苹果属花楸苹果组植物的新用途

摘要

本发明提供了苹果属花楸苹果组植物在制备降血脂的药物或保健食品中的用途。本发明还提供了一种降血脂的苹果属花楸苹果组植物提取物和含有该提取物的药物组合物。发明人通过试验发现苹果属花楸苹果组提取物用于降血脂具有显著的药效，并通过指纹图谱进行质量控制指标，药效学试验证明苹果属花楸苹果组植物及其提取物的药效明显，安全稳定。

说明书

技术领域

本发明提供了一种苹果属花楸苹果组植物的用途，属药物领域。

背景技术

血脂是血液中所含脂类的总称，包括甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)，脂蛋 白、磷脂和游离脂肪酸等。临床上所称的高脂血症(hyperlipidemias)，主要 是指胆固醇高于220—230mg/dl，甘油三酯高于130—150mg/dl的人群。正 常情况下，大部分血脂可由动脉内膜渗入动脉壁，再由动脉外膜的淋巴管排 出，所以不至于沉积在动脉壁上。然而当长期高糖高脂饮食、脂质代谢功能 异常、遗传因素、精神活动和其他疾病等影响下会病理性升高形成高脂血症， 进而造成动脉粥样硬化(AS)。由此引起的心脑血管疾病严重危害人类健康， 有时还可导致高血压、糖尿病、冠心病等疾病的发生。降血脂治疗能延缓或 减轻动脉粥样硬化病变的发展，并促进其消退。虽然部分西药有降血脂作用， 但长期应用后副反应严重，而且停药后血脂回升快，难以达到长期治疗和预 防的目的。中药治疗高脂血症的单方、验方较多，疗效也较为满意，多数无 毒副作用，疗程长，可以临床延缓或减轻动脉粥样硬化病变的发展，有利于 防治心脑血管疾病。

蔷薇科(Rosaceae)，苹果亚科(Maloideae Weber)，苹果属(Malus)， 花楸苹果组(Sect.Sorbomalus Zabel)，分以下3系：1.三叶海棠系 (Sieboldianae Rehd.)。中国有1种：三叶海棠(M.sieboldii Rehd.)。2.陇东 海棠系(kansuensi Rehd)。中国有以下4种：①陇东海棠(M.kansuensis Schneid)。②山楂海棠(M.komarovii Rehd.)。③变叶海棠(M.toringoides Hughes.)。④花叶海棠(M.transitoria Schneid.)3.滇池海棠系(Yunnanensis Rehd)。中国有以下4种：①西蜀海棠(M.prattii Schneid.)。②河南海棠 (M.honanensis Rehd.)。③滇池海棠(M.yunnanensis Schneid.)。④沧江海棠 (M.ombrophila hand.et Mazz.)。

变叶海棠(Malus toringoides(Rehd.)Hughes)(别名：大白石枣)。 其形态特征、种质特性(耐盐、耐旱、耐热、耐寒、耐涝、抗腐烂病和根腐病 等)、分布的生态环境等均具有极其复杂的多样性。变叶海棠作苹果砧木利用， 具有抗逆性强、半矮化、早结果、丰产和提高果实品质等优良性状，是极其 重要的种质资源。目前对变叶海棠的研究多集中在其形态多样性及种植栽培 方面，如：廖飞雄、李育农，变叶海棠(Malus toringoides(Rehd.)Hughes) 无孢子生殖的胚胎学观察，西南农业大学学报，1997年4月，第19卷第2期； 廖飞雄、李育农，变叶海棠(M.toringoides(Rehd.)Hughfes)无融合生殖胚 胎发育的特征与结果，江西农业大学学报，第18卷第3期，1996年9月；张云 贵、成明昊，变叶海棠变异类型的初步研究，西南园艺1998年第3期；邓洪平、 成明昊、陈亚飞，黄琳，变叶海棠变异类型的形态多样性分化与陇东海棠关 系的研究，西南师范大学学报(自然科学版)，第27卷，第1期；成明昊、李晓 林、王玫、曾维光、吴福寿、金强，变叶海棠变异类型的研究，园艺学报， 1992，19(3)；233-239；变叶海棠育苗试验初报，炉霍林业局马国中，甘 孜科技，22期；杨平、代学冬、刘大建，变叶海棠育苗与造林技术，林业实 用技术，2006年第9期；石胜友，成明昊，梁国鲁，苹果优良砧木资源--变 叶海棠，西南农业大学学报(自然科学版)，第26卷第1期，2004年2月。对花 叶海棠、陇东海棠的研究也集中在其形态多样性及种植栽培方面，如成明昊 等，苹果优良种质—花叶海棠区系地理学研究，《西南农业大学学报》，2000 年22卷4期；陈斌，花叶海棠作苹果砧木利用的调查初探，《重庆师专学报》， 2001年20卷2期；王玫，变叶海棠(Malus toringoides)X陇东海棠 (M.kansuensis)研究，《西南农业大学学报》，1991年13卷3期。据《新华 本草纲要》记载：陇东海棠、三叶海棠的果实具有和中消积，散瘀行滞的功 效，用于胃酸缺乏症，小儿伤乳的消化不良，经行腹痛或产后下腹瘀痛，心 绞痛。但将变叶海棠及其它苹果属花楸苹果组植物的叶、茎或根及其提取物 用于药品、保健食品中，尚无相关文献报道。

