抗广泛耐药结核菌药、抗耐多药结核菌药以及并用抗结核药

摘要

提供对广泛耐药结核菌有效的抗XDR-TB药和对耐多药结核菌有效的抗耐多药结核菌MDR-TB药以及对针对现有的抗结核药敏感的结核菌有效的并用抗结核药。本发明为包含由下述结构式(1)表示的化合物的抗XDR-TB药、包含由下述结构式(1)表示的化合物的抗耐多药结核菌药以及并用含有由下述结构式(1)表示的化合物的药物和从含有利福平的抗结核药和含有异烟肼抗结核药中选择的至少一种抗结核药的并用抗结核药。

说明书

技术领域

本发明涉及对广泛耐药结核菌(XDR-TB)有效的抗广泛耐药结核菌(XDR-TB)药、对耐多药结核菌(MDR-TB)有效的抗耐多药结核菌(MDR-TB)药以及对药剂敏感性结核菌有效的并用抗结核药。

背景技术

结核病被认为是世界上传染病中的一种专一性传染病，是死亡人数最多的一种疾病。结核菌在中途停止服药等错误治疗中容易产生耐性，例如已知的耐多药结核菌(MDR-TB)。

所述耐多药结核菌为对作为具有较强效果的第一选择药的异烟肼(INH)和利福平(RFR)具有耐性的菌。

近年，在所述耐多药结核菌中检测出不仅对所述第一选择药而且还对作为第二选择药的氟喹诺酮(fluoroquinolone)类药和至少对丁胺卡那霉素(amikacin)、卷曲霉素(capreomycin)以及卡那霉素(kanamycin)中的一种具有耐性的广泛耐药结核菌，这成了严重的问题(例如：参照非专利文献1～2)。此外，从日本国内的结核病患者中也检测出了所述广泛耐药结核菌，这成为了不得不隔离所述患者的严重问题(例如：参照非专利文献3)。

由于至今尚未开发对广泛耐药结核菌具有优异药效的治疗药，因此现阶段需要尽快开发治疗药。

现有技术文献

非专利文献

非专利文献1：青木正和，双十字，5，16-17，2007

非专利文献2：鹿住佑子等，kekkaku，卷.82，No.12：891-896，2007

非专利文献3：中日新闻、2006年12月5日、晚报、第一页

发明内容

技术问题

本发明将解决上述现有的诸多问题并达到以下目的作为课题。即，本发明的目的在于提供一种对广泛耐药结核菌具有优异药效的抗XDR-TB药、对耐多药结核菌具有优异药效的抗MDR-TB药以及对现有的抗结核药敏感的结核菌具有优异药效的并用抗结核药。

技术方案

为了解决上述课题，本发明的发明人深入研究的结果发现，在本发明的发明人的在先发明(WO2004/067544号国际公开文本)的卡普拉霉素的衍生物中，由下述结构式(1)表示的化合物对广泛耐药结核菌和耐多药结核菌具有优异的抗菌活性，并且，当并用含有由下述结构式(1)表示的化合物以及从含有利福平的抗结核药和含有异烟肼抗结核药中选择的至少一种抗结核药时，对针对现有的抗结核药敏感的结核菌具有优异的抗菌活性，从而完成了由下述结构式(1)表示的化合物的抗XDR-TB药、抗MDR-TB药以及并用抗结核药的发明。

[化1]

结构式(1)

(CPZEN-45)

本发明基于本发明人的上述知识，并且，用于解决上述课题的方案如下。即，

<1>抗广泛耐药结核菌药的特征为包含由下述结构式(1)表示的化合物。

[化2]

结构式(1)

(CPZEN-45)

<2>抗耐多药结核菌药的特征在于包含由下述结构式(1)表示的化合物。

[化3]

结构式(1)

(CPZEN-45)

<3>并用抗结核药的特征在于并用含有由下述结构式(1)表示的化合物的药物以及从含有利福平的抗结核药和含有异烟肼抗结核药中选择的至少一种抗结核药。

[化4]

结构式(1)

(CPZEN-45)

<4>用于治疗已感染XDR-TB的个体的方法，其特征在于对个体使用所述<1>所记载的抗XDR-TB药。

<5>用于治疗已感染MDR-TB的个体的方法，其特征在于对个体使用所述<2>所记载的抗MDR-TB药。

<6>用于治疗已感染药剂敏感性结核菌的个体的方法，其特征在于对个体使用所述<3>所记载的并用抗结核药。

有益效果

根据本发明能够解决上述现有的诸多问题且能够达到上述目的，并且能够提供对广泛耐药结核菌具有优异药效的抗XDR-TB药、对耐多药结核菌具有优异药效的抗MDR-TB药以及对现有的抗结核药敏感的结核菌具有优异药效的并用抗结核药。

