忍冬藤或其基源植物忍冬的叶或花提取物及其制备方法和应用

摘要

本发明提供了一种忍冬藤或其基源植物忍冬的叶或花提取物的制备方法，该方法包括以下步骤：(1)将忍冬藤或其基源植物忍冬的叶或花回流提取得到提取液，合并提取液并浓缩得到浓缩液；(2)将该浓缩液加水稀释，然后采用乙酸乙酯进行萃取，除去乙酸乙酯相，取水相备用；(3)将得到的水相过大孔吸附树脂柱吸附，然后水洗除杂，再用浓度为20～40重量％的乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，干燥后得到忍冬藤提取物。该忍冬藤或其基源植物忍冬的叶或花提取物中主要含有环烯醚萜类化合物，并可用于制备抗炎、解热和抑菌药物。

说明书

技术领域

本发明涉及一种忍冬藤或其基源植物忍冬的叶或花提取物及其制备方法。本发明还涉及所述提取物在制备抗炎、解热或抑菌药物中的应用和含有该提取物的药物组合物。

背景技术

忍冬藤为忍冬科植物忍冬(LonicerajaponicaThunb.)的干燥茎枝。秋、冬二季采割，晒干。其性甘、寒，具有清热解毒，疏风通络功效，用于温病发热，热毒血痢，痈肿疮疡，风湿热痹和关节红肿热痛等症状的治疗。植物忍冬主产山东、河南，河北、内蒙、湖南、广西等全国大部地区均产。

忍冬藤及其基源植物忍冬的叶和花含有有机酸类化合物、黄酮类化合物、皂苷类化合物和环烯醚萜类化合物等成分。一直以来，对于忍冬藤的研究主要集中在有机酸类化合物和黄酮类化合物成分方面，特别是对有机酸类化合物分析，认为绿原酸是忍冬藤的主要有效成分之一，不但将绿原酸作为药材的质量控制指标，也作为一些成药的质量控制指标。现有报道忍冬藤的提取物主要是包含绿原酸的有机酸类化合物和包含木犀草苷的黄酮类化合物，例如中国专利200610046198.2公开的“一种含忍冬藤提取物的药物及制备方法”。

环烯醚萜苷类化合物是一些动物和植物的自身防御物质，同时具有广泛的生物活性，是很多植物药中的有效成分，主要具有抗炎、抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、抗菌、保肝利胆、降血糖、降血脂、对心血管系统的作用及解痉等活性。关于忍冬藤中的环烯醚萜类化合物的研究尚不多见，但该类化合物不容忽视，有必要进行深入细致地研究。特别是在中国药典2010年版第一部忍冬藤中新增加了环烯醚萜类化合物马钱苷的测定方法，由此可见环烯醚萜类化合物的重要性。

发明内容

因此，本发明的目的是提供一种忍冬藤或其基源植物忍冬的叶或花提取物及其制备方法以及该提取物在制备抗炎、解热或抑菌药物中的应用和含有该提取物的药物组合物。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的。

一方面，本发明提供了一种忍冬藤或其基源植物忍冬的叶或花提取物的制备方法，该方法包括以下步骤：

(1)将忍冬藤或其基源植物忍冬的叶或花进行回流提取得到提取液，将所述提取液浓缩得到浓缩液；

(2)将得到的浓缩液加水稀释，然后采用乙酸乙酯进行萃取，除去乙酸乙酯相，取水相备用；

(3)将得到的水相过大孔吸附树脂柱吸附，然后水洗除杂，再用浓度为20～40重量％的乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，干燥后得到忍冬藤或其基源植物忍冬的叶或花提取物。

其中，所述大孔吸附树脂包括非极性大孔吸附树脂、弱极性大孔吸附树脂和极性大孔吸附树脂。在一些实施方案中，所述大孔吸附树脂选自非极性大孔吸附树脂和弱极性大孔吸附树脂。

合适的非极性大孔吸附树脂包括HPD-300大孔吸附树脂、HPD-100大孔吸附树脂、H103大孔吸附树脂、ADS-5大孔吸附树脂、ADS-17大孔吸附树脂、YWD03C2大孔吸附树脂或YWD-01B大孔吸附树脂。