发明内容

本发明解决的技术问题是提供了一种苹果属花楸苹果组植物的用途。本 发明还提供了一种苹果属花楸苹果植物提取物，及含有该提取物的用于降血 脂的药物组合物。

本发明提供了苹果属花楸苹果组提取物在制备降血脂的药物或保健食品 中的用途。其中，所述的提取物来源于：稻城海棠M.douchengensis(Li C.L.)Ponom、小金海棠Malus xiaojinensis Cheng.et.Jiang.、陇东海棠 M.kansuensis(Batal.)Schneid.、陇东海棠(原变型)Malus kansuensis(Batal.) Schneid.f.kansuensis、光叶陇东海棠Malus kansuensis(Batal.)Schneid.f. calva Rehd.、陇东海棠光叶变型M.Kansuensis、马尔康海棠M.maerkangensis Cheng，Zeng et.Jin.、变叶海棠M.toringoides(Rehd.)Hughes.、花叶海棠 M.transitoria(Batal.)Schneid.、花叶海棠(原变种)Malus transitoria(Batal.) Schneid.var.transitoria、长圆果花叶海棠Malus transitoria(Batal.)Schneid.var. centralasiatica(Vass.)Yü、花叶海棠长圆果变种M.Transitoria、沧江海棠M. ombrophila Hand.-Mazz.、滇池海棠M.yunnanensis(Franch.)Schneid.、滇 池海棠川鄂变种M.Yunnanensis、滇池海棠(原变种)Malus yunnanensis(Franch.) Schneid.var.yunnanensis、川鄂滇池海棠Malus yunnanensis(Franch.)Schneid. var.veitchii(Veitch)Rehd.、西蜀海棠M.prattii(Hemsl.)Schneid.、山楂海棠 M.komarovii(Sarg.)Rehd.、三叶海棠Malus sieboldii(Regel)Rehd.、河南海棠 Malus honanensis Rehd.。优选地，所述的植物为：变叶海棠 M.toringoides(Rehd.)Hughes.。

其中，所述的提取物来源于海拔1000～3900米的植物。

所述的药物是以苹果属花楸苹果组植物原生药或苹果属花楸苹果组植物 的提取物为活性成分制备而成。

其中，所述的植物提取物为水或有机溶液提取物。

其中，所述的植物提取物来自所述植物的叶、茎或根。

本发明还提供了一种降血脂的苹果属花楸苹果组植物提取物，苹果属花 楸苹果组植物提取物具有以下HPLC指纹图谱特征，即同时具有六个明显特 征峰，它们的保留时间分别为：H₁峰9.0±0.3；H₂峰9.8±0.3；H₃峰12.7± 0.3；H₄峰14.1±0.3 H₅峰15.8±0.3；H₆峰22.8±1.0。其中，H6峰面积与 H1-5五个特征峰面积和的比例大于10。提取物中含有根皮苷。

