一种孝扇草羊耳菊组合物及其应用

摘要

本发明涉及一种孝扇草羊耳菊组合物及其应用，所述孝扇草羊耳菊组合物，由质量之比为1～5:1的孝扇草和羊耳菊组成。本发明所述的孝扇草羊耳菊组合物在制备抗类风湿性关节炎的应用的有益效果如下：本发明组合物可有效治疗类风湿性关节炎，效果优于单独使用孝扇草，具有很好的临床应用前景。

说明书

(一)技术领域

本发明涉及一种孝扇草羊耳菊组合物及其应用。

(二)背景技术

类风湿性关节炎是一种以骨关节滑膜炎为特征的，以对称性多关节炎为主要临床表现的异质性、系统性、慢性自身免疫功能障碍疾病。全世界发病率为1％，我国发病率为0.3％，发病一年内致残率高达20％，严重影响人类的健康和生活质量。目前临床用于治疗类风湿性关节炎的药物都存在毒性和耐受性的矛盾，新型的一些生物制剂由于价格昂贵应用受限。

孝扇草为旋花科(Convolvulaceae)打碗花属(Calystegia)植物肾叶打碗花(Calystegiasoldanella(L.)R.Br.[ConvolvulussoldanellaL.])，民间多以全草及根状茎入药。其资源丰富，药用历史悠久，主要有祛风利湿，化痰止咳，清肺止血，利尿解毒等功效。用于治疗咳嗽，肾炎水肿，风湿关节疼痛，痹症等。

羊耳菊(Inulacappa(Buch.-Ham.)DC.)为菊科(Compositae)旋覆花属植物，药味苦微辛，性平无毒，以全草或根花入药，收载于《中国壮药学》及《中国民族药炮制集成》，具有行气止痛、祛风消肿之功，主治风湿骨痛、跌打损伤、感冒风寒等。在我国广西、云南、贵州等省的侗、傣、景颇、拉祜、傈僳、苗、彝、佤、壮等族的民间作为多种风湿骨痛方剂中主药运用，有丰富的药用经验。近年来对羊耳菊研究药理活性的报道较少，目前仅发现有抗氧化作用和抑菌作用。

(三)发明内容

本发明目的是提供一种孝扇草羊耳菊组合物及其在制备抗类风湿性关节炎药物中的应用。

本发明采用的技术方案是：

一种孝扇草羊耳菊组合物，由质量之比为1～5:1的孝扇草和羊耳菊组成。

所述孝扇草和羊耳菊质量之比优选为2:1。

本发明还涉及孝扇草羊耳菊组合物在制备治疗类风湿性关节炎的药物中的应用。

具体的，所述孝扇草羊耳菊提取物在制备治疗类风湿性关节炎的药物中的应用，所述提取物为水提取物、醇提取物或醇提乙酸乙酯萃取部位。

水提物制备方法：取孝扇草羊耳菊组合物干燥粗粉，孝扇草与羊耳菊粗粉质量比为1～5:1，加入药材8～10倍量的水，提取前浸泡1～2h，加热回流提取2～3次，每次1～2h，减压抽滤后浓缩，即得。

醇提物制备方法：取孝扇草羊耳菊组合物干燥粗粉，孝扇草与羊耳菊粗粉质量比为1～5:1，加入药材8～10倍量的50％乙醇，提取前浸泡30min～2h，加热回流提取2～3次，每次1～2h，减压抽滤后浓缩，即得。

经试验比较发现，孝扇草羊耳菊乙酸乙酯提取物效果最佳，因此，所述提取物优选为孝扇草羊耳菊乙酸乙酯提取物，由如下方法制备得到：取其孝扇草与羊耳菊干燥粗粉，孝扇草与羊耳菊粗粉质量比为1～5:1，加入10～12倍量80～95％乙醇，浸泡1～2h后加热回流提取2～3次，每次1～2h，合并两次滤液，回收乙醇，浓缩至无醇味，加适量水溶解，先用石油醚萃取至无色，萃余溶液再用乙酸乙酯萃取至无色，取乙酸乙酯萃取部位，挥干溶剂，即得孝扇草羊耳菊乙酸乙酯提取物。

所述药物可添加合适的药用辅料，制成下列之一的剂型：①注射液，②片剂，③胶囊剂，④颗粒剂，⑤汤剂。

本发明以其活性为先导，对孝扇草羊耳菊组合物抗炎镇痛、抗风湿和抗类风湿性关节炎的有效部位进行研究，实验从不同提取物及萃取部位着手，选用经典的小鼠热板法、扭体法、二甲苯致小鼠耳廓肿胀法等抗炎镇痛模型和佐剂性关节炎大鼠模型，在整体水平上进行抗炎镇痛、抗风湿和抗类风湿性关节炎药效学研究，探讨了孝扇草羊耳菊组合物对抗炎镇痛模型小鼠的影响，对佐剂性关节炎大鼠模型的足趾肿胀度、关节炎指数和脏器指数的影响，初步确定孝扇草羊耳菊组合物最佳有效部位为孝扇草羊耳菊组合物醇提乙酸乙酯萃取部位。

本发明所述的孝扇草羊耳菊组合物在制备抗类风湿性关节炎的应用的有益效果如下：本发明组合物可有效治疗类风湿性关节炎，效果优于孝扇草单方，具有很好的临床应用前景。

(四)附图说明

图1为大鼠滑膜组织图(10×10)，A：空白；B：模型；C：阳性；D：给药；

图2为大鼠滑膜组织图(10×20)，A：空白；B：模型；C：阳性；D：给药。

(五)具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：

实施例1：

孝扇草羊耳菊水提取物制备：取孝扇草羊耳菊组合物干燥粗粉，孝扇草与羊耳菊粗粉质量比为2:1，加入药材8倍质量的水，浸泡1h后，加热回流提取2次，每次1h，减压抽滤后浓缩至相对密度为1.10，即得。

孝扇草羊耳菊醇提物制备：取孝扇草羊耳菊组合物干燥粗粉，孝扇草与羊耳菊粗粉质量比为2:1，加入药材10倍质量的50％(v/v)乙醇，浸泡30min后，加热回流提取2次，每次1h，减压抽滤后浓缩至相对密度为1.10，即得。

孝扇草羊耳菊乙酸乙酯萃取部位(即乙酸乙酯提取物)制备：取孝扇草羊耳菊组合物干燥粗粉，孝扇草与羊耳菊粗粉质量比为2:1，加入10倍质量的95％乙醇，浸泡1h后加热回流提取2次，每次2h，合并两次滤液，滤过，回收乙醇，浓缩至无醇味，加少量水溶解，先用石油醚萃取，萃余溶液再用乙酸乙酯萃取至无色，取乙酸乙酯萃取部位挥干溶剂，即得孝扇草羊耳菊乙酸乙酯萃取部位。

孝扇草羊耳菊石油醚萃取部位制备：取孝扇草羊耳菊组合物干燥粗粉，孝扇草与羊耳菊粗粉质量比为2:1，加入10倍质量的95％乙醇，浸泡1h后加热回流提取2次，每次2h，合并两次滤液，滤过，回收乙醇，浓缩至无醇味，加少量水溶解，再用石油醚萃取至无色，取石油醚萃取部位挥干溶剂，即得孝扇草羊耳菊石油醚萃取部位。

