一种酶法提取龟板胶中龟板肽的方法

摘要

本发明公开了一种酶法提取龟板胶中龟板肽的方法，该方法采用龟板胶为主要原料，经过配水升温蒸煮、复合蛋白酶酶解、灭酶、脱色、膜分离，最后将得到的滤液干燥即得到产品龟板肽。本发明方法生产周期短、成本低、不产生任何有毒有害物质，所得产品安全性高，可广泛用于保健品、药品等领域。

说明书

技术领域

本发明方法涉及龟板深加工技术领域，具体涉及一种酶法提取龟板胶中龟板肽的方法，是一种以龟板胶为原料，利用生物酶酶解龟板胶，从而提取龟板肽的方法。

背景技术

龟板是龟科动物乌龟的腹甲，具有滋阴潜阳、益肾强骨、养血补心的功效，是中医常用的名贵药材之一。其主要的化学成分为氨基酸、蛋白质、动物胶、微量元素等。龟板胶是我国传统中药中的上品，具有极好的滋补功能，对龟板胶进行酶解可以制得龟板肽，而通过酶切技术获得的龟板肽不仅具有极好的消化吸收特性，还具有更有效的生理功能，将龟板肽溶于酒后能改善酒的外观品质，提升酒的品格。

龟板肽系列产品具有抑制血压上升、保护胃粘膜、抗溃疡、促进皮肤胶原代谢，美化皮肤、预防骨质疏松等功效。

从龟板胶中提取龟板肽大多采用以下方法：龟板胶→碱处理→高温蒸煮→酶解→过滤→浓缩→喷雾干燥。提取过程中使用大量的碱处理，既对环境造成污染又对人体存在安全隐患，还破坏了蛋白质的成分；而浓缩操作容易破坏产品的品相，现有技术中没有用到膜分离技术，影响了产品的质量。

发明内容

针对现有技术中存在的不足，本发明的目的在于提供了一种酶法提取龟板胶中龟板肽的方法，无需用碱处理，而是利用复合酶酶解，然后再通过膜分离技术脱盐和浓缩，提取龟板肽，本方法的生产周期短、操作简便、成本低、安全无毒副作用。

为了实现上述的目的，本发明采用以下技术措施：

一种酶法提取龟板胶中龟板肽的方法，其步骤如下：

1、以龟板胶(又称龟甲胶)为原料，加入原料重量的5-7倍的蒸馏水搅拌均匀，升温至100℃蒸煮5-7h；

2、冷却至45-60℃，调pH值为7-8，然后分别按原料龟板胶重量的1-3％和0.5-1.5％的比例加入碱性蛋白酶和胰蛋白酶，反应过程中用氢氧化钠溶液维持pH在7-8，恒温搅拌酶解6-10h；将得到的酶解液升温至90-100℃，保持10-20min灭酶；

3、将酶解液离心后过滤，除去蛋白酶，滤液中加入粉末状活性炭进行脱色，然后再使用膜分离手段进行分离，浓缩，干燥即得到龟板肽干品。

本发明方法中使用的碱性蛋白酶和胰蛋白酶的活力分别为25U/mg和35U/mg。

与现有技术相比，本发明方法的优点和有益效果如下：

1、有效避开了化学手段处理所带来的环境污染及对人体伤害的问题；

2、采用本发明方法生产出来的龟板肽产品的纯度高，所得产品的总蛋白质中分子量在500-3000道尔顿的肽含量达到96％以上，分子量大于3000道尔顿的在4％以内；

3、采用本发明方法生产出来的龟板肽，分子量小，人体容易吸收，吸收率达90％以上；

4、本发明采用了活性炭脱色，有效避免了使用过氧化氢脱色时残留于产品中对人体的伤害，且保证了产品的天然色泽度；

5、本发明方法的生产周期短、操作简便、成本低、安全无毒副作用，可广泛用于多功能保健品、药品等领域。

具体实施方式

下面通过具体的实施例对本发明方法做进一步的详细说明。

实施例1：

一种酶法提取龟板胶中龟板肽的方法，其步骤如下：

1、称取龟板胶1kg，然后加入蒸馏水6kg，搅拌均匀后，升温至100℃蒸煮5h；

2、冷却至55℃，用0.1M的食品级片状氢氧化钠溶液调pH至7-8，然后加入25g碱性蛋白酶和10g胰蛋白酶，在55℃下搅拌酶解10h，酶解过程中用上述0.1M氢氧化钠溶液保持反应体系的pH值稳定；然后升温至95℃，保温15min灭酶；

