用于制备具有增加的萝卜硫素含量的青花菜的方法以及由其制备的青花菜的用途

摘要

本发明涉及一种使用高压脉冲电场处理来制备具有增加的萝卜硫素含量的方法，其使得具有增加的萝卜硫素含量的青花菜能够以原始材料或者切成合适大小的切割材料的形式来消费而无需粉碎青花菜，并使得能够从作为原料的具有增加的萝卜硫素含量的青花菜提取萝卜硫素。另外，可以从具有增加的萝卜硫素含量的青花菜中提取萝卜硫素。具有增加的萝卜硫素含量的青花菜和由其制备的萝卜硫素提取物可以用作食品、饲料或化妆品组合物的活性成分以表现出萝卜硫素的功能，例如抗氧化性质和抗炎性质。

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于制备具有增加的萝卜硫素含量的青花菜的方法、 通过该方法制备的青花菜及包含所述青花菜的食品、饲料或化妆品组合物。

本发明还涉及一种用于由青花菜制备萝卜硫素的方法，所述青花菜是 通过用于制备具有增加的萝卜硫素含量的青花菜的方法制备的，还涉及包 含通过所述方法制备的萝卜硫素的食品、饲料或化妆品组合物。

背景技术

萝卜硫素是在十字花科蔬菜中发现的抗癌和抗氧化物质，是在十字花 科蔬菜中发现的通过芥子油苷的酶促水解而产生的作为次级代谢产物的一 种异硫氰酸盐。

新鲜的青花菜含有大量的芥子油苷和相对非常少量的萝卜硫素。然而， 当新鲜的青花菜被粉碎成粉末时，发生从芥子油苷到萝卜硫素的生物转化， 导致粉末中萝卜硫素含量显著增加。因此，来自粉末的青花菜提取物与新 鲜的青花菜相比含有显著增加量的萝卜硫素。已知在动物实验中这种青花 菜提取物诱导抗氧化酶的表达以抑制由氧化损伤引起的基因修饰，抑制已 知为胃癌发生原因的幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)的生长，并且抑制由 于致癌物质而产生胃癌。

青花菜是常常被用作一些加工食品的原材料的蔬菜，但是其主要以沙 拉的形式消费。在制备青花菜沙拉的情况下，一般在水蒸气或沸水中焯青 花菜以提供青花菜的柔软的咀嚼质感。然而，新鲜青花菜的加热导致芥子 油苷的降解，并且芥子油苷的含量因此减少，导致萝卜硫素含量下降。

高压脉冲电场是一种用于对抗腐败微生物以延长蔬菜产品的保质期而 对产品口味损害较小的非热杀菌的已知方法(韩国专利公布第 2000-0016830号)。高压脉冲电场处理还被认为是用于提高提取率的预处理 方法(韩国专利公布第10-2010-0052065号)。然而，还没有关于高压脉冲 电场处理用于青花菜加工以提高萝卜硫素含量的用途的报道。

发明的详细描述

技术问题

本发明的一个目的是提供一种使用高压脉冲电场处理来制备具有增加 的萝卜硫素含量的青花菜的方法，通过该方法具有增加的萝卜硫素含量的 青花菜可以生吃或者可以在食用前切成合适大小而无需弄碎青花菜；提供 由所述方法制备的青花菜，以及包含所述青花菜的食品、饲料或化妆品组 合物。

本发明的另一个目的是提供一种用于由青花菜制备萝卜硫素的方法， 所述青花菜是通过使用高压脉冲电场处理用于制备具有增加的萝卜硫素含 量的方法制备的；以及提供包含通过所述方法制备的萝卜硫素的食品、饲 料或化妆品组合物。

技术方案

本发明的一个方面提供一种用于制备具有增加的萝卜硫素含量的青花 菜的方法，其包括：将青花菜引入到包含液体介质的分批式或连续式容器 中；用0.1kV/cm至200kV/cm的高压脉冲电场以1Hz至100Hz的频率对所 述液体介质进行持续0.1秒至300秒的处理1次至50次。