孝扇草羊耳菊正丁醇萃取部位及剩余部位制备：取孝扇草羊耳菊组合物干燥粗粉，孝扇草与羊耳菊粗粉质量比为2:1，加入10倍质量的95％乙醇，浸泡1h后加热回流提取2次，每次2h，合并两次滤液，滤过，回收乙醇，浓缩至无醇味，加少量水溶解，先用石油醚萃取，所得萃余溶液用乙酸乙酯萃取，所得萃余溶液再用正丁醇萃取至无色，取正丁醇萃取部位挥干溶剂，即得孝扇草羊耳菊正丁醇萃取部位，并得到溶剂萃取后剩余部位(即正丁醇萃余溶液)备用。

实验方法1：

小鼠热板法实验：雄性ICR小鼠50只，体重(20±2)g(剔除过敏感及不敏感动物)，随机分为5组，每组10只，即为空白对照组，孝扇草羊耳菊组合物水提物低、中、高剂量组(分别为生药量2.5g·kg^-1、5.0g·kg^-1、10.0g·kg^-1)，阳性药(阿司匹林)组(0.25g·kg^-1)。药物均调节至相应浓度按0.2ml·10g^-1灌胃给药，每天一次，空白对照组给同体积蒸馏水，连续7d，末次给药1h后，将小鼠放在55℃金属板上，以小鼠舔后足或跳跃反应潜伏期为痛阈指标，记录在金属板上停留的时间。

实验结果：

对小鼠痛阈值的影响：结果表明孝扇草羊耳菊组合物水提物各剂量组能提高小鼠的痛阈值，与空白对照组相比有非常显著差异(P<0.001)，提示孝扇草羊耳菊组合物水提物组有非常显著的镇痛作用。见表1。

表1：孝扇草羊耳菊组合物水提物对小鼠痛阈值的影响(n＝10)

组别剂量/g·kg^-1给药1h后痛阈值空白组----15.6±3.4阳性组0.2525.3±4.2^**高剂量10.035.9±4.7^**中剂量5.029.6±5.9^**低剂量2.524.9±5.6^**

注：与空白对照组比较，^**P<0.001。

实验方法2：

小鼠醋酸扭体法实验：雄性ICR小鼠50只，体重(20±2)g，分组与给药方法同实验方法1，连续7d，末次给药后1h后，各小鼠腹腔注射0.6％的乙酸0.1ml·10g^-1，观察15min内由乙酸引起的扭体次数，并计算抑制率。抑制率(％)＝(生理盐水组扭体次数-试药组扭体次数)/生理盐水组扭体次数×100％。

实验结果：

对醋酸所致小鼠扭体反应的影响：结果见表2。结果所示，孝扇草羊耳菊组合物水提物各剂量组均能明显减少醋酸所致小鼠扭体反应次数，与空白组比较有非常显著的差异(P<0.001)。表明孝扇草羊耳菊组合物水提物具有非常显著的镇痛作用。

表2：孝扇草羊耳菊组合物水提物对乙酸所致小鼠扭体反应的影响(n＝10)

组别剂量/g·kg^-1扭体次数/15min抑制率/％空白组----45.3±8.9----阳性组0.2518.8±5.7^**58.5高剂量10.025.6±8.4^**43.49中剂量5.023.6±5.4^**47.90低剂量2.522.1±7.7^**51.21

注：与空白对照组比较，^**P<0.001。

实验方法3：

拮抗二甲苯致小鼠耳肿胀实验：雄性ICR小鼠50只，体重(20±2)g，分组与给药方法同实验方法1，末次给药1h后，于小鼠右耳前后涂二甲苯0.02ml/只，左耳不做任何处理。4h后将动物断椎处死，剪下双耳，用9mm直径打孔器分别在同一部位打下圆耳片，电子天平称重，每鼠右耳重量减去左耳重量为肿胀度。肿胀抑制率＝(对照组平均肿胀度-给药组平均肿胀度)/对照组平均肿胀度×100％。

实验结果：

对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响：结果见表3。结果所示，孝扇草羊耳菊组合物水提物各剂量组对二甲苯致小鼠耳廓肿胀有非常显著的抑制作用。

表3：孝扇草羊耳菊组合物水提物对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响(n＝10)

组别剂量/g·kg^-1肿胀率/％耳肿胀抑制率/％空白组----35.7±12.5----阳性组0.2516.3±8.2^**54.34高剂量10.012.6±5.5^**64.71中剂量5.08.1±6.8^**77.31低剂量2.515.7±3.9^**56.02

注：与空白对照组比较，^**P<0.001。

实验方法4：

小鼠毛细血管通透性实验：雄性ICR小鼠50只，体重(20±2)g，分组与给药方法同实验方法1，连续7d，末次给药后1h，分别给小鼠尾静脉注射0.5％伊文思蓝生理盐水溶液0.1ml·10g^-1，随即腹腔注射0.6％醋酸生理盐水溶液0.1ml·10g^-1，20min后处死，剪开腹部皮肤肌肉，用6ml生理盐水洗涤腹腔，吸出洗涤液，加生理盐水至10ml，3000r·min^-1离心10min，取上清液于576nm处测定其吸收值。以空白对照组小鼠染料渗出量为100％计算给药小鼠腹腔渗出的抑制率。以抑制率值计算通透性。

抑制率＝(空白对照组渗出量－用药组渗出量)/空白对照组渗出量×100％。

实验结果：

对小鼠毛细血管通透性的影响：结果见表4。结果所示，与空白组比较，孝扇草羊耳菊组合物水提物各剂量组均可降低由醋酸引起的小鼠毛细血管通透性的增加，腹腔毛细血管渗透液的吸光值显著降低(P<0.001)，即对急性炎症渗出有明显的抑制作用。

表4：孝扇草羊耳菊组合物水提物对小鼠毛细血管通透性的影响(n＝10)

注：与空白对照组比较，^**P<0.001。

实验方法5：

拮抗鸡蛋清致小鼠足肿胀实验：昆明种小鼠50只，体重(20±2)g，分组与给药方法同实验方法1，连续7d。末次给药60min后，测定各小鼠的右后足趾容积，各小鼠右后足趾皮下注射0.1ml鸡蛋清(室温24℃)，于注射后1h、3h、6h分别测定各鼠右后足趾容积，比较各组小鼠药后不同时间右后足趾肿胀率。按下式计算：肿胀率(％)＝(致炎后足趾容积值－致炎前足趾容积值)/致炎前足趾容积值×100％，肿胀抑制率(％)＝(对照组平均肿胀率－给药组平均肿胀率)/对照组平均肿胀率×100％。

实验结果：

对鸡蛋清致小鼠足肿胀的影响：结果见表5。结果表明，鸡蛋清诱发小鼠足水肿的急性非感染性炎症模型，肿胀高峰在致炎后2h。从表5可见，孝扇草羊耳菊组合物水提物各剂量组对鸡蛋清致小鼠足肿胀有非常显著的抑制作用(P<0.001)。

表5：孝扇草羊耳菊组合物水提物对鸡蛋清致小鼠足肿胀的影响(n＝10)

