有神经病痛治疗用血清素和去甲肾上腺素再摄取综合抑制作用的4－2－(4－甲基苯硫基)苯基哌啶的结晶形式

摘要

4－[2－(4－甲基苯硫基)苯基]哌啶的结晶形式及其盐是例如为神经病痛的治疗而提供的。

说明书

痛觉是比信号从身体受伤部分向大脑中特定受体的直接传递更复 杂的，且其中感觉到的疼痛正比于伤害。更确切地说，对末稍组织的损 害和对神经的伤害可能引起影响随后疼痛敏感性的痛觉所涉及的中枢 神经结构的改变。这种神经结构改变可能引起中枢神经系统在对持续时 间更长的有害刺激的反应方面敏化，这可能表现为诸如慢性疼痛，即甚 至在有害刺激已经停止后痛觉依旧，或痛觉过敏，即增大对一种属于正 常疼痛的刺激的反应。这一点的更神秘和对剧性实例之一是“幻肢综合 征”，即肢体中在其切断前存在的持久疼痛。关于中枢神经结构改变和 疼痛的最近综述，见Melzack et al，Ann.N.Y.Acad.Sci.，933，157-174， 2001。

慢性疼痛，例如神经性疼痛，表现得不同于其它类型疼痛例如躯体 疼痛或内脏疼痛。这种疼痛往往被描述为刺、烧、针扎、麻或刀剜。神 经病痛的共同原因包括醇中毒，切断术，背部、腿部和髋部问题，化学 疗法，糖尿病，艾滋病(HIV)，多发性硬化，脊柱外科，和带状疱疹 病毒感染。

慢性疼痛的中枢神经部分可以解释慢性疼痛例如神经病痛何以往 往对经典止痛药例如非甾类抗炎药(NSAIDS)和鸦片类止痛药反应不 良。以阿米替林为典型代表的三环类抗抑郁药(TCA)已经成为治疗神 经病痛的标准用药，而且其效果相信是经由对血清素输送质和去甲肾上 腺素输送质的综合抑制作用发生的[Clin.Ther.，26，951-979，2004]。更近 地，已经有人在临床上将对血清素和去甲肾上腺素两者再摄取都有抑制 作用的所谓双效抗抑郁药用于治疗神经病痛[Human Psychopharm.，19， S21-S25，2004]。双效抗抑郁药的实例是文拉法辛和度洛西汀，而且这 类抗抑郁药往往简称为SNRI。

关于选择性血清素再摄取抑制剂(SSRI)用于神经病痛的用途的数 据很少，但一般认为效果有限[Bas.Clin.Pharmacol.，96，399-409，2005]。 事实上，已经有人假设SSRI类本身只是微弱抗感受伤害的，但假设血 清素输送质的抑制作用增大了去甲肾上腺素再摄取抑制的抗感受伤害 效果。这种想法得到一份22项动物研究和5项人体研究的综述的支持， 这些研究显示，SNRI类与去甲肾上腺素再摄取抑制剂相比有优异的抗 感受伤害效果，而这又优于SSRI[Pain Med.4，310-316，2000]。

关于5-HT₃拮抗药odansetron的最近数据表明5-HT₃拮抗药可能有 止痛效果，因而可用于治疗神经病痛[Anesth.Analg.97，1474-1478， 2003]。

然而，三环类抗抑郁药的使用是与已知的抗胆碱能副作用例如瞌 睡、焦虑、坐立不安、以及认识和记忆困难等相联系的。因此，目前业 内需要找到神经病痛的替代治疗途径。

作为WO 2003/029232公告的国际专利申请公开了作为游离碱的化 合物4-[2-(4-甲基苯硫基)苯基]哌啶和相应的HCl盐。据报告，该化合物 是血清素输送质和血清素受体2C(5-HT_2C)的抑制剂，而且据说可用于 治疗情感性异常，例如抑郁和焦虑。

发明概要

本发明者已经令人惊讶地发现，除已经知道的药理学性能外，4-[2- (4-甲基苯硫基)苯基]哌啶是血清素再摄取和去甲肾上腺素再摄取的强 抑制剂，血清素受体3(5-HT₃)的拮抗剂，血清素2A(5-HT_2A)的拮 抗剂，和α₁肾上腺能受体的抑制剂，且该化合物因此而可能可用于治疗 诸如慢性疼痛。因此，本发明涉及化合物I，即呈结晶形式的4-[2-(4- 甲基苯硫基)苯基]哌啶及其医药上可接受盐，先决条件是该化合物不是 4-[2-(4-甲基苯硫基)苯基]哌啶盐酸加成盐。

在一种实施方案中，本发明涉及用于治疗的化合物I。

在一种实施方案中，本发明涉及一种治疗方法，包含对有其需要的 患者给药治疗有效量的化合物I。

在一种实施方案中，本发明涉及一种包含化合物I的医药组合物。

在一种实施方案中，本发明涉及化合物I用于药剂制造的用途。

附图

图1：化合物I的HBr加成盐的X射线衍射图

图2：化合物I的HBr加成盐溶剂合物的X射线衍射图

图3：化合物I的棕榈酸加成盐的X射线衍射图

图4：化合物I的DL-乳酸加成盐的X射线衍射图

图5：化合物I(α+β形式)的己二酸加成盐(1:1)的X射线衍射 图

图6：化合物I的己二酸加成盐(2:1)的X射线衍射图

图7：化合物I的富马酸加成盐(1:1)的X射线衍射图

图8：化合物I的戊二酸加成盐(1:1)的X射线衍射图

图9：化合物I(α形式)的丙二酸加成盐的X射线衍射图

图10：化合物I(β形式)的丙二酸加成盐的X射线衍射图

图11：化合物I的草酸加成盐(1:1)的X射线衍射图

图12：化合物I的癸二酸加成盐(2:1)的X射线衍射图

图13：化合物I的琥珀酸加成盐(2:1)的X射线衍射图

图14：化合物I(α形式)的L-苹果酸加成盐(1:1)的X射线衍射 图

图15：化合物I(β形式)的L-苹果酸加成盐(1:1)的X射线衍射 图

图16：化合物I的D-酒石酸加成盐(1:1)的X射线衍射图

图17：与L-天冬氨酸混合的化合物I的L-天冬氨酸加成盐(1:1) 的X射线衍射图

图18：与L-天冬氨酸混合的化合物I的L-天冬氨酸加成盐水合物 (1:1)的X射线衍射图

图19：与谷氨酸一水合物混合的化合物I的谷氨酸加成盐(1:1)的 X射线衍射图

图20：化合物I的柠酸酸加成盐(2:1)的X射线衍射图

图21：化合物I的HCl加成盐的X射线衍射图

图22：化合物I的磷酸加成盐(1:1)的X射线衍射图

图23：本发明化合物给药时前额脑皮层中多巴胺水平

图24：本发明化合物给药时前额脑皮层中乙酰胆碱水平

图25a+b：本发明化合物给药时前额脑皮层和腹海马中乙酰胆碱水 平。

本发明的详细描述

本发明涉及呈结晶形式的化合物I，即4-[2-(4-甲基苯硫基)苯基] 哌啶及其医药上可接受盐，先决条件是所述化合物不是盐酸加成盐。 4-[2-(4-甲基苯硫基)苯基]哌啶的结构是

本发明化合物的药理学性能是在实施例中阐述的，但可以概述如 下。该化合物是血清素和去甲肾上腺素再摄取的抑制剂；它们抑制血清 素受体2A、2C和3；而且它们抑制α-1肾上腺素能受体。

在一种实施方案中，所述医药上可接受盐是无毒酸的酸加成盐。所 述盐包括从下列有机酸制成的盐：例如马来酸、富马酸、苯甲酸、抗坏 血酸、琥珀酸、草酸、联亚甲基水杨酸、甲磺酸、乙二磺酸、乙酸、丙 酸、酒石酸、水杨酸、柠檬酸、葡糖酸、乳酸、苹果酸、丙二酸、扁桃 酸、肉桂酸、柠康酸、天冬氨酸、硬脂酸、棕榈酸、衣康酸、乙醇酸、 对氨基苯甲酸、谷氨酸、苯磺酸、茶碱乙酸、以及8-卤代茶碱例如8- 溴茶碱。所述盐也可以从无机酸例如氢溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸和 硝酸制成。其它有用的盐列于实施例1d的表(表1)中。

