治疗湿热黄疸的茵陈五疸丸的质量控制方法

摘要

本发明属于中成药的技术领域，涉及以中药材为原料制成的一种治疗湿热黄疸的茵陈五疸丸的质量控制方法，质量标准中设置以厚朴酚与和厚朴酚、陈皮为对照品，薄层色谱法鉴别茵陈五疸丸处方中是否含有厚朴、陈皮成分的鉴别项目；高效液相色谱法检测茵陈五疸丸处方中黄芩苷的含量定量指标及检验方法，使质量标准较为完善，修订后的质量标准，提高了药品的质量控制。

说明书

技术领域

本发明属于中成药的技术领域，涉及以中药材为原料制成的一种治疗湿热黄疸的茵陈五疸丸的质量控制方法。

背景技术

茵陈五疸丸是卫生部标准WS3-B-2930-98记载处方及质量标准：处方：

茵陈       160g    茯苓    80g    黄芩         80g

苍术       80g     泽泻    80g    厚朴(姜制)   80g

白术(麸炒) 80g     猪苓    80g    山楂         80g

甘草       60g     陈皮    40g    六神曲(麸炒) 40g

枳椇子     40g

制法：以上十三味，除茵陈外，粉碎成细粉，过筛，混匀，备用。茵陈加水煎煮二次，合并煎液，滤过，滤液浓缩成膏。将茯苓等粉末加入膏内，搅匀，干燥，粉碎成细粉，过筛，用水泛丸，干燥，即得。

鉴别：取本品，置显微镜下观察：不规则分枝团块无色，遇水合氯醛液溶化；菌丝无色或淡棕色，直径4～6μm。纤维淡黄色，梭形，壁厚，孔沟细。薄壁细胞类圆形，有椭圆形纹孔，集成纹孔群。石细胞分枝状，壁厚，层纹明显。果皮石细胞淡紫红色、红色或黄棕色，类圆形或多角形，直径约至125μm。纤维束周围薄壁细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维。草酸钙方晶，形成晶纤维。草酸钙方晶成片存在于薄壁组织中。

检查：应符合丸剂项下有关的各项规定(附录I A)。

功能与主治：清热利湿，通利小便。用于湿热黄疸，周身浮肿，遍身发黄，小便赤黄、小水不利。

目前有关与上述公开的卫生部标准WS3-B-2930-98记载处方相似或不同功效相似茵陈五疸丸的文献有很多，但是尚未见与上述公开的茵陈五疸丸处方相似或相同，配比相同，功效相似的产品标准的文献，但是现有技术的标准中还存在鉴别项目、鉴别手段、含量测定方法不完善等缺点，为提高中药的产品质量，需要完善产品质量标准。

发明内容

本发明的目的是本发明的目的在于克服现有技术的茵陈五疸丸标准不足之处，提供一种能够定性、定量检测药物成分的茵陈五疸丸的质量控制方法。

为了达到本发明的目的采用的技术方案是：一种治疗湿热黄疸的茵陈五疸丸的质量控制方法，其中所述的药物配方由中药材：

茵陈        160g    茯苓    80g    黄芩         80g

苍术        80g     泽泻    80g    厚朴(姜制)   80g

白术(麸炒)  80g     猪苓    80g    山楂         80g

甘草        60g     陈皮    40g    六神曲(麸炒) 40g

枳椇子      40g组成，制法：以上十三味，除茵陈外，粉碎成细粉，过筛，混匀，备用；茵陈加水煎煮二次，合并煎液，滤过，滤液浓缩成膏；将茯苓等粉末加入膏内，搅匀，干燥，粉碎成细粉，过筛，用水制丸，干燥，即得，其特征在于：其方法的步骤是：

(1)以厚朴酚与和厚朴酚、陈皮为对照品，薄层色谱法鉴别茵陈五疸丸处方中是否含有厚朴、陈皮成分；

(2)以黄芩苷为对照品，高效液相色谱法检测茵陈五疸丸处方中黄芩苷的含量。

所述的治疗湿热黄疸的茵陈五疸丸的质量控制方法，其特征在于：所述的薄层色谱法鉴别茵陈五疸丸处方中否含有厚朴的方法为：取本品0.5g，加甲醇20ml超声处理1小时，滤过，滤液作为供试品溶液；另取厚朴酚对照品与和厚朴酚对照品，加甲醇制成每1ml各含0.5mg的混合溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以苯-甲醇为展开剂，苯∶甲醇＝27∶1，展开，取出，晾干，置紫外光灯254nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

所述的薄层色谱法鉴别茵陈五疸丸处方中是否含有陈皮成分的方法为：取本品2g，加水30ml超声提取15分钟，加乙醚20ml提取，取水层再加20ml正丁醇提取，取正丁醇层，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取陈皮对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰乙酸-水为展开剂，乙酸乙酯∶甲酸∶冰乙酸∶水＝100∶11∶11∶26，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

