9E-15-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-7,12,25-三氧杂-19,21,24-三氮杂-四环18.3.1.1(2,5).1(14,18)二十六碳-1(24),2,4,9,14,16,18(26),20,22-壬烯柠檬酸盐

摘要

本发明涉及9E-15-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-7，12，25-三氧杂-19，21，24-三氮杂-四环[18.3.1.1(2，5).1(14，18)]二十六碳-1(24)，2，4，9，14，16，18(26)，20，22-壬烯(化合物I)的某些盐，已发现其具有改进的性质。具体地，本发明涉及该化合物的柠檬酸盐。本发明还涉及含所述柠檬酸盐的药物组合物和在治疗某些医疗病症中使用所述柠檬酸盐的方法。

说明书

技术领域

本发明涉及9E-15-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-7，12，25-三氧杂-19，21，24-三氮杂 -四环[18.3.1.1(2，5).1(14，18)]二十六碳-1(24)，2，4，9，14，16，18(26)，20，22-壬烯的柠 檬酸盐。本发明还涉及含所述柠檬酸盐的药物组合物和在治疗某些医疗病症中 使用所述盐的方法。

背景技术

专利申请PCT/SG2006/000352首次描述了化合物9E-15-(2-吡咯烷-1-基-乙 氧基)-7，12，25-三氧杂-19，21，24-三氮杂-四环[18.3.1.1(2，5).1(14，18)]二十六碳 -1(24)，2，4，9，14，16，18(26)，20，22-壬烯(化合物1)，该化合物作为用于治疗多种医 疗病症的药物活性剂大有前途。基于该化合物已证实的活性概况，该化合物的 药物开发研究正在进行。

在适于大量生产和最终商业应用的药物研究中，对所考虑目标的药物活性 的可接受水平仅仅是必须考虑的重要变量之一。例如，在药物组合物制剂中， 绝对必要的是药学活性物质的形式能以工业制造方法可靠地进行再生产，并且 足够耐用，能承受所述药学活性物质所处的条件。

从制造前景上来说，重要的是药学活性物质的工业制造方法要使得当使用 相同的制造条件时能生产同样的材料。此外，希望所述药学活性物质以固体形 式存在，制造条件微小的改变不会导致所生产的药学活性物质的固体形式有较 大的改变。例如，重要的是所述制造方法能在可靠的基础上生产具有相同结晶 性的材料，并且所述方法也能生产具有相同水合程度的材料。

此外，重要的是所述药学活性物质对降解、吸湿性和对其固体形式的后续 改变都是稳定的。促进所述药学活性成分结合到药物制剂中，这是重要的。如 果所述药学活性物质是吸湿的(粘稠的)，表示它随时间推移而吸水，几乎不可 能将所述药学活性物质可靠地配制到药物中，这是因为提供同样剂量所要加入 的物质量会根据水合程度而发生很大变化。此外，水合或固体形式的变化(多晶 型)会导致物理化学性质，例如溶解度或溶解速度的改变，进而会导致患者不一 致的口服吸收。

因此，所述药学活性剂的化学稳定性、固态稳定性以及“保存期限”都是 很重要的因素。在理想的情况下，所述药学活性剂和任何包含所述药学活性剂 的组合物应能有效地存放可观的时间，而所述活性组分的物理化学特性，例如 其活性、水分含量、溶解度特性、固体形式等不会显示明显的改变。

对9E-15-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-7，12，25-三氧杂-19，21，24-三氮杂-四环 [18.3.1.1(2，5).1(14，18)]二十六碳-1(24)，2，4，9，14，16，18(26)，20，22-壬烯(nonaene)的 初始研究在盐酸盐上进行，研究表明多晶型是普遍的，发现所述化合物根据制 造条件采取超过一种晶体形式。此外，观察到即使制造条件保持恒定，该多晶 型物的比例也会随批次而变化。从工业角度来看，这些批次间的不一致性使得 其盐酸盐不大合乎需要。

因此，希望开发9E-15-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-7，12，25-三氧杂-19，21，24-三 氮杂-四环[18.3.1.1(2，5).1(14，18)]二十六碳-1(24)，2，4，9，14，16，18(26)，20，22-壬烯 的盐来克服或改进一种或多种上述问题。