合适的弱极性大孔吸附树脂包括AB-8大孔吸附树脂。

合适的极性大孔吸附树脂包括NKA-9大孔吸附树脂、D303大孔吸附树脂、YWD-04大孔吸附树脂或S-8大孔吸附树脂。

在一些实施方案中，所述大孔吸附树脂为HPD-300大孔吸附树脂、HPD-100大孔吸附树脂、H103大孔吸附树脂或YWD-04大孔吸附树脂。

在一些实施方案中，所述大孔吸附树脂为HPD-300大孔吸附树脂、HPD-100大孔吸附树脂或AB-8大孔吸附树脂。在优选的实施方案中，所述大孔吸附树脂为HPD-300大孔吸附树脂。

根据本发明提供的制备方法，其中，所述步骤(1)包括：以水、乙醇或乙醇水溶液为溶剂对忍冬藤或其基源植物忍冬的叶或花进行回流提取2～4次得到提取液，在每次回流提取中，所述溶剂的用量为忍冬藤或其基源植物忍冬的叶或花重量的5～12倍，每次回流时间为1～2小时，然后将所述提取液浓缩得到浓缩液。

优选地，步骤(1)中所述乙醇水溶液的浓度为30～80重量％。

根据本发明提供的制备方法，其中，所述步骤(2)中浓缩液加水稀释后的浓度为0.5～1g生药/ml。

本发明中所采用的浓度单位“1g生药/ml”是指，1ml溶液中含有相当于1g生药的物质。

根据本发明提供的制备方法，其中，所述步骤(3)包括：将得到的水相以0.5～5BV/h的流速过大孔吸附树脂柱吸附，然后用水以0.5～5BV/h的流速进行水洗除杂，收集洗脱液，减压浓缩至干，得到忍冬藤或其基源植物忍冬的叶或花提取物，其中，水的用量优选为3～8BV。

优选地，步骤(3)中过大孔吸附树脂柱吸附操作中，水相的流速为2.5～5BV/h。

优选地，步骤(3)中水洗除杂操作中，水的流速为2.5～5BV/h。

另一方面，本发明还提供了一种忍冬藤或其基源植物忍冬的叶或花提取物，所述提取物是由上述制备方法制得的。

根据本发明提供的提取物，其中，所述提取物中含有20～80重量％的环烯醚萜类化合物。

优选地，所述提取物中含有30～75重量％的环烯醚萜类化合物。

更优选地，所述提取物中含有50～75重量％的环烯醚萜类化合物。

又一方面，本发明还提供了上述忍冬藤或其基源植物忍冬的叶或花提取物在制备抗炎、解热或抑菌药物中的应用。

本发明提供了一种药物组合物，该药物组合物含有上述忍冬藤或其基源植物忍冬的叶或花提取物和药学上可接受的辅料。

所述药学上可接受的辅料选自淀粉、糊精、蔗糖、乳糖、植物油、微晶纤维素、羟丙基甲基纤维素、低取代羟丙基纤维素、交联聚维酮、羧甲基淀粉钠、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、硬脂酸镁、微粉硅胶、葡萄糖、甘露醇和木糖醇中的一种或多种。

根据本发明提供的药物组合物，其中，该药物组合物可以通过口服给药的方式用于患者，也可以通过非口服给药的方式用于患者。

当通过口服给药的方式用于患者时，所述药物组合物可以是颗粒剂、片剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、滴丸或口服液的形式。

当通过非口服给药的方式用于患者时，所述药物组合物可以是气雾剂、滴鼻剂或注射剂的形式。

本发明提供的忍冬藤或其基源植物忍冬的叶或花提取物的制备方法中，药材原料资源丰富，操作简单，易于产业化，制得的忍冬藤或其基源植物忍冬的叶或花提取物以环烯醚萜类化合物为主要成分，不含或含有少量的绿原酸等有机酸类化合物和木犀草苷等黄酮类化合物。本发明还可以根据需要制备具有抗炎、解热或抑菌作用的药物组合物，为临床提供更加方便、更加有效、质量更加可控的现代中药。

附图说明

以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：

图1是混合对照品的高效液相色谱图；

图2是绿原酸的高效液相色谱图；

图3是本发明忍冬藤提取物的高效液相色谱图；

图4是对比例1忍冬藤提取物的高效液相色谱图。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。

实施例1

本实施例用于说明忍冬藤提取物及其制备方法。

(1)称取2kg忍冬藤药材，以浓度为50重量％的乙醇水溶液为溶剂回流提取3次，得到提取液，其中在每次回流提取中，溶剂的用量为忍冬藤药材重量的9倍，每次回流时间为1.5h；合并提取液，减压浓缩至无醇味，得到浓缩液；