注：与空白对照组比较，^**P<0.001。

实施例2：

实验方法1：随机分为5组，每组10只，即为空白对照组，孝扇草羊耳菊组合物醇提物低、中、高剂量组(分别为生药量2.5g·kg^-1、5.0g·kg^-1、10.0g·kg^-1)，阳性药(阿司匹林)组(0.25g·kg^-1)。其余方法同实施例1。

实验结果：

对小鼠痛阈值的影响：结果表明孝扇草羊耳菊组合物醇提物各剂量组可明显提高热致痛小鼠的痛阈值，与空白组比较具非常显著差异(P<0.001)，其痛阈值提高率略高于阿司匹林。提示孝扇草羊耳菊组合物醇提物组有非常显著的镇痛作用。见表6。

表6：孝扇草羊耳菊组合物醇提物对小鼠痛阈值的影响(n＝10)

组别剂量/g·kg^-1给药1h后痛阈值空白组----16.64±7.23阳性组0.2530.11±9.01^**高剂量10.035.97±8.45^**中剂量5.039.54±9.11^**低剂量2.534.58±8.01^*

注：与空白对照组比较，^**P<0.001。

实验方法2：方法同实施例1，只是给药换为孝扇草羊耳菊组合物醇提物。

实验结果：

对醋酸所致小鼠扭体反应的影响：结果见表7。结果所示，孝扇草羊耳菊组合物醇提物各剂量组均能明显减少醋酸所致小鼠扭体反应次数，与空白组比较有极显著性差异(P<0.01，P<0.001)，提示孝扇草羊耳菊醇提物各剂量组对醋酸所致小鼠扭体反应有非常明显的抑制作用，表明孝扇草羊耳菊组合物醇提物具有非常显著的镇痛作用。

表7：孝扇草羊耳菊组合物醇提物对乙酸所致小鼠扭体反应的影响(n＝10)

组别剂量/g·kg^-1扭体次数/15min抑制率/％空白组----46.3±8.3----阳性组0.2516.4±5.4^*64.58高剂量10.02.0±7.1^**95.68中剂量5.01.9±6.4^**95.90低剂量2.57.9±8.1^**82.94

注：与空白对照组比较，^*P<0.01，^**P<0.001。

实验方法3：方法同实施例1，只是给药换为孝扇草羊耳菊组合物醇提物。

实验结果：

对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响：结果见表8。结果所示，孝扇草羊耳菊组合物醇提物各剂量组对二甲苯致小鼠耳廓肿胀有非常显著的抑制作用。

表8：孝扇草羊耳菊组合物醇提物对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响(n＝10)

组别剂量/g·kg^-1肿胀率/％耳肿胀抑制率/％空白组----37.98±11.0----阳性组0.2513.33±8.10^**64.90高剂量10.014.11±2.99^**62.85中剂量5.013.01±3.7^**65.75低剂量2.516.29±3.91^**57.11

注：与空白对照组比较，^**P<0.001。

实验方法4：

方法同实施例1，只是给药换为孝扇草羊耳菊组合物醇提物。

实验结果：

对小鼠毛细血管通透性的影响：结果见表9。结果所示，与空白组比较，孝扇草羊耳菊组合物醇提物各剂量组均可降低由醋酸引起的小鼠毛细血管通透性的增加，腹腔毛细血管渗透液的吸光值显著降低(P<0.01，P<0.001)，即对急性炎症渗出有明显的抑制作用。

表9：孝扇草羊耳菊组合物醇提物对小鼠毛细血管通透性的影响(n＝10)

组别剂量/g·kg^-1吸光度/A抑制率/％空白组----0.112±0.014----阳性组0.250.045±0.010^**59.82高剂量10.00.061±0.017^**45.54中剂量5.00.068±0.011^**39.29低剂量2.50.089±0.023^*20.54

注：与空白对照组比较，^*P<0.01，^**P<0.001。

实施例3：

实验方法1：方法同实施例1，只是给药换为孝扇草羊耳菊组合物醇提乙酸乙酯萃取部位。

实验结果：

对小鼠痛阈值的影响：结果表明孝扇草羊耳菊组合物醇提乙酸乙酯萃取部位组(Ⅱ组)和各溶剂萃取后剩余部位组(Ⅳ组)能显著提高小鼠的痛阈值，与空白组比较有显著差异(P<0.05，P<0.01)。结果见表10。

表10孝扇草羊耳菊组合物醇提各萃取部位对小鼠痛阈值的影响(x±s，n＝10)

组别剂量/g·kg^-1给药1h后痛阈值/s空白组/19.16±7.2Ⅰ组1020.24±6.98Ⅱ组1030.87±11.19^**Ⅲ组1021.08±9.54Ⅳ组1025.99±7.98^*阳性组0.2530.19±7.55^**

注：与空白组比较，^*P<0.05，^**P<0.01。

实验方法2：方法同实施例1，只是给药换为孝扇草羊耳菊组合物醇提乙酸乙酯萃取部位。

实验结果：

对醋酸所致小鼠扭体反应的影响：结果见表11。结果所示，孝扇草羊耳菊组合物醇提各萃取部位均能明显减少醋酸致小鼠扭体反应次数，与空白组比较具有显著性差异(P<0.05，P<0.01)。表明孝扇草羊耳菊组合物醇提各萃取部位具有显著的镇痛作用。

表11：孝扇草羊耳菊组合物醇提各萃取部位对醋酸致小鼠扭体反应的影响(x±s，n＝12)

组别剂量/g·kg^-1扭体次数/次抑制率/％空白组/38.74±6.66/Ⅰ组1016.39±7.79^*57.69Ⅱ组107.02±5.59^**81.88Ⅲ组107.19±6.22^**81.44Ⅳ组1010.17±7.44^*73.74阳性组0.2514.07±3.99^*63.68

注：与空白组比较，^*P<0.05，^**P<0.01。

实验方法3：方法同实施例1，只是给药换为孝扇草羊耳菊组合物醇提乙酸乙酯萃取部位。

实验结果：

对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响：结果见表12.结果表明孝扇草羊耳菊组合物醇提乙酸乙酯萃取部位组(Ⅱ组)对二甲苯致小鼠耳廓肿胀有显著的抑制作用，与空白组比较有显著性差异(P<0.01)。

表12：孝扇草羊耳菊组合物醇提各萃取部位对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响(n＝10)

组别剂量/g·kg^-1肿胀率％耳肿胀抑制率/％空白组/37.20±10.25/Ⅰ组1025.47±6.5431.53Ⅱ组1012.45±8.01^**66.53Ⅲ组1024.59±7.7733.90Ⅳ组1028.46±5.9823.49阳性组0.2515.77±8.54^**57.61

注：与空白组比较，^*P<0.01。

实施例4：

实验方法：

动物分组：60只SD雄性大鼠，体重(160±10)g，适应饲养一周后，按每组10只随机分为6组：空白组、模型组、孝扇草羊耳菊组合物水提物低、中、高剂量组，阳性对照组。

造模及给药：阳性组、模型组、孝扇草羊耳菊组合物提取物低、中、高剂量组于大鼠右后足垫皮内注射0.1ml/只弗氏完全佐剂造模，空白组于于大鼠右后足垫皮内注射0.1ml/只生理盐水；造模同时分别按阳性组15mg·kg^-1灌胃给予雷公藤多苷片，孝扇草羊耳菊组合物提取物低、中、高剂量组分别灌胃给予生药量2.5g·kg^-1、5.0g·kg^-1、10.0g·kg^-1孝扇草羊耳菊组合物水提物，药物均调节至相应浓度按1ml·100g^-1灌胃给药，模型组、空白组给予等体积的蒸馏水，每天一次，共28d。