发明内容

本发明提供了9E-15-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-7，12，25-三氧杂-19，21，24-三氮 杂-四环[18.3.1.1(2，5).1(14，18)]二十六碳-1(24)，2，4，9，14，16，18(26)，20，22-壬烯的 柠檬酸盐(柠檬酸的盐)。

在一些实施方式中，所述盐是结晶的。

在一些实施方式中，所述盐是1∶1的柠檬酸盐。在一些实施方式中，所述柠 檬酸盐在2θ标度为22.4°±0.5°处显示X-射线衍射峰。

在一些实施方式中，所述柠檬酸盐在2θ标度为10.0°±0.5°，15.6°±0.5°和 17.2°±0.5°处也显示X-射线衍射峰。

在一些实施方式中，所述柠檬酸盐在选自下组的2θ标度上显示至少四个X- 射线衍射峰：7.9°±0.5°，10.0°±0.5°，15.6°±0.5°，15.9°±0.5°，16.8°±0.5°，17.2°±0.5°， 21.1°±0.5°和22.4°±0.5°。

在一些实施方式中，所述柠檬酸盐在选自下组的2θ标度上显示至少6个X- 射线衍射峰：7.9°±0.5°，10.0°±0.5°，15.6°±0.5°，15.9°±0.5°，16.8°±0.5°，17.2°±0.5°， 21.1°±0.5°和22.4°±0.5°。

在一些实施方式中，所述柠檬酸盐在以下的2θ标度上显示X-射线衍射峰： 7.9°±0.5°，10.0°±0.5°，15.6°±0.5°，15.9°±0.5°，16.8°±0.5°，17.2°±0.5°，21.1°±0.5°和 22.4°±0.5°。

在一些实施方式中，所述柠檬酸盐在以下的2θ标度上也显示X-射线衍射 峰：11.1°±0.5°，18.1°±0.5°，21.8°±0.5°，23.2°±0.5°和27.6°±0.5°。

在一些实施方式中，所述柠檬酸盐在以下的2θ标度上也显示X-射线衍射 峰：7.0°±0.5°，14.0°±0.5°，19.0°±0.5°，19.8°±0.5°，23.6°±0.5°，24.3°±0.5°， 25.2°±0.5°，25.7°±0.5°，26.1°±0.5°，26.5°±0.5°和32.1°±0.5°。