(2)用蒸馏水将得到的浓缩液调至0.5g生药/ml，加入乙酸乙酯进行萃取，除去乙酸乙酯相，取水相备用；

(3)取预处理后的HPD-300大孔吸附树脂装柱，将步骤(2)中得到的水相以2.5BV/h的流速过柱吸附，用水以2.5BV/h的流速水洗除杂，水的用量为4BV，再用浓度为25重量％的乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，减压浓缩干燥得到忍冬藤提取物。

其中，HPD-300大孔吸附树脂的预处理方法为：首先，在索氏提取器中用丙酮加热连续洗涤至大孔树脂无杂色，再用乙醇洗涤大孔吸附树脂至洗脱液加适量水至无白色浑浊现象，最后再用蒸馏水淋洗至无醇味即可。

实施例2

本实施例用于说明忍冬藤提取物及其制备方法。

(1)称取2kg忍冬藤药材，以水为溶剂回流提取3次，得到提取液，其中，在每次回流提取中，溶剂的用量为忍冬藤药材重量的7倍，每次回流时间为1h；合并提取液，减压浓缩得到浓缩液；

(2)用蒸馏水将得到的浓缩液调至0.5g生药/ml，加入乙酸乙酯进行萃取，除去乙酸乙酯相，取水相备用；

(3)取预处理后的H103大孔吸附树脂装柱，将步骤(2)中得到的水相以3BV/h的流速过柱吸附，用水以3BV/h的流速水洗除杂，水的用量为3BV，再用浓度为30重量％的乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，减压浓缩干燥得到忍冬藤提取物。

其中，H103大孔吸附树脂的预处理方法与实施例1中HPD-300大孔吸附树脂的预处理方法相同。

实施例3

本实施例用于说明忍冬藤提取物及其制备方法。

(1)称取2kg忍冬藤药材，以浓度为80重量％的乙醇水溶液为溶剂回流提取3次，得到提取液，其中在每次回流提取中，溶剂的用量为忍冬藤药材重量的11倍，每次回流时间为2h；合并提取液，减压浓缩至无醇味，得到浓缩液；

(2)用蒸馏水将得到的浓缩液调至1.0g生药/ml，加入乙酸乙酯进行萃取，除去乙酸乙酯相，取水相备用；

(3)取预处理后的YWD-04大孔吸附树脂装柱，将步骤(2)中得到的水相以4BV/h的流速过柱吸附，用水以4BV/h的流速水洗除杂，水的用量为4BV，再用浓度为40重量％的乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，减压浓缩干燥得到忍冬藤提取物。

其中，YWD-04大孔吸附树脂的预处理方法与实施例1中HPD-300大孔吸附树脂的预处理方法相同。

实施例4

本实施例用于说明忍冬藤提取物及其制备方法。

(1)称取2kg忍冬藤药材，以浓度为70重量％的乙醇水溶液为溶剂回流提取3次，得到提取液，其中在每次回流提取中，溶剂的用量为忍冬藤药材重量的11倍，每次回流时间为2h；合并提取液，减压浓缩至无醇味，得到浓缩液；

(2)用蒸馏水将得到的浓缩液调至1.0g生药/ml，加入乙酸乙酯进行萃取，除去乙酸乙酯相，取水相备用；

(3)取预处理后的HPD-100大孔吸附树脂装柱，将步骤(2)中得到的水相以5BV/h的流速过柱吸附，用水以5BV/h的流速水洗除杂，水的用量为5BV，再用浓度为20重量％的乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，减压浓缩干燥得到忍冬藤提取物。

其中，HPD-100大孔吸附树脂的预处理方法与实施例1中HPD-300大孔吸附树脂的预处理方法相同。

实施例5

本实施例用于说明忍冬藤提取物及其制备方法。

(1)称取2kg忍冬藤药材，以浓度为30重量％的乙醇水溶液为溶剂回流提取3次，得到提取液，其中在每次回流提取中，溶剂的用量为忍冬藤药材重量的10倍，每次回流时间为1.5h；合并提取液，减压浓缩至无醇味，得到浓缩液；

(2)用蒸馏水将得到的浓缩液调至1.0g生药/ml，加入乙酸乙酯进行萃取，除去乙酸乙酯相，取水相备用；

(3)取预处理后的HPD-300大孔吸附树脂装柱，将步骤(2)中得到的水相以5BV/h的流速过柱吸附，用水以5BV/h的流速水洗除杂，水的用量为5BV，再用浓度为35重量％的乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，减压浓缩干燥得到忍冬藤提取物。

