一种斑马鱼中比较同源修复和非同源修复末端连接实现基因置换效率的方法

摘要

本发明公开了一种斑马鱼中比较同源修复和非同源末端连接实现基因置换效率的方法，包括如下步骤：(1)在同一基因中寻找两个核酸酶的特异识别位点；构建非同源末端连接的且含有正向标记基因的敲入质粒，敲入质粒含有左边和右边的同源臂中，并在右臂后插入负向标记基因；(2)在上述敲入质粒的基础上建立同源修复的敲入质粒；(3)利用显微注射将敲入质粒和核酸酶体系到斑马鱼受精卵中，将注射的受精卵培养幼鱼，在特定时间点观察根据不同标记基因的表达情况，比较分析其不同质粒的基因置换效率。本发明可实现比较非同源末端连接和同源修复的效率。