一种血液琼脂培养基及一次性苛养菌培养板及其制备方法

摘要

本发明提供一种血液琼脂培养基，包括无菌脱纤维绵羊血、无菌琼脂培养基，其特征在于：还包括Vb6、玉米淀粉、氯化血红素、牛肉蛋白胨；还提供一种苛养菌一次性培养板，其中的培养基为本发明提供的血液琼脂培养基；同时，本发明还提供工艺中这种苛养菌一次性培养板的其制备方法。本发明的提供的血液琼脂培养基、苛养菌一次性培养板可用于苛养菌的培养繁殖，苛养菌能很好的生长，且生长菌落典型，便于观察苛养菌的CAMP试验结果及卫星现象；本发明的苛养菌一次性培养板的制备方法，简单、易操作，制备得到的苛养菌一次性培养板能用于苛养菌的培养、繁殖，且生长菌落典型，便于观察苛养菌的CAMP试验结果及卫星现象。

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体地，本发明涉及一种血液琼脂培养基及一次性苛养菌培养板及其制备方法。

背景技术

现有的一次性培养基一般是利用无菌羊血或兔血或马血与无菌琼脂培养基按比例混合，然后放入一次性无菌塑料平皿中，配制成一次性平板，用于培养(生长繁殖)细菌。

但实际上，苛养菌，对生长环境、营养要求较苛刻的细菌，在普通环境中不能或难以生长，即使能生长，也很难出现典型菌落，还有就是部分溶血现象不好，如CAMP试验、卫星现象等。

发明内容

为了克服以上现有技术中的技术问题，本发明提供一种血液琼脂培养基、苛养菌一次性培养板及其制备方法，该培养基及一次性培养板主要针对苛养菌的培养，使用本发明提供的血液琼脂培养基、苛养菌一次性培养板，苛养菌不但能生长，且生长的菌落典型，且卫星现象、CAMP实验结果明显。

为了实现本发明的目的，采用以下方案：一种血液琼脂培养基，包括无菌脱纤维羊血、无菌琼脂培养基，还包括Vb6、玉米淀粉、氯化血红素、牛肉蛋白胨。以上所述成分及本发明中所提及的所有成分均为无菌成分。所述无菌脱纤维羊血为羊全血，其包括血清成分，为苛养菌的生长繁殖提供生长因子；玉米淀粉包括蛋白质成分，为苛养菌的生长繁殖提供氮源；氯化血红素为苛养菌的生长繁殖提供生长因子。这些成分配合在一起得到的培养基利于苛养菌的生长、繁殖，且生长菌落明显，卫星现象及CAMP实验结果明显，克服了现有技术中培养基中苛养菌生长菌落不典型等技术问题。

优选的是，所述血液琼脂培养基还包括马血清和兔血清，马血清和兔血清可以为苛养菌的生长提供必须的营养成分和生长因子。

上述任一方案优选的是，Vb60.01％～0.04％、玉米淀粉1％～4％、氯化血红素0.03％～0.12％、马血清0.5％～2％、兔血清0.5％～2％、牛肉蛋白胨3％～12％。以上百分比均为浓度百分比。所述培养基中，Vb6、玉米淀粉、氯化血红素、马血清、兔血清及牛肉蛋白胨的质量百分比位于以上数值范围内，配制得到的培养基利于苛养菌的生长，生长菌落典型，卫星现象明显。如果比例超出这个范围，会影响细菌生长。

上述任一方案优选的是，Vb60.01％～0.03％、玉米淀粉1％～3％、氯化血红素0.03％～0.09％、马血清0.5％～1.5％、兔血清0.5％～1.5％、牛肉蛋白胨3％～9％。以上百分比均为浓度百分比。所述培养基中，Vb6、玉米淀粉、氯化血红素、马血清、兔血清及牛肉蛋白胨的质量百分比位于以上数值范围内，配制得到的培养基更利于苛养菌的生长，生长菌落更典型，卫星现象更明显。

上述任一方案优选的是，Vb60.01％～0.02％、玉米淀粉1％～2％、氯化血红素0.03％～0.06％、马血清0.5％～1％、兔血清0.5％～1％、牛肉蛋白胨3％～6％。以上百分比均为浓度百分比。所述培养基中，Vb6、玉米淀粉、氯化血红素、马血清、兔血清及牛肉蛋白胨的质量百分比位于以上数值范围内，配制得到的培养基更利于苛养菌的生长，生长菌落更典型，卫星现象更明显。

上述任一方案优选的是，Vb60.01％、玉米淀粉1％、氯化血红素0.03％、马血清0.5％、兔血清0.5％、牛肉蛋白胨3％。所述培养基中，Vb6、玉米淀粉、氯化血红素、马血清、兔血清及牛肉蛋白胨的质量百分比位于以上数值范围内，配制得到的培养基最利于苛养菌的生长，生长菌落最典型，卫星现象最明显。