检测指标：

①动物状态观察：包括毛色、光泽度及活动情况。

②大鼠体重的影响：实验第ld称重，以后每7d称重1次。后一次的体重减去前一次的体重为各组大鼠体重增长数。

③足爪肿胀度测量：造模前，大鼠双后肢拉直，在踝关节上0.5cm处用苦味酸做记号，然后放入足趾容积测量仪内，使足标记与水面相平，测量造模前各组大鼠的左、右足足容积(mL)5次，并记录，取其平均值作为造模前足肿胀度。并用同样方法测量造模后第6h、12h、24h、36h、48h、60h、72h、7d、11d右后足足趾容积，14d、18d、21d、24d、27d测量左、右后足足趾容积并记录。根据左、右后足趾容积与造模前容积计算足肿胀度。

足肿胀度(mL)＝造模后足趾容积-造模前足趾容积。

④主要脏器指数测定：末次给药(第28d给药)4h后处死动物，取胸腺、脾脏，称重，计算脏器指数，脏器指数(mg·g^-1)＝(脏器重×1000)/体重。

⑤滑膜组织病理切片：末次给药后处死动物，取膝关节滑膜，福尔马林固定，做常规HE病理切片检查。滑膜病理评分标准：炎细胞：0分，无；1分，稀疏、散在；2分，较密集；3分，大量。纤维组织增生：0分，无；1分，少量增生；2分，中等；3分，大量。滑膜组织增生：0，无；1分，单层；2分，2层；3分，3层。

实验结果：

①一般情况观察

造模后大鼠急性炎症反应明显，注射弗氏完全佐剂侧明显肿大。与空白组比较，造模大鼠活动减少，发生明显炎症反应时，进食明显减少，毛色欠光滑，踝关节肿大溃烂；给药组大鼠无溃烂现象；空白组大鼠与造模前无差异。

②各组大鼠体重变化

造模28d内，模型组大鼠体重增长较正常组明显减少，差异具有显著性(P<0.05，P<0.01)。孝扇草羊耳菊组合物水提物各剂量组AA大鼠体重增加与模型组比较存在显著性差异(P<0.05，P<0.01)，说明孝扇草羊耳菊组合物水提物各剂量组均能不同程度改善炎症对AA大鼠体重的影响。结果见表13。

表13：各组大鼠体重变化情况(单位：g；n＝10)

注：与空白组比较，^#P<0.05，^##P<0.01；与模型组比较，^★P<0.05，^★★P<0.01。

③大鼠关节肿胀度测量

实验前所有大鼠足趾容积组间无显著性差异(P＞0.05)，实验周期内空白组大鼠四肢关节无红肿现象，行动灵活自如。造模后大鼠急性原发性炎症反应明显，足趾严重红肿，继发性炎症反应亦有发生，可见造模对侧足趾略红肿，但不及原发性炎症明显严重。造模28d，模型组大鼠大部分踝关节处发生不同程度的溃烂，阳性对照组及孝扇草羊耳菊组合物水提物治疗组均无溃烂现象。孝扇草羊耳菊组合物对大鼠足趾肿胀度原发性炎症及继发性炎症的影响见表14、15。

表14：孝扇草羊耳菊组合物水提物对AA大鼠右侧足趾肿胀度的影响(n＝10)

(续)表14：孝扇草羊耳菊组合物水提物对AA大鼠右侧足趾肿胀度的影响(n＝10)

注：与空白组比较，^#P<0.05，^##P<0.01；与模型组比较，^★P<0.05，^★★P<0.01。

表15：孝扇草羊耳菊组合物水提物对AA大鼠左侧足趾肿胀度的影响(n＝10)

注：与空白组比较，^#P<0.05，^##P<0.01；与模型组比较，^★P<0.05，^★★P<0.01。

④主要脏器指数测定

结果见表16。结果表明孝扇草羊耳菊组合物水提物各剂量组均对AA大鼠胸腺、脾脏、肾上腺有明显的抑制作用。

表16：孝扇草羊耳菊组合物水提物对AA大鼠胸腺、脾、肾上腺重量的影响(n＝10)

注：与空白组比较，^#P<0.05，^##P<0.01；与模型组比较，^★P<0.05，^★★P<0.01。

⑤滑膜病理

正常大鼠滑膜组织未见明显的新生血管及炎症细胞浸润，滑膜细胞排列为1-2层。模型组有明显血管增生、滑膜细胞体积增大，滑膜增厚，炎性细胞浸润。治疗组滑膜组织可见少量新生血管及炎症细胞浸润，滑膜轻度增厚。模型组病理评分均显著高于正常组(P<0.01)；孝扇草羊耳菊组合物低、中、高剂量组炎细胞、滑膜组织增生病理评分低于模型组(P<0.01)。结果见表17，附图1，2。

表17:孝扇草羊耳菊组合物水提物对AA大鼠滑膜病理评分的影响(n＝10)

组别剂量/g·kg^-1炎性细胞浸润滑膜组织增生纤维组织增生空白组-----0.53±0.12^★★0.56±0.33^★★0.49±0.24^★★模型组-----1.29±0.11^##1.53±0.45^##1.28±0.24^##阳性组0.0150.77±0.14^##★★0.68±0.33^#★★0.78±0.31^##★★高剂量10.00.79±0.22^##★★0.75±0.34^##★★0.84±0.36^##★★中剂量5.00.80±0.44^##★★0.70±0.22^##★★0.85±0.23^##★★低剂量2.50.83±0.22^##★★0.72±0.40^##★★0.86±0.20^##★★

注：与空白组比较，^#P<0.05，^##P<0.01；与模型组比较，^★P<0.05，^★★P<0.01。

实施例5：

实验方法：

动物分组：60只SD雄性大鼠，体重(160±10)g，适应饲养一周后，按每组10只随机分为6组：空白组、模型组、孝扇草羊耳菊组合物醇提物低、中、高剂量组，阳性对照组。

造模及给药：同实施例4。

检测指标：

①动物状态观察：同实施例4。

②大鼠体重的影响：同实施例4。

③足爪肿胀度测量：同实施例4。

④关节炎指数评分：大鼠造模后第14d开始，根据大鼠四肢关节炎症的红、肿及硬化程度定期记录临床炎症评分，以评价AA大鼠模型的继发性病变程度。大鼠单个肢体最高评分为4分，4肢总评分最高为16分。如下表18评分标准。

表18：关节炎指数评分表

⑤主要脏器指数测定：同实施例4。

实验结果：

①一般情况观察

造模后大鼠急性炎症反应明显，注射弗氏完全佐剂侧明显肿大。空白组大鼠在28d的试验周期内精神状态良好，毛发光泽，动作敏捷，饮食及饮水正常。与空白组比较，造模大鼠精神萎靡，发生明显炎症反应时，进食明显减少，毛色无光泽，体重增长慢，踝关节肿大溃烂；给药组大鼠基本无溃烂现象；空白组大鼠与造模前基本无差异。