3、将酶解液过滤，得上清液；上清液中加入25g粉末状活性炭，95℃搅拌吸附1h脱色，滤除活性炭；滤液经孔径为1nm的纳滤膜分离系统进行分离，脱盐并浓缩；浓缩液经喷雾干燥，得到412g白色(本发明中采用活性炭脱色，所得产品的色泽为白色，优于国家标准规定的淡黄色)粉末状龟板肽，所得产品的检测报告见表1。

表1实施例1所得产品的检测报告

实施例2：

一种酶法提取龟板胶中龟板肽的方法，其步骤如下：

1、称取龟板胶2kg，然后加入蒸馏水11kg，搅拌均匀后，升温至100℃蒸煮6h；

2、冷却至50℃，用0.1M的食品级片状氢氧化钠的溶液调pH至7-8，然后加入20g碱性蛋白酶和10g胰蛋白酶，在50℃下搅拌酶解8h，酶解过程中用上述0.1M的氢氧化钠溶液保持反应体系的pH值稳定；然后升温至100℃，保温10min灭酶；

3、将酶解液过滤，得上清液；上清液中加入44g粉末状活性炭，95℃搅拌吸附1h脱色，滤除活性炭；滤液经孔径为1nm的纳滤膜分离系统进行分离，脱盐并浓缩；浓缩液经喷雾干燥，得到831g白色粉末状龟板肽，所得产品的检测报告见表2。

表2实施例2所得产品的检测报告

实施例3：

一种酶法提取龟板胶中龟板肽的方法，其步骤如下：

1、称取龟板胶10kg，然后加入蒸馏水50kg，搅拌均匀后，升温至100℃蒸煮7h；

2、冷却至55℃，用0.1M的食品级片状氢氧化钠的溶液调pH至7-8，然后加入200g碱性蛋白酶和100g胰蛋白酶，在55℃下搅拌酶解7h，酶解过程中用上述0.1M的氢氧化钠溶液保持反应体系的pH值稳定；然后升温至90℃，保温20min灭酶；

3、将酶解液过滤，得上清液；上清液中加入250g粉末状活性炭，95℃搅拌吸附1h脱色，滤除活性炭；滤液经孔径为1nm的纳滤膜分离系统进行分离，脱盐并浓缩；浓缩液经喷雾干燥，得到4.18kg白色粉末状龟板肽，所得产品的检测报告见表3。

表3实施例3所得产品的检测报告

实施例4：

一种酶法提取龟板胶中龟板肽的方法，其步骤如下：

1、称取龟板胶100kg，然后加入蒸馏水700kg，搅拌均匀后，升温至100℃蒸煮6h；

2、冷却至60℃，用0.1M的食品级片状氢氧化钠的溶液调pH至7-8，然后加入2kg碱性蛋白酶和10kg胰蛋白酶，在60下℃搅拌酶解6h，酶解过程中用上述0.1M的氢氧化钠溶液保持反应体系的pH值稳定；然后升温至95℃，保温15min灭酶；

3、将酶解液过滤，得上清液；上清液中加入2000g粉末状活性炭，95℃搅拌吸附1h脱色，滤除活性炭；滤液经孔径为1nm的纳滤膜分离系统进行分离，脱盐并浓缩；浓缩液经喷雾干燥，得到42.1kg白色粉末状龟板肽，所得产品的检测报告见表4。

表4实施例4所得产品检测报告