在一种实施方案中，本发明化合物即式1化合物是HBr加成盐。

在一种实施方案中，本发明化合物是DL-乳酸加成盐、尤其1:1盐。

在一种实施方案中，本发明化合物是L-天冬氨酸加成盐、尤其1:1 盐。

在一种实施方案中，本发明化合物是谷氨酸加成盐、尤其1:1盐。

在一种实施方案中，本发明化合物是戊二酸加成盐、尤其1:1盐。

在一种实施方案中，本发明化合物是丙二酸加成盐、尤其1:1盐， 已经发现后者以两种多晶变型α和β存在，其中β-形式因溶解度较低而据 信是最稳定的。

在一种实施方案中，本发明化合物呈精制形式。“精制形式”这一 术语意图指出该化合物基本上不含其它化合物或其它形式，即所述化合 物的多晶型，如该情况可能有的多晶型。

经口剂型、尤其片剂和胶囊剂，由于给药容易、因而更好的顺应性， 往往是患者和医师所偏爱的。对于片剂和胶囊剂来说，较好的是该有效 成分是结晶的。

本发明的结晶可以作为溶剂合物存在，即溶剂分子构成其晶体结构 的一部分的晶体。该溶剂合物可以从水生成，在这种情况下该溶剂合物 往往称为水合物。替而代之，该溶剂合物可以从其它溶剂例如乙醇、丙 酮、或乙酸乙酯生成。溶剂合物的确切数量往往因条件而异。例如，水 合物典型地会随温度上升或随湿度降低而失水。当条件例如湿度改变时 不改变或只有少许改变的化合物，一般视为更适合于医药配方。要说明 的是，HBr加成盐当从水中析出沉淀时不生成水合物，而像琥珀酸盐、 苹果酸盐和酒石酸盐酸加成盐这样的化合物则然。

一些化合物是吸湿的，即它们当暴露于湿度时吸水。吸湿性对于要 以医药配方、尤其以干配方例如片剂或胶囊剂提供的化合物一般视为一 种所不希望的性能。在一种实施方案中，本发明提供吸湿性低的结晶。

对于使用结晶性有效成分的经口剂型来说，若所述结晶是明确界定 的，则也是有益的。在本文范畴内，“明确界定”这一术语尤其指化学 计量是明确界定的，即指成盐离子之间的比值是小整数之间的比值，例 如1:1、1:2、2:1、1:1:1等。在一种实施方案中，本发明化合物是明确界 定的结晶。

有效成分的溶解度对于剂型的选择也是有意义的，因为它对生物有 效度可能有直接影响。对于经口剂型来说，一般相信，有效成分的溶解 度越高越有益，因为它提高了生物有效度。一些患者例如老年患者吞咽 片剂可能有困难，口滴溶液剂可能是避免需要吞咽片剂的一种适用替 代。为了限制口滴溶液剂的体积，达到该溶液剂中有效成分的高浓度是 必要的，这又要求该化合物的高溶解度。如表3中所示，DL-乳酸、L- 天冬氨酸、谷氨酸、戊二酸和丙二酸加成盐有格外高的溶解度。

结晶形式影响化合物的过滤和加工性能。针状结晶在生产环境下倾 向于更难以操作，因为过滤变得更困难和费时。某一给定盐的确切结晶 形式可能取决于例如该盐析出沉淀的条件。本发明的HBr酸加成盐当从 乙醇、乙酸和丙醇中析出沉淀时生长针状溶剂合物晶体，但当HBr加成 盐从水中析出沉淀时生长非针状的非水合形式的晶体，提供了优异的过 滤性能。

表3也阐述了结晶pH，即该盐饱和溶液中的pH。这种性能之所以 重要，是因为贮存期间水分永远无法完全避免，且水分的积累会引起包 含低结晶pH盐的片剂中或上的pH降低这可能缩短货架寿命。进而，当 片剂用湿造粒法制造时，结晶pH低的盐可能引起工艺设备腐蚀。表3 中的数据表明，HBr、HCl和己二酸加成盐在这一方面可能是优异的。

在一种实施方案中，本发明化合物是呈结晶形式、尤其呈精制形式 的HBr加成盐。在一种进一步实施方案中，所述HBr盐在X射线粉末 衍射图(XRPD)中的峰位于大约6.08°、14.81°、19.26°、和25.38°2θ， 具体地说，所述HBr盐有图1中所示XRPD。

在一种实施方案中，本发明化合物是呈结晶形式、尤其呈精制形式 的DL-乳酸加成盐(1:1)。在一种进一步实施方案中，所述DL-乳酸加 成盐的XRPD峰位于大约5.30°、8.81°、9.44°、和17.24°2θ，具体地说， 所述DL-乳酸加成盐有图4中所示XRPD。

在一种实施方案中，本发明化合物是呈结晶形式、尤其呈精制形式 的L-天冬氨酸加成盐(1:1)。在一种进一步实施方案中，所述L-天冬 氨酸加成盐是非溶剂合物的，其XRPD峰位于大约11.05°、20.16°、 20.60°、25.00°2θ，具体地说，所述L-天冬氨酸加成盐当与L-天冬氨酸 混合时有图17中所示XRPD。在一种实施方案中，所述L-天冬氨酸加 成盐是一种水合物、尤其呈精制形式。在一种进一步实施方案中，所述 L-天冬氨酸加成盐水合物的XRPD峰位于大约7.80°、13.80°、14.10°、 19.63°2θ，具体地说，所述L-天冬氨酸加成盐水合物当与L-天冬氨酸混 合时有图18中所示XRPD。

在一种实施方案中，本发明化合物是呈结晶形式、尤其呈精制形式 的谷氨酸加成盐(1:1)。在一种进一步实施方案中，所述谷氨酸加成盐 的XRPD峰位于大约7.71°、14.01°、19.26°、22.57°2θ，具体地说，所 述谷氨酸盐当与谷氨酸一水合物混合时有图19中所示XRPD。

在一种实施方案中，本发明化合物是呈结晶形式、尤其呈精制形式 的丙二酸加成盐(1:1)。在一种进一步实施方案中，所述丙二酸加成盐 是α形式，其XRPD峰位于大约10.77°、16.70°、19.93°、24.01°2θ，或 所述丙二酸加成盐是β-形式，其XRPD峰位于大约6.08°、10.11°、18.25°、 20.26°2θ，具体地说，所述丙二酸加成盐有图9或10中所示XRPD。

在一种实施方案中，本发明化合物是呈结晶形式、尤其呈精制形式 的戊二酸加成盐(1:1)。在一种进一步实施方案中，所述戊二酸加成盐 的XRPD峰位于大约9.39°、11.70°、14.05°、和14.58°2θ，具体地说， 所述戊二酸加成盐有图8中所示XRPD。

如以上提到的，本发明化合物特别好地适用治疗慢性疼痛。慢性疼 痛包括各种指征，例如幻肢痛、神经病痛、糖尿病性神经病、后疱疹神 经痛(PHN)、腕管综合征(CTS)、HIV神经病、复合区域性疼痛综 合征(CPRS)、三叉神经痛/(面部)痛性痉挛、外科干预(例如手术 后止痛)、糖尿病性血管病、与胰岛炎相联系的毛细管阻力或糖尿病综 合征、与心绞痛相联系的疼痛、与月经相联系的疼痛、与癌症相联系的 疼痛、牙疼、头痛、偏头痛、紧张型头痛、三叉神经痛、颞下颌关节综 合征、肌筋膜痛肌受伤、纤肌痛综合征、骨和关节痛(骨关节炎)、类 风湿性关节炎、与烧伤相联系的创伤引起的类风湿性关节炎和水肿、由 于骨关节炎、骨质疏松症、骨转移或未知原因引起的扭伤或骨折痛、痛 风、纤维织炎、肌筋膜痛、胸廓出口综合征、上背痛或下背痛(其中背 痛起因于全身性、区域性、或原发性脊椎病(神经根病))、骨盆痛、 心胸痛、非心胸痛、与脊髓受伤(SCI)相联系的疼痛、中枢神经中风 后疼痛、癌症神经病、艾滋病痛、镰形细胞痛、或老年病痛。

具体地说，本发明化合物可用于治疗情绪异常，例如，与以上所列 慢性疼痛指征相联系的抑郁症。

国际疼痛研究协会(IASP)将疼痛定义为“与实际的或潜在的组织 损害相联系的、或用此类损害描述的不愉快感觉和情感经历”(IASP Classification of Chronic Pain，2^nd Edition，IASP Press(2002)，210)。尽管 疼痛总是主观的，但其原因或综合征可以进行分类。“神经病痛”作为 一个亚类，由IASP定义为“神经系统中原发性损伤或功能障碍引发或 引起的疼痛”。

神经病痛的不同亚类得到IASP承认，其实例是：

·异常性疼痛，定义为“由于一种通常不激发疼痛的刺激而引起的 疼痛”。

·灼痛，定义为“持续烧痛、异常性疼痛和创伤性神经损伤后痛觉 过敏的综合征，往往并发血管舒张和催汗功能障碍和稍后的营养改变”。

·感觉过敏，定义为“提高的对刺激的敏感性，将感觉排除在外”。

·神经痛，定义为“一种或多种神经分布性疼痛”。

·神经炎，定义为“一种或多种神经的炎症”。

·神经病，定义为“神经机能紊乱或病理学改变：一种神经中单神 经病，若干神经中多数性单神经病，若为弥散性的和双向的则为多神经 病”。神经病可能与诸如糖尿病相联系，在这种情况下称之为糖尿病性 神经病。