HPD-300大孔吸附树脂的预处理方法见实施例1。

实施例6

本实施例用于说明忍冬藤提取物及其制备方法。

(1)称取2kg忍冬藤药材，以浓度为50重量％的乙醇水溶液为溶剂回流提取3次，得到提取液，其中在每次回流提取中，溶剂的用量为忍冬藤药材重量的8倍，每次回流时间为1.5h；合并提取液，减压浓缩至无醇味，得到浓缩液；

(2)用蒸馏水将得到的浓缩液调至1.0g生药/ml，加入乙酸乙酯进行萃取，除去乙酸乙酯相，取水相备用；

(3)取预处理后的AB-8大孔吸附树脂装柱，将步骤(2)中得到的水相以4BV/h的流速过柱吸附，用水以4BV/h的流速水洗除杂，水的用量为5BV，再用浓度为30重量％的乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，减压浓缩干燥得到忍冬藤提取物。

其中，AB-8大孔吸附树脂与实施例1中HPD-300大孔吸附树脂的预处理方法相同。

对比例1

(1)称取1000g忍冬藤药材，粉碎，以浓度为50重量％的乙醇水溶液为溶剂回流提取3次，得到提取液，其中在每次回流提取中，溶剂的用量为忍冬藤药材重量的8倍，每次提取1小时；将提取液过滤，合并，然后减压回收乙醇并浓缩至每1ml相当于原生药0.5g(即，0.5g生药/ml)，备用；

(2)将步骤(1)中得到的浓缩后的忍冬藤提取液高速离心，取离心液上预处理后的D101大孔吸附树脂吸附，用3BV的水洗，再用5BV的浓度为35重量％的乙醇水溶液洗脱，合并乙醇洗脱液，减压回收乙醇，然后加注射用水稀释至每1ml相当于原生药0.5g(即，0.5g生药/ml)，用超滤膜超滤，超滤液减压浓缩并干燥，得到忍冬藤纯化提取物。本方法所得提取物分别采用紫外分光光度法和高效液相色谱法进行了分析，结果见表1和图4。

实施例7

本实施例是用于说明含有忍冬藤提取物的药物组合物及其制备方法的。

称取20g实施例1所制备的忍冬藤提取物，与25g淀粉和25g糊精混合均匀，然后制粒，过筛，干燥，即得颗粒剂型的药物组合物。

此外，还可将制得的颗粒压片，得到片剂剂型的药物组合物。

实施例8

本实施例是用于说明含有忍冬藤提取物的药物组合物及其制备方法的。

称取20g实施例1所制备的忍冬藤提取物，与40g乳糖和5g羧甲基淀粉钠混合均匀，然后制粒，过筛，干燥和压片，即得分散片剂型的药物组合物。

实施例9

本实施例是用于说明含有忍冬藤提取物的药物组合物及其制备方法的。

称取20g实施例1所制备的忍冬藤提取物，过100目筛，接着加入50g植物油，用匀浆机混合均匀，用明胶作为囊壳，压制，即得软胶囊剂型的药物组合物。

实施例10

本实施例是用于说明含有忍冬藤提取物的药物组合物及其制备方法的。

称取20g实施例1所制备的忍冬藤提取物，加入40g熔融的聚乙二醇6000，以二甲基硅油为冷凝剂，滴制得到滴丸剂型的药物组合物。

实施例11

本实施例是用于说明含有忍冬藤提取物的药物组合物及其制备方法的。

(1)称取2kg忍冬藤药材，以浓度为50重量％的乙醇水溶液为溶剂回流提取3次获得提取液，其中，在每次回流提取中，溶剂的用量为忍冬藤药材重量的9倍，每次回流时间为1.5h；合并提取液，减压浓缩至无醇味，得到浓缩液；

(2)用蒸馏水将得到的浓缩液调至0.5g生药/ml，加入乙酸乙酯进行萃取，除去乙酸乙酯相，取水相备用；

(3)取预处理后的HPD-300大孔吸附树脂装柱，将步骤(2)中得到的水相以2.5BV/h的流速过柱吸附，用水以2.5BV/h的流速水洗除杂，水的用量为4BV，再用浓度为25重量％的乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，减压浓缩至无醇味，调PH至7.0，滤过，冷冻干燥，即得冻干粉针剂型的药物组合物。

