选育纯系黄颡鱼全雌鱼及超雄鱼大规模生产全雄鱼的方法

摘要

本发明公开了一种选育纯系黄颡鱼全雌鱼及超雄鱼大规模生产纯系全雄黄颡鱼的方法。从长江水系筛选性状优良的野生原系黄颡鱼使用人工雌核发育技术和激素性逆转方法建立纯系黄颡鱼全雌鱼种质库；再以纯系黄颡鱼为基础，应用GMT技术、转性与测交方法选育出纯系黄颡鱼超雄鱼和超雄生理雌鱼，建立超雄黄颡鱼种质库；超雄黄颡鱼与纯系全雌黄颡鱼组合，建立全雄黄颡鱼繁殖体系，大规模生产纯系全雄黄颡鱼鱼苗供商品鱼养殖。本方法有效克服了黄颡鱼种质逐代退化，降低养殖效益的弊端。按本发明技术路线生产的黄颡鱼，种质纯正，抗逆性强，对环境友好，为可持续发展的黄颡鱼养殖业提供了高效、稳定、健康、环保、节能、增收的可靠途径。

说明书

技术领域

本发明属鱼类生物工程与细胞工程遗传育种技术领域，具体涉及选育纯系黄颡鱼全雌鱼及超雄鱼大规模生产全雄鱼的方法。

背景技术

黄颡鱼从纯属野生转为全人工繁养，至今已有20年历史。期间，凡长速快、个体大的成鱼多数被人们吃掉了，唯有鱼筛底下长速慢、个体小的级外鱼（“毛毛鱼”）留下来继续养殖一年而供给黄颡鱼孵化场作繁殖用的母鱼，用以生产黄颡鱼普通苗或全雄苗，加上近亲繁殖，年复一年，种质一代不如一代；另外，普通黄颡鱼雌雄各半，雄鱼个体与生长速度是雌鱼的2—3倍。虽然近五年来国内开始兴起全雄鱼养殖，但生产全雄苗所用的超雄鱼YY♂供应紧张，价格昂贵，甚至不予外供，社会上种质混杂，不少人以假乱真，而检测技术仅掌握在少数人之手，普通苗场及广大养户很难对亲本YY♂及全雄苗XY♂进行检测鉴定。如此种种，均成为黄颡鱼养殖业健康发展的瓶颈。因此，有必要对黄颡鱼种质进行提纯复壮生产纯系黄颡鱼全雌鱼、超雄鱼供应各孵化场作繁殖纯系全雄苗亲本；大规模生产纯系全雄苗供应广大养户大面积养殖商品鱼。

发明内容

本发明主要提供选育纯系黄颡鱼全雌鱼及超雄鱼大规模生产全雄鱼的方法。包括以下步骤：

（1）建立纯系黄颡鱼种质库：在长江水系筛选个体大、性状优良的野生黄颡鱼成熟亲鱼，通过人工雌核发育，生产纯系全雌子代XX♀，开口四天后，提取部分子代苗独立投喂17α—甲基睾酮药饵或药虫，将其转性为生理雄鱼XX♂，与全雌鱼XX♀分别独立培育至性成熟，XX♀与XX♂交配，规模扩繁纯系全雌鱼种群；

（2）应用GMT技术和测交技术研制黄颡鱼超雄鱼YY♂和超雄生理雌鱼YY♀：纯系全雌鱼XX♀与野生原系雄鱼XY杂交，获得杂交子代XY♂和XX♀，其中XY♂和XX♀各占50%，杂交苗开口五天后，取500尾独立培育至性成熟，另外取500尾用EE₂雌二醇药饵或药虫转性为生理雌鱼XY♀，独立培养至性成熟；杂交子代XY分别与10—20尾生理雌鱼交配，开口五天后，各组均抽出500尾独立培育成熟，另抽500尾用EE₂雌二醇转性为生理雌鱼，分别独立培育至性成熟；若母本为生理雌鱼，其后代超雄鱼占25%，普通雄鱼占50%，雌鱼占25%；若母本为正常雌鱼，则子代雌雄各半；测交选出超雄鱼YY♂和超雄生理雌鱼YY♀。