附图说明

图1为在重水中测量CPZEN-45的三氟醋酸盐的500MHz核磁共振氢谱(¹H-NMR谱)图，其中横轴：ppm单位；

图2为在重水中测量CPZEN-45的三氟醋酸盐的125.8MHz碳-13核磁共振谱(¹³C-NMR谱)图，其中横轴：ppm单位；

图3为示出测量试验例一的肺中的结核菌数的结果的图表；

图4为示出测量试验例一的肝中的结核菌数的结果的图表；

图5为示出测量试验例一的脾中的结核菌数的结果的图表；

图6为示出测量试验例三的肺中的结核菌数的结果的图表；

图7为示出测量试验例三的肝中的结核菌数的结果的图表；

图8为示出测量试验例三的脾中的结核菌数的结果的图表。

具体实施方式

(抗XDR-TB药、抗MDR-TB药)

本发明的抗XDR-TB药至少包含由下述结构式(1)表示的化合物，并且根据需要还包含其他成分。

本发明的抗MDR-TB药至少包含由下述结构式(1)表示的化合物，并且根据需要还包含其他成分。

[化5]

结构式(1)

(CPZEN-45)

所述XDR-TB(extensively drug-resistant tuberculosis：广泛耐药结核菌)为对作为两个主要的第一选择药的异烟肼(INH)和利福平(RFP)具有耐性，且对作为第二选择药的氟喹诺酮类药和至少对丁胺卡那霉素、卷曲霉素以及卡那霉素中的一种具有耐性的菌。

所述MDR-TB(multidrug-resistant tuberculosis：耐多药结核菌)为对作为两个主要的第一选择药的异烟肼(INH)和利福平(RFP)具有耐性的菌。

-由结构式(1)表示的化合物-

由所述结构式(1)表示的化合物的基于体系命名的名称为：(S)-2-{[(2S，3R，4S，5R)-(5-氨甲基-3，4-二羟基草脲胺-2-基)氧][(2S，3S，4R，5R)-5-(2，4-二氧-1，2，3，4-四氢嘧啶-1-基)-3，4-二羟基草脲胺-2-基]-(S)-甲基}-N-(4-丁基苯基)-1，4-二甲基-3-氧-1H-1，4-二氮杂草-5-酰胺((S)-2-{[(2S，3R，4S，5R)-(5-aminomethyl-3，4-dihydroxyoxolan-2-yl)oxy][(2S，3S，4R，5R)-5-(2，4-dioxo-1，2，3，4-tetrahydropyrimidin-1-yl)-3，4-dihydroxyoxolan-2-yl]-(S)-methyl}-N-(4-butylphenyl)-1，4-dimethyl-3-oxo-1H-1，4-diazepine-5-carboxamide)。以下，在本说明书中称为“CPZEN-45”。

--物理化学性质-

由所述结构式(1)表示的化合物的三氟醋酸盐的物理化学性质如下。

(1)熔点：175℃-177℃(分解)

(2)比旋光度：[α]_D²²+79°(c1，MeOH)

(3)质谱(ESI-MS)：质核比(m/z)801[M+CF₃COOH-H]^-

(4)氟-19核磁共振谱(376.5MHz，氘代二甲亚砜(DMSO)中，氟利昂11内部标准)：δ-73.86(s，CF₃)

(5)核磁共振氢谱(¹H-NMR谱)(500MHz，重水中，四甲基硅烷(TMS)内部标准)：图1所示。

(6)碳-13核磁共振谱(¹³C-NMR谱)(125.8MHz，重水中、四甲基硅烷(TMS)内部标准)：图2所示。

对于化合物是否具有由所述结构式(1)表示的结构可根据适当选择的各种分析方法来确认。例如，可通过进行所述质谱分析、所述¹H-NMR谱分析、所述¹³C-NMR谱分析等分析来确认。