本发明还提供包含上述盐的药物组合物。

在另一个实施方式中，本发明提供治疗或预防增殖性疾病的方法，所述方 法包括给予有需要的患者治疗有效量的本发明的盐。在一些实施方式中，所述 增殖性疾病是癌症。

在另一个实施方式中，本发明提供本发明的盐在治疗增殖性疾病中的应 用。在一些实施方式中，所述增殖性疾病是癌症。

在另一个实施方式中，本发明提供本发明的盐在制造用于治疗增殖性疾病 的药剂中的应用。在一些实施方式中，所述增殖性疾病是癌症。

附图简要说明

图1示出批料1，THF中制备的盐酸盐的高分辨率X-射线粉末衍射(XRPD) 的衍射图。

图2示出批料2，MeCN中制备的盐酸盐的高分辨率X-射线粉末衍射(XRPD) 的衍射图。

图3示出批料3，丙酮中制备的盐酸盐的高分辨率X-射线粉末衍射(XRPD) 的衍射图。

图4示出批料4，THF中制备的柠檬酸盐的高分辨率X-射线粉末衍射(XRPD) 的衍射图。

图5示出批料5，MeCN中制备的柠檬酸盐的高分辨率X-射线粉末衍射 (XRPD)的衍射图。

图6示出批料6，丙酮中制备的柠檬酸盐的高分辨率X-射线粉末衍射(XRPD) 的衍射图。

图7示出批料7，丙酮中制备的柠檬酸盐(20克规模(20g scale))的高分辨率X- 射线粉末衍射(XRPD)的衍射图。

图8示出批料8，丙酮中制备的柠檬酸盐(20克规模)的高分辨率X-射线粉末 衍射(XRPD)的衍射图。

图9示出批料4-6的高分辨率X-射线粉末衍射(XRPD)的衍射图。

图10示出批料4-6的低分辨率X-射线粉末衍射图。

图11示出批料4的重叠的高分辨率和低分辨率X-射线粉末衍射图。

图12示出批料4在储存之前和在40℃和75％相对湿度条件下储存一周之后 的X-射线粉末衍射曲线。

图13示出批料5在储存之前和在40℃和75％相对湿度条件下储存一周之后 的X-射线粉末衍射曲线。

图14示出批料6在储存之前和在40℃和75％相对湿度条件下储存一周之后 的X-射线粉末衍射曲线。

图15示出批料4的差示扫描量热法(DSC，上方)和热重分析(TGA)数据。

图16示出批料4-6的重叠的DSC曲线。

图17示出批料4-6的重叠的TGA曲线。

图18示出批料4的重量分析蒸气吸着的动力学曲线。

图19示出批料4的重量分析蒸气吸着的等温线。

图20示出批料4在进行重量分析蒸气吸着实验之前和之后的X-射线粉末衍 射曲线。

图21示出溶解度筛选得到的样品的X-射线粉末衍射曲线。

图22示出批料4在d6-DMSO中的¹H NMR谱。

图23示出批料4在D₂O的¹H NMR谱。

发明详述

如上所述，现已发现9E-15-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-7，12，25-三氧杂 -19，21，24-三氮杂-四环[18.3.1.1(2，5).1(14，18)]二十六碳 -1(24)，2，4，9，14，16，18(26)，20，22-壬烯的某些盐以单一耐用的多晶型物存在。具体 地，本申请人发现这种化合物的柠檬酸盐(柠檬酸的盐)能作为单一多晶型物存 在。

同时，应认为柠檬酸的结构对本领域技术人员来说是清楚的，为避免任何 不确定性，所述结构如下所示：

柠檬酸

本文所述的对盐酸盐和柠檬酸盐的比较研究在表1所示的批料上进行。

表1-用于比较研究的盐酸盐和柠檬酸盐批料列表

对化合物I的初始研究涉及其盐酸盐。其发现概述如下，即发现最初制备的 盐酸盐固体形式不一致，在X-射线粉末衍射(XRPD)数据中有明显的变化。

在3种不同的溶剂中制备作为盐酸盐的化合物1，给出批料1(在THF中制 备)、批料2(在乙腈中制备)和批料3(在丙酮中制备)作为晶体材料。图1， 2和3示出这些批料之间XRPD衍射图的明显变化，表明在不同的溶剂中即使在 类似的条件下制备时，这些盐酸盐的晶体结构通常不一致。

由于在上述盐酸盐的情况下所观察到的不可接受的多变性，故需要一种替 代的耐用固体形式。进一步发现力图确定柠檬酸盐是一种这样的耐用固体形 式。

对9E-15-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-7，12，25-三氧杂-19，21，24-三氮杂-四环 [18.3.1.1(2，5).1(14，18)]二十六碳-1(24)，2，4，9，14，16，18(26)，20，22-壬烯的柠檬酸盐 的五种批料进行表征。分析结果示于以下实施例。

X-射线粉末衍射(XRPD)用来表征化合物1的柠檬酸盐。在高分辨率条件下 收集本发明柠檬酸盐的显著的一系列X-射线衍射峰，示于表2。

表2-柠檬酸盐的显著的X-射线衍射峰列表

  峰位置(2-θ°，±0.5°)   相对强度   7.0   弱   7.9   强   10.0   强   11.1   中   14.0   中   15.6   强   15.9   强   16.8   强   17.2   强   18.1   强   19.0   中   19.8   中   21.1   强   21.8   中   22.4   强   23.2   中   23.6   中

  峰位置(2-θ°，±0.5°)   相对强度   24.3   中   25.2   弱   25.7   中   26.1   中   26.5   弱   27.6   强   32.1   弱

可以看出所述柠檬酸盐可以表征为在2θ标度为22.4°±0.5°处显示X-射线衍 射峰。

所述柠檬酸盐也可表征为在2θ标度为10.0°±0.5°，15.6°±0.5°和17.2°±0.5°处 显示X-射线衍射峰。

在一些实施方式中，所述柠檬酸盐可以进一步表征为在选自下组的2θ标度 上显示至少四个X-射线衍射峰：7.9°±0.5°，10.0°±0.5°，15.6°±0.5°，15.9°±0.5°， 16.8°±0.5°，17.2°±0.5°，21.1°±0.5°和22.4°±0.5°。

在一些实施方式中，所述柠檬酸盐可以进一步表征为在选自下组的2θ标度 上显示至少6个X-射线衍射峰：7.9°±0.5°，10.0°±0.5°，15.6°±0.5°，15.9°±0.5°， 16.8°±0.5°，17.2°±0.5°，21.1°±0.5°和22.4°±0.5°。