②各组大鼠体重变化

空白组大鼠在28d的试验周期内体重呈进行性增长。造模28d内，模型组大鼠体重增长量与空白组比较均有明显差异(P<0.01)，孝扇草羊耳菊醇提物各剂量组AA大鼠体重增加与模型组比较存在显著性差异(P<0.01，P<0.05)，说明孝扇草羊耳菊醇提物各剂量组均能不同程度改善炎症对AA大鼠体重的影响。结果见表19。

表19：各组大鼠体重变化情况(单位：g；n＝10)

组别造模前W/g7d(ΔW)/g14d(ΔW)/g21d(ΔW)/g27d(ΔW)/g空白组175.14±7.2147.11±11.91^★★50.29±12.99^★★48.67±7.26^★★43.29±7.71^★★模型组178.91±6.4426.12±9.8^##27.15±16.01^##29.00±7.89^##32.08±11.98^##阳性组176.11±9.4729.81±7.9^#32.11±18.74^##★30.01±6.09^##39.77±13.31^##★高剂量179.29±6.8938.77±11.57^★★40.02±11.08^#★★38.74±11.54^★★33.99±10.08^##中剂量180.33±4.0732.64±15.71^#★39.94±11.34^#★★38.90±11.29^★★33.77±10.48^##低剂量175.47±9.8732.01±11.00^#★38.88±8.02^#★★34.33±10.74^#★29.08±7.15^##

注：与空白组比较，^#P<0.05，^##P<0.01；与模型组比较，^★P<0.05，^★★P<0.01。

③大鼠关节肿胀度测量

实验前所有大鼠足趾容积组间无显著性差异(P＞0.05)，实验周期内空白组大鼠四肢关节无红肿现象，行动灵活自如。造模后大鼠炎症明显，足趾严重红肿。造模后6h开始出现肿胀，继发性炎症反应亦有发生。孝扇草羊耳菊组合物醇提物各剂量组组对AA大鼠足趾原发性急性肿胀有不同程度的抑制作用。孝扇草羊耳菊组合物对大鼠足趾肿胀度原发性炎症及继发性炎症的影响见表20、21。

表20：孝扇草羊耳菊组合物醇提物对AA大鼠右侧足趾肿胀度的影响(n＝10)

(续)表20：孝扇草羊耳菊组合物醇提物对AA大鼠右侧足趾肿胀度的影响(n＝10)

(续)表20：孝扇草羊耳菊组合物醇提物对AA大鼠右侧足趾肿胀度的影响(n＝10)

注：与空白组比较，^#P<0.05，^##P<0.01；与模型组比较，^★P<0.05，^★★P<0.01。

表21：孝扇草羊耳菊组合物醇提物对AA大鼠左侧足趾肿胀度的影响(n＝10)

(续)表21：孝扇草羊耳菊组合物醇提物对AA大鼠左侧足趾肿胀度的影响(n＝10)

注：与空白组比较，^#P<0.05，^##P<0.01；与模型组比较，^★P<0.05，^★★P<0.01。

④大鼠关节炎指数评分

实验结果见表22。结果表明所有造模组大鼠足趾、足垫、踝关节均出现了不同程度的红肿，到后期由于继发性肿胀的加剧，出现关节畸形及功能障碍的动物增多，模型组大鼠关节评分指数不断升高。孝扇草羊耳菊组合物醇提物各剂量组与模型组比较具有明显差异(P<0.01，P<0.05)。

表22：羊耳菊醇提取物对AA大鼠关节炎评分指数的影响(n＝10)

注：与空白组比较，^##P<0.01；与模型组比较，^★P<0.05，^★★P<0.01。

⑤主要脏器指数测定

结果见表23。结果表明孝扇草羊耳菊组合物醇提物各剂量组均对AA大鼠胸腺、脾脏、肾上腺有明显的抑制作用。

表23：孝扇草羊耳菊组合物醇提物对AA大鼠胸腺、脾、肾上腺重量的影响(n＝10)

组别剂量/g·kg^-1胸腺指数/mg·g^-1脾脏指数/mg·g^-1肾上腺指数/mg·g^-1空白组-----1.64±0.19^★★1.98±0.25^★★0.137±0.05^★★模型组-----1.30±0.18^##2.41±0.27^##0.177±0.03^##阳性组0.0151.60±0.23^★★2.00±0.24^★★0.140±0.02^★★高剂量10.01.48±0.25^#★★2.00±0.15^★★0.148±0.03^★中剂量5.01.50±0.24^#★★1.99±0.14^★★0.140±0.07^★★低剂量2.501.49±0.22^#★★2.01±0.19^★0.144±0.04^★

注：与空白组比较，^#P<0.05，^##P<0.01；与模型组比较，^★P<0.05，^★★P<0.01。

实施例6：

实验方法：

动物分组：60只SD雄性大鼠，体重(160±10)g，适应饲养一周后，按每组10只随机分为6组：空白组(I组)、模型组(II组)、阳性组(III组)、孝扇草羊耳菊组合物醇提乙酸乙酯萃取部位组(IV组)、孝扇草羊耳菊组合物醇提正丁醇萃取部位组(V组)及各溶剂萃取后剩余部位组(VI组)。

造模及给药：空白组(I组)、模型组(II组)、阳性组(III组)、孝扇草羊耳菊组合物醇提乙酸乙酯萃取部位组(IV组)、孝扇草羊耳菊组合物醇提正丁醇萃取部位组(V组)及各溶剂萃取后剩余部位组(VI组)于大鼠右后足垫皮内注射0.1ml/只弗氏完全佐剂造模，空白组于于大鼠右后足垫皮内注射0.1ml/只生理盐水；造模同时分别按阳性组15mg·kg^-1灌胃给予雷公藤多苷片，孝扇草羊耳菊组合物醇提乙酸乙酯萃取部位组(IV组)、孝扇草羊耳菊组合物醇提正丁醇萃取部位组(V组)及各溶剂萃取后剩余部位组(VI组)分别灌胃给予10g·kg^-1药液，药物均调节至相应浓度按1ml·100g^-1灌胃给药，模型组、空白组给予等体积的蒸馏水，每天一次，共28d。

检测指标：

①动物状态观察：包括毛色、光泽度及活动情况。

②大鼠体重的影响：实验第ld称重，以后每7d称重1次。后一次的体重减去前一次的体重为各组大鼠体重增长数。

③足爪肿胀度测量：造模前，大鼠双后肢拉直，在踝关节上0.5cm处用苦味酸做记号，然后放入足趾容积测量仪内，使足标记与水面相平，测量造模前各组大鼠的左、右足足容积(mL)5次，并记录，取其平均值作为造模前足肿胀度。并用同样方法测量造模后第6h、18h、24h、48h、4d、8d、12d、16d、20d、24d、28d右后足足趾容积，12d、16d、20d、24d、28d测量左、右后足足趾容积并记录。根据左、右后足趾容积与造模前容积计算足肿胀度。

足肿胀度(mL)＝造模后足趾容积-造模前足趾容积。

④关节炎指数评分：大鼠造模后第14d开始，根据大鼠四肢关节炎症的红、肿及硬化程度定期记录临床炎症评分，以评价AA大鼠模型的继发性病变程度。大鼠单个肢体最高评分为4分，4肢总评分最高为16分。如前述表18评分标准。