所述CPZEN-45可以是盐的形态。对于所述盐而言，无特别限制，可根据目的而适当地选择。例如，诸如上述三氟醋酸盐、醋酸盐、三氯醋酸盐、羟基醋酸盐、乳酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、草酸盐、安息香酸盐、丁酸盐、马来酸盐、丙酸盐、蚁酸盐、苹果酸盐等羧酸盐；诸如氢卤酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、碳酸盐等无机酸盐；诸如精氨酸盐、天冬氨酸盐、谷氨酸盐等氨基酸盐；诸如甲基磺酸盐、对甲苯磺酸盐等磺酸盐。

--CPZEN-45的制备方法--

对于所述CPZEN-45的制备方法而言，无特别限制，可根据目的而适当地选择。例如，可根据WO2004/067544号国际公开文本(pamphlet)所记载的方法而得到。

并且，对于所述CPZEN-45的盐的制备方法而言，无特别限制，可根据目的而适当地选择。例如，可使用药理学上所允许的诸如上述的三氟醋酸盐、醋酸盐、三氯醋酸盐、羟基醋酸盐、乳酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、草酸盐、安息香酸盐、丁酸盐、马来酸盐、丙酸盐、蚁酸盐、苹果酸盐等羧酸盐；诸如氢卤酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、碳酸盐等无机酸盐；如精氨酸盐、天冬氨酸盐、谷氨酸盐等氨基酸盐；诸如甲基磺酸盐、对甲苯磺酸盐等磺酸盐和通常公知的方法来制备。

-CPZEN-45的含量-

对于所述抗XDR-TB药和抗MDR-TB药中的CPZEN-45以及其盐的含量而言，无特别限制，可根据目的而适当地选择。并且，所述抗XDR-TB药和抗MDR-TB药可以是CPZEN-45和该CPZEN-45的盐本身。

-其他成分-

对于所述抗XDR-TB药和抗MDR-TB药中的其他成分而言，无特别限制，例如可从药理学上允许而得到的载体中根据目的而适当地选择。例如，示例包括乙醇、水、淀粉等。

对于所述抗XDR-TB药和抗MDR-TB药中的所述其他成分的含量而言，无特别限制，可在不妨碍CPZEN-45和该CPZEN-45的盐的效果的范围内根据目的而适当地选择。

-使用-

另外，所述抗XDR-TB药和抗MDR-TB药可单独使用，也可以如后述一样与含有其他有效成分的药物一同使用。此外，所述抗XDR-TB药和抗MDR-TB药可以以配到含有其他有效成分的药物中的状态来使用。

-剂型-

对于所述抗XDR-TB药和抗MDR-TB药而言，无特别限制，可根据目的而适当地选择。例如，可以为粉末状、胶囊状、片剂状、液态等剂型。这些剂型的所述抗XDR-TB药和抗MDR-TB药可以根据常规方法而制备。

-用药-

对于所述抗XDR-TB药和抗MDR-TB药的用药方法而言，无特别限制，例如可根据所述抗XDR-TB药和抗MDR-TB药的剂型等而适当地选择，且可通过口服或非口服来用药。

对于所述抗XDR-TB药和抗MDR-TB药的剂量而言，无特别限制，可考虑用药对象个体的年龄、体重、体质、症状、是否用含有其他有效成分的药物等各种因素而适当地选择。

对于所述抗XDR-TB药和抗MDR-TB药的用药时间而言，无特别限制，可根据目的而适当地选择。

对于成为所述抗XDR-TB药和抗MDR-TB药的用药对象的动物种类而言，无特别限制，可根据目的而适当地选择，尤其优选的示例包括人类。

<治疗方法>

由于所述抗XDR-TB药含有所述结构式(1)所表示的化合物，因此可通过对已感染XDR-TB的个体使用抗XDR-TB药来对已感染XDR-TB的个体进行治疗。因此，本发明将个体使用所述抗XDR-TB药作为特征，且涉及对已感染XDR-TB的个体进行治疗的方法。

由于所述抗MDR-TB药含有所述结构式(1)所表示的化合物，因此可通过对已感染MDR-TB的个体使用所述抗MDR-TB药来对已感染MDR-TB的个体进行治疗。因此，本发明将个体使用所述抗MDR-TB药作为特征，且涉及对已感染MDR-TB的个体进行治疗的方法。

(并用抗结核药)

