基于CRISPR/Cas9技术的单子叶植物基因敲除载体及其应用

摘要

本发明公开了一种基于CRISPR/Cas9技术的植物基因敲除载体及其应用，该植物基因敲除载体为单子叶植物CRISPR/Cas9敲除载体pCAMBIA1300DM‑OsU3(BspQ I)‑Cas9，其中含有BspQ I的插入位点。本发明的有益效果在于：由BspQ I插入位点组成的sgRNA‑OsU3结构序列与2x35s‑hSpCas9‑ter序列共同构建的CRISPR/Cas9植物敲除的双元载体pCAMBIA1300DM‑OsU3(BspQ I)‑Cas9，能够通过一步酶切连接的方法来实现高效、快速构建单子叶植物基因敲除载体的目的；本发明提供的CRISPR/Cas9敲除载体pCAMBIA1300DM‑OsU3(BspQ I)‑Cas9，具有打靶效率高、脱靶效率低的特点，能够应用于植物靶基因的敲除或者以试剂盒的形式应用于植物基因编辑。