·痛觉过敏，定义为“提高的对属于正常疼痛的刺激的反应”。

·痛觉过敏，定义为“一种疼痛综合征，其特征在于对刺激、尤其 重复刺激的异常疼痛反应，以及提高的阈值”。

引起该神经病痛的刺激可以是机械的或热的。

本发明化合物的独特药理学性能使其适用于治疗不与慢性疼痛直 接有关的其它疾病。5-HT_2C受体位于诸如多巴胺能神经元上，在此，活 化对多巴胺释放产生强化的抑制影响，而且5-HT_2C拮抗药将影响多巴胺 水平的提高。实施例2E中提供的数据显示，本发明化合物的确会在大 脑中带来胞外多巴胺水平的剂量依赖型提高。在这种背景下，可以假设， 5-HT_2C拮抗药特别适用于治疗难以用选择性血清素再摄取抑制剂治疗 的抑郁症[Psychopharmacol.Bull.，39，147-166，2006]。这个假设在若干临 床研究中得到支持，这些研究显示，米氮平与SSRI的组合优于SSRI单 独用于治疗没有足够临床反应的抑郁症患者(抗治疗抑郁症、TRD、或 顽固性抑郁症)[Psychother.Psychosom.，75，139-153，2006]。米氮平也是 一种5-HT₂和5-HT₃拮抗药，这表明，兼备血清素再摄取抑制使用以及 5-HT₂和5-HT₃拮抗作用的化合物，例如本发明化合物，可用于治疗TRD， 即会提高患有抗治疗抑郁症的患者的缓解速率。

实施例2F和2G中提供的数据显示，本发明化合物能提高前额脑皮 层和腹海马中乙酰胆碱的胞外水平。长期存在的临床症据表明，提高大 脑中乙酰胆碱水平是治疗阿尔茨海默病和一般认识缺损的一种途径，参 照乙酰胆碱酯酶在阿尔茨海默病治疗中的用途。在这种背景下，相信本 发明化合物可用于治疗阿尔茨海默病和认识缺损以及情绪异常，例如与 阿尔茨海默病和认识缺损相联系的抑郁症。

部分抑郁症患者在如下意义上会对用诸如SSRI的治疗作出反应： 它们会在临床相关抑郁尺度例如MADRD和HAMD上有所改善，但在 这种情况下其它症状例如睡眠紊乱和认识缺损依然如故。在本发明范畴 内，这些患者称为部分反应者。由于以上讨论的对乙酰胆碱水平的影响， 本发明化合物，除抑郁症外，还可望可用于治疗认识缺损。临床研究已 经显示，哌唑嗪化合物—即一种α-1肾上腺素能受体拮抗药—减少了睡 眠紊乱[Biol.Psychiatry，61，928-934，2007]。进而，本发明化合物的 5-HT_2A和5-HT_2C拮抗作用相信也有镇静、睡眠改善效果[Neuropharmacol. 33，467-471，1994]，因此，本发明化合物可用于治疗部分反应者，或换 言之，用本发明化合物对抑郁症患者的治疗将使部分反应者的部分减 少。

注意力缺乏机能亢进异常(ADHD)是最常见的神经行为异常之一。 ADHD的特征在于如下三征的存在：社会缺损，沟通缺损，以及受限制、 重复或刻板症行为。ADHD通常始于童年或青少年，但症状可能延续到 成年。Atomoxetine是目前(美国)FDA批准用于ADHD治疗的唯一非 兴奋剂[Drugs，64，205-222，2004]。Atomoxetine是一种去甲肾上腺素再 摄取抑制剂，这表明，本发明化合物可以用于治疗ADHD。此外，本发 明化合物由于以上讨论的α-1肾上腺素能受体和5-HT₂拮抗作用而可能 有镇静效果，这有益于ADHD的治疗。

忧郁症是抑郁症的一种特定亚型，往往与严重抑郁症相联系；抑郁 症的这种类型也称为忧郁型抑郁症。忧郁症是与焦虑、未来畏惧、失眠、 食欲不振相联系的。抑制血清素如去甲肾上腺素两者再摄取的化合物例 如文拉法辛，已经有人显示在有严重抑郁症和忧郁症的患者的治疗中是 特别有效的[Depres.Anxiety，12，50-54，2000]。如以上所讨论的，产生 5-HT_2C拮抗作用的化合物能提高多巴胺，因而这样的化合物可望有效地 用于治疗忧郁症[Psych-pharm.Bull.，39，147-166，2006]。此外，本发明化 合物的α-1肾上腺素能受体和5-HT₂拮抗作用有助于使睡眠正常化，因 而所述化合物可用于治疗忧郁症。

FDA最近已经批准舍曲林和帕罗西汀这两种SSRI用于治疗创伤后 应力异常(PTSD)。进而，有5-HT_2A拮抗活性的化合物也是可用的， 因为它们可望能抑制PTSD患者中的焦虑、失眠和爆躁[Curr opinion Invest.Drug，4，37-41，2003]。因此，本发明化合物可望可用于治疗PTSD。

发烧是一种与绝经过渡相联系的症状。一些妇女可能困扰于此，达 到它干扰睡眠或一般活动而且有必要治疗的程度。用雌激素的激素置换 疗法是数十年来的成熟做法，然而，最近人们表达出对副作用的关注， 例如乳腺癌和心脏病。用SSRI和SNRI的临床试验已经显示，这些化合 物对发烧有效果，尽管不如雌激素[J.Am.Med.Ass.，295，2057-2071， 2006]。然而，发烧用能抑制血清素和/或肾上腺素再摄取的化合物例如 本发明化合物的治疗可以是无法接受或不会接受雌激素的妇女的一种 替代治疗。

睡眠呼吸暂停或障碍性睡眠呼吸暂停-hyponea综合征或障碍性睡眠 异常呼吸是一种其有效药理学仍待确认的异常。然而，若干项动物研究 表明，5-HT₃拮抗药例如本发明化合物可以有效地用于治疗干预[Sleep， 21，131-136，1998；Sleep，8，871，878，2001]。

最近已经有人显示5-HT₃拮抗药odansetron可有效地用于治疗瘾以 及醇和药物滥用[Drug Alc.Depend.，84，256-263，2006；Pharmacol. Therapeut.，111，855-876，2006]。这看来像是支持这样一种说法：5-HT₃拮抗药例如本发明化合物可以用于治疗瘾，例如醇、尼古丁或碳水化合 物瘾；以及醇和药物滥用。

5-HT₃拮抗药的其它建议用途包括呕吐、尤其化疗诱发的呕吐、食 欲异常例如贪食、和刺激性肠综合征(IBS)[Exp.Opin.Ther.Targets，11， 527-540，2007]。

赋予了独特药理学性能的本发明化合物还可望可用于治疗情感性 异常、抑郁症、重大抑郁性异常、产后抑郁症、与两极异常相联系的抑 郁症、阿尔茨海默病、精神病或帕金森病、焦虑、一般焦虑异常、社会 焦虑异常、强迫观念与行为异常、恐慌性异常、恐慌发作、恐怖症、社 会恐怖症、旷野恐怖、和应力尿失禁。

在一种实施方案中，本发明涉及下列病症的治疗方法：慢性疼痛， 部分反应者抑郁症，抗治疗抑郁症，阿尔茨海默病，认识缺损，ADHD， 忧郁症，PTSD，发烧(hot flushes)，睡眠呼吸暂停，醇、尼古丁或碳水 化合物瘾，物质滥用，醇或药物滥用，呕吐，食欲异常，IBS，情感异 常，抑郁症，重大抑郁性异常，产后抑郁症，与两极异常相联系的抑郁 症，阿尔茨海默症，精神病或帕金森病，焦虑，一般焦虑异常，社会焦 虑异常，强迫观念与行为异常，恐慌性异常，恐慌发作，恐怖症，社会 恐怖症，旷野恐怖或应力尿失禁，该方法包含对有其需要的患者给药治 疗有效量的化合物I。在一种实施方案中，因以上所列任何一种疾病而 治疗的所述患者是先诊断有所述疾病者。

在一种实施方案中，本发明涉及一种慢性疼痛治疗方法，该方法包 含对有其需要的患者给药治疗有效量的化合物I。在一种实施方案中， 所述慢性疼痛选自幻肢痛、神经病痛、糖尿病性神经病、后疱疹神经痛 (PHN)、腕管综合征(CTS)、HIV神经病、复合区域性疼痛综合征 (CPRS)、三叉神经痛、外科干预(例如手术后镇痛)、糖尿病性血 管病、与胰岛炎相联系的毛细管阻力或糖尿病症状、与心绞痛相联系的 疼痛、与月经相联系的疼痛、与癌症相联系的疼痛、牙痛、头痛、偏头 痛、紧张型头痛、三叉神经痛、颞下颌关节综合征、肌筋膜痛肌肉受伤、 纤维肌痛综合征、骨和关节痛(骨关节炎)、类风湿性关节炎、由与烧 伤相联系的创伤引起的类风湿性关节炎和水肿、由于骨关节炎、骨质疏 松症、骨转移或未知原因引起的扭伤或骨折痛、痛风、纤维织炎、肌筋 膜痛、胸出口综合征、上背痛或下背痛(其中背痛缘于全身性、区域性、 或原发性脊椎病(神经根病))、骨盆痛、心胸痛、非心胸痛、与脊髓 受伤(SCI)相联系的疼痛、中枢神经中风后痛、癌症神经病、艾滋病 痛、镰形细胞痛、或老年病痛。