其中，HPD-300大孔吸附树脂的预处理方法见实施例1。

忍冬藤提取物分析

1.环烯醚萜类化合物

采用紫外分光光度法测定忍冬藤提取物中环烯醚萜类化合物的含量，具体方法为：

(1)检测波长的确定：以马钱苷为对照品，以甲醇为空白对照，配制马钱苷和忍冬藤提取物的甲醇溶液，在200～400nm波长范围内进行扫描，发现二者均在206nm和240nm处有吸收峰。选择240nm作为检测波长。

(2)供试品溶液的制备：取50mg忍冬藤提取物，精密称定，置于50ml量瓶中，加入甲醇溶解，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。

(3)测定：以马钱苷为对照品，在240nm波长处测定忍冬藤环烯醚萜类化合物的含量。

实施例1～6中制得的忍冬藤提取物中环烯醚萜类化合物的含量如表1所示。

表1忍冬藤提取物中环烯醚萜类化合物的含量

从表1可以看出，本发明制备方法制得的忍冬藤提取物的主要成分为环烯醚萜类化合物，实施例1提供的忍冬藤提取物中环烯醚萜类化合物的含量高达73.4重量％。

2.忍冬藤提取物的成分分析

采用高效液相色谱法分析忍冬藤提取物的成分。

(1)测试条件

色谱柱为Diamonsil-C₁₈(规格为4.6mm×250mm，5μm)；采用梯度洗脱，流动相包括A相和B相，A相为乙腈，B相为浓度为0.05重量％的磷酸溶液，梯度洗脱程序条件如表2所示。

检测波长为237nm，流动相的流速为1.0ml/min，色谱柱的柱温为30℃，进样量为10μl。

表2高效液相色谱的梯度洗脱条件

(2)测试溶液

对照品溶液：①含有浓度为0.2mg/ml的裂环马钱苷酸、浓度为0.2mg/ml的马钱苷、浓度为0.2mg/ml的当药苷和浓度为0.2mg/ml的裂环马钱苷-7-甲酯的混合对照品溶液；②浓度为0.1mg/ml的绿原酸对照品溶液。

供试品溶液：取约0.1g的忍冬藤提取物，精密称定，置于50ml容量瓶中，加适量浓度为50重量％的甲醇水溶液进行溶解，然后用浓度为50重量％的甲醇水溶液稀释至刻度，摇匀，采用0.45μm的微孔滤膜滤过后即得供试品溶液。

各取10μl对照品溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪中，进行测试，记录谱图。图1是混合对照品的高效液相色谱图，其中，保留时间为12.51min是裂环马钱苷酸，保留时间为15.02min是马钱苷，保留时间为16.11min是当药苷，保留时间为18.44min是裂环马钱苷-7-甲酯。图2是绿原酸的高效液相色谱图，图3是含有实施例1制得的忍冬藤提取物的供试品溶液的高效液相色谱图。从图2可以看出，绿原酸的保留时间为13.60min，而图3中未出现绿原酸的色谱峰，说明实施例1制得的忍冬藤提取物中无绿原酸成分。对比例1制得的忍冬藤提取物中含有绿原酸(图4中绿原酸的保留时间为13.93min)等其他成分。

3.黄酮类化合物的鉴别

采用盐酸-镁、三氯化铝以及四氢硼钠反应对实施例1～6提供的忍冬藤提取物进行测试，结果均呈阴性，证明实施例1～6提供的忍冬藤提取物中不含黄酮类化合物。

忍冬藤提取物的抗炎、解热、抑菌作用

一、实验材料

1.受试药：忍冬藤提取物(由实施例1制备得到)，由本院中药现代研究部研制提供，4℃冰箱保存，于试验前用蒸馏水配制成溶液，供动物灌胃给药。

2.阳性对照药

(1)消炎痛：厦门中药厂赠送，批号20110903。

(2)阿司匹林泡腾片：阿斯利康制药有限公司生产，批号1110022。

3.工具药

(1)干酵母片：规格:0.2g/片(以干酵母计)，批号1011116，广东五洲药业有限公司生产。

(2)角叉菜胶混悬液：沈阳药科大学提供，临用当天用蒸馏水配制成1％浓度，振荡2小时成混悬液。

4.材料和仪器

(1)微量细菌定量药敏测试盒，购自天津金章科技发展有限公司。

(2)一次性血琼脂培养基，购自天津金章科技发展有限公司。

5.实验动物

SD种大鼠，雌雄兼用，北京维通利华实验动物技术有限公司，合格证号：SCXK(京)2011-0001。

上述动物饲养在有中央空调的观察室(津实动设施准第012号，符合屏障级标准)中，自由摄食和饮用自来水。

饲料为大鼠全价营养块料(天津市华容实验动物科技有限公司生产)，饮自来水。

二、试验方法和结果

1.抗炎作用(对大鼠角叉菜胶足肿的影响)