所述的治疗湿热黄疸的茵陈五疸丸的质量控制方法，其特征在于：以黄芩苷为对照品，液相色谱法检测茵陈五疸丸处方中黄芩苷的含量的方法为：

(1)色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇∶水∶磷酸＝50∶50∶0.2为流动相；检测波长为280nm；理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2000，黄芩苷峰与相邻峰的分离度应符合规定要求；

(2)对照品溶液的制备：取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得；

(3)供试品溶液的制备：取本品3g，研细，取粉末0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密量取70％乙醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，称定重量，用70％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

(4)测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得；本品每克含黄芩苷不得少于2.62mg。

发明有益效果：质量标准中设置以厚朴酚与和厚朴酚、陈皮为对照品，薄层色谱法鉴别茵陈五疸丸处方中是否含有厚朴、陈皮成分；高效液相色谱法检测茵陈五疸丸处方中黄芩苷的含量，本品每克含黄芩苷不得少于2.62mg的定量指标及检验方法，使质量标准较为完善，修订后的质量标准，提高了药品的质量控制。

附图说明

图1厚朴的薄层鉴别色谱图。

图2陈皮的定性鉴别色谱图。

图3对照品溶液的HPLC图谱。

图4供试品溶液的HPLC图谱。

图5空白对照品溶液的HPLC图谱。

图6线性回归曲线图。

具体实施方式

下面结合实施例，对本发明进一步说明，实施例1改进后的茵陈五疸丸质量标准：

处方：茵陈       160g   茯苓    80g    黄芩         80g

      苍术       80g    泽泻    80g    厚朴(姜制)   80g

      白术(麸炒) 80g    猪苓    80g    山楂         80g

      甘草       60g    陈皮    40g    六神曲(麸炒) 40g

      枳椇子     40g

制法：以上十三味，除茵陈外，粉碎成细粉，过筛，混匀，备用。茵陈加水煎煮二次，合并煎液，滤过，滤液浓缩成膏。将茯苓等粉末加入膏内，搅匀，干燥，粉碎成细粉，过筛，用水制丸，干燥，即得。

性状：本品为棕色至棕褐色的浓缩水丸；气微，味微苦。

鉴别：(1)取本品，置显微镜下观察：不规则分枝团块无色，遇水合氯醛液溶化；菌丝无色或淡棕色，直径4～6μm。纤维淡黄色，梭形，壁厚，孔沟细。薄壁细胞类圆形，有椭圆形纹孔，集成纹孔群。石细胞分枝状，壁厚，层纹明显。果皮石细胞淡紫红色、红色或黄棕色，类圆形或多角形，直径约至125μm。纤维束周围薄壁细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维。草酸钙方晶，形成晶纤维。草酸钙方晶成片存在于薄壁组织中。

(2)厚朴鉴别：取本品0.5g，加甲醇20ml超声处理1小时，滤过，滤液作为供试品溶液。另取厚朴酚对照品与和厚朴酚对照品，加甲醇制成每1ml各含0.5mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以苯-甲醇比例为27∶1为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

(3)陈皮鉴别：取本品2g，加水30ml超声提取15分钟，加乙醚20ml提取，取水层再加20ml正丁醇提取，取正丁醇层，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取陈皮对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰乙酸-水比例为100∶11∶11∶26为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

含量测定：照高效液相色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI D)测定。

色谱条件与系统适应性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水-磷酸比例为50∶50∶0.2为流动相；检测波长为280nm。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2000，黄芩苷峰与相邻峰的分离度应符合规定要求。

对照品溶液的制备  取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备  取本品3g，研细，取粉末0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密量取70％乙醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，称定重量，用70％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每克含黄芩苷不得少于2.62mg。

检查：应符合丸剂项下有关的各项规定(附录I A)。

功能与主治：清热利湿，通利小便。用于湿热黄疸，周身浮肿，遍身发黄，小便赤黄、小水不利。

用法与用量：口服，一次6g，一日1～2次。规格：每瓶装6g；贮藏：密闭，防潮。

实施例2茵陈五疸丸质量标准起草说明：

茵陈五疸丸原质量标准中无薄层鉴别和含量测定，经试验研究，增加厚朴、陈皮的薄层鉴别和黄芩中黄芩苷的含量测定。

一.薄层鉴别

1.厚朴的鉴别

1.1材料与试剂：甲醇、苯：分析纯；厚朴酚对照品：中国药品生物制品检定所，批号：110729-200309；和厚朴酚对照品：中国药品生物制品检定所，批号：0730-200206

1.2供试品溶液的制备：取本品0.5g，加甲醇20ml超声处理1小时，过滤，滤液作为供试品溶液。

1.3对照品溶液的制备：取厚朴酚对照品与和厚朴酚对照品，加甲醇制成每1ml各含0.5mg的混合溶液，作为对照品溶液。

1.4空白对照品溶液的制备：按处方、工艺，除厚朴外制备空白对照品，再将空白对照品粉碎成细粉，按照供试品溶液制备方法制备空白对照品溶液。

1.5实验方法：照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以苯-甲醇(27∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，空白对照品无干扰。结果见图1。图1中1：对照品  2：供试品  3：空白对照品。