在一种实施方案中，所述慢性疼痛是神经病痛。

在一种实施方案中，所述神经病痛选自痛觉过敏、痛觉过敏、神经 病、糖尿病性神经病、神经炎、神经痛、感觉过敏、灼痛、和异常性疼 痛。

在一种实施方案中，本发明化合物的给药量是约0.001～约100mg/kg 体重/日。

典型口服剂量范围是约0.001～约100mg/kg体重/日、较好约0.01～ 约50mg/kg体重/日、以1个或多个剂量例如1～3个剂量给药。确切剂 量取决于给药频率和方式，治疗对象的性别、年龄、体重和总体状况， 治疗病症的性质和严重性，任何要治疗的伴行疾病以及业内技术人员显 而易见的其它因素。

成人的典型口服剂量范围是1～100mg/日本发明化合物，例如1～30 mg/日、或5～25mg/日。典型地，一日一次或两次给药0.1～50mg、例如 1～25mg、如1、5、10、15、20或25mg本发明化合物，就可以做到这 一点。

本文中使用的化合物的“治疗有效量”系指在一种包含所述化合物 给药的治疗干预中足以治愈、缓解或部分终止某一给定疾病及其并发症 的临床表现的数量。足以实现这一点的数量就定义为“治疗有效量”。 这一术语也包括在一种包含所述化合物给药的治疗中足以治愈、缓解或 部分终止某一给定疾病及其并发症的临床表现的数量。每一个目的的有 效量都取决于该疾病或受伤的严重性、以及该对象的体重和总体状态。 要理解的是，适当剂量的确定可以实现如下：利用常规实验，构建数值 点阵，和测试该点阵中不同的点，这些都在训练有素的医生的普通技能 范围内。

本文中使用的“治疗”这一术语系指患者的管理和护理，以达到克 服某一病症例如疾病或异常之目的。这一术语意图包括该患者所患的某 一给定病症的全治疗谱，例如该活性化合物给药以缓解症状或并发症、 以延缓该疾病、异常或病症的进展、以缓解或减轻症状和并发症、和/ 或以治愈或消除该疾病、异常或病症以及以预防该病症，其中预防要理 解为患者的管理和护理以达到克服该疾病、病症、或异常之目的，而且 包括活性化合物给药以预防该症状或并发症发作。不过，预防性(预防) 和治疗性(治愈)治疗是本发明的两个独立方面。要治疗的患者较好是 哺乳动物、尤其人类。

在一种实施方案中，本发明涉及本发明用于下列病症治疗用药剂制 造的用途：慢性疼痛，部分反应者抑郁症，抗治疗抑郁症，阿尔茨海默 病，认识缺损，ADHD，忧郁症，PTSD，发烧(hot flushes)，睡眠呼吸 暂停，醇、尼古丁或碳水化合物瘾，物质滥用，醇或药物滥用，呕吐， 食欲异常，IBS，情感异常，抑郁症，重大抑郁性异常，产后抑郁症， 与两极异常相联系的抑郁症，阿尔茨海默症，精神病或帕金森病，焦虑， 一般焦虑异常，社会焦虑异常，强迫观念与行为异常，恐慌性异常，恐 慌发作，恐怖症，社会恐怖症，旷野恐怖或应力尿失禁。

在一种实施方案中，本发明涉及本发明用于慢性疼痛例如神经病痛 治疗用药剂制造的用途。

在一种实施方案中，本发明涉及本发明用来作为下列病症治疗用药 剂的用途：慢性疼痛，部分反应者抑郁症，抗治疗抑郁症，阿尔茨海默 病，认识缺损，ADHD，忧郁症，PTSD，发烧(hot flushes)，睡眠呼吸 暂停，醇、尼古丁或碳水化合物瘾，物质滥用，醇或药物滥用，呕吐， 食欲异常，IBS，情感异常，抑郁症，重大抑郁性异常，产后抑郁症， 与两极异常相联系的抑郁症，阿尔茨海默症，精神病或帕金森病，焦虑， 一般焦虑异常，社会焦虑异常，强迫观念与行为异常，恐慌性异常，恐 慌发作，恐怖症，社会恐怖症，旷野恐怖或应力尿失禁。

在一种实施方案中，本发明涉及用来作为慢性疼痛例如神经病痛治 疗用药剂的本发明化合物。

本发明化合物可以作为纯化合物单独、或以与医药上可接受载体或 赋形剂的组合、以要么单一剂量要么多剂量给药。按照本发明的医药组 合物可以用医药上可接受载体或稀释剂以及任何其它已知佐药和赋形 剂按照惯常技术例如Remington：The Science and Practice of Pharmacy，19 Edition，Gennaro，Ed.，Mack Publishing Co.，Easton，PA，1995中公开的那 些配制。

该医药组合物尤其可以是为经由下列任何适用途径给药而配制的： 例如经口、经直肠、经鼻、经肺、经局部(包括经颊和经舌下)、透皮、 经脑池内、经腹膜内、经阴道、和非经肠(包括经皮下、经肌内、经腱 鞘内、经静脉内、和经皮内)途径，经口途径是较好的。要知道的是， 较好的途径取决于要治疗的对象的总体状况和年龄、要治疗的病症的性 质、和所选择的有效成分。

经口给药用医药组合物包括固体剂型例如胶囊剂、片剂、糖锭剂、 丸剂、锭剂、散剂、和颗粒度。适当时，它们可以制备得有包衣。

经口给药用液体剂型包括溶液剂、乳状液剂、悬浮液剂、糖浆剂和 酏剂。

非经常给药用医药组合物包括无菌水性和非水性可注射溶液剂、分 散液剂、悬浮液剂或乳状液剂以及使用前要用无菌可注射溶液或分散液 重建的无菌粉末剂。

其它适用给药形式包括栓剂、喷雾剂、软膏剂、乳油剂、凝胶剂、 吸入剂、皮肤贴剂、植入物等。

方便地，本发明化合物是以含有所述化合物的单元剂型给药的，其 数量为约0.1～50mg、例如1mg、5mg、10mg、15mg、20mg、或25mg 本发明化合物。

对于非经肠途径例如经静脉内、经腱鞘内、经肌内和类似的给药来 说，剂量典型地是经口给药所采用剂量的约一半左右。

对于非经肠给药来说，可以采用本发明化合物在无菌水溶液、水性 丙二醇、水性维生素E或者芝麻油或花生油中的溶液。必要时这样的水 溶液应当是适当缓冲的，而且液体稀释剂先用足够的食盐水或葡萄糖进 行等渗化。水溶液特别适用于经静脉内、经肌内、经皮下和经腹膜内给 药。所采用的无菌水性介质都是容易用业内技术人员已知的标准技术得 到的。

适用的医药载体包括惰性固体稀释剂或填料、无菌水溶液、和各种 有机溶剂。固体载体的实例是乳糖、白土、蔗糖、环糊精、滑石、明胶、 琼脂、果胶、阿拉伯胶、硬脂酸镁、硬脂酸和纤维素低级烷基醚。液体 载体的实例是糖浆、花生油、橄榄油、磷脂、脂肪酸、脂肪酸胺、聚氧 乙烯和水。然后，通过合并本发明化合物和医药上可接受载体而形成的 医药组合物容易地以适用于所公开给药途径的各种各样剂型给药。

适用于经口给药的本发明配方可以作为分立单元例如胶囊剂或片 剂提供，每个单元含有预定量的有效成分，而且可以包括适用赋形剂。 进而，口服配方可以呈散剂或颗粒剂、水性或非水性液体中的溶液剂或 悬浮液剂、或者水包油型或油包水型液体乳状液剂的形式。

如果将固体载体用于经口给药，则该制剂可以是片剂、置于硬明胶 胶囊中、呈粉末或小丸形式、呈锭剂或糖锭形式等。固体载体的数量可 以各异，但通常是约25mg～约1g。

如果使用液体载体，则该制剂可以呈糖浆剂、乳状液剂、软胶囊剂、 或无菌可注射液体例如水性或非水性液体悬浮液剂或溶液剂的形式。

片剂可以制备如下：将有效成分与普通佐药和/或稀释剂混合，随后 用惯常压片机压缩该混合物。佐药或稀释剂的实例包含：玉米淀粉、马 铃薯淀粉、滑石、硬脂酸镁、明胶、乳糖、树胶等。常用于此类目的的 任何其它佐药或添加剂例如着色剂、矫臭矫味剂、防腐剂等也可以使用， 只要它们是与该有效成分可兼容的即可。

