罗斯福火星花的组织培养方法

摘要

本发明涉及罗斯福火星花的组织培养方法，包括无菌材料的获得，芽的分化和增殖，小球茎壮苗培养，生根培养，炼苗与移栽等步骤。与现有技术相比，本发明大大提高了罗斯福火星花的繁殖速度和苗的整齐度，可实现育苗的工厂化大批量生产。

说明书

技术领域

本发明涉及一种植物的组织培养方法，尤其是涉及罗斯福火星花的组织培养方法。

背景技术

罗斯福火星花为鸢尾科雄黄兰植物，原产于非洲南部，为多年生草本，有球茎和匍匐茎，球茎扁圆，外有褐色纤维质膜。地上茎高约50cm，常有分枝，叶呈线状剑形，花为橙红色，呈漏斗状，多片花束排列，呈复圆锥花序，从葱绿的叶丛中抽出，高低错落，疏密有致，花被筒细而略弯曲，裂片开展。火星花的花季是仲夏，花开不绝，是布置花境、花坛的好材料。但作为国外引进的新品种，罗斯福火星花引种数量较少，分株慢，种苗供应受限制。

发明内容

本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种可提高繁殖速度和苗的整齐度的罗斯福火星花的组织培养方法。

本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：

罗斯福火星花的组织培养方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

(1)无菌材料的获得

在春季挖取罗斯福火星花大球茎旁的小球茎，除去外面包裹的茎片，用自来水冲洗1-3h，再于超净工作台上，依次利用质量浓度为70-75％的乙醇浸泡10-50s，体积浓度为0.5-2‰的汞浸泡10-30min，再用无菌水冲洗4-6次，利用无菌滤纸吸干小球茎表面的水分后，将小球茎切成0.5-2cm的带腋芽的节段，节段接种于小球茎诱导培养基上；

(2)芽的分化和增殖

节段接种于小球茎诱导培养基上1-3周后，其基部开始膨大，出现黄绿色突起，3-4周后节段上可以看见芽分生组织，再培养1-2个月，有0.1-0.3cm大小的小球茎长出，将小球茎切下移入球茎增殖培养基中进行增殖培养，球茎基部的愈伤组织较多，但小球茎仍增殖较快，生长发育良好；

(3)小球茎壮苗培养

在小球茎诱导培养基里诱导出的小球茎呈丛状分布，每丛有4-6个球，将小球茎再分成小丛，每丛有1-3个芽，然后将分成小丛的小球茎转至壮苗培养基上，小球茎迅速膨大，20-30天后可以长到0.3-0.5cm；

(4)生根培养

取0.3-0.5cm的小球茎，转接入生根培养基中诱导生根，8-15天后小球茎幼苗的基部分化出白色的根原基，25-35天后可以长至2-4cm，根系粗壮，须根众多，生根率为90-100％；

(5)炼苗与移栽

在生根培养30-35天，根系长至2-3cm时，选择根系发达、生长健壮的无菌幼苗，于室内开瓶炼苗1-3天，然后将苗取出，洗净其根部的琼脂，栽于温室的苗床中驯化25-40天，即可移栽室外，并给予肥水管理。

所述的小球茎诱导培养基包括MS+6-BA0.1-5.0mg/L+NAA0.1-0.5mg/L。

所述的小球茎诱导培养基优选MS+6-BA5.0mg/L+NAA0.5mg/L。

所述的球茎增殖培养基包括MS+6-BA0.5-5.0mg/L。

所述的球茎增殖培养基优选MS+6-BA3.0mg/L。

所述的壮苗培养基包括MS+6-BA1.0-3.0mg/L。

所述的壮苗培养基优选MS+6-BA2.0mg/L。

所述的生根培养基包括MS+NAA0.05-0.2mg/L。

所述的生根培养基优选MS+NAA0.1mg/L。

所述的培养基还包括蔗糖20-40g/L、琼脂粉4-8g/L，培养基pH5.5-6.0，培养温度24-26℃，光照1500-2500lx。

与现有技术相比，本发明通过组织培养技术，极大提高了罗斯福火星花的繁殖速度和苗的整齐度，可以实现育苗的工厂化大批量生产。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。

实施例1

(1)无菌材料的获得

在春季挖取罗斯福火星花大球茎旁的小球茎，去除外面包裹的茎片后，用自来水冲洗1h后于超净工作台上，依次利用质量浓度为70％的乙醇浸泡10s，体积浓度为0.5‰的汞浸泡10min，再用无菌水冲洗4次，利用无菌滤纸吸干小球茎表面的水分后，将球茎切成0.5cm的带腋芽的节段，再接种于包括MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.1mg/L的小球茎诱导培养基上；

(2)芽的分化和增殖

接种于小球茎诱导培养基上，1周后节段的基部开始膨大，出现黄绿色突起，3周后可见芽分生组织，再培养1个月，有0.1cm的小球茎长出，将小球茎切下移入包括MS+6-BA0.5mg/L的球茎增殖培养基中进行增殖培养，球茎基部的愈伤组织较多，但小球茎仍增殖较快，生长发育良好；