⑤主要脏器指数测定：末次给药4h后处死动物，取胸腺、脾脏，称重，计算脏器指数，脏器指数(mg·g^-1)＝(脏器重×1000)/体重。

实验结果：

①一般情况观察

造模后大鼠急性炎症反应明显，注射弗氏完全佐剂侧明显肿大。空白组在28d的试验周期内精神状态良好，毛发光泽，动作敏捷，饮食及饮水正常。与空白组比较，造模大鼠活动较少，发生明显炎症反应时，进食明显减少，毛发无光泽，体重增长慢，踝关节肿大溃烂；给药组大鼠基本无溃烂现象；空白组大鼠与造模前基本无差异。

②各组大鼠体重变化

造模28d内，模型组大鼠(II组)空白组(Ⅰ组)大鼠状态良好，毛发光泽，体重增加，动作自如，反应灵敏。造模28d后，造模组(Ⅱ组)大鼠体重增长量与空白组(Ⅰ组)比较有极显著性差异(P<0.01，P<0.05)，造模后大鼠毛发枯槁，进食量减少，体重增长慢。造模14d，21d，27d孝扇草羊耳菊组合物醇提乙酸乙酯萃取部位组(Ⅳ组)AA大鼠体重增加与模型组(Ⅱ组)比有极显著性差异(P<0.01)。造模21d和27d孝扇草羊耳菊组合物醇提乙酸乙酯萃取部位组(Ⅳ组)大鼠体重增长量与模型组(Ⅱ组)比有极显著性差异(P<0.01)，结果见表25。

表25:各组大鼠体重变化情况(n＝10)

组别造模前W/g7d(△W)/g14d(△W)/g20d(△W)/g28d(△W)/gⅠ组170.44±5.8840.90±5.66^▲▲45.1±5.11^▲▲46.92±7.97^▲▲45.97±6.94^▲▲Ⅱ组169.98±8.0124.11±6.77^**32.19±6.11^**28.60±7.11^**38.11±6.89^*Ⅲ组171.55±9.0121.83±7.77^**32.88±5.93^**39.61±12.45^**▲▲42.47±12.01^▲▲Ⅳ组169.88±5.6928.60±9.70^*49.89±9.01^▲▲51.27±9.11^*▲▲64.02±11.01^*▲▲Ⅴ组168.41±6.9926.79±5.17^*39.99±4.81^**▲27.73±5.87^**36.20±6.51^**Ⅵ组168.47±8.2222.55±6.19^**33.87±4.17^**37.46±5.11^**▲39.05±11.37^**

注：与空白组比^*P<0.05，^**P<0.01，与模型组比^▲P<0.05，^▲▲P<0.01。

③大鼠关节肿胀度测量

实验前所有的大鼠足趾容积组间无显著性差异(P＞0.05)，实验周期内空白组大鼠四肢关节无红肿现象，行动灵活自如。造模后大鼠急性原发性炎症明显，足趾严重红肿，造模后6h开始出现肿胀。模型组大鼠两侧足趾均出现肿胀、溃烂、水肿、关节畸形，耳朵红肿发炎，尾部出现结节状肿块等继发性病变，造模28d，造模大鼠踝关节处都出现不同程度的溃烂。孝扇草羊耳菊组合物醇提各萃取部位对AA大鼠右足足趾肿胀度影响实验结果见表17，孝扇草羊耳菊组合物醇提各萃取部位对AA大鼠左足足趾肿胀度影响实验结果见表26。

表26：孝扇草羊耳菊组合物醇提各萃取部位对AA大鼠右足足趾肿胀度影响(n＝10)

组别6h18h24h48h4dⅠ组0.02±0.05^▲▲0.03±0.01^▲▲0.03±0.03^▲▲0.04±0.05^▲▲0.04±0.22^▲▲Ⅱ组0.43±0.09^**0.76±0.29^**0.78±0.11^**0.88±0.22^**0.90±0.22^**Ⅲ组0.28±0.09^**▲0.74±0.11^**0.74±0.18^**0.74±0.11^**▲0.80±0.11^**▲Ⅳ组0.20±0.05^**▲0.35±0.27^**▲▲0.55±0.17^**▲▲0.67±0.19^**▲▲0.77±0.22^**▲Ⅴ组0.23±0.05^**▲0.64±0.33^**▲0.62±0.27^**▲▲0.70±0.33^**▲0.84±0.19^**Ⅵ组0.30±0.09^**0.50±0.19^**▲▲0.48±0.08^**▲▲0.81±0.47^**0.94±0.27^**

(续)表26：孝扇草羊耳菊组合物醇提各萃取部位对AA大鼠右足足趾肿胀度影响(n＝10)

注：与空白组比^*P<0.05，^**P<0.01，与模型组比^▲P<0.05，^▲▲P<0.01。

表27：孝扇草羊耳菊组合物醇提各萃取部位对AA大鼠左足足趾肿胀度影响(n＝10)

组别d12d16d20d24d28Ⅰ组0.11±0.030.18±0.06^▲▲0.19±0.05^▲▲0.23±0.05^▲▲0.23±0.07^▲▲Ⅱ组0.16±0.050.20±0.41^**0.25±0.39^**0.37±0.51^**0.49±0.29^**Ⅲ组0.14±0.02^*0.18±0.220.19±0.18^▲▲0.23±0.49^▲▲0.25±0.21^*▲▲Ⅳ组0.10±0.04^**▲0.14±0.21^*▲▲0.24±0.22^**0.22±0.38^▲▲0.17±0.15^**▲▲Ⅴ组0.15±0.05^**0.29±0.22^*0.31±0.11^**▲0.69±0.51^**▲▲0.87±0.451^**▲▲Ⅵ组0.18±0.07^**0.77±0.29^**▲▲0.86±0.27^**▲▲1.73±0.41^**▲▲1.71±0.47^**▲▲

注：与空白组比^*P<0.05，^**P<0.01，与模型组比^▲P<0.05，^▲▲P<0.01。

④大鼠关节炎指数评分

实验结果见表28，结果表明所有造模大鼠关节均出现不同程度的炎症，与空白组(Ⅰ组)对照均有极显著性差异(P<0.01)。阳性组(Ⅲ组)和孝扇草羊耳菊组合物醇提乙酸乙酯萃取部位组(Ⅳ组)能明显改善关节炎症，降低AA大鼠关节炎指数，抑制继发性炎症，与模型组(Ⅱ组)比较均有极显著性差异(P<0.01)。

表28：孝扇草羊耳菊组合物醇提各萃取部位对AA大鼠关节炎指数的影响(n＝10)

组别14d21d27dⅠ组000Ⅱ组5.50±1.22^**5.69±0.89^**5.70±0.77^**Ⅲ组3.00±1.11^**▲▲4.11±1.08^**▲▲4.08±0.69^**▲▲Ⅳ组3.14±1.11^**▲▲3.67±1.02^**▲▲3.87±0.74^**▲▲Ⅴ组5.21±1.27^**5.37±0.99^**5.62±0.66^**Ⅵ组5.39±0.99^**5.54±1.12^**5.60±0.69^**