（3）建立纯系超雄鱼种质库：生理雌鱼YY♀与超雄鱼YY♂杂交，子代为100%的超雄鱼，开口五天后，抽取部分投喂EE₂雌二醇药饵或药虫45天，将其转性为生理雌鱼YY♀，并与未转性的超雄鱼YY♂分池培育至性成熟，二者杂交，批量繁殖超雄鱼种群，储备于超雄鱼种质库；

（4）建立纯系全雄鱼生产体系：黄颡鱼超雄鱼YY♂与全雌鱼杂交，大规模全人工繁殖纯系全雄鱼XY♂，供各地养殖户养殖商品鱼。

进一步，所述EE₂雌二醇药饵的配制方法为：将EE₂雌二醇激素溶于95%酒精中，配成原液，再用酒精稀释拌入鳗料或长吻鮠料中，晾干后即可获得EE2雌二醇药饵，其含EE2雌二醇激素量为40—60mg/kg。

进一步，所述药虫为采用含EE₂雌二醇激素量为130—180μg/L的药液浸泡1小时后滤去药液的活丰年虫。

本发明与现有技术相比的有益效果：

本发明针对近年来黄颡鱼种质逐代退化的现状，选用长江水系野生原系黄颡鱼中性状特优的成熟亲鱼，进行雌核发育，获得纯度较高的纯系黄颡鱼全雌鱼XX♀，使黄颡鱼种质得以提纯复壮，并应用激素性逆转技术获得生理雄鱼XX♂，与全雌鱼XX♀杂交扩群，规模生产纯系全雌鱼取代社会上的“毛毛鱼”作为生产全雄苗的母本；同时，以纯系黄颡鱼全雌鱼作为选育基础，通过GMT技术，以及激素性逆转与测交方法，选育出纯度较高的优质超雄鱼YY♂,与纯系全雌鱼XX♀交配而生产出的纯系全雄苗XY♂种质纯正、长速快、个体大而均匀、抗病力强，具有极强的生长优势及抗逆性能，提高了商品鱼养殖的经济效益。本发明为可持续发展的黄颡鱼养殖业提供了切实可行的技术路线与优质的健康养殖新品系。

附图说明

图1为本发明的技术路线图。

具体实施方式

参照图1，下面介绍申请人七年来关于本发明在研究与生产实践中的具体操作方法。但所举操作方法不作为对本发明的限制，本领域的技术人员可以因地、因人、因时制宜，对本发明作相应改动。

具体操作方法，有如下步骤：

1.建立纯系全雌黄颡鱼种质库

针对多年来各地生产黄颡鱼普通苗及全雄苗存在的问题，将黄颡鱼种质提纯复壮，按传统方法即通过选择育种与杂交育种来构建纯系，需要经过8—10代同胞兄弟妹交配选育，而人工诱导雌核发育，只需经过一次抑制第一次卵裂，就可以使基因座位全部纯合，由于黄颡鱼性别决定机制为雌性配子同型，所以生产的子代为纯系全雌苗。具体操作步骤如下：

（1）鱼卵采集：在长江水系挑选个体粗大、性状优良的野生原系黄颡鱼雌、雄鱼亲本回来进行强化培育，野生原系雌鱼注射催产激素后，达到效应时间时人工挤出卵子；

（2）精子灭活：选取成熟的异源精子（如：南方大口鲶、长吻鮠等精子），置于精子保存液稀释，用波长2537埃的紫外线灯照射25分钟，使精子的遗传物质失活即可保存备用；

