包括视网膜下递送治疗有效量的重组AAV9衍生载体的在对象的视锥细胞光感受器中表达目的多核苷酸的方法

摘要

眼内注射腺相关病毒(AAV)载体已经是将基因药物递送到视网膜中的明确途径。目前，需要将所述载体注射到视网膜下空间中以向视锥细胞提供基因递送。在这种方法中，基因递送限于与注入流体局部“小泡”接触的细胞。此外，视网膜下注射期间发生的视网膜脱离在具有视网膜变性的眼睛中是一种隐患。在此，本发明人建立了几种新的载体‑启动子组合以克服与中央凹中AAV介导的视锥细胞转导有关的局限性，并在小鼠模型、人类诱导多能干细胞衍生的类器官、人类死后视网膜外植体和活猕猴中进行了支持性研究。他们表明，AAV9变体当被注入距中央凹几毫米远的视网膜下空间中时，提供了有效的中央凹视锥细胞转导，且不会使这个脆弱的区域脱离。这种递送方式依赖于视锥细胞特异性启动子，并导致与光遗传学视力恢复相容的高水平转基因表达。因此，本发明涉及在对象的视锥细胞光感受器中表达目的多核苷酸的方法，所述方法包括视网膜下递送治疗有效量的重组AAV9衍生载体，所述载体包含如SEQ ID NO:11所示的VP1衣壳蛋白以及在如SEQ ID NO:12所示的pR1.7启动子控制下的目的多核苷酸。