本发明还提供了一种降血脂的药物或保健食品组合物，它是含有所述的 植物或其提取物为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而 成的制剂。

苹果属花楸苹果组植物用于制备降血脂药物时，可以是将苹果属花楸苹 果组植物原生药直接加工成药物，也可以是对苹果属花楸苹果组植物原生药 进行化学分离提取，将各提取物(包括水提物、有机溶剂提取物、总黄酮提 取物)制备成药品。也可以是将苹果属花楸苹果组植物原生药或其各种提取 物与其它植物药制成复方制剂，可以是苹果属花楸苹果组植物原生药与其它 降血脂类传统中药组成复方中药及其制剂。

用苹果属花楸苹果组植物原生药(叶、茎、根)任一种为原料直接加工 制成药品。可以是将上述原生药净制后粉碎，过80～120目筛，制成细粉， 再将细粉装胶囊。或制备成胶囊、片剂、丸剂、颗粒剂、散剂。

发明人通过试验发现苹果属花楸苹果组提取物用于降血脂具有显著的药 效，并通过指纹图谱进行质量控制指标，药效学试验证明苹果属花楸苹果组 植物提取物的药效明显，安全稳定。

以下通过具体实施方式对本发明作进一步的详细描述，但并不限制本发 明，本领域技术人员可以根据本发明作出各种改变和变形，只要不脱离本发 明的精神，均应属于本发明所附权利要求的范围。

附图说明

图1是五种苹果属花楸苹果组植物混合物的提取物HPLC指纹图谱

图2是变叶海棠醇提取物HPLC指纹图谱

图3是变叶海棠水提取物HPLC指纹图谱

图4是苹果属花楸苹果组不同植物混合物的总黄酮提取物HPLC指纹图 谱

图5是陇东海棠总提取物HPLC指纹图谱

图6是苹果属花楸苹果组不同植物的HPLC重叠色谱图

具体实施方式

实施例1 变叶海棠、花叶海棠、陇东海棠、滇池海棠、西蜀海棠原生 药品的制备

以苹果属花楸苹果组植物中一种为原料，即变叶海棠、花叶海棠、陇东 海棠、滇池海棠、西蜀海棠，净制后按常规方法粉碎，过筛，制成粒度小于 60目的细粉1000克，细粉灌装2000粒胶囊，灭菌，分装即成。

实施例2 变叶海棠、花叶海棠、陇东海棠、滇池海棠、西蜀海棠提取 物的制备

取变叶海棠、花叶海棠、陇东海棠、滇池海棠、西蜀海棠中一种为原料， 溶剂法提取(煎煮法、浸渍法、渗漉法、回流法)，提取溶剂可以是水；也 可以是有机溶剂，如醇类或含醇的混合物，其中醇类优选为乙醇和甲醇。提 取液浓缩；浓缩液精制，溶液吸附、洗脱、洗脱液回收溶剂，干燥，得提取 物。

实施例3 变叶海棠、花叶海棠、陇东海棠、滇池海棠、西蜀海棠水提 取物的制备

取变叶海棠、花叶海棠、陇东海棠、滇池海棠、西蜀海棠中一种为原料， 取原生药1000g，粗碎后加入10倍量水，加热回流提取3小时，过滤，滤渣 用8倍和6倍水再加热回流提取两次，每次分别为2小时和1小时，过滤， 合并三次滤液，浓缩，精制，干燥，得水提物。

实施例4 变叶海棠、花叶海棠、陇东海棠、滇池海棠、西蜀海棠醇提取 物的制备

取变叶海棠、花叶海棠、陇东海棠、滇池海棠、西蜀海棠中一种为原料， 取原生药1000g，粗碎后加入90％乙醇溶液8升，加热回流提取3小时，过 滤，滤渣用6倍和4倍90％乙醇溶液再加热回流提取两次，每次分别为2小 时和1小时，过滤，合并三次滤液，浓缩，精制，干燥，得醇提物。