在一些实施方式中，所述柠檬酸盐可以进一步表征为在以下的2θ标度上显 示X-射线衍射峰：7.9°±0.5°，10.0°±0.5°，15.6°±0.5°，15.9°±0.5°，16.8°±0.5°， 17.2°±0.5°，21.1°±0.5°和22.4°±0.5°。

在一些实施方式中，所述柠檬酸盐在以下的2θ标度上也显示X-射线衍射 峰：11.1°±0.5°，18.1°±0.5°，21.8°±0.5°，23.2°±0.5°和27.6°±0.5°。

在一些实施方式中，所述柠檬酸盐可以进一步表征为在以下的2θ标度上显 示X-射线衍射峰：7.9°±0.5°，10.0°±0.5°，11.1°±0.5°，15.6°±0.5°，15.9°±0.5°， 16.8°±0.5°，17.2°±0.5°，18.1°±0.5°，21.8°±0.5°，21.1°±0.5°，22.4°±0.5°，23.2°±0.5° 和27.6°±0.5°。

虽然上述峰是特征峰，但是所述柠檬酸盐在以下的2θ标度上也显示X-射线 衍射峰：7.0°±0.5°，14.0°±0.5°，19.0°±0.5°，19.8°±0.5°，23.6°±0.5°，24.3°±0.5°， 25.2°±0.5°，25.7°±0.5°，26.1°±0.5°，26.5°±0.5°和32.1°±0.5°。

本领域技术人员能理解衍射的相对强度可以根据一些因素，例如样品制备 方法和使用的仪器类型而不同。此外，在某些情况下，上述某些峰可能不可检 测出。

本发明的盐可以用以下方法生产：化合物(I)的游离碱与柠檬酸在合适的溶 剂中反应，并从结晶、沉淀或蒸发之后所得的盐的反应混合物中回收。

形成所述盐的反应可以在任何非-干扰性溶剂或溶剂混合物中进行，游离碱 在溶剂中具有合适的溶解度。此类合适的溶剂的例子包括乙腈、四氢呋喃和 丙酮。所述方法通常包括在升高的温度，例如高于20℃，将游离碱在合适的溶 剂中溶解。在一些实施方式中，所述游离碱在约56℃的温度溶解在溶剂(例如丙 酮)中。在一些实施方式中，所述游离碱在约82℃的温度溶解在溶剂(例如乙腈) 中。

当所述游离碱溶解于合适的溶剂中时，所述方法包括再加入适量的所述 酸。所述酸通常作为在合适的溶剂中的溶液加入，通常使用同样的溶剂溶解游 离碱。所述酸的量可以不同，虽然通常酸的用量与化学计量等同或稍微过量。 加入所述酸之后，所述方法通常还包括在加入温度下搅拌反应混合物1小时， 接着冷却所述反应混合物至温度低于反应温度，从而促进结晶。当晶体形成达 到所需的水平时，通过过滤分离晶体并采用本领域的常规方法干燥。

本发明的另一个实施方式提供本发明的盐在治疗增殖性疾病中的应用。 PCT/SG2006/000352公开了用于这类化合物应用的制剂和方法以及可以治疗的 疾病。

现在通过以下非限制性的实施例来描述本发明。如上所述制备比较例的盐 酸盐，并用类似的方法进行分析。

实施例1-在THF溶剂中形成HCl盐(批料1)：

向15毫升THF中加入化合物1的游离碱(0.200克，0.432毫摩尔，1当量)。对 溶液进行加热回流，直至观察到完全溶解为止并保持1小时。然后在回流条件 下缓慢加入1N HCl(0.518毫升，0.518毫摩尔，1.2当量)。将混合物再回流15分钟， 然后冷却。在逐渐冷却过程中观察到结晶。在室温下搅拌晶体12小时，并进行 真空过滤。在真空下干燥产物，得到165毫克产物。

实施例2-在CH₃CN溶剂中形成HCl盐(批料2)：

向70毫升CH₃CN中加入化合物1的游离碱(0.300克，0.648毫摩尔，1当量)。 对溶液进行加热回流，直至观察到完全溶解为止并保持1小时。然后在回流条 件下缓慢加入1N HCl(0.778毫升，0.778毫摩尔，1.2当量)。将混合物再回流15分 钟，然后冷却。在逐渐冷却过程中观察到结晶。在室温下搅拌晶体12小时，并 进行真空过滤。在真空下干燥产物，得到190毫克产物。

