一种单增李斯特菌与志贺氏菌的荧光定量PCR检测方法

摘要

本发明涉及一种单增李斯特菌与志贺氏菌的荧光定量PCR检测方法，包括以下步骤：(1)PCR模板DNA提取：(1.1)待测样品DNA提取：取1ml待测样品进行DNA提取，1ml待测样品－12000rpm，2min，弃上清－沉淀用PBS洗两次－200μl TE重悬－加入8μl溶菌酶(10mg/ml)及2μl RNaseA(10mg/ml)，37℃水浴30min－按照UNIQ－10DNA提取试剂盒加入裂解液与蛋白酶K，55℃水浴30min－后参照UNIQ－10DNA提取试剂盒说明书提取DNA；(1.2)菌液DNA提取；(2)hly与ipaH质粒标准品的构建：(3)荧光定量PCR扩增及分析。本发明的有益效果：本发明运用双重荧光定量PCR(TaqMan探针)同步定量检测单增李斯特菌hly基因和志贺氏菌ipaH基因，为食品卫生行业提供一种特异、快速、定量准确的同步定量检测单增李斯特菌和志贺氏菌的方法。