包含本发明化合物的胶囊剂可以制备如下：将一种包含所述化合物 的粉末与微晶纤维素和硬脂酸镁混合，并将所述粉末装入一种硬胶囊 中。任选地，所述胶囊可以用适当颜料着色。典型地，胶囊将包含 0.25～20％本发明化合物，例如0.5～1.0％、3.0～4.0％、14.0～16.0％本发明 化合物。这些强度可以以单元剂型方便地输送1、5、10、15、20和25mg 本发明化合物。

注射用溶液剂可以制备如下：将有效成分和可能添加剂溶解于部分 注射用溶剂、较好无菌水中，将该溶液调整到所希望体积，使该溶液灭 菌，并将其灌装到适用安瓿或管形瓶中。业内惯常使用的任何适用添加 剂例如等渗剂、防腐剂、抗氧化剂等。

化合物I可以像WO 2003/029232中所述那样制备。化合物I的盐可 以通过添加适当酸、随后析出沉淀来制备。沉淀可以通过诸如冷却、脱 除溶剂、添加另一种溶剂或其混合物进行。

本文中引用的所有参考文献、包括出版物、专利申请、和专利都以 其全文列为本文参考文献，并达到这样的程度：个别、具体地指出要列 为参考文献和全文列入本文中(在法律允许的最大程度上)的每篇参考 文献，无论本文中其它地方所做的、任何单独提供的特定文件引用如何。

在描述本发明的范畴内，“一个”、“一种”和“该”这些术语和 类似参照物的使用，要理解为同时涵盖单数和复数，除非本文中另有指 出或上下文明显相矛盾。例如，“化合物”这一短语要理解为系指本发 明的各种“化合物”或具体描述的方面，除非另有指出。

除非另有指出，否则本文中提供的所有确切数值都是相应近似值的 代表(例如，所提供的、关于某一特定因子或测定的所有确切例示性数 值，都可以理解为也提供适当时用“约”修饰的相应近似测定)。

本文中参照一种或多种要素使用“包含”、“有”、“包括”、或 “含有”这样的术语对本发明任何一个或多个方面的描述，意图提供对 “组成为”、“基本组成为”、或“实质上包含”该一种或多种要素的 本发明一个或多个类似方面的支持，除非上下文另有说明或明显矛盾 (例如，本文中描述为包含某一特定要素的组合物应当理解为也描述一 种由该要素组成的组合物，除非上下文另有说明或明显矛盾)。

实施例

分析方法

X射线粉末衍射(XRPD)是在一台PANaly-tical X’Pert PRO X射 线衍射仪上使用CuKα1辐射测定的。样品是以2θ范围为5～40°的反射 方式使用X’celerator检测器测定的。元素组成(CHN)是用Elementar 公司的一台Elementar Vario EL仪器上测定的。每次测定使用约4mg样 品，结果是作为2次测定的平均值给出的。

实施例1a 化合物I的HBr盐

向442g搅拌和稍微加热(约45℃)的油状4-(2-对甲苯硫基苯基) 哌啶-1-羧酸乙酯中添加545mL 33wt％ HBr/AcOH(5.7M，2.5eqv.)。 这种混合给出10℃放热。最终添加之后，将反应混合物加热到80℃、 并保持18h。取样，用HPLC分析，且若未完成则必须再添加33wt％ HBr/AcOH。否则，将该混合物冷却到25℃，使产物4-(2-对甲苯硫基 苯基)哌啶氢溴酸盐析出沉淀。在25℃1h后，向稠悬浮液中添加800 mL二乙醚。再继续搅拌1h，然后该产物过滤分离、用400mL二乙醚 洗涤、在40℃真空干燥过夜。化合物I的氢溴酸盐作为白色固体分离出 来。

实施例1b 化合物I的HBr盐

2-(4-甲苯硫基)苯基溴

在一个搅拌的、有氮气覆盖的反应器中，N-甲基吡咯烷酮(NMP， 4.5L)用氮气吹扫20min。添加4-甲基苯硫酚(900g，7.25mol)，然 后添加1，2-二溴苯(1709g，7.25mol)。最后，添加叔丁醇钾(813g， 7.25mol)作为最后反应物。反应是放热的，使反应混合物的温度上升 到70℃。然后在2～3h内将反应混合物加热到120℃。将反应混合物冷 却到室温。添加乙酸乙酯(4L)和氯化钠水溶液(15％，2.5L)。该混 合物搅拌20min。将水相分离、用另一份乙酸乙酯(2L)萃取。将水 相分离，有机相合并、用氯化钠溶液(15％，2.5L)洗涤。将有机相分 离、用硫酸钠干燥、减压蒸发，给出一种含有20～30％NMP的红色油状 物。该油状物用甲醇稀释到2倍体积，将混合物回流。再添加甲醇，直 至得到一种清澈红色溶液。该溶液边接种边徐徐冷却到室温。产物结晶 成灰白色晶体，将其过滤分离、用甲醇洗涤、在真空烘箱中于40℃干燥 直至恒重。

4-羟基-4-(2-(4-甲苯硫基)苯基)哌啶-1-羧酸乙酯

在一个有氮气覆盖的搅拌反应器中，将2-(4-甲苯硫基)苯基溴(600 g，2.15mol)悬浮在庚烷(4.5L)中。在室温下，用10min时间添加 10M BuLi/己烷(235mL，2.36mol)。注意到只有微小放热。该悬浮液 在常温下搅拌1h，然后冷却到-40℃。以不快于使反应温度保持在-40 ℃以下的速率添加溶解在THF(1.5L)中的1-乙酯基-4-哌啶酮(368g， 2.15mol)。当反应已经达到完成时，使其回升到0℃、添加1M HCl (1L)，并保持在10℃以下的温度。将酸水相分离、用乙酸乙酯(1L) 萃取。有机相合并、用氯化钠溶液(15％，1L)萃取。有机相用硫酸钠 干燥、蒸发到一种半结晶物料。用乙醚(250mL)使其淤浆化、滤出。 在真空烘箱中于40℃干燥直至恒重。

4-(2-(4-甲苯硫基)苯基)哌啶-1-羧酸乙酯

将三氟乙酸(2.8kg，24.9mol)和三乙基甲硅烷(362g，3.1mol)加入 一个有高效率搅拌器的反应器中。将4-羟基-4-(2-(4-甲苯硫基)苯基) 哌啶-1-羧酸乙酯(462g，1.24mol)分批经由粉末漏斗添加。反应是稍 微放热的。温度上升到50℃。添加结束后，在18h内让反应混合物上 升到60℃。让反应混合物冷却到室温。添加甲苯(750mL)和水(750mL)。 将有机相分离，水相用另一份甲苯(750mL)萃取。有机相合并、用氯 化钠溶液(15％，500mL)洗涤，用硫酸钠干燥。将硫酸钠滤出、滤液 减压蒸发，得到一种红色油状物，后者在下一步骤进一步加工。

4-(2-(4-甲苯硫基)苯基)哌啶氢溴酸盐

在一个搅拌反应器中，让来自实施例3的红色油状粗4-(2-(4-甲 苯硫基)苯基)哌啶-1-羧酸乙酯与氢溴酸/乙酸(40％，545mL，3.11mol) 混合。该混合物在80℃加热18h。将反应混合物冷却到室温。在该冷却 期间，产物结晶出来。在室温下1h后，将乙醚(800mL)添加到该反 应混合物中，混合物再搅拌1h。将产物滤出、用乙醚洗涤、在真空烘 箱中于50℃干燥直至恒重。

实施例1c 化合物I的HBr盐的重结晶

将10.0g诸如以上制备的化合物1的HBr盐在100mL H₂O中加热 回流。该混合物在80～90℃变得清澈和充分溶解。向该清澈溶液中添加 1g木炭、继续回流15min、然后过滤、使之自发冷却到室温。在该冷 却期间，白色固体的沉淀发生，悬浮液在室温搅拌1h。过滤、在40℃ 真空干燥过夜，发生6.9g(69％)化合物1的HBr酸加成盐。见图1的 XRPD。元素分析：3.92％N，59.36％C，6.16％H(理论值：3.85％N， 59.34％C，6.09％H)。

实施例1d 游离碱储备溶液的制备

将500mL乙酸乙酯和200mL H₂O的混合物添加到50g化合物I 的HBr盐中，产生一种两相淤浆。向这种淤浆中添加约25mL浓NaOH， 这导致生成一种清澈的两相溶液(实测pH为13～14)。该溶液剧烈搅 拌15min，将有机相分离。有机相用200mL H₂O洗涤、用Na₂SO₄干燥、 过滤、在60℃真空蒸发，产生38g产率(99％)几乎无色油状的游离碱。

