一种基于新冠病毒的全基因组全长扩增的三代建库测序方法

摘要

本发明公开了一种基于新冠病毒的全基因组全长扩增的三代建库测序方法，步骤包括：1)根据新冠病毒基因组一致性序列设计与合成引物；2)新冠病毒基因组全长扩增；3)全基因组扩增子样本混样；4)文库构建；5)三代测序。本发明通过结合奇数、偶数引物分别扩增，然后将奇数和偶数扩增片段进行混合，可获得覆盖整个新冠病毒基因组的扩增子片段，从而仅需要2个扩增反应，极大地提高了实验效率。另外通过PacBio建库流程，在扩增子的两端添加带有barcode的测序接头，即可进行PacBio测序，通过拆分与数据校正后获得准确率在99％以上的HiFiReads。