本试验选用50只雄性大鼠，随机分成5组，每组10只。各药物组按表3中所示的剂量给药，每天1次，连续3天；对照组同时给予同体积蒸馏水。于末次给药后30分钟，在每只大鼠的右后足垫部皮下注射0.05ml的1％角叉菜胶浆致炎。分别在致炎前和致炎后1、2、3、4小时，用投影仪(放大8倍)测量每只大鼠右后肢踝关节下方0.5cm处直径，用致炎前与致炎后不同时间点的肿胀差值作为肿胀度，结果如表3所示。结果(见表3)显示，忍冬藤提取物对大鼠足肿有明显的抑制作用，其抗炎效果显著。

表3忍冬藤提取物对大鼠角叉菜胶足肿的影响(n＝10)

2.解热作用(对干酵母致热大鼠体温的影响)

选用健康雄性大鼠50只，体重180～220g，随机分为5组，每组10只，设模型组，阳性药阿司匹林组100mg/kg以及忍冬藤提取物200mg、400mg、800mg生药/kg三个剂量组。各受试药物组大鼠均每天灌胃给药1次，连续3天，模型组给与同体积的纯化水，阳性药阿司匹林组于试验当日灌胃给药1次，给药体积均为10ml/kg。各组动物于末次给药前12小时禁食不禁水。试验当日每只动物间隔1小时测体温2次，取其平均值作为基础体温值。各组动物均在腿部皮下注射18％干酵母混悬液10ml/kg，随即再末次给药1次。2小时后开始每隔1小时测定每只大鼠体温值，至给药后10小时，以给药后每小时体温值与基础体温值的差值作为升温反应指标，并与模型组进行统计学比较，以此评价该药对致热大鼠的解热降温作用，结果见表4。

表4忍冬藤提取物对干酵母致热大鼠体温的影响(n＝10)

结果表明，忍冬藤提取物800mg和400mg生药/kg大鼠连续灌胃给药3天，均表现出不同程度的降温作用。其中，忍冬藤提取物400mg生药/kg组在致热后3、7小时，忍冬藤提取物800mg生药/kg组在致热后2～10小时的升温值与模型组同期比较，其降温值差异均具有显著性(P<0.05和0.01)，这表明该药对干酵母致热大鼠的体温升高有抑制作用。

3.抑菌作用(体外抑菌作用)

(1)试验用菌种及来源：

金黄色葡萄球菌：标准株CMCC-26003；

铜绿假单胞菌：标准株CMCC-10211；

肺炎链球菌：标准株CMCC-31001；

肺炎克雷伯杆菌：标准株CMCC-46117；

乙型溶血性链球菌：标准株CMCC-32210。

以上标准菌株均购自中国药品生物制品检定所。

将冻存的以上五种细菌分别接种于血碟，于37℃下在孵育箱培养20h，再将此细菌接种于另一血碟，于37℃下在孵育箱培养20h后备用。将药液高压蒸汽灭菌30分钟，用已灭菌的肉汤培养基按倍比稀释法稀释成不同的浓度(实验浓度范围为1000～1.96μg/ml)，按1ml/孔分别加入24孔培养板中，再将培养好的菌液稀释成细菌含量约为1×10⁶CFu/ml的菌液后，按50μl/孔加入培养板，于37℃下培养20h，观察培养液浑浊度，判定药物的最低抑菌浓度。实验时各药物浓度设复孔，同时设细菌对照，结果见表5。结果(见表5)显示，忍冬藤提取物对金葡菌、肺炎链球菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯杆菌和乙型溶血性链球菌5种实验菌均有明显的体外抑菌作用，其最低抑菌浓度分别为：31.25μg/ml、62.5μg/ml、125μg/ml、62.5μg/ml和125μg/ml。

表5忍冬藤提取物对细菌的抑制作用