高压脉冲电场处理优选在0.2kV/cm至20kV/cm下执行1秒至50秒。

优选地，被整块地引入到容器中的青花菜是完整的或者被切开的，没 有将青花菜进行粉碎或研碎。

液体介质优选水、乙醇或其混合物。

液体介质可以还包含有机酸如乙酸、柠檬酸或乳酸，或无机盐如食盐。

优选地，将经过高压脉冲电场处理的青花菜进行干燥、粉碎、干燥后 粉碎、或粉碎后干燥。

本发明的其它方面提供通过所述方法制备的具有增加的萝卜硫素含量 的青花菜，并且在高压脉冲电场处理后所述青花菜的萝卜硫素含量比在处 理前它的初始萝卜硫素含量高至少30％，优选至少50％，更优选100％至 1000％。

在高压脉冲电场处理之前新鲜的青花菜通常每100g干青花菜含有 30mg至70mg的萝卜硫素，平均为约40mg。青花菜在焯后损失其萝卜硫 素含量的大部分，焯是在食用之前最常用的预处理方法。根据本发明，在 高压脉冲电场处理后青花菜的萝卜硫素含量是每100g干青花菜100mg至 200mg，比在处理前完整的青花菜高1.5至8倍。

本发明的另一个方面提供一种用于由具有增加的萝卜硫素含量的青花 菜制备萝卜硫素提取物的方法。

萝卜硫素提取物可以用水、有机溶剂或其混合物作为提取溶剂来制备。 对于有机溶剂的种类和水与有机溶剂之间的比例没有特别的限制。

例如，有机溶剂可以选自低级醇、己烷、丙酮、乙酸乙酯、氯仿、乙 醚及其混合物。低级醇可以是C₁-C₆醇，例如甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、 正丙醇、异丙醇、正丁醇、1-戊醇、2-丁氧基乙醇或乙二醇。其它的有机 溶剂的实例包括：极性溶剂，例如乙酸、二甲基甲酰胺(DMF)及二甲基 亚砜(DMSO)；和非极性溶剂，例如乙腈、乙酸乙酯、乙酸甲酯、氟代烷 烃、戊烷、2,2,4-三甲基戊烷、癸烷、环己烷、环戊烷、二异丁烯、1-戊烯， 1-氯丁烷、1-氯戊烷、邻二甲苯、二异丙醚、2-氯丙烷、甲苯、1-氯丙烷、 氯苯、苯、乙醚、二乙基硫醚、氯仿、二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、苯胺、二 乙胺、醚，四氯化碳及四氢呋喃(THF)。

可以用水、乙醇、甲醇或者选自水、乙醇和甲醇的两种或更多种溶剂 从具有增加的萝卜硫素含量的青花菜提取萝卜硫素。

可以通过将具有增加的萝卜硫素含量的青花菜用水在40℃至100℃下 提取2小时至48小时来制备萝卜硫素提取物。优选地，通过将具有增加的 萝卜硫素含量的青花菜用含有选自纤维素酶、戊聚糖复合酶、碱性蛋白酶 及胃蛋白酶的至少一种酶的水在40℃至55℃下提取2小时至24小时来制 备萝卜硫素提取物。添加酶以提高通过水提取的水溶性成分的提取效率。

可以通过将具有增加的萝卜硫素含量的青花菜用乙醇或35体积％至 75体积％的乙醇水溶液在20℃至60℃下提取2小时至36小时，优选在40℃ 至50℃下提取2.5小时至6小时来制备乙醇提取物或乙醇水溶液提取物。 更优选地，通过将具有增加的萝卜硫素含量的青花菜用70体积％的乙醇的 水溶液在45℃下提取3小时来制备乙醇水溶液提取物。

