及反式,反式-二苯基丁二烯(TTB)0.09g(0.43mmol)添加于1,2-二甲氧基乙烷(DME)100mL中，得到DME悬浮液。

于20℃向得到的悬浮液中加入二乙酸碘苯(PIDA)0.15g(0.46mmol)，于相同温度搅拌4小时，得到包含顺式-2-(4-二甲基氨基苯基)-5,8-二苯基-1H-[1,2,4]三唑并[1,2-a]哒嗪-1,3(2H)-二酮(DAPTAC)的反应液。

对于得到的反应液，按以下的条件实施高效液相色谱(HPLC)分析，由此算出DAPTAC的测定产率。DAPTAC的测定产率为76.8％。

(分析条件)

试样浓度：50％

进样量：1.0μL

波长：254nm

流速：1.0mL/min

流动相：0～15min(CH

15～20min(CH

柱温：30℃

填充剂：X Bridge C18 5μm(4.6×150)

保留时间：DMU：2.1min

DAPTAC：7.2min

TTB：11.4min

〔反应式〕

以下示出实施例1中实施的反应式。

[化学式38]

[DAPTAC的分离]

用5％碳酸氢钠水溶液对得到的反应液进行洗涤，接着用水进行洗涤，然后进行减压浓缩，用硅胶柱对浓缩残渣进行纯化(洗脱溶剂：乙酸乙酯)。将包含产物的组分进行减压浓缩，然后用乙酸乙酯10mL将浓缩残渣进行加热分散，于室温进行冷却，由此析出晶体。将析出的晶体过滤，进行己烷洗涤，并进行减压干燥，由此得到固体状的DAPTAC。

〔物性评价〕

针对得到的DAPTAC，实施各种分析。将结果示于以下。

Mp：174～177℃

IR(KBr)：1772，1700cm

δ7.10-7.75(m，12H)，

6.50-6.85(m，2H)，

6.00(s，2H)，

5.51(s，2H)，

2.90(s，6H)

＜实施例19＞

[向DMU与维生素D3的混合溶液中加入PIDA，得到维生素D3加成物]

将4-(4’-二甲基氨基苯基)-1,2,4-三唑烷-3,5-二酮(DMU)0.01g(0.045mmol)、及维生素D3 0.017g(0.044mmol)添加于1,2-二甲氧基乙烷(DME)10mL中，得到DME悬浮液。

于20℃向得到的悬浮液中加入二乙酸碘苯(PIDA)0.015g(0.045mmol)，于相同温度搅拌3小时，得到包含(5S,7S)-2-[4-(二甲基氨基)苯基]-5-[(E)-[(1R,3as,7aR)-1-[(1R)-1,5-二甲基己基]八氢-7a-甲基-4H-茚-4-亚基]甲基]-5,6,7,8,9,10-六氢-7-羟基-1H-[1,2,4]三唑并[1,2-b]酞嗪-1,3(2H)-二酮(维生素D3加成物)的反应液。

对于得到的反应液，按以下的条件实施高效液相色谱(HPLC)分析，由此算出维生素D3加成物的测定产率。维生素D3加成物的测定产率为84.3％。

(分析条件)

试样浓度：50％(将反应液稀释于相同重量的THF中并进行测定)

进样量：1.0μL

波长：254nm

流速：1.0mL/min

流动相：0～15min(CH

15～20min(CH

柱温：30℃

填充剂：X Bridge C18 5μm(4.6×150)

保留时间：DMU：2.1min

维生素D3加成物：13.2min

维生素D3：18.8min

〔反应式〕

以下示出实施例2中实施的反应式。

[化学式39]

[维生素D3加成物的分离]

用5％碳酸氢钠水溶液对得到的反应液进行洗涤，接着用水进行洗涤，然后进行减压浓缩，用硅胶柱对浓缩残渣进行纯化(洗脱溶剂：己烷/乙酸乙酯＝4/1→2/1)，由此得到维生素D3加成物。

〔物性评价〕

针对得到的维生素D3加成物，实施各种分析。将结果示于以下。

Mp：125～129℃

IR(KBr)：1762，1697cm

δ7.25(d，J＝15Hz，2H)，

6.75(d，J＝15Hz，2H)，

4.75-5.25(m，2H)，

3.75-4.30(m，2H)，

3.00(s，6H)，

0.25-2.25(m，40H)

＜比较例1＞

[从DMU和PIDA得到DAPTAD溶液，向其中加入TTB，得到DAPTAC]

将4-(4’-二甲基氨基苯基)-1,2,4-三唑烷-3,5-二酮(DMU)0.30g(1.36mmol)添加于1,2-二甲氧基乙烷(DME)10mL中，得到DME悬浮液。

于20℃向得到的DME悬浮液中加入二乙酸碘苯(PIDA)0.44g(1.36mmol)，于相同温度搅拌3小时，得到包含4-(4’-二甲基氨基苯基)-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(DAPTAD)的反应液。

于20℃向得到的包含DAPTAD的反应液中加入反式,反式-二苯基丁二烯(TTB)0.28g(1.36mmol)，于相同温度搅拌2小时，生成DAPTAC。

对于得到的反应液，与实施例1同样地实施HPLC分析，可知DAPTAC的测定产率为31.1％。

〔反应式〕

以下示出比较例1中实施的反应式。

[化学式40]

＜实施例20＞

[向DMU与蒽的混合溶液中加入PIO，得到蒽加成物]

在遮光容器中，称取蒽81mg(0.45mmol)，加入干燥乙腈(10mL)而使其溶解。向得到的溶液中加入4-(4’-二甲基氨基苯基)-1,2,4-三唑烷-3,5-二酮(DMU)100mg(0.45mmol)，接着，加入亚碘酰苯(PIO)110mg(0.50mmol)，于室温搅拌4小时。将得到的悬浮液过滤，用己烷将得到的晶体洗涤并进行干燥，由此得到蒽加成物(DAP-A)。得到的蒽加成物(DAP-A)为75mg，产率为41.7％。

〔反应式〕

以下示出实施例3中实施的反应式。

[化学式41]

〔物性评价〕

对于得到的蒽加成物(DAP-A)，实施各种分析。将结果示于以下。

Mp：217～218℃

IR(KBr)：1780，1717cm

δ7.20-7.75(m，8H)，

6.50-7.15(m，4H)，

6.25(s，2H)，

3.00(s，6H)。