从陕西卫矛中提取的陕西卫矛醇苷Ⅱ及其提取工艺

摘要

本发明涉及从陕西卫矛中提取的陕西卫矛醇苷II及其提取工艺，取新鲜的陕西卫矛茎、叶，室温下在丙酮水溶液中组织破碎提取、减压回收溶剂得干粉，干粉加水溶解，离心，上清液上大孔吸附树脂柱，用水冲洗至洗脱液无色，然后用10％甲醇冲洗至洗脱液无色，得到的10％甲醇洗脱液，低温减压回收溶剂得干粉，将干粉水溶上凝胶柱，用水洗脱，得洗脱液，将洗脱液点滴在薄层板上展开，展开后用茴香醛－浓硫酸显色剂喷雾，先显蓝色，后变红色的流分，该流分依次通过MCI Gel CHP－20柱，Toyopearl HW－40柱，羟丙基葡聚糖凝胶Sephadex LH－20柱，硅胶柱得无色油状陕西卫矛醇苷II，本发明是一种新的化合物，其制备方法操作方便，可靠性强，经济和社会效益巨大。

说明书

一、技术领域

本发明涉及从陕西卫矛中提取的陕西卫矛醇苷II及其提取工艺。

二、背景技术

陕西卫矛（Euonymus schensianus Maxim.)为卫矛科(Celastraceae)卫矛属(Euonymus)植物，又名金丝吊蝴蝶、金蝴蝶。据《新华本草纲要》记载，该科植物多具有杀虫活性，主要集中在雷公藤属、卫矛属、南蛇藤属。自20世纪80年代以来，我国学者对卫矛科许多植物的杀虫活性进行了广泛的研究，其中发现陕西卫矛对昆虫幼虫具有拒食和麻醉作用。广泛分布于我国华北南部，华中各省，主要分布在河南省伏牛山区。为什么陕西卫矛具有杀虫活性呢？其有效成分如何提取至今未见有公开报导。

三、发明内容

针对上述上述情况，为克服现有技术之不足，本发明之目的就是通过对陕西卫矛进行系统的化学成分研究，从陕西卫矛叶、茎中分离并鉴定出一种新的化合物，从而提供一种从陕西卫矛中提取的陕西卫矛醇苷II及其提取工艺，可有效解决从陕西卫矛中提取活性成分陕西卫矛醇苷II的问题，其解决的技术方案是，本发明的陕西卫矛醇苷II，无色油状；比旋光度为[α]_D²⁰-26.4(c0.17，MeOH)；易溶于丙酮，甲醇，茴香醛-浓硫酸喷雾后加热先显蓝色，而后变为红色(105℃)。HR-TOF-MS：m/z：439.2306[M+Na]⁺(计算值：439.2308)，分子式：C₂₁H₃₆O₈。其结构式为：

本发明的陕西卫矛醇苷II的提取工艺为：取新鲜的陕西卫矛茎、叶，室温15-25℃下在70％丙酮水溶液中用闪式提取器(常用提取设备)组织破碎提取两次，每次15-20分钟，提取液合并后低温45℃减压回收溶剂，得干粉，干粉加水分散溶解，离心，上清液上大孔吸附树脂柱Diaion HP-20，用水冲洗至洗脱液无色，然后用10％甲醇冲洗至洗脱液无色，得到10％甲醇洗脱液，低温45℃减压回收溶剂得干粉，将干粉用水溶解上凝胶Toyopearl HW-40柱，用水洗脱，得洗脱液，将洗脱液点滴在薄层板(薄层板为公知常用试剂板)上展开，展开后用茴香醛-浓硫酸显色剂喷雾(茴香醛-浓硫酸显色剂为公知常用显色剂)，在105℃下，先显蓝色，后变红色的RF值(组分的色谱斑点中心到原点的距离与溶剂前沿至原点距离的比值)为0.3的流分，收集该流分得到组分A，组分A依次通过MCI Gel CHP-20柱，Toyopearl HW-40柱，羟丙基葡聚糖凝胶SephadexLH-20柱，硅胶柱得无色油状陕西卫矛醇苷II。

本发明是一种新的化合物，其制备方法先进、科学，操作方便，对陕西、河南、山东等地的陕西卫矛样品按上述方法进行反复多次制备，均取得了相同或相近似的结果，表明本发明可靠性强，有效解决了从陕西卫矛中提取活性成分陕西卫矛醇苷II，为陕西卫矛的应用提供了有利的技术手段和药用价值，经济和社会效益巨大。

四、附图说明

图1为陕西卫矛醇苷II的结构式。

图2为化合物陕西卫矛醇苷II的¹H-NMR谱。

图3为化合物陕西卫矛醇苷II的¹³C-NMR谱。

图4为化合物陕西卫矛醇苷II的HSQC谱。

图5为化合物陕西卫矛醇苷II的HMBC谱。

图6为化合物陕西卫矛醇苷II的IR谱。

图7为化合物陕西卫矛醇苷II的HR-TOF-MS谱。

图8为化合物陕西卫矛醇苷II的UV谱。

五、具体实施方式

以下结合实施例对本发明的具体实施方式作详细说明。

在实施和试验中，本发明所用仪器和材料：柱层析填料Diaion HP-20、MCIGel CHP-20为日本三菱化学公司生产，Toyopearl HW-40为日本TOSOH公司生产，Sephadex LH-20为Parmacia Biotech公司生产，柱层析所用硅胶H由青岛海洋化工厂生产(160-200目)，薄层层析硅胶为青岛海洋化工厂生产(颗粒范围10-40μm)，以0.5％CMC-Na制板，阴干，105℃活化0.5h。