如本文所使用的，术语“提取物”意在包括通过提取物的进一步分级 而获得的分级产物。也就是说，萝卜硫素提取物不仅包括使用上述提取溶 剂获得的提取物还包括通过提取物的进一步纯化而获得的萝卜硫素浓缩 物。本发明的萝卜硫素提取物还意在包括通过使提取物和分级产物穿过具 有特定的截留(cut-off)分子量的超滤膜而获得的级分和通过各种其他纯 化方法，例如各种色谱分离方法(根据大小、电荷、疏水性或亲和性的那 些)而获得的级分。

本发明的另一个方面提供包含具有增加的萝卜硫素含量的青花菜的食 品组合物或包含通过所述方法制备的萝卜硫素提取物的食品组合物。

根据本发明的具有增加的萝卜硫素含量的青花菜或者由其制备的萝卜 硫素提取物可以用作保健功能食品或普通食品的活性成分。在这种情况下， 本发明的青花菜或萝卜硫素提取物可以在没有进一步加工的情况下添加或 可以按照现有技术已知的方法与其它食品或食品成分一起使用。活性成分 的量可以根据其预期的目的例如预防、卫生保健或治疗目的适当地确定。

当意在制备食品或饮料时，本发明的青花菜或萝卜硫素提取物通常基 于100重量份的食品或饮料的原材料以15重量份或更少，优选10重量份 或更少的量添加。在为了健康和保健或卫生保健的目的而长期服用食品或 饮料的情况下，青花菜或萝卜硫素提取物的量可以调整为比上述定义的下 限值更小。本发明的食品组合物没有安全方面的问题，因为它使用天然产 品或其提取物。因此，青花菜或萝卜硫素提取物也可以以超过上述定义的 上限值的量使用。

对于食品的种类没有特别的限制。可以添加青花菜或萝卜硫素提取物 的食品的实例包括所有常用食品，例如肉、香肠、面包、巧克力、糖果、 小吃、饼干、比萨、方便面、其它面条、口香糖、包括冰淇淋的乳制品、 汤、饮料、茶、饮品、酒精饮料和维生素复合物。

保健功能食品可以是饮料食品。在这种情况下，饮料食品可以如普通 饮料一样包含一种或更多种另外的成分，例如调味剂或天然糖类。天然糖 类可以是单糖，例如葡萄糖和果糖；二糖，例如麦芽糖和蔗糖；多糖，例 如糊精和环糊精；以及糖醇，例如木糖醇、山梨糖醇和赤藓糖醇。饮料食 品可以包含一种或更多种甜味剂。作为甜味剂，例如可以使用天然甜味剂 如索马甜和甜叶菊提取物，和合成甜味剂如糖精和阿斯巴甜。天然糖类的 总重量可以为基于100mL的功能食品的约0.01g至约0.04g，优选约0.02g 至约0.03g。

本发明的食品组合物由于其抗氧化活性可以用于减轻或预防炎症或癌 症。在这种情况下，本发明的食品组合物可以还包含选自营养素、维生素、 电解质、调味剂、着色剂、果胶酸及其盐、海藻酸及其盐、有机酸、保护 性胶体增稠剂、pH调节剂、稳定剂、防腐剂、甘油、醇和用于碳酸饮料的 碳酸剂(carbonatingagent)的一种或更多种添加剂。本发明的食品组合物 可以还包含用于天然果汁、果汁饮料和蔬菜饮料的制备的果肉。这类成分 可以独立地使用或以其混合物使用。这类添加剂的比例不受限制但是通常 选自基于100重量份的本发明的组合物的0.01重量份至0.1重量份。

本发明的另一个方面提供包含具有增加的萝卜硫素含量的青花菜的饲 料组合物或包含通过所述方法制备的萝卜硫素提取物的饲料组合物。饲料 组合物可以是饲料或饲料添加剂。

饲料组合物可以进一步包含选自以下的一种或更多种添加剂：有机酸， 如柠檬酸、富马酸、己二酸、乳酸和苹果酸；磷酸盐，如磷酸钠、磷酸钾、 焦磷酸二氢盐和多磷酸盐；以及天然抗氧化剂，如多酚、儿茶素、α-生育 酚、迷迭香提取物、维生素C、绿茶提取物、甘草提取物、壳聚糖、单宁 酸和植酸。

