滇西乌头中粗茎乌头碱甲及去乙酰粗茎乌头碱甲的纯化方法

摘要

本发明提供一种滇西乌头中粗茎乌头碱甲及去乙酰粗茎乌头碱甲的纯化方法。所述一种滇西乌头中粗茎乌头碱甲及去乙酰粗茎乌头碱甲的纯化方法包括以下步骤：步骤一、药材的提取；步骤二、萃取分离；步骤三、柱层析纯化；步骤四、结晶纯化；步骤五、粗茎乌头碱甲的水解；步骤六、去乙酰粗茎乌头碱甲的柱层析纯化。本发明提供的一种滇西乌头中粗茎乌头碱甲及去乙酰粗茎乌头碱甲的纯化方法对滇西乌头中粗茎乌头碱甲和去乙酰乌头碱甲进行纯化，为滇西乌头的质量控制及其药理研究提供了一定的基础，并且为进一步利用粗茎乌头碱甲降低其毒副作用提供了相关物质基础。

说明书

技术领域

本发明属于药品生产制造领域，尤其涉及一种滇西乌头中粗茎乌头碱甲及去乙酰粗茎乌头碱甲的纯化方法。

背景技术

滇西乌头为毛茛科(ranunculaceae)乌头属植物滇西乌头Aconitum bulleyanumDiels的干燥根，主要分布于云南西部丽江和大理地区，用于治疗风湿性关节炎，麻木瘫痪和各种疼痛疾病。其中成分双酯型生物碱粗茎乌头碱甲具有较好的镇痛效果且不具有成瘾性，但其毒性较大。在川乌、附子的临床应用中将其中双酯型生物碱乌头碱、次乌头碱及其新乌头碱水解得到苯甲酰乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱和苯甲酰次乌头原碱能有效降低其毒副作用。

发明内容

为解决现有滇西乌头中含有粗茎乌头碱甲及去乙酰粗茎乌头碱甲的技术问题，本发明提供一种对滇西乌头中粗茎乌头碱甲及去乙酰粗茎乌头碱甲的纯化方法。

本发明提供的滇西乌头中粗茎乌头碱甲及去乙酰粗茎乌头碱甲的纯化方法包括以下步骤：

步骤一、药材的提取：将干燥的滇西乌头块根粉碎，适量乙醇浸润，用乙醇进行渗滤提取，合并渗滤液，浓缩至膏状；

步骤二、萃取分离：将提取所得的膏用盐酸溶液溶解，过滤，酸水液继调PH至碱性，碱液用石油醚萃取多次，再用乙酸乙酯萃取多次，合并氯仿或乙酸乙酯萃取部分并减压回收至膏状，得总碱；

步骤三、柱层析纯化：将萃取分离步骤所得的总碱，用二氯甲烷溶解吸附于硅胶拌样，挥干，进行硅胶柱层析，以石油醚、乙酸乙酯、二乙胺进行梯度洗脱，收集洗脱液，以粗茎乌头碱甲为对照用薄层色谱TLC跟踪检测，合并主含粗茎乌头碱甲的流份，回收溶剂至干，得到主要含粗茎乌头碱甲部分；

步骤四、结晶纯化：将含粗茎乌头碱甲的部分，用乙醇溶解进行结晶和重结晶，得粗茎乌头碱甲；

步骤五、粗茎乌头碱甲的水解：取粗茎乌头碱甲，加入乙醇溶解，加入等量饱和磷酸氢二钠水溶液，水浴加热，每隔半小时取样TLC监控反映情况，当薄层检测仅有少量粗茎乌头碱甲时停止反应，浓缩至少量，二氯甲烷萃取多次，合并二氯甲烷层，浓缩干得类白色粉末；

步骤六、去乙酰粗茎乌头碱甲的柱层析纯化：取上述水解后粉末，加入少量二氯甲烷溶解，吸附于硅胶拌样，挥干，进行硅胶柱层析，用石油醚、乙酸乙酯、二乙胺洗脱，收集去乙酰粗茎乌头碱甲TLC单点的流份，回收溶剂至干，得白色粉末。

在本发明提供的滇西乌头中粗茎乌头碱甲及去乙酰粗茎乌头碱甲的纯化方法一种较佳实施例中，所述步骤六中，石油醚、乙酸乙酯、二乙胺洗脱的质量比为30:5:0.1。

在本发明提供的滇西乌头中粗茎乌头碱甲及去乙酰粗茎乌头碱甲的纯化方法一种较佳实施例中，所述步骤三及步骤六中，所述吸附于硅胶拌样具体为，吸附于2倍量硅胶拌样。

在本发明提供的滇西乌头中粗茎乌头碱甲及去乙酰粗茎乌头碱甲的纯化方法一种较佳实施例中，所述步骤五中，水浴温度为50-100℃，溶解用乙醇与粗茎乌头碱甲用量比为100:1。

在本发明提供的滇西乌头中粗茎乌头碱甲及去乙酰粗茎乌头碱甲的纯化方法一种较佳实施例中，所述步骤三中，石油醚、乙酸乙酯、二乙胺洗脱用量比为100-20:10:0.1。