本发明的并用抗结核药至少包含含有由所述结构式(1)表示的化合物(CPZEN-45)的药和从现有的抗结核药中选择的至少一种抗结核药，并根据需要还可包含其他药。

本发明的并用抗结核药可适用于对现有的抗结核药敏感的结核菌。

-含有CPZEN-45的药-

对于含有所述CPZEN-45的药而言，无特别限制，可根据目的而适当地选择。例如，可举出上述的抗XDR-TB药、抗MDR-TB药等。

-现有的抗结核药-

对于所述现有的抗结核药而言，无特别限制，可根据目的而适当地选择。例如可举出日本药典第十五版(平成18年3月31日厚生劳动省告示第285号)中所记载的药物。

对于所述日本药典第十五版中所举出的抗结核药而言，无特别限制，可根据目的而适当地选择。例如，可举出含有利福平(RFP)的抗结核药、含有利福平的衍生物的抗结核药、含有异烟肼(INH)的抗结核药、含有异烟肼的衍生物的抗结核药。其中，优选为含有利福平(RFP)的抗结核药、含有异烟肼(INH)的抗结核药。

对于所述利福平的衍生物而言，无特别限制，可根据目的而适当地选择。例如，可举出利福布丁(Rifabutin)、利福喷丁(rifapentine)。

对于所述异烟肼(INH)的衍生物而言，无特别限制，可根据目的而适当地选择。例如，可举出异烟肼·甲烷磺酸钠(IHMS)、葡萄糖醛酸钠·异烟酰腙(isonicotinyl hydrazone)(INHG)、丙酮酸钙·异烟腙(isoniazone)(IP)等。

-使用-

另外，所述并用抗结核药可以仅与所述药一同使用，也可以与含有其他有效成分的药物一同使用。

-剂型-

对于含有所述CPZEN-45的药和所述现有的抗结核药的剂型而言，无特别限制，可根据目的而适当地选择。例如，可以为粉末状、胶囊状、片剂状、液态等剂型。这些剂型的含有所述CPZEN-45的药和所述现有的抗结核药可根据常规方法而制备。

对于含有所述CPZEN-45的药和所述现有的抗结核药的剂型的组合而言，无特别限制，可根据目的而适当地选择。例如，可以使所述CPZEN-45的剂型为注射剂，使所述现有的抗结核药的剂型为液态。

-用药-

对于含有所述CPZEN-45的药和所述现有的抗结核药的用药方法而言，无特别限制，例如可根据含有所述CPZEN-45的药和所述现有的抗结核药的剂型等而适当地选择，且可通过口服或非口服来用药。

对于含有所述CPZEN-45的药和所述现有的抗结核药的用药方法的组合而言，无特别限制，可根据目的而适当地选择。例如，通过非口服来用所述CPZEN-45，通过口服来用所述现有的抗结核药。

对于含有所述CPZEN-45的药和所述现有的抗结核药的剂量而言，无特别限制，可考虑用药对象个体的年龄、体重、体质、症状、是否用含有其他有效成分的药物等各种因素而适当地选择。

对于含有所述CPZEN-45的药和所述现有的抗结核药的剂量的组合而言，无特别限制，可根据目的而适当地选择。例如，使含有所述CPZEN-45的药的剂量多于所述现有的抗结核药的剂量。

对于含有所述CPZEN-45的药和所述现有的抗结核药的用药时间而言，无特别限制，可根据目的而适当地选择。

对于含有所述CPZEN-45的药和所述现有的抗结核药的用药时间的组合而言，无特别限制，可根据目的而适当地选择。例如，可同时使用所述两种药。

对于成为含有所述CPZEN-45的药和所述现有的抗结核药的用药对象的动物种类而言，无特别限制，可根据目的而适当地选择，尤其优选的示例包括人类。

<治疗方法>

由于所述并用抗结核药并用含有所述结构式(1)所表示的化合物和从含有利福平(RFP)的抗结核药以及含有异烟肼(INH)的抗结核药中选择的至少一种抗结核药，因此可通过对已感染对现有的抗结核药敏感的结核菌(药剂敏感性结核菌)的个体使用所述并用抗结核药来对已感染了药剂敏感性结核菌的个体进行治疗。因此，本发明将个体使用所述抗结核药作为特征，且涉及对已感染药剂敏感性结核菌的个体进行治疗的方法。

实施例

以下，以实施例和试验例的方式对本发明进行具体说明，但是本发明并不限定于这些实施例和试验例。并且，在以下实施例和试验例中，若没有特别的记载，则“％”表示“质量％”

(实施例一：CPZEN-45的制备)

