异氰酸酯、苯甲酸及肉桂酸取代的滇南洋耳菊内酯类似物及其合成与应用

摘要

本发明涉及医药技术领域，本发明提供了一类异氰酸酯、苯甲酸及肉桂酸取代的滇南洋耳菊内酯类似物，本发明还提供了上述滇南洋耳菊内酯类似物合成方法与在制备抗炎药物中的应用。本发明化合物经细胞抗炎活性及细胞毒性实验，结果证明，本发明化合物具有很好的抑制巨噬细胞RAW264.7产生NO的活性；且细胞毒性较低。因此，本发明化合物具有较好的抗炎活性，并且存在低毒性化合物，可作为新的抗炎药物。

说明书

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体涉及一类异氰酸酯、苯甲酸及肉桂酸取 代的滇南洋耳菊内酯类似物，及其合成方法与在制备抗炎药物中的应用。

背景技术

菊科(Compositae)旋覆花属(Inula L.)植物约有100种，主要分布于地 中海地区，在欧洲、非洲及亚洲的其它地区也有分布。本属植物在我国有20 余种和多数变种，其中过半的植物有药用记载（中国科学院中国植物志编辑 委员会，中国植物志[M]，北京：科学出版社，1979,75:248-281）。国内外学 者先后从该属植物中分离得到黄酮、倍半萜内酯、萜类等结构类型的化合物 （Zhao YM,Zhang ML,Shi QW,Kiyota H.Chemical constituents of plants from  the genus Inula.Chemistry&Biodiversity2006;3:371-383）。倍半萜内酯是本 属植物的特征性成分，也是主要的活性成分具有抗炎、抗肿瘤、抗病毒、驱 虫杀虫、免疫抑制等多种作用。文献表明，该类化合物分子结构中的α-亚甲 基-γ-内酯片段为药效基团，该片段可以与一些亲核基团，比如半胱氨酸的 巯基片段发生迈克尔加成反应，从而产生药理作用（S.M.Kupchan,M.A.Eakin, A.M.Thomas.Tumor inhibitors.69.Structure-cytotoxicity relations among the  sesquiterpene lactones,Journal of Medicinal Chemistry1971;14;1147-1152）。倍 半萜内酯还因为其结构简单，并且具有多种母核结构类型，可作为研发药物 的先导化合物。

我国特有植物滇南羊耳菊(Inula wissmanniana Hand.-Mazz.)为旋覆花属 植物，云南地区俗称“火把梗”，为亚灌木，产云南南部(元江、屏边)。生于 低山开旷坡地，海拔1200～1650米。

本发明人长期致力于滇南羊耳菊的化学成分及生物活性的相关研究。目 前已从滇南羊耳菊中分离得到28个倍半萜类成分，其中滇南羊耳菊总提取物 及6个吉玛烷型倍半萜内酯具有良好的抗炎及抗抗肿瘤活性，已经申请中国 专利：中国专利申请CN201310014911.5，发明名称为滇南羊耳菊提取物及其 制备与在制备抗炎药物中的应用，公开号为CN103058970A；中国专利申请 CN201310014913.4，发明名称为滇南羊耳菊提取物及其制备与在制备抗肿瘤 药物中的应用，公开号为CN103102336A。

本发明人又于20131112申请了中国专利CN201310560385.2，发明名称 为“滇南羊耳菊内酯A及其衍生物在制备抗炎药物中的应用”，所述的滇南 羊耳菊内酯A及其衍生物，其化学结构如通式A所示：

有关从滇南羊耳菊中寻找到新的具有生物活性的化学成分以及对滇南羊 耳菊内酯进行结构改造是本领域的研究重点。

发明内容

本发明的目的在于对滇南羊耳菊内酯进行结构改造，以获得一类抗炎活 性更好的滇南洋耳菊内酯类似物即异氰酸酯、苯甲酸及肉桂酸取代的滇南洋 耳菊内酯类似物；本发明的另一目的是提供此类滇南洋耳菊内酯类似物的合 成方法；本发明的第三目的是提供此类滇南洋耳菊内酯类似物在制备抗炎药 物中的应用。

本发明人对滇南羊耳菊内酯A进行了结构改造，在保留药效团α-亚甲基 -γ-内酯片段的基础上，使用不同取代基的苯基异氰酸酯、苯甲酸及肉桂酸与 合成滇南洋耳菊内酯过程中含羟基的中间体发生酯化反应，合成了32个异氰 酸酯取代、8个苯甲酸取代、10个肉桂酸取代的滇南羊耳菊内酯类似物，并 对这些化合物进行了体外抗炎活性及细胞毒性实验，结果显示大部分化合物 抗炎活性很好，且兼具高活性与低毒性。

目前，尚无异氰酸酯、苯甲酸、肉桂酸取代的滇南羊耳菊内酯类似物化 学合成及药理活性的文献报道，也未见与本发明中的滇南羊耳菊内酯异氰酸 酯、苯甲酸酯、肉桂酸酯类似物制备方法、用途有关的报道。

本发明的第一方面，是提供了一种异氰酸酯、苯甲酸或肉桂酸取代的滇 南洋耳菊内酯类似物，包括其对映异构体形式，其化学结构如式1、式2或 式3所示：

一种异氰酸酯取代的滇南洋耳菊内酯类似物，包括其对映异构体，选自 以下任一：

式1中，R1分别为：

一种苯甲酸取代的滇南洋耳菊内酯类似物，包括其对映异构体，选自以 下任一：

式2中，R2分别为：

一种肉桂酸取代的滇南洋耳菊内酯类似物，包括其对映异构体，选自以 下任一：

式3中，R3分别为：

本发明的第二方面，是提供了上述的异氰酸酯、苯甲酸或肉桂酸取代的 滇南洋耳菊内酯类似物的制备方法。

合成路线为：

反应步骤如下：

二环己基碳二亚胺(DCC)和对二甲氨基吡啶(DMAP)溶于乙醚，零下30℃ 条件下逐滴加入丙炔酸、顺丁烯二醇的乙醚溶液。滴加完毕后室温反应12 小时得到化合物1。在催化剂1,5-环辛二烯氯铑二聚、六氟锑酸银及手性配 体联萘二苯膦(R-BINAP,S-BINAP)作用下，化合物1可以分别转化成R、S 两种构型的化合物2r和2s。化合物2r和2s被硼烷还原成化合物3r和3s， 化合物3r和3s与苯环上不同取代的异氰酸酯、苯甲酸、肉桂酸反应即可得 到目标化合物4r、4s、5s、6s。

本发明的第三方面，是提供了上述的异氰酸酯、苯甲酸或肉桂酸取代的 滇南洋耳菊内酯类似物在制备抗炎药物中的应用。

对本发明合成的50个化合物4r-1～16、4s-1～16、5s-1～8、6s-1～10进行细 胞抗炎活性及细胞毒性实验，结果证明，该类化合物具有很好的抑制巨噬细 胞RAW264.7产生NO的活性；在细胞毒性中，所有化合物毒性都较低，毒 性IC₅₀均大于20μM。

因此，该类化合物具有较好的抗炎活性，并且兼具低毒性，为制备抗炎 药物提供可能。

本发明所述的异氰酸酯、苯甲酸或肉桂酸取代的滇南洋耳菊内酯类似物 制备抗炎药物，为由异氰酸酯、苯甲酸或肉桂酸取代的滇南洋耳菊内酯类似 物作为活性成分与常规药用载体制成的药物组合物。

所述的药物组合物可以是片剂、分散片、含片、口崩片、缓释片、胶囊 剂、软胶囊剂、滴丸、颗粒剂、注射剂、粉针剂或气雾剂等。

本发明所述的药物组合物为由化合物4r-1～16作为活性成分与药用辅料 组成的药物组合物。

本发明所述的药物组合物为由化合物4s-1～16作为活性成分与药用辅料 组成的药物组合物。

本发明所述的药物组合物为由化合物5s-1～8作为活性成分与药用辅料 组成的药物组合物。

本发明所述的药物组合物为由化合物6s-1～10作为活性成分与药用辅料 组成的药物组合物。

本发明首次公开了异氰酸酯、苯甲酸、肉桂酸取代的滇南羊耳菊内酯类 似物的化学合成方法，并提供了它们的细胞抗炎活性及细胞毒性数据，为临 床提供了新的抗炎药物可能性，给患者带来福音，有较大的临床应用价值和 较高的社会效益。

本发明为炎症的治疗提供了新的药物，有较大的临床应用价值。

附图说明

图1：化合物4r-3的单晶衍射结构；

图2：化合物4s-8的单晶衍射结构。

具体实施方式

现结合实施例和附图，对本发明作详细描述，但本发明的实施不仅限于 此。

本发明所用试剂和原料均市售可得或可按文献方法制备。下列实施例中 未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的 条件。