适合于在饲料组合物中使用的辅助成分的实例包括佐剂，例如氨基酸、 无机盐、维生素、抗生素、抗菌物质，抗氧化剂/抗真菌酶，活性微生物制 剂(activeandmicrobialagent)。适合于在饲料组合物中使用的主要成分的 实例包括：谷物，例如经压碎的或经粉碎的小麦、燕麦、大麦、玉米及水 稻；植物蛋白饲料，例如，包含油菜籽、豆类、葵花作为主要成份的那些； 动物蛋白饲料，例如血粉、肉粉、骨粉和鱼粉；以及糖和乳制品，例如通 过将由牛奶和乳清粉组成的干燥成分与干燥添加剂混合并用液体成分和加 热后会液化的成分，即脂质，通过加热任选地使混合物液化而获得的动物 脂肪和植物脂肪。除了这些成分，饲料组合物可以还包含营养补充剂、消 化吸收改善剂、生长促进剂、预防剂等。

饲料组合物可以单独或者在可食用载体中与其它饲料添加剂一起施用 给动物。

饲料组合物可以用作追肥或者可以与动物饲料直接混合。或者，饲料 组合物可以与饲料分开使用。在这种情况下，饲料组合物可以容易地以口 服制剂的形式施用或者通过注射或经皮地与其它成分组合施用。如本领域 众所周知的，饲料组合物通常可以每天以单剂量或分剂量施用。

当饲料组合物与动物饲料分开施用时，如本领域众所周知的，组合物 可以与无毒、药学上可接受的可食用载体结合以制备速释或缓释制剂。这 种可食用载体可以是固体或液体载体，例如玉米淀粉、乳糖、蔗糖、豆片、 花生油、橄榄油、芝麻油及丙二醇。当使用固体载体时，组合物的剂型可 以是片剂、胶囊剂、散剂、糖锭、锭剂和非分散型追肥。至于液体载体， 组合物的剂型可以是明胶软胶囊、糖浆、液体混悬剂、乳剂和溶液。剂型 可以包含一种或更多种佐剂，例如防腐剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂或增 溶剂。

饲料组合物可以通过浸渍、喷雾或混合添加到动物饲料中。

饲料组合物可以应用于许多动物包括哺乳动物、家禽和鱼类的日粮。 更具体地，该日料可以用于商业上重要的哺乳动物，例如猪、牛、绵羊、 山羊、实验室啮齿动物(例如，大鼠、小鼠、仓鼠和沙鼠)、毛皮动物(例 如，貂和狐狸)、动物园动物(例如，猴和猿)和家畜(例如，猫和狗)。 商业上重要的家禽种类包括鸡、火鸡、鸭、鹅、野鸡和鹌鹑。也可以包括 商业上的养殖鱼类例如鳟鱼。

当饲料组合物与动物饲料混合时，其以每1公斤动物饲料约1g至100g 的量(基于干重)使用。在充分混合饲料混合物后，根据成分的粉碎程度 获得均匀的丸粒或颗粒。混合物可以以糊状物提供或者可以形成进一步加 工或包装所期望的分散形状。在此时，优选将水添加至动物饲料，然后制 粒、膨胀或挤出。这个后续加工防止在存储期间饲料成分的分离。多余的 水可以通过干燥去除。

本发明的另一个方面还提供包含具有增加的萝卜硫素含量的青花菜的 化妆品组合物或包含通过所述方法制备的萝卜硫素提取物的化妆品组合 物。

本发明的化妆品组合物可以制备成爽肤水、润肤露、精华、面霜和面 膜。

具有增加的萝卜硫素含量的青花菜或由其制备的萝卜硫素提取物可以 基于每个制剂的重量以至少0.1重量％，优选0.2重量％至50重量％，更优 选0.3重量％至30重量％，最优选0.5重量％至10重量％的量使用。