<从卡普拉霉素混合物合成caprazene>

如下反应式所示，将卡普拉霉素A～G的混合物50.0g溶解在500mL醋酸-水(4∶1)的混合溶剂中。并在70℃下加热搅拌3小时，以使该溶液反应。向浓缩反应液而得到的浆状的浓缩液添加丙酮。提取所生成的沉淀，并用丙酮清洗而得到褐色固体，将该褐色固体溶解在1L甲醇-水(1∶1)的混合溶剂中，利用活性炭脱色之后浓缩而得到24.3g的caprazene的粗固体。从水-丙酮(1∶2，750mL)中结晶出该固体，得到17.2g无色结晶的caprazene。

[化6]

卡普拉霉素A～G                caprazene

<从caprazene合成5″-N-Boc-caprazene>

如下反应式所示，将上述所得到的50.0g结晶状的caprazene溶解在600mL水-二恶烷(2∶1)的混合溶剂中，并向所得的溶液添加13.6g三乙胺和24.7g二碳酸二叔丁酯，并在室温下搅拌5小时。在反应液中添加5mL浓氨水，将剩余的试剂分解之后浓缩而得到67.2g的无色固体5″-N-Boc-caprazene(与三乙胺一起形成盐)。

[化7]

caprazene                         5″-N-Boc-caprazene

测定所述5″-N-Boc-caprazene(与三乙胺一起形成盐)的¹H-NMR谱(500MHz，氘代DMSO中，TMS内部标准)的结果为如下。

δ1.07(9H，t，(CH₃CH₂)₃N)，1.36(9H，s，(CH₃)₃C-O)，2.32(3H，s，CH₃N-5″′)，2.94(3H，s，CH₃N-8″′)，5.01(1H，s，H-1″)，5.57(1H，d，H-1′)，5.59(1H，d，J＝8Hz，H-5)，6.39(1H，br t，H-3″′)，7.80(1H，d，J＝8Hz，H-6)。

<从5″-N-Boc-caprazene合成5″-N-Boc-caprazene-1″′-酰胺衍生物>

如下述反应式所示，将上述所得到的34.8g 5″-N-Boc-caprazene溶解在700mL 2-丙醇-水(19∶1)混合液中，并向所得的溶液添加7.03g 4-丁基苯胺和20.0g 4-(4，6-二甲氧基-1，3，5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉盐酸盐水合物，在室温下搅拌6小时，使该溶液反应。

将浓缩反应液而得到的浆液溶解在800mL 5％硫酸氢钾水溶液中。用醋酸乙酯清洗所得溶液之后，在冰浴中添加300mL碳酸钠水溶液来中和该溶液。用醋酸乙酯萃取所生成的不溶物，并用饱和盐水清洗有机层之后用无水硫酸钠进行干燥并浓缩而得到32.2g的淡黄色固体的5″-N-Boc-caprazene-1″′-酰胺衍生物。

[化8]

5″-N-Boc-caprazene             5″-N-Boc-caprazene-1″′-酰胺

测定所述5″-N-Boc-caprazene-1″′-酰胺衍生物的¹H-NMR谱(500MHz，氘代DMSO中，TMS内部标准)的结果为如下。

δ0.89(3H，t，CH₃(CH₂)₃C₆H₄NH)，1.31(9H，s，(CH₃)₃C-O)，2.35(3H，s，CH₃N-5″′)，2.93(3H，s，CH₃N-8″′)，5.59(1H，d，J＝8Hz，H-5)，5.63(1H，s，H-1′)，6.39(1H，t，H-3″′)，7.13和7.51(每2H，d，CH₃(CH₂)₃C₆H₄NH)，7.79(1H，d，J＝8Hz，H-6)，10.12(1H，s，CH₃(CH₂)₃C₆H₄NH)，11.30(1H，s，NH-3)。

<从5″-N-Boc-caprazene-1″′-酰胺衍生物合成CPZEN-45>

如下述反应式所示，将上述所得到的23.8g 5″-N-Boc-caprazene-1″′-酰胺衍生物溶解在240mL三氟醋酸-甲醇(4∶1)的混合溶剂中。使所得溶液在室温下反应2小时，以去除氨基酸保护基团。向浓缩反应液而得到的浆状浓缩液添加二乙醚，并将生成的沉淀用二乙醚清洗，且干燥之后得到27.3g淡黄色固体(CPZEN-45的2三氟醋酸盐)。

