肠三叶因子重组表达载体及肠三叶因子制备方法

摘要

本发明公开了一种以pGAP为启动子，以毕赤酵母GS115为工程菌，在发酵罐中发酵表达肠三叶因子的工艺方法，首先构建重组毕赤酵母表达载体pGAPZɑA-ITF并转化到大肠杆菌Top10中扩增，提取大肠杆菌质粒线性化后转入酵母菌GS115中，根据载体上所带的zeocin抗性基因筛选高拷贝转化子并进行组成性表达，筛选高表达中试工程菌在培养基中发酵2天分泌表达ITF；通过纯化处理得到纯度95%以上的目的蛋白ITF，产量约为200mg/L，收率约50%；本发明生产成本低，发酵周期短，纯化方法简单，无需甲醇诱导，蛋白表达量高，为ITF的大规模工业化生产奠定了良好的基础。