化妆品组合物可以进一步包含通常用于化妆品制备的合适的载体、赋 形剂或稀释剂。

载体、赋形剂或稀释剂的实例包括但不限于纯净水、油、蜡、脂肪酸、 脂肪酸醇、脂肪酸酯、表面活性剂、湿润剂、增稠剂、抗氧化剂、粘度稳 定剂、螯合剂、缓冲剂和低级醇。化妆品组合物可以任选地进一步包括美 白剂、保湿剂、维生素、紫外线吸收剂、香料、染料和抗菌剂。

关于油，可以使用氢化植物油、蓖麻油、棉籽油、橄榄油、棕榈油、 霍霍巴油和鳄梨油。关于蜡，可以使用蜂蜡、鲸蜡、棕榈蜡、小烛树蜡、 褐煤蜡、地蜡、液体石蜡和羊毛脂。关于脂肪酸，可以使用硬脂酸、亚油 酸、亚麻酸和油酸。关于脂肪酸醇，可以使用鲸蜡醇、辛基十二醇、油醇、 泛醇、羊毛脂醇、十八烷醇、十六烷醇。关于脂肪酸酯，可以使用豆蔻酸 异丙酯、棕榈酸异丙酯和硬脂酸丁酯。表面活性剂的实例包括：阴离子表 面活性剂，例如硬脂酸钠、十六烷基硫酸钠、聚氧乙烯月桂基醚磷酸酯和 N-酰基谷氨酸钠；阳离子表面活性剂，例如十八烷基二甲基苄基氯化铵和 十八烷基三甲基氯化铵；两性离子表面活性剂，例如烷基氨基乙基甘氨酸 盐酸盐和卵磷脂；以及非离子表面活性剂，例如单硬脂酸甘油酯、脱水山 梨醇单硬脂酸酯、蔗糖脂肪酸酯、单硬脂酸丙二醇酯、聚氧乙烯油醇醚， 聚乙二醇单硬脂酸酯、聚氧乙烯脱水山梨醇单棕榈酸酯、聚氧乙烯椰子脂 肪酸单乙醇酰胺、聚氧丙烯二醇、聚氧乙烯蓖麻油和聚氧乙烯羊毛脂。可 以使用甘油、1,3-丁二醇、丙二醇作为湿润剂。可以使用乙醇和异丙醇作为 低级醇。增稠剂的实例包括藻酸钠、酪蛋白酸钠、明胶琼脂、黄原胶、淀 粉、纤维素醚(例如羟乙基纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素和羟丙基 甲基纤维素)、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚乙二醇和羧甲基纤维素钠。 关于抗氧化剂，可以使用丁基化羟基甲苯、丁基羟基茴香醚、没食子酸丙 酯、柠檬酸和乙氧喹。关于螯合剂，可以使用乙二胺四乙酸二钠和乙烷羟 基二磷酸酯。关于缓冲剂，可以使用柠檬酸、柠檬酸钠、硼酸、硼砂和磷 酸氢二钠。

有益效果

如上所述，根据本发明用于制备具有增加的萝卜硫素含量的青花菜的 方法使用高压脉冲电场处理。根据本发明的方法，具有增加的萝卜硫素含 量的青花菜可以生吃或者可以在食用前切成合适的大小而无需弄碎青花 菜。另外，可以从具有增加的萝卜硫素含量的青花菜提取萝卜硫素。高压 脉冲电场处理避免了使用高压容器的需求，且需要几秒钟至几分钟的非常 短的处理时间，并且可以分批操作和连续操作来进行。因此，本发明的方 法相对于目前已知的技术在产业化上是有利的。此外，具有增加的萝卜硫 素含量的青花菜和由其制备的萝卜硫素提取物可以用作食品、饲料或化妆 品组合物的活性成分以表现出萝卜硫素的活性，包括抗氧化活性和抗炎活 性。