使用乙酸乙酯溶解10g该油状物并将体积调整到150mL，产生一 种乙酸乙酯中0.235M储备溶液，使用其中1.5mL等分样品(100mg) 游离碱。

使用96vol％ EtOH溶解10g该油状物并将体积调整到100mL，产 生一种EtOH中0.353M储备溶液，使用其中1.0mL等分样品(100mg 游离碱)。

实施例1e 使用游离碱储备溶液的盐生成

将给定等分样品置于试管中，且边搅拌边添加表1中所指出的适量 酸。如果该酸是一种液体，则添加其净相，否则将其溶解于给定溶剂中 然后添加。在混合和沉淀后继续搅拌过夜，过滤收集沉淀物。在于30 ℃真空干燥前，取出一份小参考样，在室温下干燥而不抽空。之所以包 括这个程序，是为了测试溶剂合物。一些结果列于表1中。XRPD衍射 图显示于图1～22中，而所选择的峰位置列于表2中。表3显示本发明 化合物在水中的溶解度以及所得到饱和溶液中的pH。“沉淀物”栏显 示该溶解度测定后分离的沉淀物是否与所溶解的化合物相同，这一点是 生成水合物的指示。

表1

 

酸(碱:酸) MW (g/mol)酸量 (mg或μl)溶剂 CHN(实测值) CHN(理论值) 棕榈酸，十六烷酸1:1256.42905EtOAc75 36  9.77  2 4675.64  9.9   2.6DL-乳酸，DL-2-羟基 丙酸1:1901 31.8 EtOAc 66.88  7.26  3.52 67.53  7.29  375 己二酸，1，6-己二酸1:1146.1451.6EtOAc66 08  7.23  2 9867 1   7.27  3.26己二酸，1，6-己二酸2:114614258EtOAc70 66  7.32  3 8270.75  7.35  3.93富马酸1:1116.0140.9EtOH65 71  6.41  3 3566.14  6.31  3.51

 

酸(碱:酸) MW (g/mol)酸量 (mg或μl)溶剂 CHN(实测值) CHN(理论值) 戊二酸，1，5-戊二酸 1:1132 12 46.6 EtOAc 66.09  6.97  3 2 66 48  7.03  3 37 丙二酸1:1104 136.7EtOAc65 04  6 53  35465.09  6.5   3 62草酸1:190  131.8EtOH64 28  6.41  3 6164.32  6 21  3.75辛二酸，1，8-辛二酸 2:1202 02 35.6 EtOAc 71.79  7 86  3 58 71 83  7 86  3.64 琥珀酸，1，4-丁二酸 2:1118.1 20.8 EtOAc 65.65  6 86  3 4 65 80  6 78  3 49 (所生成的1:1盐)L-苹果酸，L-2-羟基 丁二酸1:1，α134.1 473 EtOAc 62 87  6 20  3.22 63 29  6.52  3.36 L-苹果酸，L-2-羟基 丁二酸1:1，β134 1 47.3 EtOH 62 99  6 66  3 13 63 29  6 52   3.36 D-酒石酸，D-2，3- 二羟基丁二酸1:1150.1 53.0 EtOH 60 67  6 4   3 07 60 95  6.28  3 23 L-天冬氨酸1:1 133 1 47.0 EtOH 59.31  67    71 (含有过量酸)63 43  6 78  6 73 谷氨酸1:1 165 15 583 EtOH 56 38  688   735 (含有过量酸) 56 46  6.94  7.06 (对于1:1盐和酸一 水合物1:1)柠檬酸2:1192.1333.9EtOAc65 93  672   34466 46  6.64  3 69HCl/Et₂O1.12M1764EtOH磷酸1:114.7M24.0EtOAc55.79  6.47  3.4356 68  6.34  3 67

表2所选择的X射线峰位置(°2θ)，2:1系指2碱/1酸，所有值 都±0.1°

 

棕榈酸盐7.0016.3422.7328 21硬脂酸盐6 7015 5221.8128 91乳酸盐5 308.189 4417.24乳酸盐水合物11 6716.7018 2521 76羟基异丁酸盐5 0916.6020.3827 37辛二酸盐7 1812.5321 1124.19己二酸盐2:18.0313.5217 9024.60己二酸盐1:1α9.3314.0118 7220.63己二酸盐1:1β15.6921 5325.8131.18戊二酸盐1:19.3911 7014 0514 58琥珀酸盐1:111 7414 3317.7526.84富马酸盐1:18 9011 4719.2522.33富马酸盐2:18 4912.4817.7823 97马来酸盐1:112.1115 5117 4822 53马来酸盐1:1水合物12.8118 7620 5327.31

 

丙二酸盐α10.7716.7019.9324.01丙二酸盐β6 0810.1118.2520 26天冬氨酸盐11.0520.120 6025 00天冬氨酸盐水合物7.8013.8014.1019 63谷氨酸盐7.7114.0119 2622 57草酸盐14.6817.4519 5023.90苹果酸盐1:1α8.3012.0417.2320 67苹果酸盐1:1β10 9112.8714.1426.16苹果酸盐水合物12 3015.5619.5623.30D-酒石酸盐(来自EtOH)5.0817.1819.4222 10盐酸盐12.4416.7219.4525 02氢溴酸盐6.0814 8119.2625 38氢溴酸盐1-PrOH溶剂合物65713.1219.0724.77

表3

 

酸(碱:酸) 溶解度 (mg/ml)结晶pH 沉淀物 棕榈酸，十六烷酸1:10.48.6＝开始DL-乳酸，DL-2-羟基 丙酸1:1>150 61 ＝开始(蒸发后) 己二酸，1，6-己二酸 1:12.5 4.0 部分2:1盐 己二酸，1，6-己二酸 2:11.0 7.8 ＝开始 富马酸1:1023.3＝开始戊二酸，1，5-戊二酸 1:113 4.6 ＝开始 丙二酸1:1(α)5.240＝新形式(β)草酸1:11.12.7＝开始癸二酸，1，8-辛烷二酸 2:10.7 5.5 ＝开始 琥珀酸，1，4-丁二酸 2:12.0 40 水合物 L-苹果酸，L-2-羟基 丁二酸1:1，β2.8 40 水合物 D-酒石酸，D-2，3-二 羟基丁二酸1:11.8 3.5 水合物 L-天冬氨酸394.3水合物谷氨酸1:1>354.6-柠檬酸2:10.547＝开始磷酸1:1 6.0 2.0 ？ HCl456.8＝开始HBr2.47.0＝开始

实施例2A 血清素(5-HT)和去甲肾上腺素(NE)再摄取抑制

试验化合物和大鼠皮质突触体制剂的等分样品在37℃培养10min， 然后添加[³H]NE或[³H]5-HT(最终浓度10nM)。非专性摄取是在10μM 它舒普仑或西酞普兰的存在下测定的，而总摄取量是在缓冲剂的存在下 测定的。各等分样品培养15min/37℃。培养后，突触体吸收的[³H]NE 或[³H]5-HT是使用一种Tomtec细胞收集器程序、通过经由预先在 0.1％PEI中浸渍30min的Unifilter GF/C过滤分离的。过滤器洗涤、在 一台Wallac MicroBeta计数器上计数。

对NET，本发明化合物显示出IC₅₀值为23nM。对SERT，本发明 化合物显示出IC₅₀值为8nM。

实施例2B 5-HT_2A拮抗作用

测试本发明化合物对血清素受体的亲和性，并发现其显示出在 5-HT_2A受体上有亲和性(K₁ 54nM)的拮抗性能。该亲和性是从Y＝100/ (1+10^(X-log IC₅₀⁾)计算的，式中Y表示％结合，而X表示化合物浓度。使 用5个化合物浓度(1，10，30，100，1000nM)来计算IC₅₀值。Ki是 从Cheng Prusoff方程Ki＝IC₅₀/(1+([L]/Kd))计算的。亲和性是以MDL Pharmaservices分类号271650确定的。

在表达人5-HT_2A受体的哺乳动物细胞中，本发明化合物显示出竞争 性拮抗性能。该化合物与5-HT_2A受体结合的Ki<100nM，而在功能试验 中，该化合物拮抗5-HT诱发的、胞内贮藏的Ca²⁺的释放，Kb为67nM。 Schild分析揭示了Kb为100nM的竞争性拮抗作用。

实验进行如下：实验前2或3天，将表达250fmol/mg人5-HT_2A受 体的CHO细胞以足以在实验当日产生单融合层的密度涂在平皿上。该 细胞在一台5％ CO₂、95％湿度、37℃恒温箱中加染料(Ca²⁺试剂盒， Molecular Devices公司)60min。基础荧光是用一台荧光影像板读出器 或Molecular Devices公司(美国加州Sunnyvale)的FLIPR³⁸⁴、以488nm 的激发波长和500～560nm的发射范围监测的。激光强度设定到适当水 平，以得到大约8000～10000荧光单位的基础值。基础荧光的变异应当 <10％ EC50值是使用涵盖至少3个数量级的试验化合物递增浓度评价 的。评价了pA₂值，以用4个不同化合物浓度(150、400、1500和4000 nM)挑战5-HT的全剂量-响应曲线。也评价了Kb值，以用5-HT的EC₈₅挑战试验物质的2个数量级浓度。试验物质在5-HT之前5min添加到 该细胞中。Ki值是用Cheng-Prusoff方程计算的。