2.陈皮的鉴别

2.1材料与试剂：乙醚、正丁醇、乙酸乙酯、甲酸、冰乙酸：分析纯

陈皮对照药材：中国药品生物制品检定所，批号：120969-200507

2.2供试品溶液的制备：取本品2g，加水30ml超声提取15分钟，加乙醚20ml提取，取水层再加20ml正丁醇提取，取正丁醇层，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。

2.3对照药材溶液的制备：取陈皮对照药材0.5g，按照供试品溶液制备方法制备对照药材溶液。

2.4空白对照品溶液的制备：按处方、工艺，除陈皮外制备空白对照品，再将空白对照品粉碎成细粉，按照供试品溶液制备方法制备空白对照品溶液。

2.5实验方法：照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰乙酸-水(100∶11∶11∶26)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，空白对照品色谱无干扰。结果见图2。图2中1：供试品  2：对照品  3：空白对照品

二.黄芩苷的含量测定

1.仪器与材料

仪器：Waters 2695高效液相色谱仪；检测器：Waters2487；C₁₈色谱柱Sartorius CP224S.电子天平.

材料：黄芩苷对照品：批号：110715-200514由中国药品生物制品检验所生产

甲醇：色谱纯，冰乙酸、磷酸：分析纯；

2.实验方法

2.1对照品溶液的制备：取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得。见图3

色谱峰结果

  名字  保留时间  面积  峰高  含量  单位 1  黄芩苷  20.797  1266518  30541

2.2流动相的选择：参考《中国药典》2005年版一部黄芩药材含量测定方法。色谱条件：柱温30℃，检测波长：280nm，流速：0.8ml/min

表1流动相的选择

比较以上三种流动相，选择甲醇-水-磷酸比例为50∶50∶0.2作为流动相。

2.3提取方法的选择：结果：采用方法3黄芩苷提取充分，确定采用方法3为供试品溶液提取溶剂。

2.4提取时间的选择：将本品研细，取细粉0.5g精密称定，置具塞锥型瓶中，精密量取70％乙醇25ml，称重，超声处理不同的时间，放冷补重，滤过，注入高效液相色谱仪中测定。结果如表3

2.5确定供试品溶液制备方法：取本品3g，研细，取粉末0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密量取70％乙醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，称定重量，用70％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。见图4

色谱峰结果

  名字  保留时间  面积  峰高  含量  单位 1  黄芩苷  20.047  1228230  29294

表2提取方法的选择1

表3提取时间的选择

3空白对照品溶液制备

除黄芩外按处方工艺制备空白对照品，按供试品溶液制备方法制备空白对照品溶液。见图5

色谱峰结果

  名字  保留时间  面积  峰高  含量  单位 1  黄芩苷  20.761

4.方法学验证

4.1线性考察

分别吸取黄芩苷对照品溶液(浓度0.0596mg/ml)2μl，4μl，6μl，8μl，10μl注入高效液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积对进样体积做线性回归。结果如表4。

由数据得回归方程为：y＝A+Bx＝292476.1x-32908.01，r＝0.999963结果表明黄芩苷在0.1192～0.5960μg范围内线性关系良好。(见图6)

4.2精密度

取同一供试品溶液，连续进样6次，测定相对标准偏差RSD＝0.3％，表明精密度良好。结果如表5

4.3重现性

精密称定6份同一批样品粉末，按照供试品溶液的制备方法制备，测定黄芩苷含量的RSD为1.7％，表明重现性良好。结果如表6。

4.4稳定性实验

取同一供试品溶液，每隔2小时进样1次进行试验，连续进样6次，RSD＝1.1％，表明本品在10h内基本稳定。结果如表7。

4.5回收率实验

取同一批已知含量(含量：2.73mg/g)的样品6份，每份0.25g，精密称定，加入黄芩苷对照品0.7300mg(溶液浓度：0.7300mg/ml加1ml)，再按照供试品溶液的制备方法制备，计算平均回收率为101.4％，RSD＝0.6％。结果显示样品回收率良好。结果如表8。

5.6样品含量测定

取三批样品，分别按照供试品溶液制备方法进行制备，测定黄芩苷含量，结果见表9。

表4线性考察

表5精密度实验

表6重现性实验

表7稳定性实验

 1  2  3  4  5  6  x  SD  RSD  峰  面  积 1220954  1263573  1233423  1236189  1234666  1239192  1237999.5  13618.0  1.1％

表8回收率实验

表9三批样品含量测定结果

3.27×80％＝2.62mg/g根据以上三批的检测结果，确定茵陈五疸丸中黄芩苷的含量不得低于2.62mg/g。