附图说明

图1a示出比较例1的青花菜的图像(左)和实施例1的青花菜在高压 脉冲电场处理后即时的图像(右)；

图1b示出比较例1的青花菜在室温下存储1天后的图像(左)和实施 例1的青花菜在高压脉冲电场处理之后在室温下存储1天后的图像(右)；

图1c示出比较例1的青花菜在室温下存储3天后的图像(左)和实施 例1的青花菜在高压脉冲电场处理之后在室温下存储3天后的图像(右)；

图1d示出比较例1的青花菜在室温下存储4天后的图像(左)和实施 例1的青花菜在高压脉冲电场处理之后在室温下存储4天后的图像(右)；

图1e示出比较例1的青花菜在寒冷处存储6天后的图像(左)和实施 例1的青花菜在高压脉冲电场处理之后在寒冷处存储6天后的图像(右)。

最佳实施方式

本发明提供了一种用于制备具有增加的萝卜硫素含量的青花菜的方 法，其包括：将青花菜引入到包含液体介质的分批式或连续式容器中；用 0.1kV/cm至200kV/cm的高压脉冲电场以1Hz至100Hz的频率对液体介质 进行1次至50次每次持续0.1秒至300秒的处理。

发明的实施方式

会参照以下实施例对本发明进行更详细地解释。然而，这些实施例不 意在限制本发明的范围。

购买从韩国Jeju-Do收获的新鲜青花菜和从韩国Gangwha岛收获的新 鲜芜菁并使用它们作为样品。使用ELCRACKHVP5装置(德国食品技术 研究所，GermanInstituteofFoodTechnology，德国)来进行高压脉冲电场 处理。

实验实施例1：分析属于十字花科的蔬菜的萝卜硫素含量

通过以下的过程分析了作为十字花科蔬菜的生的萝卜、芜菁、甘蓝、 红叶甘蓝、球芽甘蓝、青花菜和花椰菜中的萝卜硫素的含量。

使用萝卜硫素标准品(90％、Sigma)制备标准溶液，并且使用 UPLC-MS/MS(Waters)对标准溶液进行分析以构建标准校准曲线。将1g 每个样品(基于干重)分别在10ml水中用搅拌器研磨并保持浸没2小时以 使萝卜硫苷(glucoraphanin)被黑芥子酶转化为萝卜硫素。在2小时的反 应后，在搅拌下用90ml甲醇提取反应混合物。从提取物(100ml)取1ml， 稀释10倍并且通过UPLC-MS/MS分析萝卜硫素含量。UPLC系统是包括 二元溶剂管理器和样品管理器的AcquityUPLC系统(Waters公司，milford， MA)。MS系统是WatersQuattroPremierXETandemMS系统(Micromass UKlimited)。使用MasslynxV4.1软件控制该系统。

表1

[表1]

根据表1中的结果，可确认在十字花科蔬菜中红叶甘蓝和青花菜最合 适用作萝卜硫素来源。

实验实施例2：分析青花菜和红叶甘蓝中萝卜硫素前体的含量

为了测定在实验实施例1中发现的萝卜硫素含量高的红叶甘蓝和青花 菜中的萝卜硫素前体即萝卜硫苷的含量，建立了用于萝卜硫素和萝卜硫苷 的同时分析的以下过程。

使用萝卜硫苷标准品(90％、PhytoLab)制备标准溶液，并且使用 UPLC-MS/MS(Waters)对标准溶液进行分析以构建标准校准曲线。将1g 样品(基于干重)在10ml水中使用搅拌器研磨并保持浸泡2小时以使萝卜 硫苷被黑芥子酶转化为萝卜硫素。在2小时的反应后，在搅拌下添加90ml 乙醇而不是甲醇以同时提取萝卜硫苷和萝卜硫素。从提取物(100ml)取 1ml，稀释10倍，并且通过UPLC-MS/MS分析萝卜硫苷和萝卜硫素含量。 UPLC系统与在实验实施例1中使用的相同。对于萝卜硫素以正离子模式 扫描(MS178m/z→子离子113.9m/z)实施MS/MS方法，对于萝卜硫苷以 负离子模式扫描(MS436m/z→子离子372，96.9m/z)实施MS/MS方法。