在本发明提供的滇西乌头中粗茎乌头碱甲及去乙酰粗茎乌头碱甲的纯化方法一种较佳实施例中，所述步骤二中具体为，将提取步骤所得的膏用2％的盐酸溶液溶解，过滤，酸水液继用25％浓氨水调PH至9，碱液用石油醚萃取2次，再用乙酸乙酯萃取3次。

在本发明提供的滇西乌头中粗茎乌头碱甲及去乙酰粗茎乌头碱甲的纯化方法一种较佳实施例中，所述步骤一中，乙醇的用量为药材量的6-10倍。

本发明的滇西乌头中粗茎乌头碱甲及去乙酰粗茎乌头碱甲的纯化方法具有如下有益效果：

总共包括提取、萃取分离、柱层析分离纯化、结晶纯化、粗茎乌头碱甲水解及其去乙酰粗茎乌头碱甲的柱层析纯化等步骤，主要针对粗茎乌头碱甲及其水解产物去乙酰粗茎乌头碱甲进行分离纯化，为后续的药理研究提供物质基础，为滇西乌头的质量控制及其药理研究提供了一定的基础，并且为进一步利用粗茎乌头碱甲降低其毒副作用提供了相关物质基础。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图，其中：

图1是本发明提供的滇西乌头中粗茎乌头碱甲及去乙酰粗茎乌头碱甲的纯化方法一种实施例的工艺流程图；

图2是粗茎乌头碱甲HNMR谱；

图3是去乙酰粗茎乌头碱甲MS谱；

图4是去乙酰粗茎乌头碱甲CNMR谱；

图5是去乙酰粗茎乌头碱甲HNMR谱。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。

请一并参阅图1至图5，其中图1是本发明提供的滇西乌头中粗茎乌头碱甲及去乙酰粗茎乌头碱甲的纯化方法一种实施例的工艺流程图；图2是粗茎乌头碱甲HNMR谱；图3是去乙酰粗茎乌头碱甲MS谱；图4是去乙酰粗茎乌头碱甲CNMR谱；图5是去乙酰粗茎乌头碱甲HNMR谱。

步骤S11、所述滇西乌头中粗茎乌头碱甲及去乙酰粗茎乌头碱甲的纯化方法S1药材的提取：将干燥的滇西乌头块根粉碎，适量乙醇浸润，用乙醇进行渗滤提取，乙醇的用量为药材量的6-10倍，合并渗滤液，浓缩至膏状；

步骤S12、萃取分离：将提取所得的膏用2％的盐酸溶液溶解，过滤，酸水液继用25％浓氨水调PH至9，碱液用石油醚萃取2次，再用乙酸乙酯萃取3次，合并氯仿或乙酸乙酯萃取部分并减压回收至膏状，得总碱；

步骤S13、柱层析纯化：将萃取分离步骤所得的总碱，用二氯甲烷溶解吸附于2倍量硅胶拌样，挥干，进行硅胶柱层析，以石油醚、乙酸乙酯、二乙胺用量比为100-20:10:0.1进行梯度洗脱，收集洗脱液，以粗茎乌头碱甲为对照用薄层色谱TLC跟踪检测，合并主含粗茎乌头碱甲的流份，回收溶剂至干，得到主要含粗茎乌头碱甲部分；

步骤S14、结晶纯化：将含粗茎乌头碱甲的部分，用乙醇溶解进行结晶和重结晶，得粗茎乌头碱甲；

步骤S15、粗茎乌头碱甲的水解：取粗茎乌头碱甲，加入乙醇溶解，溶解用乙醇与粗茎乌头碱甲用量比为100:1，加入等量饱和磷酸氢二钠水溶液，水浴温度为50-100℃加热，每隔半小时取样TLC监控反映情况，当薄层检测仅有少量粗茎乌头碱甲时停止反应，浓缩至少量，二氯甲烷萃取多次，合并二氯甲烷层，浓缩干得类白色粉末；

步骤S16、去乙酰粗茎乌头碱甲的柱层析纯化：取上述水解后粉末，加入少量二氯甲烷溶解，吸附于2倍量硅胶拌样，挥干，进行硅胶柱层析，用石油醚、乙酸乙酯、二乙胺洗脱的质量比为30:5:0.1洗脱，收集去乙酰粗茎乌头碱甲TLC单点的流份，回收溶剂至干，得白色粉末。

本发明的滇西乌头中粗茎乌头碱甲及去乙酰粗茎乌头碱甲的纯化方法S1具有如下有益效果：

总共包括提取、萃取分离、柱层析分离纯化、结晶纯化、粗茎乌头碱甲水解及其去乙酰粗茎乌头碱甲的柱层析纯化等步骤，主要针对粗茎乌头碱甲及其水解产物去乙酰粗茎乌头碱甲进行分离纯化，为后续的药理研究提供物质基础，为滇西乌头的质量控制及其药理研究提供了一定的基础，并且为进一步利用粗茎乌头碱甲降低其毒副作用提供了相关物质基础。

以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书及附图内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其它相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。