将所述固体溶解在1200ml的1-丁醇中，并依次用5％碳酸氢钠水溶液和水清洗。之后，利用活性炭对有机层进行脱色处理，并通过浓缩而得到21.1g无色固体CPZEN-45的三氟醋酸盐。接着，利用甲醇-己烷进行结晶化，得到17.6g CPZEN-45的三氟醋酸盐的无色结晶。

[化9]

5″-N-Boc-caprazene-1″′-酰胺      CPZEN-45

测定上述所得到的CPZEN-45的三氟醋酸盐结晶的物理化学性质，结果为如下。从这些物理化学性质确认CPZEN-45为由下面结构式(1)表示的化合物。

(1)熔点：175℃-177℃(分解)

(2)比旋光度：[α]_D²²+79°(c1，MeOH)

(3)质谱(ESI-MS)：质核比(m/z)801[M+CF₃COOH-H]^-

(4)氟-19核磁共振谱(376.5MHz，氘代DMSO中，氟利昂11内部标准)：δ-73.86(s，CF₃)

(5)核磁共振氢谱(¹H-NMR谱)(500MHz，重水中、四甲基硅烷(TMS)内部标准)：图1所示。

(6)碳-13核磁共振谱(¹³C-NMR谱)(125.8MHz，重水中、四甲基硅烷(TMS)内部标准)：图2所示。

[化10]

结构式(1)

(CPZEN-45)

此外，对所得到的CPZEN-45实施了以下的试验例一至试验例三。

(试验例一)

-针对广泛耐药结核菌(XDR-TB)的CPZEN-45的有效性评价-

对广泛耐药结核菌感染的模式小鼠，用CPZEN-45进行治疗实验，以调查其有效性。

-所用菌株-

作为所述广泛耐药结核菌，使用了结核分枝杆菌(M.tuberculosis)临床分离株XDR-TB(0306-0206)。表1示出利用比率法检查所述菌的药剂敏感性的结果。另外，对吡嗪酰胺(PZA)的敏感性根据吡嗪酰胺酶(PZase)活性的有无来判定。对于PZase的活性，基于日本结核病学会杂志kekkaku卷.75，No.9，PP.561-562，2000中所记载的方法而进行。

[表1]

R：耐性，S：敏感性

※基于记载于日本结核病学会杂志结核卷.75，No.9，pp.561-562的方法进行

从表1的结果可知，结核分枝杆菌(M.tuberculosis)临床分离株XDR-TB(0306-0206)对链霉素(SM)、异烟肼(INH)、利福平(RFP)、乙胺丁醇(EB)、卡那霉素(KM)、乙硫异烟胺(TH)、恩维霉素(EVM)、对氨水杨酸(PAS)、左氧氟沙星(LVFX)以及吡嗪酰胺(PZA)为耐性，对环丝氨酸(CS)为敏感性。

--所用药剂--

在以下的组1至组8中分别使用了5只(共40只)6周龄的雌性巴比赛(BALB/c)小鼠。对所述小鼠静脉(i.v.)接种了所述广泛耐药结核菌5×10⁵cfu。从进行所述接种1天之后使用药剂。所述药剂使用了CPZEN-45或链霉素(SM，对照药)。所述药剂的用药方法为，将各药剂用生理盐水溶解，并对背部皮下的四处(左上背部、右上背部、左下背部、右下背部)分别注射0.125mL该溶解药剂，合计皮下注射0.5mL。各组使用的药剂以及用量如下所示。

组1：药剂···无，用量···无(对照(control))

组2：药剂···CPZEN-45，用量···6.3mg/kg

组3：药剂···CPZEN-45，用量···25mg/kg

组4：药剂···CPZEN-45，用量···100mg/kg

组5：药剂···CPZEN-45，用量···200mg/kg

组6：药剂···SM，用量···25mg/kg

组7：药剂···SM，用量···100mg/kg

组8：药剂···SM，用量···200mg/kg

所述药剂的用药次数为第一周为五次(星期一至星期五)，第二周为五次(星期一至星期五)，第三周为两次(星期一、星期四)，第四周为两次(星期一、星期四)，合计用药14次。

--结核菌数(CFU)的测定--

从用所述药剂开始第30天宰杀小鼠，分别对肺、肝以及脾进行匀浆(homogenate)，并适当地稀释之后，接种到米德尔布鲁克(middlebrook)7H11琼脂培养基，在37℃下培养，并在14天之后对出现的群落进行计数，以检查药剂在活体内(in vivo)对广泛耐药结核菌的有效性。该结果由图3至图5表示。