表2

[表2]

表2中的结果示出，红叶甘蓝的萝卜硫素含量为青花菜萝卜硫素含量 的约一半，但是红叶甘蓝中萝卜硫素前体即萝卜硫苷的含量少于青花菜中 萝卜硫苷含量的十分之一。另外，预测在青花菜中萝卜硫苷到萝卜硫素的 转化会导致萝卜硫素含量显著增加。

实施例1：

丢弃新鲜青花菜的不可食用部分并且切下青花菜小花(一次50g)。将 切下的小花引入到高压脉冲电场处理系统的装有水的分批式容器中并且在 2kV/cm的电场和10Hz的频率下处理。

实施例2：

除了将青花菜在2kV/cm的电场和20Hz的频率下进行一次持续10秒 的处理之外，重复实施例1的过程。

比较例1：

为了与经过高压脉冲电场处理的青花菜小花进行比较，使用新鲜的青 花菜作为对照。丢弃青花菜的不可食用部分并且切下青花菜小花(一次 50g)。

比较例2：

丢弃新鲜青花菜的不可食用部分并且切下青花菜小花(一次50g)。将 切下的小花在100℃的沸水中焯1分钟。

比较例3：

丢弃新鲜青花菜的不可食用部分并且切下青花菜小花(一次50g)。将 切下的小花用搅拌器研磨2分钟。

实验实施例3：分析萝卜硫素含量

使用萝卜硫素标准品(90％、Sigma)制备标准溶液，并且使用 UPLC-MS/MS(Waters)对标准溶液进行分析以构建标准校准曲线。基于 标准校准曲线，分析了实施例1至2和比例较1至3的每个青花菜的萝卜 硫素含量。以与实验实施例1相同的方式进行分析。

表3

[表3]

实验实施例4：

根据在韩国食品标准法典(KoreanFoodStandardsCodex)中描述的用 于计算细菌数量的测试方法对实施例1至2和比较例1至2的每个青花菜 中的细菌的数量进行了测量。结果在表4中示出。在洗涤后微生物最有可 能存活的情况下从青花菜小花收集样品。

表4

[表4]

当将比较例2的青花菜在沸水中焯后，青花菜中的细菌数量与比较例 2的新鲜青花菜中的细菌数量相比降低了≥99％。高压脉冲电场处理对于实 施例1至2的每个青花菜的灭菌效果与比较例2中的灭菌效果基本相同。

实验实施例5：

为了预测经过高压脉冲电场处理的每个青花菜的存储条件和保质期， 观察在室温(25℃)和在冰箱里(5℃)存储期间实施例1的青花菜和比较 例1的青花菜的颜色上的变化。图像在图1a至1e中示出。

对于新鲜的青花菜(比较例1)和经过高压脉冲电场处理的青花菜(实 施例1)，在室温下3天时均未观察到褐变，但是在第四天发生了褐变。特 别地，从第四天开始比例较1的青花菜的小花破碎成碎片。

相反地，新鲜的青花菜(比较例1)和经过高压脉冲电场处理的青花 菜(实施例1)在冷藏条件下甚至在第六天也均没有褐变。

根据这些结果，可以预测经过高压脉冲电场处理的青花菜的保质期会 与新鲜的青花菜的保质期至少相等或者比其更长。

实施例3：

在40℃下用热风将50g实施例1的青花菜干燥并且粉碎。

实施例4：

将250ml的70重量％乙醇水溶液添加至50g实施例1的青花菜。将混 合物用均质机粉碎3分钟，在20℃在搅拌下提取12小时，在减压下浓缩， 并且冷冻干燥以制备萝卜硫素提取物粉末。

实施例5：

将250ml的乙酸乙酯添加至50g实施例1的青花菜小花。将混合物用 均质机粉碎3分钟，在搅拌的情况下以20℃的温度提取1小时，在减压下 浓缩乙酸乙酯层，并且冷冻干燥以制备萝卜硫素提取物粉末。