实施例3-在丙酮溶剂中形成HCl盐(批料3)：

向50毫升丙酮中加入化合物1的游离碱(0.200克，0.432毫摩尔，1当量)。对 溶液进行加热回流，直至观察到完全溶解为止并保持1小时。然后在回流条件 下缓慢加入1N HCl(0.518毫升，0.518毫摩尔，1.2当量)。将混合物再回流15分钟， 然后冷却。在逐渐冷却过程中观察到结晶。在室温下搅拌晶体12小时，并进行 真空过滤。在真空下干燥产物，得到180毫克产物。

实施例4-在THF溶剂中形成柠檬酸盐(批料4)：

向12毫升THF中加入化合物1的游离碱(0.300克，0.648毫摩尔，1当量)。对 溶液进行加热回流，直至观察到完全溶解为止并保持1小时。然后在回流条件 下缓慢加入溶解于12毫升THF中的柠檬酸溶液(0.149克，0.778毫摩尔，1.2当量)。 将混合物再回流15分钟，然后冷却。在逐渐冷却过程中观察到结晶。在室温下 搅拌晶体12小时，并进行真空过滤。在真空下干燥产物，得到250毫克产物。

实施例5-在CH₃CN溶剂中形成柠檬酸盐(批料5)：

向45毫升CH₃CN中加入化合物1的游离碱(0.200克，0.432毫摩尔，1当量)。 对溶液进行加热回流，直至观察到完全溶解为止并保持1小时。然后在回流条 件下缓慢加入溶解于12毫升CH₃CN中的柠檬酸溶液(0.099克，0.518毫摩尔，1.2 当量)。将混合物再回流15分钟，然后冷却。在逐渐冷却过程中观察到结晶。在 室温下搅拌晶体12小时，并进行真空过滤。在真空下干燥产物，得到220毫克 产物。

实施例6-在丙酮溶剂中形成柠檬酸盐(批料6)：

向50毫升丙酮中加入化合物1(0.200克，0.432毫摩尔，1当量)的游离碱。对 溶液进行加热回流，直至观察到完全溶解为止并保持1小时。然后在回流条件 下缓慢加入溶解于12毫升丙酮中的柠檬酸溶液(0.099克，0.518毫摩尔，1.2当 量)。将混合物再回流15分钟，然后冷却。在逐渐冷却过程中观察到结晶。在室 温下搅拌晶体12小时，并进行真空过滤。在真空下干燥产物，得到198毫克产 物。

实施例7-X-射线粉末衍射研究

条件1a(高分辨率)

用α西门子D5000衍射仪(αSiemens D5000 diffractometer)收集X-射线粉末 衍射(XRPD)图，使用Cu K辐射(1.54A)，40kV，步长(step size)0.03°和步进 时间(step time)-0.5秒的30次连续扫描模式，即θ-θmA(using Cu K radiation (1.54A)，40kV，30continuous scan mode with step size of 0.03°and step time-0.5s， was θ-θmA)。所用的样品-检测器距离得到有效的θ范围是22°-50°。样品分 析时间(暴露于X-射线光束中)是13分钟33秒。用于数据收集的软件是 DIFFRACplus-D5000#1，使用Diffrac Plus-D5000#1分析并表示数据。

在环境条件下检测的样品是使用粉末(未研磨制得)制备的平板试样。将约 100-200mg所述样品在载玻片上轻压得到平坦表面。

条件1b(高分辨率)

X-射线粉末衍射(XRPD)图用Bruker AXS C2GADDS衍射仪收集，使用Cu Kα辐射(40kV，40mA)，自动XYZ台，自动样品定位的激光视频显微镜和HiStar 二维区域检测器。X-射线光学部件由单个多层镜与0.3mm的针孔准直仪联 接组成。光束发散，即X-射线光束在样品上的有效大小，约为4mm。使用θ-θ 连续扫描模式，样品-检测器的距离为20cm，得到有效的2θ范围是3.2°-29.7°。 通常样品暴露于X-射线光束中120秒。用于数据收集的软件是用于WNT 4.1.16 的GADDS，使用Diffrac Plus EVA v 9.0.0.2或v 13.0.0.2分析并表示数据。在环 境条件下检测的样品是使用粉末(未研磨制得)制备的平板试样。将约1-2mg所述 样品在载玻片上轻压得到平坦表面。