实施例1：32个异氰酸酯取代的滇南洋耳菊内酯类似物的合成方法

合成路线为：

化合物1：二环己基碳二亚胺(DCC)(2.79g,13.5mmol)和对二甲氨基吡啶 (DMAP)(0.12g,0.09mmol)溶于乙醚，零下30℃条件下逐滴加入丙炔酸(0.93 g,13.2mmol)、顺丁烯二醇(1.05g,12.0mmol)的乙醚溶液。滴加完毕后室温反 应12小时,反应结束后，饱和氯化铵溶液淬灭，有机相用乙醚萃取三次，合 并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩过柱，得到化合物1(1.41g,76%)为黄色油 状物。

化合物2s：1,5-环辛二烯氯铑二聚(50.2mg,0.102mol)、六氟锑酸银(70.0 mg,0.204mol)加入三颈瓶，氩气保护，用过注射器向瓶中加入10ml丙酮， 室温搅拌20分钟，氩气保护下过滤，滤液与手性配体S-联萘二苯膦(127mg, 0.204mol)继续室温搅拌20分钟，将得到的溶液加入到化合物 1(1.14g,8.14mmol)的1,2-二氯乙烷溶液中，室温搅拌21个小时，反应液浓缩 过柱，得到化合物2s(0.67g,59%)为黄色油状物。化合物2r用同样方法得到， 手性配体换成R-联萘二苯膦。

化合物3s：0℃下向化合物2s(39mg,0.28mmol)的四氢呋喃溶液滴加硼 烷四氢呋喃溶液(0.31mL,1M in THF,0.31mmol)，反应时间为30分钟，反 应结束后饱和氯化铵溶液淬灭，有机相用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相， 无水硫酸钠干燥，浓缩得到化合物3s(0.26g,65%)为黄色油状物。

化合物4s-1～16和4r-1～16通用合成方法：室温下化合物3s或3r与苯环 上不同取代的异氰酸酯(1.2eq)溶于二氯甲烷中，滴加三乙胺(1.2eq)，反应时 间一小时，反应溶液水洗，二氯甲烷萃取，合并有机相，干燥浓缩过柱得到 产物。

上述化合物的¹H-NMR、¹³C-NMR和高分辨质谱等数据如下所示：

化合物1：黄色油状物;

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ5.82(dt,J=11.6,6.4Hz,1H),5.59(dt,J=11.2, 7.0Hz,1H),4.73(d,J=7.0Hz,2H),4.20(d,J=6.3Hz,2H),2.83(s,1H).

¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ152.73,134.57,124.26,75.28,74.55,61.85, 58.59.

HR-ESI-MS calcd for C₇H₈O₃[M+H]⁺141.1366,found141.0531.

化合物2s：黄色油状物;

¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ9.82(s,1H),6.31(d,J=2.9Hz,1H),5.65(d,J= 2.6Hz,1H),4.65(dd,J=9.3,8.6Hz,1H),3.92(dd,J=9.4,5.9Hz,1H),3.58 (ddt,J=11.2,5.7,3.0Hz,1H),2.99(dd,J=19.0,5.1Hz,1H),2.79(dd,J=19.0, 8.7Hz,1H).

¹³C NMR(150MHz,CDCl₃)δ199.15,170.23,137.45,123.00,77.16,71.14, 48.33,33.18.

HR-ESI-MS calcd for C₇H₉O₃[M+H]⁺141.1366,found141.0537.

化合物3s：黄色油状物;

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ6.27(d,J=2.8Hz,1H),5.63(d,J=2.5Hz,1H), 4.55–4.51(m,1H),4.07(dd,J=9.1,5.9Hz,1H),3.79–3.72(m,2H),3.29– 3.23(m,1H),1.94(ddd,J=14.0,11.4,5.6Hz,1H),1.81–1.73(m,1H).

¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ171.05,138.35,122.23,71.69,60.03,36.53, 36.13.

HR-ESI-MS calcd for C₇H₁₁O₃[M+H]⁺143.1525,found143.0702.

化合物4s-1：黄色固体；室温下化合物3s(35.5mg,0.25mmol)与苯基异氰酸 酯(1.2eq)溶于二氯甲烷中，滴加三乙胺(1.2eq)，反应时间一小时，反应溶液 水洗，二氯甲烷萃取，合并有机相，干燥浓缩过柱得到产物46.1mg，产率 70.5%。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.38(d,J=7.4Hz,2H),7.31(t,J=8.0Hz,2H), 7.08(t,J=7.4Hz,1H),6.31(d,J=2.7Hz,1H),5.67(d,J=2.4Hz,1H),4.52(t, J=8.6Hz,1H),4.35–4.22(m,2H),4.07(dd,J=9.0,5.6Hz,1H),3.23–3.20 (m,1H),2.10–2.02(m,1H),1.98–1.90(m,1H).

¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ170.62,153.33,137.83,129.24,123.90,122.65, 118.91,71.06,62.27,36.40,33.01.

HR-ESI-MS calcd for C₁₅H₁₆NO₄[M+H]⁺262.2812,found262.2826.

化合物4r-1：黄色固体；反应物变成3r，投料量及合成方法不变，得到产物 52.2mg，产率为80%。

¹H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.38(d,J=7.5Hz,2H),7.32(t,J=8.0Hz,2H), 7.09(t,J=7.3Hz,1H),6.32(d,J=2.7Hz,1H),5.68(d,J=2.4Hz,1H),4.53(t, J=8.6Hz,1H),4.33–4.24(m,2H),4.08(dd,J=9.0,5.6Hz,1H),3.22(ddd,J= 8.2,5.6,2.7Hz,1H),2.10–2.05(m,1H),1.96–1.90(m,1H).

¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ170.61,153.31,137.83,137.65,129.25,123.91, 122.66,118.89,71.05,62.27,36.40,33.03.

HR-ESI-MS calcd for C₁₅H₁₆NO₄[M+H]⁺262.2812,found262.2819.

化合物4s-2：黄色固体；室温下化合物3s(35.5mg,0.25mmol)与2,4-二氟苯基 异氰酸酯(1.2eq)溶于二氯甲烷中，滴加三乙胺(1.2eq)，反应时间一小时，反 应溶液水洗，二氯甲烷萃取，合并有机相，干燥浓缩过柱得到产物56.5mg， 产率76.1%。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.94(s,1H),6.86(d,J=3.4Hz,1H),6.84(dd,J= 7.7,4.5Hz,1H),6.29(d,J=2.2Hz,1H),5.66(d,J=1.2Hz,1H),4.50(t,J=8.4 Hz,1H),4.31–4.21(m,2H),4.07–4.03(m,1H),3.21(s,1H),2.07–2.03(m, 1H),1.93–1.90(m,1H).

¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ170.42,158.42(d,J=251.1Hz),153.17,153.57– 151.37(m),137.70,122.60,122.38,121.72,111.34(dd,J=21.9,3.3Hz),104.00 –103.54(m),70.93,62.62,36.22,32.87.

HR-ESI-MS calcd for C₁₄H₁₄F₂NO₄[M+H]⁺298.2621,found298.2627.

化合物4r-2：黄色固体；反应物变成3r，投料量及合成方法不变，得到产物 55.2mg，产率为74.3%。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.97(s,1H),6.87(dd,J=5.2,3.2Hz,1H),6.75(s, 1H),6.32(d,J=3.0Hz,1H),5.67(d,J=2.2Hz,1H),4.52(t,J=8.5Hz,1H), 4.40–4.22(m,2H),4.07(d,J=5.7Hz,1H),3.22(s,1H),2.10–2.05(m,1H), 1.97–1.91(m,1H).

¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ170.42,158.45(d,J=246.2Hz),153.17,153.76– 151.37(m),137.70,122.61,122.39,121.71,111.35(dd,J=21.9,3.3Hz),103.78 (t,J=24.9Hz),70.93,62.63,36.23,32.88.

HR-ESI-MS calcd for C₁₄H₁₄F₂NO₄[M+H]⁺298.2621,found298.2628.

化合物4s-3：黄色固体；室温下化合物3s(35.5mg,0.25mmol)与对氯苯基异 氰酸酯(1.2eq)溶于二氯甲烷中，滴加三乙胺(1.2eq)，反应时间一小时，反应 溶液水洗，二氯甲烷萃取，合并有机相，干燥浓缩过柱得到产物60.6mg，产 率82.2%。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.33(d,J=8.2Hz,2H),7.28(d,J=8.9Hz,2H), 6.33(d,J=2.7Hz,1H),5.68(d,J=2.3Hz,1H),4.53(t,J=8.6Hz,1H),4.33– 4.23(m,2H),4.08(dd,J=9.1,5.5Hz,1H),3.25–3.20(m,1H),2.11–2.04(m, 1H),1.98–1.90(m,1H).

¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ170.54,153.12,137.81,136.25,129.29,122.70, 120.15,70.95,62.45,36.39,33.05.