图3为示出测量肺中的结核菌数的结果的图表，纵轴表示肺的每单位重量的菌数(cfu/g(log))，各柱状图从左到右依次记载所述组1至组8。图4为示出测量肝中的结核菌数的结果的图表，纵轴表示肝的每单位重量的菌数(cfu/g(log))，各柱状图从左到右依次记载所述组1至组8。图5为示出测量脾中的结核菌数的结果的图表，纵轴表示脾的每单位重量的菌数(cfu/g(log))，各柱状图从左到右依次记载所述组1至组8。

从图3至图5的结果可知，相对于SM几乎没有抗菌效果(广泛耐药结核菌的减少)，CPZEN-45根据浓度而对广泛耐药结核菌具有显著高于SM的抗菌效果。

(试验例二)

-针对耐多药结核菌(MDR-TB)以及广泛耐药结核菌(XDR-TB)的CPZEN-45的抗菌谱-

基于日本化学疗法学会标准法，在10％油酸-白蛋白-葡萄糖-过氧化氢酶(oleic-albumin-dext rose-catalase：OADC)米德尔布鲁克7H10琼脂培养基上，37℃下培养14天之后根据稀释倍数法来测定针对对药剂(链霉素(SM)、INH、RFP、乙胺丁醇(EB)、卡那霉素(KM)、乙硫异烟胺(TH)、恩维霉素(EVM)、对氨水杨酸(PAS)、左氧氟沙星(LVFX)等)具有耐性的各种耐多药结核菌和广泛耐药结核菌的CPZEN-45的抗菌谱。每种菌的最小抑制浓度(MIC)的测定结果如表2所示。

[表2]

¹⁾RFP：利福平耐药性，INH：异烟肼耐药性，LVFX：左氧氟沙星耐药性，EB：乙胺丁醇耐药性，PAS：对氨水杨酸耐药性，TH：乙硫异烟胺耐药性，KM：卡那霉素耐药性，SM：链霉素耐药性。

从表2可以判断，CPZEN-45对各种耐多药结核菌具有抗菌活性。

(试验例三)

-针对药剂敏感性结核菌的CPZEN-45和现有的抗结核药的并用效果-

对H37Rv人型结核菌感染的模式小鼠，并用CPZEN-45和现有的抗结核药来进行治疗实验，以调查其有效性。

--所用菌株-

所用的药剂敏感性结核菌为H37Rv人型结核菌。

--所用药剂--

在以下的组1至组10中分别使用了5只(共50只)6周龄的雌性巴比赛(BALB/c)小鼠。并且，对所述小鼠静脉(i.v.)接种了5×10⁵cfu所述H37Rv人型结核菌。从进行所述接种1天之后使用药剂。对于所述药剂使用了CPZEN-45、利福平(RFP)、异烟肼(INH)。在所述药剂中，CPZEN-45用生理盐水进行溶解，并对背部皮下的四处(左上背部、右上背部、左下背部、右下背部)分别注射0.125mL该溶解药剂，总共皮下注射0.5mL。将RFP和INH分别溶解在5％阿拉伯树胶(已溶于蒸馏水)中，并将该溶液通过口食道插管而注入。各组使用的药剂以及用量如下所示。

组1(对照(control))

药剂···无，用量···无

组2(RFP)

药剂···RFP，用量···5.0mg/kg

组3(INH)

药剂···INH，用量···1.5mg/kg

组4(CPZEN-45高)

药剂···CPZEN-45，用量···25mg/kg

组5(RFP+INH)

药剂···RFP+INH

用量···RFP 5.0mg/kg，INH 1.5mg/kg

组6(CPZEN-45高+RFP)

药剂···CPZEN-45、RFP

用量···CPZEN-45 25mg/kg，RFP  5.0mg/kg

组7(CPZEN-45高+INH)

药剂···CPZEN-45、INH

用量···CPZEN-45 25mg/kg，INH  1.5mg/kg

组8(CPZEN-45高+RFP+INH)

药剂···CPZEN-45、RFP、INH

用量···CPZEN-45 25mg/kg，RFP 5.0mg/kg，INH 1.5mg/kg

组9(CPZEN-45低+RFP+INH)

药剂···CPZEN-45、RFP、INH

用量···CPZEN-45 6.3mg/kg，RFP 5.0mg/kg，INH 1.5mg/kg

组10(CPZEN-45低)