实施例2C 5-HT_3A受体拮抗作用

在表达了人同数5-HT_3A受体的卵母细胞中，5-HT以EC₅₀为2600nM 激活了流。这种流可以用经典5-HT₃拮抗药例如昂丹司琼拮抗。昂丹司 琼在这个系统中显示出1nM以下的Ki值。本发明化合物在低浓度(0.1 nM～100nM)时显示出强拮抗作用(IC₅₀～10nm/Kb～2nM)，而当以更 高浓度(100～100000nM)施用时显示出兴奋性能(EC₅₀～2600nM)， 达到5-HT本身诱发的最大流的大约70～80％的最大流。在表达了大鼠同 数5-HT_3A受体的卵母细胞中，5-HT激活了EC₅₀为3.3μM的流。这些 实验进行如下。卵母细胞是用外科手术法从以0.4％ MS-222麻醉10～15 min的成熟雌性Xenepus laevis中取出的。然后，这些卵母细胞在OR2 缓冲剂(82.5mN NaCl，2.0mM KCl，1.0mM MgCl₂和5.0mM HEPES， pH7.6)中以0.5mg/mL胶原酶(1A型，Sigma-Aldrich公司)在室温下 消解2～3h。选择去掉滤泡层的卵母细胞，在改进的Barth’s食盐水缓冲 剂[88mM NaCl，1mM KCl，15mM HEPES，2.4mM NaHCO₃，0.41mM CaCl₂，0.82mM MgSO₄，0.3mM Ca(NO₃)₂]中培养24h，该缓冲剂补充 了2mM丙酮酸钠、0.1U/L青霉素和0.1μg/L链霉素。选择阶段IV-IV 卵母细胞，注射12～48nL含有14～50pg有人5-HT_3A受体编码的cRNA 的无水核酸酶，在18℃培养直至它们用于电生理记录(注射后1～7日)。 将有人5-HT₃受体表达的卵母细胞置1mL浴中，用林格氏缓冲剂(115 mM NaCl，2.5mM KCl，10mM HEPES，1.8mM CaCl₂，0.1mM MgCl₂， pH7.5)灌注。细胞用含有3M KCl的塞琼脂0.5～1MΩ电极和由 GeneClamp 500B放大器加-90mV电压进行移植。该卵母细胞不断地用 林格氏缓冲剂灌注，并将药物施用于该灌注液中。将5-HT兴奋剂溶液 施用10～30秒。5-HT₃受体拮抗药的药效是通过测定对10μM 5-HT刺激 的浓度-响应考察的。

实施例2D α_1A受体拮抗作用

对本发明化合物进行对α_1A受体的亲和性试验，发现其显示出拮抗 性能，对α_1A受体有中等亲和性(Ki＝34nM)。

实验当日(关于膜制备的描述见以下)将膜解冻，在缓冲剂中用一 台Ultra Turrax均化，并稀释到所希望浓度(5μg/孔～5μg/900μL，贮藏 于冰上直至使用)。

实验始于50μL试验化合物、50μL[³H]-哌唑嗪和900μL膜的混合， 该混合物在25℃培养20min。非专性结合是在10μM WB-4101的存在 下确定的，而总结合是在缓冲剂的存在下确定的。培养之后，使用Tomtec 细胞收集程序(D4.2.4)，通过经由预先在0.1％PEI中浸渍30min的 Unifilter GF/B过滤，使结合的配体与未结合的配体分离。96孔过滤器用 1mL冰冷缓冲剂洗涤3次、在50℃干燥、向该过滤器中添加35μL闪 烁液/孔。结合的放射性是在一台Wallac OY 1450 MicroBeta上计数的。 亲和性是从Y＝100/(1+10(X^-log IC₅₀⁾)计算的，式中Y表示％结合，X表示 化合物浓度。使用涵盖2个数量级的化合物浓度计算IC₅₀值。Ki是从 Cheng-Prusoff方程Ki＝IC₅₀/(1+([L]/Kd))计算的。

在功能试验中，本发明化合物拮抗了肾上腺素诱发的、胞内贮藏的 Ca²⁺的释放，功能试验揭示化合物是拮抗药。

这些实验基本上像以下所述那样进行。

所有细胞都是在补加了10％ BCS、4mM L-谷氨酰胺(或在COS-7 的情况下2mM)、和100单位/mL青霉素+100μg/mL链霉素的DMEM 培养基中、在37℃和5％CO₂培养的。

在试验前24小时，将表达了人α_1A-7受体的CHO细胞接种到涂有聚 -D-赖氨酸的384孔黑壁微升平皿中。将培养基吸入、各细胞在试验缓冲 剂(50μL/孔)中在5％CO₂中、在37℃用1.5μM Fluo-4加染料1h，该 试验缓冲剂的组成为Hank’s均衡盐溶液(138mM NaCl、5mM KCl、 1.3mM CaCl₂、0.5mM MgCl₂、0.4mM MgSO₄、0.3mM KH₂PO₄、0.3mM Na₂HPO₄、5.6mM葡萄糖)加20mM HEPES pH7.4、10.05％BSA和2.5 mM羟苯磺丙胺。弃去过剩染料之后，细胞用试验缓冲剂洗涤、分层， 最终体积等于45μL/孔(对拮抗药试验而言30μL/孔)。在拮抗药评估 的情况下，此时添加拮抗药或载剂，作为4倍于最终浓度(最终 DMSO＝1％)的含4％ DMSO缓冲剂中的15μL等分样品，随后培养20 min。基础荧光是用一台荧光成像板读出器或Molecular Devices公司 (Sunnyvale，CA)的FLIPR^TM以激发波长为488nm、发射范围为500～560 nm监测的。调整激光激发能量，使得基础荧光读数为大约8000相对荧 光单位(RFU)。然后，在室温下以用试验缓冲剂(15μL)稀释的兴奋 剂激发细胞，在为期2.5min内以1.5秒间隔测量RFU。计算每一孔的 荧光最大变化。用非线性回归法(Hill方程)分析从最大荧光变化衍生 的浓度响应曲线。为了确定拮抗作用，在(如上所述)化合物培养20min 后添加固定浓度的标准兴奋剂血清素。

实施例2E 多巴胺提高

本发明化合物的单一注射剂量依赖地提高了大鼠前额皮层中的胞 外DA水平。8.9mg/kg和18mg/kg皮下注射的本发明化合物，相对于 图23中所示基线而言，使DA水平分别提高了约100％和150％。数量 是作为游离碱计算的。

方法

使用初始重量275～300g的雄性Sprague-Dawley大鼠。这些动物在 规定室内温度(21±2℃)和湿度(55±5％)的受控条件下以12小时亮/ 暗周期隔离，饵料和自来水可任意取用。三天治疗实验使用的是渗透小 型泵(Alzet，2ML1)。这些泵在无菌条件下灌装，并在七氟烷麻醉下 植入皮下。实验是用植入的小型泵进行的。实验结束时采集血样，用于 测定3天治疗后试验化合物的血浆水平。

外科手术和微渗析实验

试验动物用hypnorm/dormicum(2mL/kg)麻醉，脑内导管(CMA/12) 用立体定位法植入海马中，将渗析探针尖定位于腹海马中(坐标：前囟 前5.6mm，侧向-5.0mm，腹部到硬膜7.0mm)；或定位于前额皮层中 (坐标：前囟前3.2mm，侧向3.0mm，腹部到硬膜4.0mm)。使用锚 固螺钉和丙烯酸类粘固粉固定该导管。动物体温。动物体温用直肠探针 监测并保持在37℃。让动物用2天时间从外科手术中康复，单独关在笼 中。实验当日，将微渗析探针(CMA/12，0.5mm直径，3mm长)经由 导管插入。这些探针经由一种双通道旋转接头连接到一台微注射泵上。 过滤的林格氏溶液(145mM NaCl、3mM KCl、1mM MgCl₂、1.2mM CaCl₂)对微渗析探针的灌注始于该探针临插入大脑中之前，而且以1 (1.3)μL/min的恒定流量率继续于整个实验期间。稳定180min之后， 启动实验。每20(30)min收集渗析物。

实验之后，用斩首法宰杀大鼠，将其大脑取出、冷冻、切片，以验 证探针放置。

渗析物分析

渗析物中多巴胺的浓度是借助于HPLC以电化学检测分析的。一胺 类是用逆相液体色谱法(ODS 150×3mm，3μM)分离的。多巴胺：移 动相组成为90mM NaH₂PO₄、50mM柠檬酸钠、367mg/L1-辛磺酸钠、 50μM EDTA和8％乙腈(pH4.0)，流量率为0.5mL/min。电化学检测 是使用库仑检测器完成的，电位设定于250mV(保护电池设定于350 mV)(Coulochem II，ESA)。

