饲料中单增李斯特氏菌的微滴数字PCR检测方法

摘要

本发明公开了一种单增李斯特氏菌的PCR扩增引物及探针引物，包括：单增李斯特氏菌引物正向序列：5＇‑CTGAATCTCAAGCAAAACCTGGT‑3＇，反向序列；5＇‑CGCGACCGAAGCCAACTA‑3＇；探针序列：5＇‑FAM‑ATACGATAACATCCACGGCTCTGGCTGG‑TAMRA‑3＇；一种饲料中单增李斯特氏菌的微滴数字PCR检测方法，包括以下步骤：称取样品至盛有225mL无菌培养液的均质袋中，用拍击式均质器拍打，稀释为1:10的样品匀液，进行增菌培养，得到增菌液；提取待测样品、阳性对照、阴性对照的DNA；获得鉴定单增李斯特氏菌的PCR扩增引物及探针引物；将所得DNA进行微滴数字PCR扩增，获得反应液；对反应液进行检测与分析。结果表明该引物对单增李斯特氏菌的扩增具有特异性；同时微滴数字PCR对其扩增稳定，具有重复性；取浓度为108‑103的基因序列进行检测，灵敏度良好。