(3)球茎壮苗培养

在小球茎诱导培养基里诱导出的小球茎中，每丛有4个球，将小球茎再分成小丛，每丛有1个芽，然后将分成小丛的小球茎转至包括MS+6-BA1.0mg/L的壮苗培养基上，小球茎迅速膨大，25天后可以长到0.3cm；

(4)生根培养

取0.3cm的小球茎，转接入包括MS+NAA0.05mg/L的生根培养基中诱导生根，8天后幼苗基部分化出白色的根原基，25天后可以长至2cm，根系粗壮，须根众多，生根率为90％；

(5)炼苗与移栽

生根培养30天，根系长至2cm时，选择根系发达、生长健壮的无菌苗，于室内开瓶炼苗1天，然后将苗取出，洗净根部的琼脂，栽于温室的苗床中驯化25天，即可移栽室外，并给予肥水管理。

上述各种情况的培养基还包括蔗糖20g/L、琼脂粉4g/L，pH＝5.5，培养温度24℃，光照1500lx。

实施例2

(1)无菌材料的获得

在春季挖取罗斯福火星花大球茎旁的小球茎，去除外面包裹的茎片后，用自来水冲洗2h后于超净工作台上，依次利用质量浓度为75％的乙醇浸泡30s，体积浓度为1‰的汞浸泡15min，再用无菌水冲洗5次，利用无菌滤纸吸干小球茎表面的水分后，将球茎切成1cm的带腋芽的节段，再接种于包括MS+6-BA5.0mg/L+NAA0.5mg/L的小球茎诱导培养基上；

(2)芽的分化和增殖

接种于小球茎诱导培养基上，2周后节段的基部开始膨大，出现黄绿色突起，3周后可见芽分生组织，再培养1个月，有0.3cm的小球茎长出，将小球茎切下移入包括MS+6-BA3mg/L的球茎增殖培养基中进行增殖培养，球茎基部的愈伤组织较多，但小球茎仍增殖较快，生长发育良好；

(3)球茎壮苗培养

在小球茎诱导培养基里诱导出的小球茎中，每丛有6个球，将小球茎再分成小丛，每丛有3个芽，然后将分成小丛的小球茎转至包括MS+6-BA2.0mg/L的壮苗培养基上，小球茎迅速膨大，20天后可以长到0.5cm；

(4)生根培养

取0.5cm的小球茎，转接入包括MS+NAA0.1mg/L的生根培养基中诱导生根，10天后幼苗基部分化出白色的根原基，30天后可以长至3cm，根系粗壮，须根众多，生根率为100％；

(5)炼苗与移栽

生根培养30天，根系长至3cm时，选择根系发达、生长健壮的无菌苗，于室内开瓶炼苗3天，然后将苗取出，洗净根部的琼脂，栽于温室的苗床中驯化30天，即可移栽室外，并给予肥水管理。

上述各种情况的培养基还包括蔗糖30g/L、琼脂粉6g/L，pH＝5.8，培养温度25℃，光照2000lx。

实施例3

(1)无菌材料的获得

在春季挖取罗斯福火星花大球茎旁的小球茎，去除外面包裹的茎片后，用自来水冲洗3h后于超净工作台上，依次利用质量浓度为75％的乙醇浸泡50s，体积浓度为2‰的汞浸泡30min，再用无菌水冲洗6次，利用无菌滤纸吸干小球茎表面的水分后，将球茎切成2cm的带腋芽的节段，再接种于包括MS+6-BA5.0mg/L+NAA0.5mg/L的小球茎诱导培养基上；

(2)芽的分化和增殖

接种于小球茎诱导培养基上，3周后节段的基部开始膨大，出现黄绿色突起，4周后可见芽分生组织，再培养2个月，有0.2cm的小球茎长出，将小球茎切下移入包括MS+6-BA3mg/L的球茎增殖培养基中进行增殖培养，球茎基部的愈伤组织较多，但小球茎仍增殖较快，生长发育良好；

(3)球茎壮苗培养

在小球茎诱导培养基里诱导出的小球茎中，每丛有5个球，将小球茎再分成小丛，每丛有2个芽，然后将分成小丛的小球茎转至包括MS+6-BA3.0mg/L的壮苗培养基上，小球茎迅速膨大，30天后可以长到0.4cm；

(4)生根培养

取0.4cm的小球茎，转接入包括MS+NAA0.2mg/L的生根培养基中诱导生根，15天后幼苗基部分化出白色的根原基，35天后可以长至4cm，根系粗壮，须根众多，生根率为96％；

(5)炼苗与移栽

生根培养35天，根系长至3cm时，选择根系发达、生长健壮的无菌苗，于室内开瓶炼苗3天，然后将苗取出，洗净根部的琼脂，栽于温室的苗床中驯化40天，即可移栽室外，并给予肥水管理。

上述各种情况的培养基还包括蔗糖40g/L、琼脂粉8g/L，pH＝6.0，培养温度26℃，光照2500lx。