条件2(低分辨率)

同样，X-射线粉末衍射图用Bruker D8衍射仪收集，使用Cu Kα辐射(40kV， 40mA)，θ-2θ测角器，发散的V4和接收狭缝(divergence of V4 and receiving  slits)，Ge单色器和Lynxeye检测器。仪器性能使用鉴定合格的刚玉标样(NIST 1976)检验。用于数据收集的软件是Diffrac Plus XRD Commander v2.5.0，使用 Diffrac Plus EVA v 11.0.0.2或v 13.0.0.2分析并表示数据。在环境条件下检测的 样品是使用粉末(按来样)制备的平板试样。约15mg样品缓慢装入在抛光的零背 景(510)硅晶片中切出的洞中。分析过程中所述样品在其自身平面内旋转。收集 到的数据具体如下：

●角度范围：2-42°2θ

●步长(Step size)：0.05°2θ

●收集时间：0.5秒.步^-1

得到各样品的高分辨率XRPD曲线(条件1a)，结果示于图4-8中，显示柠檬 酸盐的五个样品都具有相同的晶相。同样，在条件1b下收集批料4-6的数据，图 9显示曲线重叠，表明图形非常相似，证明它们都具有相同的晶相。

同样使用Bruker GADDS衍射仪收集低分辨率XRPD曲线(条件2)，这样得到 用于多晶型筛选分析的参比图形。图10示出批料4-6的曲线重叠，图11示出批料 4的高分辨率曲线和低分辨率曲线的比较。

为收集低分辨率XRPD曲线而制备的样品放置在保持为40℃和75％相对湿 度的室中。一周之后，用低分辨率XRPD(条件2)对样品进行再分析，以检查相 变。图12-图14显示了与原始XRPD曲线比较的结果。可以看出未发生相变，本 发明的柠檬酸盐在这样的条件下至少能稳定一周。

实施例8-核磁共振(NMR)研究

用Bruker 400MHz仪(Bruker 400MHz instrument)收集¹H NMR谱，Bruker 400MHz仪装有自动取样器并由DRX400控制台控制。使用ICON-NMR v4.0.4 (1型(build 1))进行自动化实验，用Topspin v 1.3(补丁程序第8级(patch level 8)) 运行，采用标准Bruker充样实验(using the standard Bruker loaded experiments)。 在d6-DMSO或D₂O中制备样品。使用ACD SpecManager v 9.09(7703型)进行离 线分析。

¹H NMR显示三个样品都是同样的化合物。通过抗衡离子信号积分确定柠 檬酸盐的化学计量比。但是，在所得的波谱中这些信号出现在DMSO信号的下 方(批料4，图22)，结果无法进行柠檬酸信号的积分。图23示出批料4在D₂O的¹H NMR。在该溶剂中，柠檬酸信号的积分显示化学计量比为预期的1∶1。

实施例9-差示扫描量热法(DSC)和热重分析(TGA)

用装有34位自动取样器的Mettler DSC 823e收集差示扫描量热法(DSC)数 据。使用鉴定合格的铟来对仪器的能量和温度进行校正。通常，0.5-3毫克各种 样品在针孔铝盘中以10℃.min-1从25℃加热至350℃。在样品上的氮气吹扫保持 在50ml.min-1。仪器控制和数据分析软件是STARe v9.10。

用装有34位自动取样器的Mettler TGA/SDTA 851e收集热重分析(TGA)数 据。使用鉴定合格的铟来校正仪器温度。通常，将5-30毫克各样品装载到预先- 称重的铝坩埚，以10℃.min^-1从室温加热至350℃。在样品上的氮气吹扫保持在 50ml.min^-1。仪器控制和数据分析软件是STARe v9.10。

批料4的DSC曲线(图15)显示在176℃有明显的热变。TGA中观察到相应的 重量损失约为20％(图15)。该重量损失以及DSC吸热的复杂形状表明在大于176 ℃时发生总的分解(gross degradation)。不希望受理论限制，这可能表示盐的离 解和柠檬酸的后续分解。

批料5和6显示类似的DSC和TGA曲线(图16和17分别显示重叠的DSC和 TGA数据)。

实施例10-重量分析蒸气吸着(GVS)

