一种预防禽流感病毒感染的新型血凝素抗原的制备及应用

摘要

本发明公开了一种预防禽流感病毒感染的新型血凝素抗原的制备及其应用，特点是包括以下步骤：(1)制备含有H10基因的稳定的重组杆状病毒(rBV)；(2)Sf9细胞表达H10的SVP；(3)SVP的纯度和稳定性，该H10重组血凝素可用于预防禽流感H10N8的感染，免疫人或动物以产生抗体和保护作用，与针对H10N8或H10血凝素的抗体发生反应，优点是具有高效、低成本的特点，可用于预防H10N8禽流感病毒的感染，另外此重组血凝素在昆虫细胞中表达，不依赖于鸡胚，很容易进行工艺放大和规模化生产。

说明书

技术领域

本发明涉及一种血凝素抗原的制备，尤其是涉及一种预防禽流感病毒感染的新型血凝素抗原的制备及应用。

背景技术

禽流感和季节性流感是困扰世界的问题。最新流行的H10N8禽流感病毒对人的感染是亟待解决的问题。

大流感是比季节性流感更为严重的疾病。比如1918年“西班牙”大流感造成了世界范围内4千万到1亿人的死亡。2009-2010年的H1N1猪流感在世界范围内迅速蔓延，并被WHO定义为21世纪第一起大流感。高致病禽流感(HPAI)病毒可能造成未来的大流感。比如，逐渐增加的H5N1禽流感病毒感染病例也显示出了造成大流感的可能。其它潜在的可能造成大流感的还有曾经感染过人的H7N2和H9N2禽流感病毒。2013年3月，华东地区曾爆发了H7N9大流行，造成严重的疾病和死亡现象。尚无可预防新型的H10N8禽流感病毒的疫苗。H10N8禽流感病毒，是一种新型的禽流感病毒类型，首次发现病例是在江西省，甲型流感依据流感病毒特征可分为HxNx(H为血凝素蛋白，N为神经氨酸酶蛋白)共140余种亚型，目前，国内外还没有公开任何关于预防H10N8禽流感病毒感染的新型血凝素抗原的制备及应用的相关研究报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种可用于预防H10N8禽流感的预防禽流感病毒感染的新型血凝素抗原的制备及应用

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种预防禽流感病毒感染的新型血凝素抗原的制备，包括以下步骤：

(1)制备含有H10基因的稳定的重组杆状病毒(rBV)；

(2)从Sf9细胞中分离的H10重组血凝素的的重组流感亚病毒颗粒SVP；

(3)重组流感亚病毒颗粒经NP40表面活性剂处理后采用离子交换和分子筛层析纯化。

上述预防禽流感病毒感染的新型血凝素抗原的应用，该H10重组血凝素可用于预防禽流感H10N8的感染，免疫人或动物以产生抗体和保护作用，与针对H10N8或H10血凝素的抗体发生反应。

与现有技术相比，本发明的优点在于：

本发明首次成功制备了包含潜在的大流感病毒H10N8的血凝素蛋白H10 SVP，对于H10N8流感病毒有免疫原性，是由H10凝血素组成的全新重组流感亚病毒颗粒(SVP)疫苗。总地来说，SVP是由细胞培养(昆虫或其它细胞)中分离出来的纳米颗粒，是由血凝素(HA)蛋白分子组成的。与流感类病毒颗粒不同，我们的SVP不含有NA、M1或其它需要用来制备类病毒颗粒的蛋白，由HA组成的多个分子集合。SVP代表球形或多晶结构，仅有脂类和以天然状态存在的HA分子。SVP能够诱导和VLP相似的免疫反应。该SVP通过sf9昆虫细胞膜形成稳定的结构，具有高效、低成本的特点，可用于预防H10N8禽流感病毒的感染。另外此重组血凝素在昆虫细胞中表达，不依赖于鸡胚，很容易进行工艺放大和规模化生产。

附图说明

图1为H10重组血凝素组成的亚病毒颗粒示意图；

图2为电镜下的H10重组血凝素的亚病毒颗粒照片。

具体实施方式

以下结合附图实施例对本发明作进一步详细描述。

一、具体实施例

为了制备SVP，禽流感病毒H10N8的血凝素H10基因在重组杆状病毒(rBV)中的克隆。得到的rBV用于在Sf9细胞中表达H10血凝素蛋白。从Sf9细胞中分离的H10重组血凝素的SVP经NP40表面活性剂处理后采用离子交换(IEX)和分子筛层析纯化。结果如图1和图2所示，病毒颗粒清晰，纯度高。

二、应用实施例

我们评估了重组血凝素H10在鼠和白鼬的模型中的挑战性模型中的免疫原性和有效性。免疫原性由HAI(血凝素抑制)和中和病毒的抗体确认。死亡率由接种疫苗的动物在三种病毒挑战性实验后确定。

上述实施例是对本发明的进一步说明，但本发明的保护范围以权利要求书为准。