注：与空白组比^*P<0.05，^**P<0.01；与模型组比^▲P<0.05，^▲▲P<0.01。

⑤主要脏器指数测定

实验结果见表29，结果表明模型组(Ⅱ组)AA大鼠胸腺出现萎缩，胸腺指数下降，脾脏指数升高，与空白对照组(Ⅰ组)相比均存在极显著差异(P<0.01，P<0.01)，阳性组(Ⅲ组)，孝扇草羊耳菊组合物醇提乙酸乙酯萃取部位组(Ⅳ组)和正丁醇萃取部位组(V组)均能明显抑制胸腺的萎缩，升高大鼠胸腺指数，与模型组(Ⅱ组)比较存在极显著性差异(P<0.01，P<0.01，P<0.01)。阳性组(Ⅲ组)和孝扇草羊耳菊组合物醇提乙酸乙酯萃取部位组(Ⅳ组)均能明显升高脾脏指数，与模型组(Ⅱ组)比较存在显著性差异(P<0.01，P<0.05)。

表29孝扇草羊耳菊组合物醇提各萃取部位对AA大鼠脏器指数影响(x±s，n＝10)

组别胸腺指数/g·kg^-1脾脏指数/g·kg^-1Ⅰ组1.74±0.06^▲▲2.06±0.20^▲▲Ⅱ组1.38±0.13^**2.93±0.44^**Ⅲ组1.61±0.11^*▲▲2.54±0.40^**▲▲Ⅳ组1.68±0.19^*▲▲2.60±0.40^**▲Ⅴ组1.63±0.33^*▲▲2.79±0.22^**Ⅵ组1.57±0.18^**2.90±0.41^**

注：与空白组比^*P<0.05，^**P<0.01，与模型组比^▲P<0.05，^▲▲P<0.01。

实施案例7：

实验方法：

动物分组：60只SD雄性大鼠，体重(160±10)g，适应饲养一周后，按每组10只随机分为6组：空白组、模型组、孝扇草醇提各萃取部位组(分别为石油醚萃取部位(Ⅰ组)、乙酸乙酯萃取部位(Ⅱ组)、正丁醇萃取部位(Ⅲ组)及各溶剂萃取后剩余部位(Ⅳ组))、阳性对照组，孝扇草提取物制备方法同实施例1，只是去除了组合物中的羊耳菊组分。

造模及给药：阳性组、模型组、孝扇草醇提各萃取部位组(分别为石油醚萃取部位(Ⅰ组)、乙酸乙酯萃取部位(Ⅱ组)、正丁醇萃取部位(Ⅲ组)及各溶剂萃取后剩余部位(Ⅳ组))、阳性对照组于大鼠右后足垫皮内注射0.1ml/只弗氏完全佐剂造模，空白组于大鼠右后足垫皮内注射0.1ml/只生理盐水；造模同时分别按阳性组15mg·kg^-1灌胃给予雷公藤多苷片，孝扇草醇提各萃取部位组(分别为石油醚萃取部位(Ⅰ组)、乙酸乙酯萃取部位(Ⅱ组)、正丁醇萃取部位(Ⅲ组)及各溶剂萃取后剩余部位(Ⅳ组))分别灌胃给予生药量10.0g·kg^-1药物，药物均调节至相应浓度按1ml·100g^-1灌胃给药，模型组、空白组给予等体积的蒸馏水，每天一次，共28d。

检测指标：

①动物状态观察：包括毛色、光泽度及活动情况。

②大鼠体重的影响：实验第ld称重，以后每7d称重1次。后一次的体重减去前一次的体重为各组大鼠体重增长数。

③足爪肿胀度测量：造模前，大鼠双后肢拉直，在踝关节上0.5cm处用苦味酸做记号，然后放入足趾容积测量仪内，使足标记与水面相平，测量造模前各组大鼠的左、右足足容积(mL)5次，并记录，取其平均值作为造模前足肿胀度。并用同样方法测量造模后第6h、12h、24h、36h、48h、60h、72h、7d、11d右后足足趾容积，14d、18d、21d、24d、27d测量左、右后足足趾容积并记录。根据左、右后足趾容积与造模前容积计算足肿胀度。

足肿胀度(mL)＝造模后足趾容积-造模前足趾容积。

④关节炎指数评分：大鼠造模后第14d开始，根据大鼠四肢关节炎症的红、肿及硬化程度定期记录临床炎症评分，以评价AA大鼠模型的继发性病变程度。大鼠单个肢体最高评分为4分，4肢总评分最高为16分。如前述表18评分标准。

⑤主要脏器指数测定：末次给药4h后处死动物，取胸腺、脾脏，称重，计算脏器指数，脏器指数(mg·g^-1)＝(脏器重×1000)/体重。

实验结果：

①一般情况观察

造模后大鼠急性炎症反应明显，注射弗氏完全佐剂侧明显肿大。空白组大鼠在28d的试验周期内精神状态良好，毛发光泽，动作敏捷，饮食及饮水正常，体重呈进行性增长。与空白组比较，造模大鼠精神萎靡，发生明显炎症反应时，即造模后第18-24d，进食明显减少，毛色无光泽，体重增长慢，踝关节肿大溃烂；给药组大鼠基本无溃烂现象；空白组大鼠与造模前基本无差异。

②各组大鼠体重变化

造模28d内，模型组大鼠体重增长量与空白组比较均有明显差异(P<0.01，P<0.05)，孝扇草醇提各萃取部位组AA大鼠体重增加与模型组比较存在显著性差异(P<0.01，P<0.05)，说明孝扇草醇提各萃取部位组均能不同程度改善炎症对AA大鼠体重的影响。结果见表30。

整个实验过程中，空白组(Ⅰ组)大鼠状态良好，毛发光泽，体重增加，动作自如，反应灵敏。造模28d后，所有造模组(Ⅱ组)大鼠体重增长量与空白组(Ⅰ组)比均有极显著性差异(P<0.01)，造模后大鼠毛发枯槁，进食量减少，体重增长慢，造模14d，体重略有增加，同时结果表明，造模14d孝扇草醇提乙酸乙酯萃取部位组(Ⅳ组)AA大鼠体重增加与模型组(Ⅱ组)比有显著性差异(P<0.05)。造模20d和28d孝扇草醇提乙酸乙酯萃取部位组(Ⅳ组)大鼠体重增长量与模型组(Ⅱ组)比有极显著性差异(P<0.01，P<0.01)。与孝扇草羊耳菊组合物醇提各萃取部位组相比，单用孝扇草醇提各萃取部位的AA大鼠体重增长较缓慢，增长量较小，状态较低迷，进食欲望低，反应略迟钝。结果见表30。

表30孝扇草醇提各萃取部位对AA大鼠体重增长的影响(n＝10)

组别造模前W/g7d(ΔW)/g14d(△W)/g21d(△W)/g27d(△W)/gⅠ组174.84±7.8724.84±5.6348.7±5.02^▲▲60.91±8.30^▲▲84.81±7.44^▲▲Ⅱ组169.52±7.9124.71±6.8639.45±6.05^**29.60±7.01^**40.79±7.66^**Ⅲ组171.69±9.0120.82±8.2331.5±5.92^**36.61±11.46^**▲50.48±11.05^**▲Ⅳ组170.82±6.9427.55±3.9844.67±3.01^*▲41.43±9.21^**▲▲56.19±12.23^**▲▲Ⅴ组165.75±8.2525.66±5.2737.25±4.88^**25.73±4.87^**36.91±6.58^**Ⅵ组170.51±11.6620.52±6.3931.78±4.16^**23.23±4.96^**33.48±10.37^**

