CRISPR‑Cas9靶向敲除人肠癌细胞RITA基因及其特异性的sgRNA

摘要

本发明公开了CRISPR/Cas9 靶向敲除人肠癌细胞RITA基因及其特异性sgRNA。首先是获得特异性靶向RITA 基因第二外显子的sgRNA，其碱基序列如SEQ ID NO.1 所示；其次是构建RITA基因的sgRNA到慢病毒载体系统，该系统含有Cas9 蛋白；最后将含有该sgRNA的CRISPR/Cas9慢病毒感染人肠癌HT‑29细胞，获得RITA蛋白表达水平显著降低的细胞株。本发明具有操作步骤简单、sgRNA靶向性好、且对RITA基因切割效率高；此外，所构建的CRISPR/Cas9慢病毒系统具有敲除效率高的优势，并能特异性敲除RITA基因，得到敲除RITA基因的人肠癌细胞，从而为进一步研究肠癌细胞中RITA的作用机制提供强有力的工具。