药剂···CPZEN-45，用量···6.3mg/kg

所述药剂的用药次数为第一周为五次(星期一至星期五)，第二周为五次(星期一至星期五)，第三周为两次(星期一、星期四)第四周为两次(星期一、星期四)，合计用药14次。

--结核菌数(CFU)的测定--

从用所述药剂开始第30天宰杀小鼠，并分别对肺、肝以及脾进行匀浆(homogenate)之后接种到米德尔布鲁克(middlebrook)7H11琼脂培养基，在37℃下培养，并在14天之后对出现的群落进行计数，以检查并用药剂在活体内(in vivo)对药剂敏感性结核菌的有效性。该结果由图6至图8表示。

图6为示出测量肺中的结核菌数的结果的图表，纵轴表示肺的每单位重量的菌数(cfu/g(log))，各柱状图从左到右依次记载所述组1至组10。从图6的结果可知，通过学生t检验和Turkey kramer检验可知，组8(CPZEN-45高+RFP+INH)中的结核菌数相比组5(RFP+INH)中的结核菌数显著减少，这表明并用CPZEN-45发生了协同效应。此外，即使组9(CPZEN-45低+RFP+INH)中的结核菌数也比组5(RFP+INH)中的结核菌数显著减少。

尤其，组8(CPZEN-45高+RFP+INH)中的结核菌数相比单独使用高浓度的CPZEN-45的组4(CPZEN-45高)中的结核菌数显著减少。此外，组9(CPZEN-45低+RFP+INH)中的结核菌数相比单独使用低浓度的CPZEN-45的组10(CPZEN-45低)中的结核菌数显著减少。

此外，组7(CPZEN-45高+INH)中的结核菌数相比组3(INH)或组4(CPZEN-45高)中的结核菌数显著减少，这表明并用CPZEN-45而发生了协同效应。

此外，组6(CPZEN-45高+RFP)中的结核菌数相比组2(RFP)或组4(CPZEN-45高)中的结核菌数显著减少。

从以上结果，除CPZEN-45还另外使用了INH和RFP而在肺中发生了协同效应。这个结果，想必在将来的临床医用中会成为重要的一点。

图7为示出测量肝中的结核菌数的结果的图表，纵轴表示肝的每单位重量的菌数(cfu/g(log))，各柱状图从左到右依次记载所述组1至组10。从图7的结果可知，组8(CPZEN-45高+RFP+INH)中的结核菌数相比组5(RFP+INH)中的结核菌数显著减少。此外，组8(CPZEN-45高+RFP+INH)中的结核菌数相比单独使用高浓度的CPZEN-45的组4(CPZEN-45高)中的结核菌数显著减少。

此外，组7(CPZEN-45高+INH)中的结核菌数相比组3(INH)或组4(CPZEN-45高)中的结核菌数减少。

此外，组6(CPZEN-45高+RFP)中的结合菌数相比组2(RFP)或组4(CPZEN-45高)中的结合菌数因协同而减少。

以上，在肝中发生了CPZEN-45和RFP的协同效应。此外，由于除了CPZEN-45(25mg/kg)还使用了INH和RFP，结核菌数进一步减少。

图8为示出测量脾中的结核菌数的结果的图表，纵轴表示脾的每单位重量的菌数(cfu/g(log))，各柱状图从左到右依次记载所述组1至组10。从图8的结果可知，组9(CPZEN-45低+RFP+INH)中的结核菌数相比组5(RFP+INH)中的结核菌数显著减少。此外，组7(CPZEN-45高+INH)中的结核菌数相比组3(INH)和组4(CPZEN-45高)中的结核菌数显著减少。

以上，由于在脾中除了低浓度的CPZEN-45(6.3mg/kg)还使用了INH和RFP，进一步产生了显著地协同效应。

从以上结果可知，除了高浓度的CPZEN-45(25mg/kg)，即使对低浓度的CPZEN-45(6.3mg/kg)添加INH和RFP而使用也可期待发生结核菌数减少效果的协同效应。

产业上的可利用性

本发明的抗XDR-TB药对广泛耐药结核菌具有优异的抗菌活性，适合用于对已感染成为当今非常严重问题的广泛耐药结核菌的患者的治疗。

本发明的抗MDR-TB药对耐多药结核菌具有优异的抗菌活性，适合用于对已感染耐多药结核菌的患者的治疗。

本发明的并用抗结核药对药剂敏感的结核菌具有优异的抗菌活性，相比现有的药，可期待缩短治疗时间。