注：与空白组比^*P<0.05，^**P<0.01，与模型组比^▲P<0.05，^▲▲P<0.01。

②孝扇草醇提各萃取部位对AA大鼠足趾肿胀度的影响

造模后大鼠急性原发性炎症明显，足趾严重红肿，造模后6h开始出现肿胀。造模8d原发性病变达到高峰期。造模12d开始出现继发性病变，16～20d左足足趾肿胀度达到高峰值，两侧足趾均出现肿胀、溃烂、水肿、关节畸形，耳朵红肿发炎，尾部出现结节状肿块等继发性病变，造模28d，造模大鼠踝关节处都出现不同程度的溃烂。与孝扇草羊耳菊组合物醇提各萃取不为相比，单用孝扇草醇提各萃取部位的AA大鼠右足足趾肿胀度较严重，疗效缓慢，效果平和，继发性肿胀度亦较严重。

孝扇草醇提各萃取部位对AA大鼠左足足趾肿胀度影响实验结果见表31。

表31孝扇草醇提各萃取部位对AA大鼠右足足趾肿胀度影响(n＝10)

组别6h18h24h48hⅠ组0.14±0.060.08±0.05^▲▲0.08±0.02^▲▲0.08±0.05Ⅱ组0.25±0.10^*0.88±0.29^**0.65±0.12^**0.78±0.27^**Ⅲ组0.28±0.08^**0.78±0.29^**0.79±0.17^**▲0.76±0.15^**Ⅳ组0.30±0.07^**0.83±0.31^**0.70±0.16^**0.69±0.18^**Ⅴ组0.23±0.06^**0.66±0.35^**0.60±0.14^**0.75±0.27^**Ⅵ组0.31±0.08^**0.54±0.20^**▲▲0.51±0.09^**▲▲0.81±0.17^**

表31孝扇草醇提各萃取部位对AA大鼠右足足趾肿胀度影响(n＝10)

组别4d8d12d16dⅠ组0.21±0.140.28±0.13^▲▲0.24±0.07^▲▲0.31±0.06^▲▲Ⅱ组0.80±0.23^**1.16±0.29^**1.30±0.54^**2.62±0.62^**Ⅲ组0.85±0.14^**0.91±0.38^**1.13±0.31^**2.03±0.57^**▲Ⅳ组0.88±0.28^**0.86±0.26^**▲▲1.18±0.43^**2.00±0.68^**▲Ⅴ组0.81±0.26^**0.86±0.29^**▲1.20±0.43^**2.12±0.51^**▲Ⅵ组0.95±0.25^**0.92±0.23^**▲1.34±0.46^**2.71±0.51^**

注：与空白组比^*P<0.05，^**P<0.01，与模型组比^▲P<0.05，^▲▲P<0.01。

表31孝扇草醇提各萃取部位对AA大鼠左足足趾肿胀度影响(n＝10)

注：与空白组比^*P<0.05，^**P<0.01，与模型组比^▲P<0.05，^▲▲P<0.01。

③孝扇草醇提各萃取部位对AA大鼠关节炎指数的影响

实验结果见表45，结果表明所有造模大鼠关节均出现不同程度的炎症，与空白组(Ⅰ组)对照均有极显著性差异(P<0.01)。阳性组(Ⅲ组)和孝扇草醇提乙酸乙酯萃取部位组(Ⅳ组)能明显改善关节炎症，降低AA大鼠关节炎指数，抑制继发性炎症，与模型组(Ⅱ组)比较均有极显著性差异(P<0.01，P<0.01)。与孝扇草羊耳菊组合物醇提各萃取部位相比，单用孝扇草醇提各萃取部位的AA大鼠关节炎指数普遍较高，关节炎症明显。

表45孝扇草醇提各萃取部位对AA大鼠关节炎指数的影响(n＝10)

组别12d20d28dⅠ组000Ⅱ组5.20±1.32^**5.60±0.70^**5.60±0.84^**Ⅲ组3.10±1.10^**▲▲4.30±1.06^**▲▲3.90±0.74^**▲▲Ⅳ组3.70±1.06^**▲▲4.60±0.97^**▲▲3.90±0.74^**▲▲Ⅴ组5.30±1.25^**5.70±0.82^**5.20±0.63^**Ⅵ组5.70±0.95^**6.20±0.92^**5.80±0.79^**

注：与空白组比^*P<0.05，^**P<0.01；与模型组比^▲P<0.05，^▲▲P<0.01。

④孝扇草醇提各萃取部位对AA大鼠脏器指数的影响

实验结果见表46，结果表明模型组(Ⅱ组)AA大鼠胸腺出现萎缩，胸腺指数下降，脾脏指数升高，与空白对照组(Ⅰ组)相比均存在极显著差异(P<0.01，P<0.01)，阳性组(Ⅲ组)和孝扇草醇提乙酸乙酯萃取部位组(Ⅳ组)均能明显抑制胸腺的萎缩，升高大鼠胸腺指数，与模型组(Ⅱ组)比较存在极显著性差异(P<0.01，P<0.01)。与孝扇草羊耳菊组合物醇提各萃取部位相比，单用孝扇草醇提各萃取部位的AA大鼠胸腺萎缩较严重，脾脏指数较高，疗效平和。

表46孝扇草醇提各萃取部位对AA大鼠脏器指数影响(n＝10)

组别胸腺指数/g·kg^-1脾脏指数/g·kg^-1Ⅰ组1.73±0.16^▲▲2.07±0.18Ⅱ组1.40±0.12^**2.88±0.38^**Ⅲ组1.59±0.15^*▲▲2.60±0.43^**Ⅳ组1.62±0.22^▲▲2.73±0.45^**Ⅴ组1.60±0.342.81±0.33^**Ⅵ组1.47±0.17^**3.53±0.61^**▲▲

注：与空白组比^*P<0.05，^**P<0.01，与模型组比^▲P<0.05，^▲▲P<0.01。

实施例8：

实验方法：

比较孝扇草羊耳菊组合物水提物、醇提物及醇提乙酸乙酯萃取部位对AA大鼠右侧及左侧足趾肿胀度的影响。△足趾肿胀度(ml)＝第27d足趾肿胀度－第1d足趾肿胀度。

实验结果见表47，结果表明模孝扇草羊耳菊组合物醇提乙酸乙酯萃取部位组右侧及左侧足肿胀度均较水提物组及醇提物组小，且具有显著性差异(P<0.01，P<0.05)。说明孝扇草羊耳菊组合物醇提乙酸乙酯萃取部位疗效最佳。

表47孝扇草羊耳菊组合物不同提取物对AA大鼠右侧足趾肿胀度的影响(n＝10)

注：与水提物组比^**P<0.01，与醇提物组比^▲P<0.05。

表48孝扇草羊耳菊组合物不同提取物对AA大鼠左侧足趾肿胀度的影响(n＝10)

注：与水提物组比^*P<0.05，与醇提物组比^▲P<0.05。