（3）人工授精：灭活精子与卵子混合均匀，加入4‰盐水激活精子，刺激鱼卵“受精”发育；

（4）冷休克处理：受精后1—2分钟内，将受精卵放进4℃水中冷休克处理15—20分钟，阻断卵子减数分裂第二极体排出而恢复雌核二倍体；

（5）人工孵化：冷休克处理完毕后将鱼卵取出放入25—30℃水中按正常方法人工孵化出纯系全雌子代XX♀；

（6）生理雄鱼制种：在全雌苗开口五天后，取出部分苗独立培育，投喂40天17α—甲基睾酮药饵或药虫将其转性为生理雄鱼XX♂，与未转性的全雌苗分别独立培育至性成熟；

（7）杂交扩群：纯系全雌鱼XX♀与生理雄鱼XX♂杂交扩群，规模生产纯系全雌苗，专塘培育成熟后，置于纯系全雌鱼种质库保种。

2选育优质黄颡鱼超雄鱼YY♂和生理雌鱼YY♀

本发明在选育出纯系全雌鱼的基础上，用GMT技术和性逆转与测交方法研制出优质黄颡鱼超雄鱼和生理雌鱼，具体方法如下：

（1）优质雄鱼的选育：用纯系黄颡鱼全雌鱼XX♀与野生原系黄颡鱼雄鱼杂交，获得优质子代XY♂及XX♀；

（2）优质生理雌鱼XY♀的制备：上述优质杂交子代保留500尾用丰年虫投喂五天后，提取250尾独立培育，改投EE₂雌二醇药饵：将丰年虫放入剂量为150μg/L的EE2药液中浸1小时后，滤取活虫投喂，日喂三次，连喂45天，将其转性为生理雌鱼XY♀，然后用普通黄颡鱼饲料培育至性成熟；其余250尾未转性的杂交苗继续独立培育至性成熟（当雌雄可辨别清楚时，将其中的雌鱼淘汰掉，仅保留雄鱼XY♂）

（3）全雄黄颡鱼YY♂与生理雌鱼YY♀的制种

取两尾发育良好的优质雄鱼的精囊剪碎，用精子保存液稀释，置于5—7℃冰箱保存；

取10—20尾发育良好的纯系“生理雌鱼”，注射催产激素，将卵子挤出，分开暂放，一尾一尾独立与上述（XY♂）精子人工授精，受精卵独立孵化，独立培育，开口五天后，每尾雌鱼产出的鱼苗各保留500尾，其中50%即250尾按上述方法人工雌性化后独立培育，余下50%按常规培苗方法独立培育。

将以上各组鱼苗用小网箱独立培育至可分清雌雄后，检查不转性的各组鱼中的雌雄比例。若雌雄各50%左右，则该母本为XX♀，其母本及子代（含已雌性化的子代）全部淘汰；若雌雄比例为1:3，则该母本为XY♀，子代中存在25%超雄鱼YY，应将这尾雌鱼产出的子代（含已转性和未转性两部分）独立培育成熟。

（4）测交选出纯系黄颡鱼超雄鱼YY♂和生理雌鱼YY♀

候选雄鱼YY♂，与普通雌鱼XX♀1:1配对繁殖，亲本及子代均独立培育至子代可分清雌雄，若子代为全雄鱼，则该尾雄鱼为超雄鱼YY♂，否则淘汰；

候选生理雌鱼YY♀与普通雄鱼XY♂人工繁殖出子代独立培育，若子代全部为雄鱼，则该尾雌鱼为超雄生理雌鱼YY♀，否则淘汰。

3.建立纯系超雄黄颡鱼YY♂和YY♀种质库

将选出的超雄鱼YY♂和超雄生理雌鱼YY♀人工繁殖，所产子代全部为超雄鱼，按上述方法将部分YY♂人工雌性化变为超雄生理雌鱼YY♀，培育成熟后就可以批量扩群，储存于超雄黄颡鱼种质库。

4.大规模生产纯系全雄黄颡鱼鱼苗

当种质库储备有足够的黄颡鱼超雄鱼YY♂和全雌XX♀成熟亲鱼后，就可以在繁殖季节大规模全人工繁殖纯系全雄黄颡鱼鱼苗供应各地养户。一尾超雄鱼YY♂可与100—350万粒纯系全雌鱼鱼卵交配授精，若亲鱼培育良好，受精率与孵化率均在95%以上。

上述方法中，EE2雌二醇药饵的配制方法为：将EE₂雌二醇激素溶于95%酒精中，配成原液，再用酒精稀释拌入鳗料或长吻鮠料中，晾干后即可获得EE2雌二醇药饵，其含EE2雌二醇激素量为40—60mg/kg。

上述方法中，所述药虫为采用含EE₂雌二醇激素量为130—180μg/L>

经过试验发现，以丰年虫为激素载体比投喂药饵效果更佳。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，只要以基本相同手段实现本发明目的的技术方案都属于本发明的保护范围之内。