上述任一方案优选的是，所述琼脂培养基为固体琼脂培养基。

上述任一方案优选的是，所述固体琼脂培养基的添加量为1.5％～2％。

上述任一方案优选的是，所述琼脂培养基为半固体琼脂培养基。

上述任一方案优选的是，所述半固体琼脂培养基的添加量为0.5％～0.8％。

上述任一方案优选的是，所述培养基还包括无机盐。

上述任一方案优选的是，所述无机盐包括NaCl。

上述任一方案优选的是，所述NaCl的添加量为0.85％。

上述任一方案优选的是，所述培养基还包括磷酸氢二钾。

上述任一方案优选的是，所述磷酸氢二钾的添加量为0.006％。

上述任一方案优选的是，所述培养基还包括硫酸镁。

上述任一方案优选的是，所述硫酸镁的添加量为0.01％。

上述任一方案优选的是，所述一次性血液琼脂培养基还包括无菌水。

上述任一方案优选的是，本发明提供的血液琼脂培养基适用于嗜血杆菌属、鲍特菌属、肺炎链球菌、淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌、卡他莫拉菌的培养。

上述任一方案优选的是，所述嗜血杆菌属包括流感嗜血杆菌和副流感嗜血杆菌。

上述任一方案优选的是，所述无菌琼脂培养基包括巧克力琼脂。

本发明提供的血液琼脂培养基，在上面生长的细菌能出现典型菌落、生长良好，溶血现象良好，易于观察。

另一方面，本发明提供一种苛养菌一次性培养板，包括培养基，其中，所述培养基为本发明第一方面提供的血液培养基。

第三方面，本发明提供一种本发明第二方面提供的可杨菊一次性培养板的制备方法，包括步骤：

A.配置本发明第一方面提供的血液培养基；

B.将步骤A中得到的血液培养基放入一次性无菌塑料平皿中。

优选的是，所述制备方法还包括将步骤B得到的平板进行灭菌。

本发明的提供的血液琼脂培养基、苛养菌一次性培养板可用于苛养菌的培养繁殖，苛养菌能很好的生长，且生长菌落典型，便于观察苛养菌的CAMP试验结果及卫星现象。

具体实施方式

为了更好地理解本发明的发明内容，下面结合具体实施例对本发明的发明内容进一步进行说明。

实施例1

一种血液琼脂培养基，包括以下成分：

本实施例的血液培养基通过以下方法得到：

第一步：称量、灭菌及溶化，按上述成分称取原料，并进行灭菌，并将除琼脂以外的成分溶于50mL无菌水中；

第二步：调pH，先用pH试纸或pH仪，测试第一步得到的液体的pH，使用1mol/LNaOH和1mol/LHCl调节溶液pH值到7.0；

第三步：加琼脂、溶化、定容，将步骤一中称量并灭菌的琼脂加入第二步中调节pH后的溶液中，并进行煮沸5min，使琼脂溶化，并添加无菌水定容至100mL；

第四步：灭菌，采用121℃17min高压蒸汽灭菌；

第五步：分装倒平板，分装时移至47℃水浴锅中，水浴15至20分钟后加入无菌脱纤维羊血，依要求分装平皿；

第六步：无菌检验，将步骤五中得到的血液琼脂培养基在37℃培养箱中培养24-48小时，检验无菌性。

将本实施例的血液琼脂培养基用于培养流感嗜血杆菌24时间，结果发现，流感嗜血杆菌在本实施例提供的一次性血液琼脂培养基上生长良好，生长的细菌出现典型菌落。

将本实施例的血液琼脂培养基用于CAMP试验，结果发现，流感嗜血杆菌在本实施例提供的血液琼脂培养基上生长后，溶血现象易于观察。

同样的，将本实施例的血液琼脂培养基用于观察流感嗜血杆菌的卫星现象，结果发现，与金黄色葡萄球菌共同培养后，发现，靠近金黄色葡萄球菌的流感嗜血杆菌菌落较大，靠近金黄色葡萄球菌的流感嗜血杆菌菌落较小，即，卫星现象明显，便于观察。

对比例1

采用现有技术：将无菌脱纤维羊血与无菌琼脂培养基按比例1：10混合，然后放入一次性无菌塑料平皿中，制成一次性平板。同样地，将流感嗜血杆菌在该培养基上培养24时间，发现流感嗜血杆菌在该培养基上不能生长。

