一种在全基因组范围内体外检测CRISPR-Cas脱靶效应的方法

摘要

一种在全基因组范围内体外检测CRISPR‑Cas脱靶效应的方法，本发明涉及一种在全基因组范围内体外检测CRISPR‑Cas脱靶效应的方法。本发明的目的是为了解决现有脱靶位点检测时存在假阳性位点以及DNA起始加入量大的问题，本发明随机打断基因组DNA，然后连接茎环接头1，使用核酸外切酶消化单侧连接接头1和未连接接头的线性DNA，剩余的DNA片段用ddNTP封闭。用Cas酶切割DNA，暴露新的DNA断端并连接线性接头2，用链霉亲和素磁珠捕获连接接头2的DNA，用巢式PCR构建NGS文库进行illumina双端测序及生物信息学分析。本发明方法真阳性脱靶位点检出率高。本发明应用于生物技术领域。