HR-ESI-MS calcd for C₁₄H₁₄ClNO₄Na[M+Na]⁺318.7078,found318.7073.

化合物4r-3：黄色固体；反应物变成3r，投料量及合成方法不变，得到产物 58.7mg，产率为79.6%。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.34(d,J=8.1Hz,2H),7.28(s,2H),6.32(d,J= 2.6Hz,1H),5.67(d,J=2.3Hz,1H),4.52(t,J=8.6Hz,1H),4.32–4.23(m,2H), 4.08(dd,J=9.0,5.5Hz,1H),3.26–3.17(m,1H),2.11–2.05(m,1H),1.97– 1.92(m,1H).

¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ170.61,153.16,137.81,136.32,129.24,128.89, 122.68,120.14,71.01,62.44,36.41,32.96.

HR-ESI-MS calcd for C₁₄H₁₄ClNO₄Na[M+Na]⁺318.7078,found318.7069.

化合物4r-3的单晶衍射结构如图1所示。

化合物4s-4：黄色固体；室温下化合物3s(35.5mg,0.25mmol)与对溴苯基异 氰酸酯(1.2eq)溶于二氯甲烷中，滴加三乙胺(1.2eq)，反应时间一小时，反应 溶液水洗，二氯甲烷萃取，合并有机相，干燥浓缩过柱得到产物72.8mg，产 率85.9%。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.41(d,J=8.7Hz,2H),7.29(d,J=8.2Hz,2H), 6.31(d,J=2.7Hz,1H),5.67(d,J=2.3Hz,1H),4.52(t,J=8.6Hz,1H),4.32– 4.22(m,2H),4.07(dd,J=9.1,5.6Hz,1H),3.21(ddd,J=8.1,5.5,2.6Hz,1H), 2.14–2.00(m,1H),1.92(ddd,J=14.2,7.9,5.7Hz,1H).

¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ170.63,153.12,137.79,136.88,132.1,122.68, 120.44,116.34,71.03,62.45,36.41,32.92.

HR-ESI-MS calcd for C₁₄H₁₅BrNO₄[M+H]⁺340.1693,found340.1726.

化合物4r-4：黄色固体；反应物变成3r，投料量及合成方法不变，得到产物 78.7mg，产率为92.7%。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.42(d,J=8.8Hz,2H),7.28(d,J=8.3Hz,2H), 6.32(d,J=2.7Hz,1H),5.67(d,J=2.4Hz,1H),4.52(t,J=8.6Hz,1H),4.33– 4.24(m,2H),4.08(dd,J=9.1,5.5Hz,1H),3.22(ddd,J=8.2,5.5,2.6Hz,1H), 2.07(ddd,J=14.3,12.0,5.6Hz,1H),1.98–1.89(m,1H).

¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ170.57,153.09,137.80,136.82,132.21,122.69, 120.45,70.96,62.45,36.39,33.00.

HR-ESI-MS calcd for C₁₄H₁₅BrNO₄[M+H]⁺340.1693,found340.1725.

化合物4s-5：黄色固体；室温下化合物3s(35.5mg,0.25mmol)与对碘苯基异 氰酸酯(1.2eq)溶于二氯甲烷中，滴加三乙胺(1.2eq)，反应时间一小时，反应 溶液水洗，二氯甲烷萃取，合并有机相，干燥浓缩过柱得到产物75.1mg，产 率77.6%。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.60(d,J=8.2Hz,2H),7.17(d,J=7.5Hz,2H), 6.32(s,1H),5.67(s,1H),4.52(t,J=8.4Hz,1H),4.27(d,J=21.2Hz,2H),4.14 –3.98(m,1H),3.22(s,1H),2.08–2.04(m,1H),1.93(s,1H).

¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ170.60,153.03,138.14,137.80,137.56,122.70, 120.74,86.81,71.01,62.46,36.40,32.97.

HR-ESI-MS calcd for C₁₄H₁₅INO₄[M+H]⁺387.1698,found387.1692.

化合物4r-5：黄色固体；反应物变成3r，投料量及合成方法不变，得到产物 75.2mg，产率为77.7%。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.61(d,J=8.8Hz,2H),7.17(d,J=8.2Hz,2H), 6.32(d,J=2.6Hz,1H),5.67(d,J=2.4Hz,1H),4.52(t,J=8.6Hz,1H),4.36– 4.18(m,2H),4.08(dd,J=9.1,5.4Hz,1H),3.30–3.14(m,1H),2.31–2.00(m, 1H),1.96–1.93(m,1H).

¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ170.57,153.04,138.15,137.80,137.54,122.70, 120.73,86.83,70.97,62.46,36.39,32.99.

HR-ESI-MS calcd for C₁₄H₁₅INO₄[M+H]⁺387.1698,found387.1689.

化合物4s-6：黄色油状物；室温下化合物3s(35.5mg,0.25mmol)与2-甲基-6- 异丙基苯基异氰酸酯(1.2eq)溶于二氯甲烷中，滴加三乙胺(1.2eq)，反应时间 一小时，反应溶液水洗，二氯甲烷萃取，合并有机相，干燥浓缩过柱得到产 物58.6mg，产率73.9%。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.20(d,J=7.6Hz,1H),7.17(d,J=7.3Hz,1H), 7.09(d,J=7.2Hz,1H),6.27(d,J=60.1Hz,1H),5.59(d,J=106.4Hz,1H), 4.55(t,J=8.4Hz,1H),4.40–4.26(m,2H),4.16–4.04(m,1H),3.24(s,1H), 3.18–3.08(m,1H),2.26(s,3H),2.04(s,1H),1.74–1.69(m,1H),1.20(s,6H).

¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ170.79,154.94,146.58,138.18,136.79,132.14, 128.79,128.47,124.08,122.85,71.33,62.65,36.72,33.55,28.95,23.87,18.87.

HR-ESI-MS calcd for C₁₈H₂₄NO₄[M+H]⁺318.3875,found318.3871.

化合物4r-6：黄色油状物；反应物变成3r，投料量及合成方法不变，得到产 物60.2mg，产率为76.0%。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.21(d,J=6.4Hz,1H),7.17(d,J=7.1Hz,1H), 7.09(d,J=7.0Hz,1H),6.28(d,J=60.0Hz,1H),5.60(d,J=106.6Hz,1H), 4.56(s,1H),4.36–4.26(m,2H),4.11(s,1H),3.24(s,1H),3.14(d,J=6.1Hz, 1H),2.26(s,3H),2.09(s,1H),1.72(s,1H),1.20(s,6H).

¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ170.54,154.69,146.33,137.92,136.53,131.89, 128.53,128.22,123.83,122.60,71.08,62.39,36.46,33.30,28.68,23.62,18.62.

HR-ESI-MS calcd for C₁₈H₂₄NO₄[M+H]⁺318.3875,found318.3868.

化合物4s-7：黄色固体；室温下化合物3s(35.5mg,0.25mmol)与对正丁氧基 羰基苯基异氰酸酯(1.2eq)溶于二氯甲烷中，滴加三乙胺(1.2eq)，反应时间一 小时，反应溶液水洗，二氯甲烷萃取，合并有机相，干燥浓缩过柱得到产物 80.5mg，产率89.2%。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.99(d,J=8.6Hz,1H),7.47(d,J=8.5Hz,1H), 6.32(d,J=2.5Hz,1H),5.67(d,J=2.2Hz,1H),4.52(t,J=8.6Hz,1H),4.42– 4.22(m,2H),4.08(dd,J=9.1,5.5Hz,1H),3.32–3.12(m,1H),2.09–2.05(m, 1H),1.96–1.92(m,1H),1.78–1.68(m,1H),1.52–1.41(m,1H),0.97(t,J= 7.4Hz,1H).

¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ170.67,166.39,152.89,141.98,137.77,131.03, 125.58,122.77,117.82,71.02,64.92,62.54,36.38,32.92,30.91,19.39,13.88.

HR-ESI-MS calcd for C₁₉H₂₃NaNO₆[M+Na]⁺384.3788,found384.3779.

化合物4r-7：黄色固体；反应物变成3r，投料量及合成方法不变，得到产物 77.2mg，产率为85.5%。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.00(d,J=7.9Hz,2H),7.46(d,J=7.9Hz,2H), 6.33(d,J=1.7Hz,1H),5.68(d,J=2.3Hz,1H),4.53(t,J=8.6Hz,1H),4.35– 4.25(m,2H),4.09(dd,J=9.1,5.4Hz,1H),3.23(dd,J=6.6,4.2Hz,1H),2.09 (dd,J=14.4,5.8Hz,1H),1.95(dd,J=14.4,7.2Hz,1H),1.77–1.72(m,2H), 1.47(dd,J=15.0,7.5Hz,2H),0.97(t,J=7.4Hz,3H).

¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ170.68,166.39,152.89,141.99,137.76,131.03, 125.58,122.78,117.82,71.04,64.92,62.55,36.38,32.93,30.91,19.40,13.89.

HR-ESI-MS calcd for C₁₉H₂₃NaNO₆[M+Na]⁺384.3788,found384.3776.

化合物4s-8：黄色固体；室温下化合物3s(35.5mg,0.25mmol)与对乙基苯基 异氰酸酯(1.2eq)溶于二氯甲烷中，滴加三乙胺(1.2eq)，反应时间一小时，反 应溶液水洗，二氯甲烷萃取，合并有机相，干燥浓缩过柱得到产物59.7mg， 产率82.6%。

1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.28(d,J=6.2Hz,1H),7.14(d,J=8.4Hz,2H), 6.31(d,J=2.7Hz,1H),5.67(d,J=2.3Hz,1H),4.52(t,J=8.3Hz,1H),4.33– 4.22(m,2H),4.10–4.03(m,1H),3.21(s,1H),2.61(q,J=7.6Hz,2H),2.09– 2.05(m,1H),1.93–1.90(m,1H),1.21(t,J=7.6Hz,3H).

¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ170.60,153.46,137.85,135.21,128.56,122.62, 121.48,119.09,71.07,62.21,36.41,33.06,28.32,15.77.

HR-ESI-MS calcd for C₁₆H₂₀NO₄[M+H]⁺290.3343,found290.3351.

化合物4s-8的单晶衍射结构如图2所示。

化合物4r-8：黄色固体；反应物变成3r，投料量及合成方法不变，得到产物 56.7mg，产率为79.7%。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.27(d,J=1.6Hz,2H),7.15(d,J=8.4Hz,2H), 6.32(d,J=2.7Hz,1H),5.67(d,J=2.4Hz,1H),4.52(t,J=8.4Hz,1H),4.33– 4.21(m,2H),4.09–4.05(m,1H),3.23–3.20(m,1H),2.61(q,J=7.6Hz,2H), 2.10–2.04(m,1H),1.96–1.88(m,1H),1.21(t,J=7.6Hz,3H).

¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ170.59,153.50,140.07,137.85,135.20,128.57, 122.62,119.08,71.06,62.21,36.41,33.07,28.33,15.77.

HR-ESI-MS calcd for C₁₆H₂₀NO₄[M+H]⁺290.3343,found290.3349.

化合物4s-9：黄色固体；室温下化合物3s(35.5mg,0.25mmol)与3,5-二三氟甲 基苯基异氰酸酯(1.2eq)溶于二氯甲烷中，滴加三乙胺(1.2eq)，反应时间一小 时，反应溶液水洗，二氯甲烷萃取，合并有机相，干燥浓缩过柱得到产物 80.6mg，产率81.2%。

¹HNMR(500MHz,CDCl₃)δ7.93(s,1H),7.57(s,1H),6.33(d,J=2.6Hz,1H), 5.69(d,J=2.3Hz,1H),4.55(t,J=8.6Hz,1H),4.37–4.30(m,2H),4.11(dd,J =9.1,5.5Hz,1H),3.29–3.21(m,1H),2.16–2.08(m,1H),2.00–1.94(m,1H).

¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ170.77,152.90,139.48,137.76,132.64(q,J= 33.5Hz),122.85,122.13,118.46,117.02,71.02,62.97,36.50,32.80.

HR-ESI-MS calcd for C₁₆H₁₄F₆NO₄[M+H]⁺398.2771,found398.2762.

化合物4r-9：黄色固体；反应物变成3r，投料量及合成方法不变，得到产物 76.7mg，产率为77.3%。

¹HNMR(500MHz,CDCl₃)δ7.92(s,2H),7.57(s,1H),6.34(d,J=2.7Hz,1H), 5.69(d,J=2.4Hz,1H),4.56–4.52(m,1H),4.38–4.30(m,2H),4.11(dd,J= 9.2,5.4Hz,1H),3.26–3.23(m,1H),2.15–2.05(m,1H),2.00–1.95(m,1H).

¹³C NMR(125MHz,CDCl3)δ170.76,152.89,139.47,137.76,132.84–132.06 (m),122.84,122.12,118.46,117.03,71.00,62.96,36.49,32.81.

HR-ESI-MS calcd for C₁₆H₁₄F₆NO₄[M+H]⁺398.2771,found398.2765.

化合物4s-10：黄色固体；室温下化合物3s(35.5mg,0.25mmol)与3,4-二甲基 苯基异氰酸酯(1.2eq)溶于二氯甲烷中，滴加三乙胺(1.2eq)，反应时间一小时， 反应溶液水洗，二氯甲烷萃取，合并有机相，干燥浓缩过柱得到产物60.6mg， 产率83.9%。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.16(s,1H),7.06(d,J=7.7Hz,2H),6.32(d,J= 2.7Hz,1H),5.67(d,J=2.5Hz,1H),4.52(s,1H),4.40–4.18(m,2H),4.07(s, 1H),3.22(s,1H),2.24(s,3H),2.21(s,3H),2.11–2.02(m,1H),1.97–1.88(m, 1H).

¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ170.55,153.50,137.85,137.53,135.22,130.21, 120.41,118.75,116.56,71.09,62.20,36.42,33.11,20.03,19.20.

HR-ESI-MS calcd for C₁₆H₂₀NO₄[M+H]⁺290.3343,found290.3339.

化合物4r-10：黄色固体；反应物变成3r，投料量及合成方法不变，得到产物 54.5mg，产率为75.4%。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.16(s,1H),7.07(s,2H),6.32(d,J=2.7Hz,1H), 5.67(d,J=2.4Hz,1H),4.53(t,J=8.4Hz,1H),4.31–4.22(m,2H),4.09–4.06 (m,1H),3.22(s,1H),2.24(s,3H),2.22(s,3H),2.10–2.04(m,1H),1.95–1.89 (m,1H).

¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ170.81,153.76,138.10,137.78,135.47,130.47, 122.88,120.66,119.01,116.81,71.34,62.46,36.68,33.37,20.28,19.46.

HR-ESI-MS calcd for C₁₆H₂₀NO₄[M+H]⁺290.3343,found290.3337.

化合物4s-11：暗红色油状物；室温下化合物3s(35.5mg,0.25mmol)与对异丙 基苯基异氰酸酯(1.2eq)溶于二氯甲烷中，滴加三乙胺(1.2eq)，反应时间一小 时，反应溶液水洗，二氯甲烷萃取，合并有机相，干燥浓缩过柱得到产物 60.3mg，产率79.6%。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.29(d,J=6.4Hz,2H),7.17(d,J=8.4Hz,2H), 6.31(d,J=2.6Hz,1H),5.67(d,J=2.1Hz,1H),4.52(t,J=8.2Hz,1H),4.34– 4.20(m,2H),4.07(d,J=5.4Hz,1H),3.21(s,1H),2.89–2.85(m,1H),2.07– 2.04(m,1H),1.92–1.87(m,1H),1.22(d,J=6.9Hz,6H).

¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ170.59,153.49,144.69,137.85,135.26,127.12, 122.61,119.12,71.07,62.20,36.41,33.62,33.06,24.14.

HR-ESI-MS calcd for C₁₇H₂₂NO₄[M+H]⁺304.3609,found304.3619.

化合物4r-11：暗红色油状物；反应物变成3r，投料量及合成方法不变，得到 产物62.6mg，产率为82.6%。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.29(d,J=5.3Hz,2H),7.17(d,J=8.4Hz,2H), 6.32(d,J=2.5Hz,1H),5.67(d,J=2.1Hz,1H),4.52(t,J=8.3Hz,1H),4.34– 4.20(m,2H),4.06(d,J=7.0Hz,1H),3.21(s,1H),2.90–2.85(m,1H),2.08– 2.04(m,1H),1.94–1.90(m,1H),1.23(d,J=6.9Hz,6H).

¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ170.57,153.45,144.69,137.85,135.25,127.14, 122.61,119.14,71.06,62.20,36.41,33.63,33.08,24.14.

HR-ESI-MS calcd for C₁₇H₂₂NO₄[M+H]⁺304.3609,found304.3616.

化合物4s-12：黄色油状物；室温下化合物3s(35.5mg,0.25mmol)与2-氟苯基 异氰酸酯(1.2eq)溶于二氯甲烷中，滴加三乙胺(1.2eq)，反应时间一小时，反 应溶液水洗，二氯甲烷萃取，合并有机相，干燥浓缩过柱得到产物52.3mg， 产率75.0%。

¹HNMR(500MHz,CDCl₃)δ8.04(s,1H),7.12(dd,J=15.0,7.1Hz,1H),7.07 (dd,J=11.0,1.5Hz,1H),6.85(s,1H),6.33(d,J=2.7Hz,1H),5.69(d,J=2.4 Hz,1H),4.53(t,J=8.6Hz,1H),4.32–4.27(m,2H),4.07(dd,J=9.1,5.5Hz, 1H),3.27–3.20(m,1H),2.11–2.04(m,1H),2.01–1.84(m,1H).

¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ170.44,153.01,137.74,126.14(d,J=10.0Hz), 124.80(d,J=3.2Hz),123.98,122.73,120.49,115.09(d,J=19.1Hz),70.97, 62.56,36.27,33.04.

HR-ESI-MS calcd for C₁₄H₁₅FNO₄[M+H]⁺280.2716,found280.2722.

化合物4r-12：黄色油状物；反应物变成3r，投料量及合成方法不变，得到产 物53.6mg，产率为76.8%。

¹HNMR(500MHz,CDCl₃)δ8.04(s,1H),7.10(dd,J=18.9,4.6Hz,1H),7.06 (d,J=1.3Hz,1H),6.86(s,1H),6.33(d,J=2.6Hz,1H),5.68(d,J=2.3Hz,1H), 4.53(t,J=8.6Hz,1H),4.35–4.23(m,2H),4.10–4.05(m,1H),3.26–3.20(m, 1H),2.12–2.06(m,1H),1.99–1.89(m,1H).

¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ170.45,153.02,137.73,126.16,124.78(d,J=3.3 Hz),123.98,122.72,120.44,115.08(d,J=19.1Hz),70.97,62.56,36.26,33.02. HR-ESI-MS calcd for C₁₄H₁₅FNO₄[M+H]⁺280.2716,found280.2725.

化合物4s-13：棕色固体；室温下化合物3s(35.5mg,0.25mmol)与对甲氧基苯 基异氰酸酯(1.2eq)溶于二氯甲烷中，滴加三乙胺(1.2eq)，反应时间一小时， 反应溶液水洗，二氯甲烷萃取，合并有机相，干燥浓缩过柱得到产物56.4mg， 产率77.5%。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.27(d,J=1.8Hz,1H),6.85(d,J=8.9Hz,1H), 6.30(d,J=2.5Hz,1H),5.66(d,J=1.8Hz,1H),4.51(s,1H),4.29–4.22(m, 1H),4.06(s,1H),3.79(s,3H),3.20(s,1H),2.12–2.02(m,1H),1.92–1.86(m, 1H).

¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ170.60,156.31,153.70,137.85,130.68,122.59, 120.92,114.42,71.09,62.20,55.62,36.43,33.03.

HR-ESI-MS calcd for C₁₅H₁₈NO₅[M+H]⁺292.3071,found292.3078.

化合物4r-13：棕色固体；反应物变成3r，投料量及合成方法不变，得到产物 54.6mg，产率为75.1%。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.27(d,J=1.9Hz,2H),6.86(d,J=9.0Hz,2H), 6.31(d,J=2.7Hz,1H),5.67(d,J=1.9Hz,1H),4.52(s,1H),4.30–4.19(m, 2H),4.07(s,1H),3.79(s,3H),3.21(s,1H),2.14–1.99(m,1H),1.97–1.86(m, 1H).

¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ170.62,156.27,153.70,137.84,130.71,122.57, 120.90,114.39,71.10,62.19,55.60,36.43,32.98.

HR-ESI-MS calcd for C₁₅H₁₈NO₅[M+H]⁺292.3071,found292.3077.

化合物4s-14：黄色固体；室温下化合物3s(35.5mg,0.25mmol)与对正丁基苯 基异氰酸酯(1.2eq)溶于二氯甲烷中，滴加三乙胺(1.2eq)，反应时间一小时， 反应溶液水洗，二氯甲烷萃取，合并有机相，干燥浓缩过柱得到产物60.3mg， 产率76.1%。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.26(d,J=1.1Hz,2H),7.12(d,J=8.3Hz,2H), 6.31(d,J=2.6Hz,1H),5.67(d,J=2.1Hz,1H),4.52(t,J=8.1Hz,1H),4.38– 4.20(m,2H),4.07(s,1H),3.21(s,1H),2.63–2.49(m,2H),2.09–2.04(m,1H), 1.95–1.91(m,1H),1.60–1.55(m,2H),1.37–1.32(m,2H),0.91(t,J=7.3Hz, 3H).

¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ170.58,153.44,137.85,135.17,129.12,122.62, 119.05,71.06,62.20,36.41,35.06,33.77,33.07,22.38,14.05.

HR-ESI-MS calcd for C₁₈H₂₄NO₄[M+H]⁺318.3875,found318.3869.

化合物4r-14：黄色固体；反应物变成3r，投料量及合成方法不变，得到产物 63.6mg，产率为80.2%。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.27(d,J=1.1Hz,2H),7.12(d,J=8.4Hz,2H), 6.32(d,J=2.7Hz,1H),5.67(d,J=2.4Hz,1H),4.52(t,J=8.4Hz,1H),4.38– 4.21(m,2H),4.15–4.02(m,1H),3.22(s,1H),2.58–2.55(m,2H),2.08–2.04 (m,1H),1.94–1.91(m,1H),1.57(ddd,J=15.3,11.1,7.6Hz,2H),1.34(dd,J= 14.9,7.4Hz,2H),0.91(t,J=7.4Hz,3H).

¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ170.59,153.44,137.85,135.17,129.11,122.62, 119.02,71.06,62.21,36.41,35.06,33.77,33.07,22.38,14.04.

HR-ESI-MS calcd for C₁₈H₂₄NO₄[M+H]⁺318.3875,found318.3871.

化合物4s-15：黄色固体；室温下化合物3s(35.5mg,0.25mmol)与3,5-二甲基 苯基异氰酸酯(1.2eq)溶于二氯甲烷中，滴加三乙胺(1.2eq)，反应时间一小时， 反应溶液水洗，二氯甲烷萃取，合并有机相，干燥浓缩过柱得到产物57.8mg， 产率80%。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.01(s,1H),6.72(s,1H),6.31(d,J=2.6Hz,1H), 5.66(d,J=2.3Hz,1H),4.52(t,J=8.6Hz,1H),4.32–4.20(m,1H),4.06(dd,J =9.0,5.7Hz,1H),3.23–3.20(m,1H),2.28(s,6H),2.08–2.04(m,1H),1.93– 1.89(m,1H).

¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ170.58,153.33,138.94,137.85,137.46,125.62, 122.56,116.69,71.05,62.18,36.40,33.02,21.46.

HR-ESI-MS calcd for C₁₆H₂₀NO₄[M+H]⁺290.3343,found290.3336.

化合物4r-15：黄色固体；反应物变成3r，投料量及合成方法不变，得到产物 61.9mg，产率为85.7%。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.00(s,1H),6.73(s,1H),6.32(d,J=2.7Hz,1H), 5.67(d,J=2.4Hz,1H),4.52(t,J=8.6Hz,1H),4.31–4.23(m,1H),4.07(dd,J =9.1,5.6Hz,1H),3.24–3.20(m,1H),2.29(s,6H),2.09–2.06(m,1H),1.95– 1.91(m,1H).

¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ170.54,139.03,137.86,137.42,125.72,122.61, 116.67,71.02,62.20,36.41,33.11,21.50.

HR-ESI-MS calcd for C₁₆H₂₀NO₄[M+H]⁺290.3343,found290.3335.

化合物4s-16：黄色固体；室温下化合物3s(35.5mg,0.25mmol)与3-溴苯基异 氰酸酯(1.2eq)溶于二氯甲烷中，滴加三乙胺(1.2eq)，反应时间一小时，反应 溶液水洗，二氯甲烷萃取，合并有机相，干燥浓缩过柱得到产物67.8mg，产 率80%。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.65(s,1H),7.28(d,J=8.0Hz,1H),7.21(d,J= 8.0Hz,1H),7.17(dd,J=7.9,2.8Hz,1H),6.32(d,J=2.7Hz,1H),5.68(d,J= 2.3Hz,1H),4.53(t,J=8.6Hz,1H),4.34–4.25(m,2H),4.08(dd,J=9.1,5.5 Hz,1H),3.23–3.21(m,1H),2.09–2.05(m,1H),1.96–1.92(m,1H).

¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ170.64,153.00,153.00,139.01,137.80,130.52, 126.87,122.94,122.71,121.81,117.32,70.96,62.52,36.38,33.00.

HR-ESI-MS calcd for C₁₄H₁₅BrNO₄[M+H]⁺340.1693,found340.1715.

化合物4r-16：黄色固体；反应物变成3r，投料量及合成方法不变，得到产物 69.1mg，产率为81.5%。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.65(s,1H),7.28(d,J=7.6Hz,1H),7.23–7.19 (m,1H),7.16(t,J=7.9Hz,1H),6.32(d,J=2.7Hz,1H),5.68(d,J=2.4Hz,1H), 4.55–4.51(m,1H),4.32–4.24(m,2H),4.08(dd,J=9.2,5.5Hz,1H),3.25– 3.19(m,1H),2.10–2.04(m,1H),1.97–1.89(m,1H).

¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ170.59,153.00,139.04,137.80,130.51,126.85, 122.92,122.71,121.81,117.36,70.98,62.52,36.39,32.98.

HR-ESI-MS calcd for C₁₄H₁₅BrNO₄[M+H]⁺340.1693,found340.1713.

实施例2：8个苯甲酸取代的滇南洋耳菊内酯类似物的合成方法

化合物5s-1～8通用合成方法：室温下化合物3s与苯环上不同取代的苯 甲酸(1.2eq)溶于二氯甲烷中，加入EDCI(1.2eq)和DMAP(0.02eq)，反应时间 两小时，反应溶液水洗，二氯甲烷萃取，合并有机相，干燥浓缩过柱得到产 物。

上述化合物的¹H-NMR、¹³C-NMR和高分辨质谱等数据如下所示：

化合物5s-1：白色固体；室温下化合物3s(35.5mg,0.5mmol)与苯甲酸(1.2eq) 溶于二氯甲烷中，加入EDCI(1.2eq)和DMAP(0.02eq)，反应时间两小时，反 应溶液水洗，二氯甲烷萃取，合并有机相，干燥浓缩过柱得到产物46.6g，产 率为75.8%。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.05(d,J=7.96Hz,2H),7.57(t,J=7.66Hz,1H), 7.46(t,J=7.96,7.66Hz,2H),6.20(d,J=2.85Hz,1H),5.54(d,J=2.85Hz,1H), 4.80(td,J=6.83,2.70Hz,2H),4.55(dd,J=9.15,7.80Hz,1H),3.81(dd,J=9.15, 4.60Hz,1H),3.08–3.12(m,1H),2.07–2.11(m,1H),1.81–1.86(m,1H).

¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ170.42,166.35,138.68,133.00,130.14,129.76, 129.76,128.48,128.48,118.83,70.93,62.95,39.27,31.15.

HR-ESI-MS calcd for C₁₄H₁₄O₄Na[M+Na]⁺269.2483,found269.2473.

化合物5s-2：白色固体；室温下化合物3s(35.5mg,0.5mmol)与对溴苯甲酸 (1.2eq)溶于二氯甲烷中，加入EDCI(1.2eq)和DMAP(0.02eq)，反应时间两小 时，反应溶液水洗，二氯甲烷萃取，合并有机相，干燥浓缩过柱得到产物69.5g， 产率为85.8%。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.89(d,J=8.46Hz,2H),7.58(d,J=8.46Hz,2H), 6.20(d,J=2.85Hz,1H),5.54(d,J=2.85Hz,1H),4.80(td,J=6.83,2.70Hz,2H), 4.55(dd,J=9.15,7.80Hz,1H),3.82(dd,J=9.15,4.60Hz,1H),3.06–3.15(m,1H), 2.05–2.14(m,1H),1.80–1.87(m,1H).

¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ170.42,165.54,138.68,133.16,133.16,131.80, 131.80,129.64,127.90,118.86,70.96,62.93,39.32,31.18.

HR-ESI-MS calcd for C₁₄H₁₄O₄Br[M+H]⁺326.1626,found326.1619.

化合物5s-3：白色固体；室温下化合物3s(35.5mg,0.5mmol)与对碘苯甲酸 (1.2eq)溶于二氯甲烷中，加入EDCI(1.2eq)和DMAP(0.02eq)，反应时间两小 时，反应溶液水洗，二氯甲烷萃取，合并有机相，干燥浓缩过柱得到产物80.6g， 产率为86.7%。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.78(d,J=8.29Hz,2H),7.59(d,J=8.29Hz,2H), 6.20(d,J=2.85Hz,1H),5.53(d,J=2.85Hz,1H),4.79(td,J=6.83,2.70Hz,2H), 4.54(dd,J=9.15,7.80Hz,1H),3.81(dd,J=9.15,4.60Hz,1H),3.05–3.12(m,1H), 2.04–2.12(m,1H),1.80–1.86(m,1H)

¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ170.42,165.79,138.68,136.75,136.75,130.31, 130.31,129.57,118.83,98.61,70.93,62.96,39.29,31.16.

HR-ESI-MS calcd for C₁₄H₁₄O₄I[M+H]⁺373.1630,found373.1626.

化合物5s-4：白色固体；室温下化合物3s(35.5mg,0.5mmol)与对异丙基苯甲 酸(1.2eq)溶于二氯甲烷中，加入EDCI(1.2eq)和DMAP(0.02eq)，反应时间两 小时，反应溶液水洗，二氯甲烷萃取，合并有机相，干燥浓缩过柱得到产物 61.6g，产率为85.6%。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.98(d,J=7.95Hz,2H),7.20(d,J=7.95Hz,2H), 6.20(d,J=2.85Hz,1H),5.54(d,J=2.85Hz,1H),4.80(td,J=6.83,2.70Hz,2H), 4.55(dd,J=9.15,7.80Hz,1H),3.81(dd,J=9.15,4.60Hz,1H),3.06–3.11(m,1H), 2.93–2.98(m,1H),2.03–2.09(m,1H),1.82–1.88(m,1H),1.24(s,6H).

¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ170.42,166.32,152.06,138.68,129.06,129.06, 127.13,125.82,125.82,118.83,70.93,62.96,39.29,34.13,31.16,23.29.

HR-ESI-MS calcd for C₁₇H₂₀O₄Na[M+Na]⁺311.3281,found311.3276.

化合物5s-5：黄色固体；室温下化合物3s(35.5mg,0.5mmol)与对叔丁基苯甲 酸(1.2eq)溶于二氯甲烷中，加入EDCI(1.2eq)和DMAP(0.02eq)，反应时间两 小时，反应溶液水洗，二氯甲烷萃取，合并有机相，干燥浓缩过柱得到产物 59.7g，产率为79.1%。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.88(d,J=8.65Hz,2H),7.39(d,J=8.65Hz,2H), 7.39(d,J=8.65Hz,1H),6.20(d,J=2.85Hz,1H),5.54(d,J=2.85Hz,1H),4.80(td, J=6.83,2.70Hz,2H),4.55(dd,J=9.15,7.80Hz,1H),3.81(dd,J=9.15,4.60Hz, 1H),3.08–3.13(m,1H),2.03–2.09(m,1H),1.80–1.88(m,1H),1.35(s,9H).

¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ170.42,166.06,158.28,138.68,129.42,127.31, 125.62,118.83,70.93,62.96,39.29,35.26,31.16,30.95.

HR-ESI-MS calcd for C₁₈H₂₂O₄Na[M+Na]⁺325.3546,found325.3556.

化合物5s-6：白色固体；室温下化合物3s(35.5mg,0.5mmol)与对正戊基苯甲 酸(1.2eq)溶于二氯甲烷中，加入EDCI(1.2eq)和DMAP(0.02eq)，反应时间两 小时，反应溶液水洗，二氯甲烷萃取，合并有机相，干燥浓缩过柱得到产物 57.2g，产率为72.4%。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.03(d,J=8.15Hz,2H),7.22(d,J=8.15Hz,2H), 6.21(d,J=2.85Hz,1H),5.55(d,J=2.85Hz,1H),4.81(td,J=6.83,2.70Hz,2H), 4.56(dd,J=9.15,7.80Hz,1H),3.82(dd,J=9.15,4.60Hz,1H),3.08(m,1H),2.62 (t,J=7.40Hz,2H),2.07(m,1H),1.86(m,1H),1.72(m,2H),1.44(m,2H)1.38(m, 2H),0.82(t,J=6.80Hz,3H).

¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ170.41,166.28,149.07,138.68,129.62,129.62, 129.16,129.16,128.24,118.83,70.93,62.96,39.29,35.36,31.54,31.16,30.75, 22.51,13.98.

HR-ESI-MS calcd for C₁₉H₂₄O₄Na[M+Na]⁺339.3812,found339.3819.

化合物5s-7：黄色固体；室温下化合物3s(35.5mg,0.5mmol)与对甲氧基苯甲 酸(1.2eq)溶于二氯甲烷中，加入EDCI(1.2eq)和DMAP(0.02eq)，反应时间两 小时，反应溶液水洗，二氯甲烷萃取，合并有机相，干燥浓缩过柱得到产物 49.5g，产率为71.7%。

¹HNMR(500MHz,CDCl₃)δ7.96(d,J=8.60Hz,2H),6.93(d,J=8.60Hz,2H), 6.20(d,J=2.85Hz,1H),5.54(d,J=2.85Hz,1H),4.80(td,J=6.83,2.70Hz,2H), 4.55(dd,J=9.15,7.80Hz,1H),3.84(s,3H),3.81(dd,J=9.15,4.60Hz,1H), 3.06–3.13(m,1H),2.06–2.12(m,1H),1.81–1.89(m,1H).

¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ170.42,165.93,165.20,138.68,132.52,123.36, 118.83,115.49,70.93,62.96,56.70,39.29,31.16.

HR-ESI-MS calcd for C₁₅H₁₆O₅Na[M+Na]⁺299.2743,found299.2752.

化合物5s-8：白色固体；室温下化合物3s(35.5mg,0.5mmol)与对三氟甲基苯 甲酸(1.2eq)溶于二氯甲烷中，加入EDCI(1.2eq)和DMAP(0.02eq)，反应时间 两小时，反应溶液水洗，二氯甲烷萃取，合并有机相，干燥浓缩过柱得到产 物62.8g，产率为80%。

¹HNMR(500MHz,CDCl₃)δ8.10(d,J=8.00Hz,2H),7.86(d,J=8.00Hz,2H), 6.19(d,J=2.85Hz,1H),5.53(d,J=2.85Hz,1H),4.79(td,J=6.83,2.70Hz,2H), 4.54(dd,J=9.15,7.80Hz,1H),3.80(dd,J=9.15,4.60Hz,1H),3.07–3.13(m,1H), 2.05–2.11(m,1H),1.80–1.89(m,1H).

¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ170.41,165.61,138.67,134.51,131.70,129.87, 125.08,123.60,118.82,70.92,62.94,39.28,31.14.

HR-ESI-MS calcd for C₁₅H₁₄O₄F₃[M+H]⁺315.2645,found315.2652.

实施例3：10个肉桂酸取代的滇南洋耳菊内酯类似物的合成方法

化合物6s-1～10通用合成方法：室温下化合物3s与苯环上不同取代的肉 桂酸(1.2eq)溶于二氯甲烷中，加入EDCI(1.2eq)和DMAP(0.02eq)，反应时间 两小时，反应溶液水洗，二氯甲烷萃取，合并有机相，干燥浓缩过柱得到产 物。

上述化合物的¹H-NMR、¹³C-NMR和高分辨质谱等数据如下所示：

化合物6s-1：黄色固体；室温下化合物3s(35.5mg,0.5mmol)与肉桂酸(1.2eq) 溶于二氯甲烷中，加入EDCI(1.2eq)和DMAP(0.02eq)，反应时间两小时，反 应溶液水洗，二氯甲烷萃取，合并有机相，干燥浓缩过柱得到产物46.2g，产 率67.9%。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.78(d,J=15.88Hz,1H),7.47(d,J=7.51Hz,2H), 7.42–7.45(m,3H),6.50(d,J=15.88Hz,1H),6.20(d,J=2.85Hz,1H),5.54(d, J=2.85Hz,1H),4.49(dd,J=9.15,7.80Hz,1H),4.25(td,J=6.83,2.70Hz,2H), 3.75(dd,J=9.15,4.60Hz,1H),3.10–3.17(m,1H),2.05–2.11(m,1H),1.82–1.91 (m,1H).

¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ170.42,169.01,144.80,139.18,134.50,130.20, 129.52,129.23,118.83,118.50,71.14,62.75,40.15,31.29.

HR-ESI-MS calcd for C₁₆H₁₇O₄[M+H]⁺273.3038,found273.3052.

化合物6s-2：白色固体；室温下化合物3s(35.5mg,0.5mmol)与对氟肉桂酸 (1.2eq)溶于二氯甲烷中，加入EDCI(1.2eq)和DMAP(0.02eq)，反应时间两小 时，反应溶液水洗，二氯甲烷萃取，合并有机相，干燥浓缩过柱得到产物54.2g， 产率75.2%。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.60(d,J=15.88Hz,1H),7.51–7.55(m,2H), 7.07–7.10(m,1H),6.39(d,J=15.88Hz,1H),6.20(d,J=2.85Hz,1H),5.54(d, J=2.85Hz,1H),4.49(dd,J=9.15,7.80Hz,1H),4.25(td,J=6.83,2.70Hz,2H), 3.75(dd,J=9.15,4.60Hz,1H),3.10–3.18(m,1H),2.05–2.10(m,1H),1.82–1.89 (m,1H).

¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ170.41,169.01,164.50,145.26,139.16,130.46, 130.10,118.81,118.40,116.00,71.13,62.73,40.13,31.27.

HR-ESI-MS calcd for C₁₆H₁₅FO₄Na[M+Na]⁺313.2761,found313.2755.

化合物6s-3：白色固体；室温下化合物3s(35.5mg,0.5mmol)与对氯肉桂酸 (1.2eq)溶于二氯甲烷中，加入EDCI(1.2eq)和DMAP(0.02eq)，反应时间两小 时，反应溶液水洗，二氯甲烷萃取，合并有机相，干燥浓缩过柱得到产物58.6g， 产率76.6%。

¹HNMR(500MHz,CDCl₃)δ7.65(d,J=15.88Hz,1H),7.40(d,J=8.51Hz,2H), 7.35(d,J=8.51Hz,2H),6.49(d,J=15.88Hz,1H),6.20(d,J=2.85Hz,1H),5.54(d, J=2.85Hz,1H),4.49(dd,J=9.15,7.80Hz,1H),4.25(td,J=6.83,2.70Hz,2H), 3.75(dd,J=9.15,4.60Hz,1H),3.12–3.16(m,1H),2.03–2.09(m,1H),1.80–1.89 (m,1H).

¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ170.41,169.01,142.63,139.18,136.17,133.44, 129.73,128.46,118.82,117.76,71.14,62.75,40.15,31.28.

HR-ESI-MS calcd for C₁₆H₁₅ClO₄Na[M+Na]⁺329.7304,found329.7335.

化合物6s-4：白色固体；室温下化合物3s(35.5mg,0.5mmol)与对溴肉桂酸 (1.2eq)溶于二氯甲烷中，加入EDCI(1.2eq)和DMAP(0.02eq)，反应时间两小 时，反应溶液水洗，二氯甲烷萃取，合并有机相，干燥浓缩过柱得到产物62.0g， 产率70.9%。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.63(d,J=15.88Hz,1H)7.53(d,J=8.59Hz,2H), 7.45(d,J=8.59Hz,2H),6.45(d,J=15.88Hz,1H),6.20(d,J=2.85Hz,1H),5.54(d, J=2.85Hz,1H),4.49(dd,J=9.15,7.80Hz,1H),4.25(td,J=6.83,2.70Hz,2H), 3.75(dd,J=9.15,4.60Hz,1H),3.11–3.16(m,1H),2.04–2.10(m,1H),1.82–1.88 (m,1H).

¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ170.42,169.01,143.48,139.17,133.74,132.16, 130.06,124.91,118.94,118.83,71.13,62.75,40.14,31.29.

HR-ESI-MS calcd for C₁₆H₁₅BrO₄Na[M+Na]⁺374.1817,found374.1820.

化合物6s-5：白色固体；室温下化合物3s(35.5mg,0.5mmol)与对三氟甲基肉 桂酸(1.2eq)溶于二氯甲烷中，加入EDCI(1.2eq)和DMAP(0.02eq)，反应时间 两小时，反应溶液水洗，二氯甲烷萃取，合并有机相，干燥浓缩过柱得到产 物61.4g，产率72.3%。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.70(d,J=15.88Hz,1H),7.65(d,J=8.44Hz,2H), 7.60(d,J=8.44Hz,2H),6.42(d,J=15.88Hz,1H),6.20(d,J=2.85Hz,1H),5.54(d, J=2.85Hz,1H),4.49(dd,J=9.15,7.80Hz,1H),4.25(td,J=6.83,2.70Hz,2H), 3.75(dd,J=9.15,4.60Hz,1H),3.10–3.16(m,1H),2.02–2.09(m,1H),1.81–1.89 (m,1H).

¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ170.42,169.01,142.91,139.16,137.76,131.70, 128.10,128.10,125.80,125.80,121.25,123.80,118.82,71.12,62.74,40.13, 31.28.

HR-ESI-MS calcd for C₁₇H₁₅F₃O₄Na[M+Na]⁺363.2836,found363.2817.

化合物6s-6：黄色油状物；室温下化合物3s(35.5mg,0.5mmol)与对甲硫基肉 桂酸(1.2eq)溶于二氯甲烷中，加入EDCI(1.2eq)和DMAP(0.02eq)，反应时间 两小时，反应溶液水洗，二氯甲烷萃取，合并有机相，干燥浓缩过柱得到产 物59.3g，产率74.6%。

¹HNMR(500MHz,CDCl₃)δ7.72(d,J=15.88Hz,1H),7.50(d,J=8.50Hz,2H), 7.18(d,J=8.50Hz,2H),6.42(d,J=15.88Hz,1H),6.20(d,J=2.85Hz,1H),5.54(d, J=2.85Hz,1H),4.49(dd,J=9.15,7.80Hz,1H),4.25(td,J=6.83,2.70Hz,2H), 3.75(dd,J=9.15,4.60Hz,1H),3.10–3.18(m,1H),2.50(s,3H),2.03–2.09(m,1H), 1.83–1.89(m,1H).

¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ170.42,169.01,145.92,139.18,137.35,133.36, 129.34,126.92,118.83,118.78,71.14,62.75,40.15,31.29,16.00.

HR-ESI-MS calcd for C₁₇H₁₉O₄S[M+H]⁺319.3964,found319.3957.

化合物6s-7：白色固体；室温下化合物3s(35.5mg,0.5mmol)与对甲基肉桂酸 (1.2eq)溶于二氯甲烷中，加入EDCI(1.2eq)和DMAP(0.02eq)，反应时间两小 时，反应溶液水洗，二氯甲烷萃取，合并有机相，干燥浓缩过柱得到产物58.7g， 产率82.1%。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.58(d,J=15.88Hz,1H),7.42(d,J=8.07Hz,2H), 7.19(d,J=8.07Hz,2H),6.43(d,J=15.88Hz,1H),6.20(d,J=2.85Hz,1H),5.54(d, J=2.85Hz,1H),4.49(dd,J=9.15,7.80Hz,1H),4.25(td,J=6.83,2.70Hz,2H), 3.75(dd,J=9.15,4.60Hz,1H),3.10–3.16(m,1H),2.38(s,3H),2.05–2.10(m,1H), 1.85–1.89(m,1H).

¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ170.42,169.02,143.33,141.36,139.19,132.39, 130.33,128.77,118.85,118.37,71.15,62.76,40.16,31.30,22.18.

HR-ESI-MS calcd for C₁₇H₁₉O₄[M+H]⁺287.3304,found287.3321.

化合物6s-8：白色固体；室温下化合物3s(35.5mg,0.5mmol)与对甲氧基肉桂 酸(1.2eq)溶于二氯甲烷中，加入EDCI(1.2eq)和DMAP(0.02eq)，反应时间两 小时，反应溶液水洗，二氯甲烷萃取，合并有机相，干燥浓缩过柱得到产物 59.5g，产率78.8%。

¹HNMR(500MHz,CDCl₃)δ7.64(d,J=15.88Hz,1H),7.47(d,J=8.51Hz,2H), 6.90(d,J=8.51Hz,2H),6.34(d,J=15.88Hz,1H),6.20(d,J=2.85Hz,1H),5.54(d, J=2.85Hz,1H),4.49(dd,J=9.15,7.80Hz,1H),4.25(td,J=6.83,2.70Hz,2H), 3.83(s,3H),3.75(dd,J=9.15,4.60Hz,1H)3.11–3.16(m,1H),2.02–2.08(m,1H), 1.82–1.88(m,1H).

¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ170.42,169.01,162.40,145.36,139.18,131.20, 130.21,118.83,117.17,116.00,71.14,62.75,55.60,40.15,31.29.

HR-ESI-MS calcd for C₁₇H₁₉O₅[M+H]⁺303.3298,found303.3279.

化合物6s-9：白色固体；室温下化合物3s(35.5mg,0.5mmol)与对乙氧基肉桂 酸(1.2eq)溶于二氯甲烷中，加入EDCI(1.2eq)和DMAP(0.02eq)，反应时间两 小时，反应溶液水洗，二氯甲烷萃取，合并有机相，干燥浓缩过柱得到产物 58.6g，产率74.1%。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.64(d,J=15.88Hz,1H),7.49(d,J=8.51Hz,2H), 6.98(d,J=8.51Hz,2H),6.34(d,J=15.88Hz,1H),6.20(d,J=2.85Hz,1H),5.54(d, J=2.85Hz,1H),4.49(dd,J=9.15,7.80Hz,1H),4.25(td,J=6.83,2.70Hz,2H), 4.09(q,J=6.96Hz,2H),3.75(dd,J=9.15,4.60Hz,1H),3.12–3.17(m,1H), 2.04–2.09(m,1H),1.83–1.89(m,1H),1.42(t,J=6.96Hz,3H).

¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ170.43,169.02,158.86,145.23,139.19,129.89, 127.67,118.84,117.18,115.00,71.15,64.46,62.76,40.16,31.28,14.75.

HR-ESI-MS calcd for C₁₈H₂₁O₅[M+H]⁺317.3563,found317.3577.

化合物6s-10：白色固体；室温下化合物3s(35.5mg,0.5mmol)与对丙氧基肉 桂酸(1.2eq)溶于二氯甲烷中，加入EDCI(1.2eq)和DMAP(0.02eq)，反应时间 两小时，反应溶液水洗，二氯甲烷萃取，合并有机相，干燥浓缩过柱得到产 物62.6g，产率75.9%。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.64(d,J=15.88Hz,1H),7.47(d,J=8.51Hz,2H), 6.97(d,J=8.51Hz,2H),6.34(d,J=15.88Hz,1H),6.20(d,J=2.85Hz,1H),5.54(d, J=2.85Hz,1H),4.49(dd,J=9.15,7.80Hz,1H),4.25(td,J=6.83,2.70Hz,2H), 3.95(t,J=7.11Hz,2H),3.75(dd,J=9.15,4.60Hz,1H),3.11–3.17(m,1H), 2.05–2.10(m,1H),1.85–1.89(m,1H),1.79–1.83(m,2H),1.04(t,J=7.36Hz,3H).

¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ170.42,169.01,159.74,145.23,139.18,129.90, 127.45,118.83,117.17,114.89,71.14,69.10,62.75,40.15,31.29,22.20,10.40.

HR-ESI-MS calcd for C₁₉H₂₃O₅[M+H]⁺331.3829,found331.3836.

实施例4：化合物4r-1～16、4s-1～16、5s-1～8、6s-1～10抑制LPS诱导RAW264.7 的NO生成活性

（1）样品配置

实施例1制备的4r-1～16、4s-1～16、5s-1～8、6s-1～10、滇南洋耳菊内酯 A及阳性对照药氨基胍（Sigma-Aldrich,纯度>98.0%）用DMSO（二甲亚 砜）(Merck)溶解后，加入PBS(-)（磷酸盐缓冲液）配成10mM的溶液， 进一步稀释为0,0.1,0.5,5,20μM梯度浓度的样品。以10μg/mL的LPS (Lipopolysaccharides,脂多糖，sigma,Cat.L-2880)为诱导剂。

（2）实验方法

小鼠巨噬细胞RAW264.7（购于上海生科院细胞资源中心）在37℃,5% CO₂培养箱中常规培养于DMEM培养液中。实验时将1μL/mL LPS（脂多糖） (溶于蒸馏水中)加入100mL浓度为2×10⁶μg/mL的细胞悬液中，18h后以 Griess法通过测定细胞上清液中亚硝酸盐的含量间接反映NO生成量：取100 mL细胞培养液，加入等量Griess（格里斯）试剂，测定吸光值。

（3）评价标准及统计方法

于570nm波长处测吸收度，以NaNO₂标准溶液绘制标准曲线，计算亚 硝酸盐的浓度。各组实验结果以SPSS软件one-way ANNOVA方法进行统计 分析。

（4）实验结果

实验结果表明4r-1～16、4s-1～16、5s-1～8和6s-1～10对LPS诱导RAW264.7 巨噬细胞的NO生成有明显的抑制活性（结果见表1），说明其具有抗炎活性。

表1：4r-1～16、4s-1～16、5s-1～8、6s-1～10抑制LPS诱导RAW264.7的NO生成活 性

实施例5：化合物4r-1～16、4s-1～16、5s-1～8、6s-1～10的细胞毒性

（1）样品配置

实施例1制备的4r-1～16、4s-1～16、5s-1～8、6s-1～10用DMSO（二甲亚 砜）(Merck)溶解后，加入PBS(-)（磷酸盐缓冲液）配成10mM的溶液

（2）实验方法

小鼠巨噬细胞RAW264.7（购于上海生科院细胞资源中心）在37℃,5% CO₂培养箱中常规培养于DMEM培养液中。实验时取对数生长期的 RAW264.7细胞经胰蛋白酶消化后重悬，得到1×10⁵/ml的细胞悬液。铺板于 96孔板中，继续培养18小时。加药后再培养18小时，每孔再加入10Μl MTT 溶液(5mg/ml)，继续培养3小时。

（3）评价标准及统计方法

于570nm波长处测吸收度，各组实验结果以SPSS软件one-way ANNOVA方法进行统计分析。

（4）实验结果

实验结果发现所有化合物毒性都较低，毒性IC₅₀均大于20μM，且相对 滇南洋耳菊内酯A毒性更低。

以上已对本发明创造的较佳实施例进行了具体说明，但本发明创造并不 限于所述实施例，熟悉本领域的技术人员在不违背本发明创造精神的前提下 还可作出种种的等同的变型或替换，这些等同的变型或替换均包含在本申请 权利要求所限定的范围内。