同时，将该培养基用于流感嗜血杆菌的CAMP实验，结果发现几乎观察不出溶血现象。

同样地，将该对比例中得到的培养基用于观察流感嗜血杆菌卫星现象，流感嗜血杆菌在该对比例中的培养基上培养后，根本没有出现卫星现象。

从实施例1及对比例1可以得到：流感嗜血杆菌能在本发明提供的血液培养基上很好地生长，且生长菌落明显，CAMP实验结果及卫星现象明显。而流感嗜血杆菌在对比例1的培养基上不能生长(或能生长，但是生长情况不好，或生长良好，但是没有出现典型菌落，CAMP实验结果及卫星现象不明显)。

本发明的提供的血液琼脂培养基、苛养菌一次性培养板可用于苛养菌的培养繁殖，苛养菌能很好的生长，且生长菌落典型，便于观察苛养菌的CAMP试验结果及卫星现象。

实施例2.1

一种血液琼脂培养基，与实施例1基本相同，不同之处在于，本实施例中的血液琼脂培养基的成分如下：

实施例2.2

一种血液琼脂培养基，与实施例1基本相同，不同之处在于，本实施例中的血液琼脂培养基的成分如下：

实施例2.3

一种血液琼脂培养基，与实施例1基本相同，不同之处在于，本实施例中的血液琼脂培养基的成分如下：

实施例3.1

一种血液琼脂培养基，与实施例1基本相同，不同的是，其中的固体琼脂培养基换成半固体琼脂培养基，且其添加量为0.5％。

实施例3.2

一种血液琼脂培养基，与实施例3.1基本相同，不同的是，其中的固体琼脂培养基换成半固体琼脂培养基，且其添加量为0.8％。

实施例3.3

一种血液琼脂培养基，与实施例3.1基本相同，不同的是，其中的固体琼脂培养基换成半固体琼脂培养基，且其添加量为0.7％。

实施例3.4

一种血液琼脂培养基，与实施例3.1基本相同，不同的是，其中的固体琼脂培养基换成半固体琼脂培养基，且其添加量为0.6％。

实施例4.1

一种血液琼脂培养基，与实施例1基本相同，不同的是，流感嗜血杆菌的培养时间为48小时。

实施例4.2

一种血液琼脂培养基，与实施例1基本相同，不同的是，流感嗜血杆菌的培养时间为36小时。

实施例5.1

一种血液琼脂培养基，与实施例1基本相同，不同的是，将所述血液琼脂培养基用于培养副流感嗜血杆菌，其结果大致相同。

实施例5.2

一种血液琼脂培养基，与实施例1基本相同，不同的是，将所述血液琼脂培养基用于培养肺炎链球菌，其中琼脂培养基为适用于肺炎链球菌生长的普通的琼脂培养基。

实施例5.3

一种血液琼脂培养基，与实施例1基本相同，不同的是，将所述血液琼脂培养基用于培养淋病奈瑟菌，其中琼脂培养基为适用于淋病奈瑟菌生长的琼脂培养基。

实施例5.4

一种血液琼脂培养基，与实施例1基本相同，不同的是，将所述血液琼脂培养基用于培养脑膜炎奈瑟菌，其中琼脂培养基为适用于脑膜炎奈瑟菌生长的琼脂培养基。

实施例5.5

一种血液琼脂培养基，与实施例1基本相同，不同的是，将所述血液琼脂培养基用于培养卡他莫拉菌，其中琼脂培养基为适用于卡他莫拉菌生长的琼脂培养基。

实施例5.6

一种血液琼脂培养基，与实施例1基本相同，不同的是，将所述血液琼脂培养基用于培养百日咳鲍特菌，其中琼脂培养基为适用于百日咳鲍特菌生长的琼脂培养基。

实施例6.1

一种血液琼脂培养基，与实施例1基本相同，不同的是，所述血液琼脂培养基还包括浓度百分比为0.05％磷酸氢二钾。磷酸氢二钾的作用是缓冲剂。

实施例6.2

一种血液琼脂培养基，与实施例1基本相同，不同的是，所述血液琼脂培养基还包括0.01％硫酸镁，硫酸镁的作用是为微生物生长提供生长因子。

实施例6.3

一种血液琼脂培养基，与实施例1基本相同，不同的是，不包括其中的NaCl。

实施例7.1

一种一次性苛养菌培养平板，包括上述实施例中任一种血液琼脂培养基。

本实施例的一次性苛养菌培养平板通过以下方案制备得到：

步骤A.按照实上述任一施例制备血液琼脂培养基；

步骤B.将步骤A中得到的血液琼脂培养基放入一次性平皿中，制成一次性平板，用于培养苛养菌。

实施例7.2

一种一次性苛养菌培养平板，与实施例7.1基本相同，不同的是，在其制备过程中，成型一次性平板后，再次进行辐照灭菌，辐照计量仍为8KGy。

需要说明的是，以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。