核磁共振用DPX-400(400MHz for ¹H-NMR and 100MHz for¹³C-NMR)核磁共振仪测定，TMS为内标，由郑州大学分析测试中心代测。红外分光光度计型号为Shimadzu FTIR-8201，质谱由郑州大学分析测试中心代测，所用质谱仪为APEX II型。熔点用Kofler显微熔点测定仪测定，未经校正。N-1000型旋转蒸发仪(上海爱朗仪器有限公司)，SHB-B95A型循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司)，DFZ-3型真空干燥箱(上海医用恒温设备厂)。

实施例1

取河南产新鲜的陕西卫矛茎、叶10kg，室温18℃下在70％丙酮水溶液中用闪式提取器组织破碎提取两次，第1次20分钟，第2次15分钟，提取液合并后45℃减压回收溶剂，得干粉410g，干粉加水分散溶解，离心，上清液上大孔吸附树脂柱Diaion HP-20，用水冲洗至洗脱液无色，然后用10％甲醇冲洗至洗脱液无色，得到10％甲醇洗脱液，45℃减压回收溶剂，得干粉15g，将干粉水溶解上凝胶Toyopearl HW-40柱，用水洗脱，得洗脱液，将洗脱液点滴在薄层板上展开，展开后用茴香醛-浓硫酸显色剂喷雾，在105℃下先显蓝色，后变红色的RF值为0.3的流分，收集该流分得到组分A，组分A依次通过MCI Gel CHP-20柱，Toyopearl HW-40柱，羟丙基葡聚糖凝胶Sephadex LH-20柱，硅胶柱得无色油状21mg陕西卫矛醇苷II。

实施例2

取陕西产新鲜的陕西卫矛茎、叶15kg，室温20℃下在70％丙酮水溶液中用闪式提取器组织破碎提取两次，每次各18分钟，提取液合并后45℃减压回收溶剂，得干粉605g，干粉加水分散溶解，离心，上清液上大孔吸附树脂柱DiaionHP-20，用水冲洗至洗脱液无色，然后用10％甲醇冲洗至洗脱液无色，得到10％甲醇洗脱液，45℃减压回收溶剂，得干粉23g，将干粉水溶上凝胶ToyopearlHW-40柱，用水洗脱，得洗脱液，将洗脱液点滴在薄层板上展开，展开后用茴香醛-浓硫酸显色剂喷雾，在105℃下先显蓝色，后变红色的RF值为0.3的流分，收集该流分得到组分A，组分A依次通过MCI Gel CHP-20柱，Toyopearl HW-40柱，羟丙基葡聚糖凝胶Sephadex LH-20柱，硅胶柱得无色油状30mg陕西卫矛醇苷II。

实施例3

取山东产新鲜的陕西卫矛茎、叶20kg，室温22℃下在70％丙酮水溶液中用闪式提取器组织破碎提取两次，第一次15分钟，第2次20分钟，提取液合并后45℃减压回收溶剂，得干粉825g，干粉加水分散溶解，离心，上清液上大孔吸附树脂住Diaion HP-20，用水冲洗至洗脱液无色，然后用10％甲醇冲洗至洗脱液无色，得到10％甲醇洗脱液，45℃减压回收溶剂，得干粉32g，将干粉水溶上凝胶Toyopearl HW-40柱，用水洗脱，得洗脱液，将洗脱液点滴在薄层板上展开，展开后用茴香醛-浓硫酸显色剂喷雾，在105℃下先显蓝色，后变红色的RF值为0.3的流分，收集该流分得到组分A，组分A依次通过MCI Gel CHP-20柱，Toyopearl HW-40柱，羟丙基葡聚糖凝胶Sephadex LH-20柱，硅胶柱得无色油状42mg陕西卫矛醇苷II。

本发明的陕西卫矛醇苷II的结构解析：陕西卫矛醇苷II，无色油状；比旋光度为[α]_D²⁰-26.4(c 0.17，MeOH)；易溶于丙酮，甲醇。茴香醛-浓硫酸喷雾后加热先显蓝色，而后变为红色(105℃)。HR-TOF-MS：m/z：439.2306[M+Na]⁺(计算值：439.2308)，分子式：C₂₁H₃₆O₈。UV：λ_max ^MeOHnm(logε)：206.7nm；IR(KBr)：υ_max cm^-1：3367，2972，2856，1611，1595，1412，1374.与GJH-14的¹H-NMR谱相比，除了在δ_H4.28-3.02之间多出7个氢质子的信号外，其余谱峰都十分相似，对比二者¹³C-NMR谱，在δ_C99.1-63.1之间多出6个碳信号，由此可以推出该化合物是以GJH-14为苷元，又连接了一个葡萄糖。与GJH-17的¹H-NMR谱和¹³C-NMR谱相比较，两者较为相似，但葡萄糖端基的连接位置不同，在化合物GJH-24的HMBC谱中，葡萄糖端基氢质子δ_H4.28(d，1H，J＝7.8Hz，H-1′)与δ_C80.2(C-3)和δ_C 75.0(C-2′)有远程相关，说明葡萄糖连在3位上。因此，GJH-24和GJH-17互为同分异构体，而GJH-14是两者的苷元。由葡萄糖的端基氢信号的偶合常数J＝7.8Hz知，其化合物的苷键应为β构型。因此，确定GJH-24的结构为(3S，7R，10S)-3，11-二羟基-7，10-环氧-3，7，11-三甲基十二碳-1，5-二烯-3-O-β-D-葡萄糖苷。经查阅文献未见报道，确定为一新化合物，命名为陕西卫矛醇苷II。

下表给出本发明化合物陕西卫矛醇苷II的¹H-NMR(400MHz，Acetone-d₆)和¹³C-NMR(100MHz，Acet one-d₆)数据

注：该表给出了该化合物的碳氢归属，证明结构解析的正确性。