实施例2F 乙酰胆碱提高

实验设计旨在评估本发明化合物对自由活动大鼠前额皮层中乙酰 胆碱的胞外水平的影响。

使用雄性Wistar大鼠(280～350g；Harlan，Zeist，荷兰)进行实验。 大鼠单个地隔离于塑料笼(30×30×40cm)中，但可任意地获取饵料和 水。

大鼠使用异氟烷(2％，400mL/min N₂O，400mL/min O₂)麻醉。 使用利多卡因(10％m/v)进行局部麻醉。将每只动物放进一个立体定 位框架(Kopf仪器公司，美国)，并使用Paxinos和Watson(1982)的 大鼠脑图集将家庭制作的I-形探针(Hospal AN 69膜，4mm裸露表面) 插入中央前额皮层(mPFC)中。探针尖端的坐标是mPFC[AP＝3.4mm， L＝-0.8mm，V＝5.0mm]。然后，该探针用牙科用水泥和螺钉固定到颅骨 上。氟尼辛(1mg/kg，皮下注射)是作为手术后镇痛药给药的。

实验在外科手术后24～48小时进行。在实验当日，各大鼠用可挠曲 PEEK管材连接到微灌注泵(CMA102)上，该渗析探针以1.5μL/min 的流量率灌注含有147mM NaCl、3.0mM KCl、1.2mM CaCl₂、和1.2mM MgCl₂的林格氏缓冲剂。以30min间隔，将微渗析样品收集到含有55μL 0.02M甲酸的小型管形瓶中，用于测定乙酰胆碱。样品由一种自动分级 收集器(CMA 142)并于-80℃贮存直至分析。实验完成后将大鼠宰杀。 将大脑取出、固化于多聚甲醛溶液(4％m/v)中。每根探针的定位是通 过制作大脑的冠状切片而按照Paxinos和Watson(1982)图集进行组织 学验证的。

将试验化合物溶解于10％ 2-OH丙基-β-环糊精中，以不同剂量经由 5mL/kg体积的皮下注射进行给药。

乙酰胆碱的浓度是用HPLC和串联质谱法(MS/MS)检测确定的。

各等分样品(25μL)用自动样品注射器(Perkin Elmer仪器公司， 系列200)注射到HPLC柱上。色谱分离在一根逆相150×2.00mm(4μm) 分析柱(Phenomenex Synergy MAX-RP，Bester)上进行，后者由一根4× 2.0mm保护柱(Phenomenex Synergy MAX-RP AJO-6073，Bester)保护， 两柱都保持在30℃的温度。移动相(等度)由超纯化水(UP)、乙腈 (ACN)、和三氟乙酸(TFA)组成(UP:ACN:TFA＝95.0:0.5:0.1v/v/v％)。 移动相是由一台HPLC泵(PerkinElmer仪器公司，系列200微型泵)以 0.300mL/min的流量率流经该系统的。

该LC/MS分析是使用一种API4000MS/MS系统进行的，该系统由 一个API4000MS/MS检测器和一个Turbo Ion Spray界面(两者均购自 荷兰Applied Biosystem公司)。数据采集以阳离子化方式进行，离子喷 雾电压设定于5.5kV，雾化器气体压力为50psig(在0～90的SCIEX尺 度上)，探针温度为600℃。该仪器以用于检测乙酰胆碱(前体物146.1 Da，产物86.8Da)的多反应监测(MRM)方式运行。碰撞能量是21.0 eV，碰撞气体(氮气)压力保持在7(在0～12的SCIEX尺度上)。数 据用Analyst^TM数据系统(Applied Biosystem，version 1.2)校准和定量。

取变异率<50％的2个相继微渗析样品作为基线水平并设定于 100％。乙酰胆碱浓度的变化表达为同一对象体内基线的百分率。

数据显示于图24中。

实施例2G 乙酰胆碱提高

实验设计得能评估本发明化合物对自由活动大鼠的前额皮层和腹 海马中乙酰胆碱胞外水平的影响。

使用初始重量275～300g的雄性Sprague-Dawley大鼠。这些动物在 规定室内温度(21±2℃)和湿度(55±5％)的受控条件下以12小时亮/ 暗周期隔离，且可以任意获取饵料和水。

外科手术和微渗析实验

大鼠用hypnorm/dormicum(2mL/kg)麻醉，并将脑内导管(CMA/12) 用空间定位法植入海马中，旨在将渗析探针尖端定位于腹海马中(坐标： 前囟后5.6mm，侧向-5.0mm，腹部到硬膜7.0mm)或定位于前额皮层 中(坐标：前囟前3.2mm，侧向0.8mm，腹部到硬膜4.0mm)。使用 锚固螺钉和丙烯酸类粘固剂固定该导管。该动物的体温用直肠探针监测 并保持在37℃。让大鼠在手术后康复2天，单独关在笼中。实验当日， 将微渗析探针(CMA/12，0.5mm直径，3mm长度)经由导管插入。

这些探针经由双通道旋转接头连接到一台微注射泵上。含有0.5μM 新斯的明的过滤林格氏溶液(145mM NaCl，3mM KCl，1mM MgCl₂， 1.2mM CaCl₂)对微渗析探针的灌注始于该探针临插入大脑中前，并以 1μL/min的恒定流量率继续于整个实验期间。稳定180min后，启动实 验。每20min收集渗析物。实验后将动物宰杀，取出其大脑，冷冻、切 片，以验证探针配置。

渗析物乙酰胆碱的分析

渗析物中乙酰胆碱(ACh)的浓度是借助于有电化学检测的HPLC 分析的，所使用的移动相组成为100mM磷酸氢二钠、2.0mM辛磺酸、 0.5mM氯化四甲铵、和0.005％MB(ESA)，pH8.0。含有包埋胆碱氧 化酶的柱前酶反应器消除了分析柱(ESA ACH-250)上ACh分离前注射 样品(10μL)中的胆碱；流量率0.35mL/min，温度35℃。分析柱后， 样品通过了一个含有包埋乙酰胆碱酯酶和胆碱氧化酶的柱后固相反应 器(ESA)。后一个反应器使ACh转化成胆碱，随后又使胆碱转化成甜 菜碱和H₂O₂。后者是使用铂电极进行电化学检测的(分析池：ESA， model 5040)。

数据表述

在单一注射实验中，用化合物临给药前3个相继ACh样品的平均值 作为每个实验的基础水平，将数据换算成基础值的百分率(平均基础注 射前值归一化为100％)。数据表述于图25a和25b中。

图24中表述的数据显示乙酰胆碱水平的意外降低(见例如8 mg/kg)，这是难以解释的而且被归因于实验不确定性。总而言之，来 自实施例2F和2G的2个数据集都显示同样趋势，即大脑中胞外乙酰胆 碱水平的剂量依赖型提高。这个临床前发现可望解读为可用于诸如治疗 以认识缺损为特征的疾病例如阿尔茨海默病患者、部分反应者、认识缺 损的临床安排中认识的改善。

实施例3 对神经病性疼痛的效果

为了示范对神经病痛的疗效，本发明化合物用福尔马林神经病痛模 型进行试验[Neuro-pharm.，48，252-263，2005；Pain，51，5-17，1992]。在这 种模型中，小鼠接受福尔马林(4.5％，20μL)对左后爪跖表面的注射， 随后放进单个玻璃烧杯(2L容量)中观察。福尔马林引起的刺激诱发 特征性两阶段行为反应，用受伤爪licking所花费的时间量予以量化。第 一阶段(～0～10min)代表直接化学刺激和感受伤害，而第二阶段(～20～30 min)被认为代表神经病源的疼痛。这两个阶段由一个行为回归正常的 静止期分开。这两个阶段中受伤爪licking所花费的时间量的测定评价了 试验化合物减少疼痛刺激的有效性。

每组试验8只C57/B6小鼠(约25g)。以下表4显示两个阶段即 福尔马林注射后0～5min和20～30min中受伤爪licking所花费的时间量。 化合物给药量是作为游离碱计算的。

表4

 

载剂1.0mg/kg2.5mg/kg10mg/kg0-5min (sec)42 37 30 37 20-30min (sec)41 43 26 6

表4中数据显示，本发明化合物在代表直接化学刺激和感受伤害的 第一阶段有一点效果。更显著地，该数据也显示第二阶段中爪licking 所花费的时间明显且剂量依赖型减少，表明本发明化合物在神经痛治疗 方面的效果。

实施4 胶囊剂

在第一步，让4-[2-(4-甲基苯硫基)苯基]哌啶氢溴酸盐与微晶纤 维素混合。在第二步，将硬脂酸镁混入。制备有4强度的胶囊剂—有效 成分表述为游离碱。

 

1mg5mg25mg有效成分12.85g64.25g321.25g微晶纤维素2026.55g2034.55g1846.85g硬脂酸镁20.6g21.2g21.9g胶囊内容物 重量206mg 212mg 219mg

从每一批料制备10000个胶囊剂。