实验实施例6：分析萝卜硫素含量

对实施例3的青花菜粉末和实施例4-5的萝卜硫素提取物粉末中的萝 卜硫素含量进行分析。以与实验实施例1相同的方式进行分析。结果在表 5中示出。

表5

[表5]

实验实施例7：

将每个新鲜的青花菜小花放置在高压脉冲电场处理系统的装有水的分 批式处理容器中。以不同的电场、频率、处理时间和处理次数来处理小花。 对经处理小花的萝卜硫素含量进行分析并且进行感官评价。

对于感官评价需要20位成员。评价以9分的分值尺度为基础，其中将 比较例1的新鲜青花菜定义为最高分数(9)而其它的用相对分数来表达。

青花菜的处理条件和萝卜硫素含量在表6中示出。

表6

[表6]

实验实施例8：

将每个新鲜的青花菜小花在高压脉冲电场处理系统的分批式处理容器 中的液体介质中在2kV/cm的电场和5Hz的频率下进行一次持续5秒的处 理。液体介质是50体积％乙醇水溶液、20体积％乙醇水溶液或0.5重量％ 的盐水。对萝卜硫素含量进行分析并在表7中示出。

表7

[表7]

包含根据本发明的具有增加的萝卜硫素含量的青花菜或由其制备的萝 卜硫素提取物的食品组合物制备成以下制剂。应当理解制剂中成分的比例 可以根据消费者的区域或国家偏好例如阶级、民族和使用目的任意地改变。

制剂实施例1：片剂的制备

将这些成分混合在一起并且根据现有技术已知的一般方法将该混合物 压制成片剂。

制剂实施例2：胶囊的制备

根据现有技术已知的一般方法将这些成分混合在一起并且将混合物填 充在明胶胶囊中。

制剂实施例3：粉末保健功能食品的制备

使用适合用于保健功能食品的成分制备维生素和矿物质混合物。然而， 应当理解混合物的组成作为优选实施方案提供并且可以任意地改变。将成 分混合在一起并且将混合物制粒。根据现有技术已知的一般方法，使用颗 粒制备保健功能食品。

制剂实施例4：饮料的制备

根据现有技术已知的一般方法，将成分混合在一起，在85℃在搅拌下 加热约1小时，过滤，密封并在2L的无菌容器中灭菌，然后冷藏保存。得 到的溶液用于制备功能性饮料组合物。

包含根据本发明的具有增加的萝卜硫素含量的青花菜或由其制备的萝 卜硫素提取物的化妆品组合物制备成以下制剂。应当理解制剂中成分的比 例可以根据消费者的区域或民族偏好例如阶级、民族和使用目的任意地改 变。

制剂实施例5：肥皂的制备

根据现有技术已知的一般方法，将成分混合在一起并且将混合物配制 成肥皂。

制剂实施例6：润肤露的制备

根据现有技术已知的一般方法，将成分混合在一起并且将混合物配制 成乳液。

制剂实施例7：面霜的制备

根据现有技术已知的一般方法，将成分混合在一起并且将混合物配制 成面霜。

制剂实施例8：面膜的制备

根据现有技术已知的一般方法，将成分混合在一起并且将混合物配制 成面膜。

工业实用性

根据前述内容明显的是，根据本发明的用于制备具有增加的萝卜硫素 含量的青花菜的方法使用高压脉冲电场处理。根据本发明的方法，具有增 加的萝卜硫素含量的青花菜可以生吃或者可以在食用前切成合适的大小而 无需粉碎青花菜。另外，可以从具有增加的萝卜硫素含量的青花菜提取萝 卜硫素。具有增加的萝卜硫素含量的青花菜和由其制备的萝卜硫素提取物 可以用作食品、饲料或化妆品组合物的活性成分以表现出萝卜硫素的活性， 包含抗氧化活性和抗炎活性。