使用SMS DVS固有湿气吸着分析仪(SMS DVS Intrinsic moisture sorption  analyser)得到吸着等温线，由SMS分析软件包(SMS Analysis Suite software)进行 控制。通过仪器控制将样品温度保持在25℃。混合干湿氮气气流控制湿度，总 流速为200毫升.分钟^-1。用校准的Rotronic探针测量样品附近的相对湿度(1.0-100 ％RH的动态范围)。用微量天平(精度±0.005毫克)持续监测样品重量变化(质量减 少(mass relaxation))与％RH的关系。通常，5-20毫克样品在环境条件下放置在配 衡网不锈钢篮子(tared mesh stainless steel basket)中。在40％RH和25℃条件(典 型的室温条件)下加载并取出样品。如下文所述进行湿气吸着等温分析(2次扫描 得到1个完整的循环)。25℃条件下，在0.5-90％RH范围内以10％RH间隔进行标 准等温分析。

表3-用于SMS DVS固有实验的方法参数

  参数   数值   吸附-扫描1   40-90

  解吸/吸附-扫描2   90-干燥，干燥-40   间隔(％RH)   10   扫描次数   2   流速(毫升.分钟^-1)   200   温度(℃)   25   稳定性(℃.分钟^-1)   0.2   吸着时间(小时)   6小时完成(time out)

通过对批料4进行重量分析蒸汽吸着实验来研究柠檬酸盐的吸湿性。约20 毫克样品保持在25℃，同时在两个完整的循环中改变环境湿度。图18所示的动 力学曲线显示批料4的样品在各％RH步骤中达到重量平衡。在实验的早期阶段， 样品需要较长时间达到平衡。这可能是由于残余溶剂的置换。

图19所示的等温线显示样品在40％RH-90％RH之间吸收＜0.6％的水。最大 重量差(0％RH和90％RH之间)小于1％w/w，表明所述柠檬酸盐不吸湿。此外， 没有证据表明存在所述柠檬酸盐的水合形式。

表4-批料4的GVS的等温重量值

在GVS实验结束时，收回样品并通过XRPD进行分析，以检查是否存在任 何总的相变。结果(图20)显示没有总的相变。

实施例11-通过高效液相色谱法(HPLC)测定化学纯度

在安捷伦HP1100系列系统(Agilent HP1100 series system)上进行纯度分析， 该系统装有二极管阵列检测器并使用软件ChemStation vB.02.01-SR1。使用的参 数总结在表5中。

表5-测定化学纯度的HPLC方法参数

使用该HPLC程序确定所述柠檬酸盐批料4-6的化学纯度。数值结果示于表 6。

表6-纯度测定结果

可以看出，各样品的测量纯度大于98.1％。

实施例12-溶解度和多晶型评价

对研究的各种溶剂，称取约8毫克化合物1，放入8毫升螺纹盖玻璃瓶中。 以等分试样的10体积加入溶剂，对混合物进行超声波处理并加热(用热空气枪) 以促进溶解。如果加入100体积溶剂之后未实现溶解，再加入100体积。各实验 的细节和观察结果(表7)显示只有在水中达到全部溶解。

表7-具体的溶解度评价

再将小瓶放置在湿度室中，进行25℃/50℃循环(8小时循环)24小时。在该 时间结束时检查样品，然后松开盖子以使溶剂蒸发。再将已干燥的那些样品转 移至石英阵列，同时将仍存有溶剂的那些样品真空过滤到烧结物上。再通过 XRPD分析样品来评价其晶体状态和晶体形式。XRPD分析结果(图21)显示所有 的样品(含水的是唯一的例外)都为形式1。从水溶液中得到的样品是无定形的 (图21，最上方曲线未显示锐峰)。

已证实化合物1柠檬酸盐在有机溶剂中的溶解度极其有限。与黄色晶体接 触的溶剂缺少颜色表明溶解度最小。筛选样品的有机溶剂中所有的残余晶体都 为形式1。发现溶解在水中的柠檬酸盐含量为100毫克.毫升^-1。发现蒸发溶液回 收得到的固体是无定形的。溶解度筛选未显示存在所述柠檬酸盐的任何溶剂化 物或多晶型。

实施例1-12的结果总结在下表中。

表8-批料表征总结

本发明所述的具体实施方式的细节不应被解释为对本发明的限制。在不 偏离本发明的实质和范围的情况下可以作出各种等同的实施方式和变化，应理 解这种等同的实施方式也是本发明的部分。