实施例5 变叶海棠、花叶海棠、陇东海棠、滇池海棠、西蜀海棠总黄酮 提取物的制备

取实施例3和4中的水提物或醇提物加入7-8倍的水溶解，搅拌，放置，过 滤。将滤液过大孔吸附树脂M130，用水洗杂，用60％乙醇洗脱，浓缩洗脱液， 干燥得总黄酮提取物。

以芦丁为标准品计算总黄酮含量。

实施例6 变叶海棠、花叶海棠、陇东海棠、滇池海棠、西蜀海棠提取物 的胶囊剂的制备

取实施例2～5中的任一种提取物细粉，按药品和保健食品剂量要求与药 学上可接受的辅料或辅助性成分混匀成细粉或制粒，并按胶囊剂生产工艺灌 装胶囊，灭菌，分装即成。

规格：250mg/粒，相当于含原生植物5g。

实施例7 本发明提取物HPLC指纹图谱

检测仪器及方法：Waters2695，色谱柱：C—18；流速：1ml/min；柱温： 25℃；流动相A乙腈—乙酸乙酯，流动相B：硫酸水溶液，流动相A与流动 相B的体积比为2∶8，PAD 285.0nm。

其中，图1是五种苹果属花楸苹果组植物混合物的提取物的HPLC指纹图 谱，其中，植物混合物提取物的制备方法为：取变叶海棠、花叶海棠、陇东 海棠、滇池海棠、西蜀海棠五种为原料，各取原生药200g，粗碎后加入90％ 乙醇溶液8升，加热回流提取3小时，过滤，滤渣用6倍和4倍90％乙醇溶液再 加热回流提取两次，每次分别为2小时和1小时。过滤。合并三次滤液，浓缩， 干燥，得提取物。

图2是实施例4所述的方法制备的变叶海棠醇提取物的HPLC图谱。按实 施例4方法将变叶海棠制备的醇提取物。

图3是实施例3所述的方法制备的变叶海棠水提取物的HPLC图谱。按实 施例3方法将变叶海棠制备的水提取物。

图4是苹果属花楸苹果组植物混合物的总黄酮提取物HPLC指纹图谱

取变叶海棠、花叶海棠、陇东海棠、滇池海棠、西蜀海棠五种为原料， 各取原生药200g，共计1000g，按实施例4方法制备成的醇提物加入7-8倍 的水溶解，搅拌，放置，过滤。将滤液过大孔吸附树脂M130，用水洗杂， 用60％乙醇洗脱，浓缩洗脱液，干燥得总黄酮提取物。

图5是陇东海棠总提取物HPLC指纹图谱

取陇东海棠原生药1000g，粗碎后加入90％乙醇溶液8升，加热回流提 取3小时，过滤，滤渣用6倍和4倍90％乙醇溶液再加热回流提取两次，每 次分别为2小时和一小时，过滤，合并三次滤液，浓缩，干燥，得陇东海棠 总提取物。

图6是苹果属花楸苹果组不同植物的HPLC重叠色谱图。

变叶海棠、花叶海棠、陇东海棠、滇池海棠、西蜀海棠、陇东海棠(原变 型)、花叶海棠(原变种)、沧江海棠共八种，按实施例4所述的方法制备成醇 提取物，进行HPLC指纹图谱测定。

实施例中所有提取物经HPLC检测均有特征峰，说明苹果属花楸苹果组 不同植物具有相似性。

综合图谱可知，苹果属花楸苹果组植物提取物具有以下HPLC指纹图谱 特征，即同时具有六个明显特征峰，它们的保留时间分别为：H₁峰9.0±0.3； H₂峰9.8±0.3；H₃峰12.7±0.3；H₄峰14.1±0.3 H₅峰15.8±0.3；H₆峰22.8 ±1.0。

其中，图2中各个峰面积百分比为：H1:0.24，H2:0.93，H3:0.37，H4:0.58 H5:0.20 H6:92.39，H6峰面积与H1-5五个特征峰面积和的比值为：39.8；图3 中各个峰面积百分比为：H1:0.41，H2:1.95，H3:0.43，H4:0.21 H5:0.92 H6:83.59， H6峰面积与H1-5五个特征峰面积和的比值为：21.3；图4中各个峰面积百 分比为：H1:0.10，H2:0.10，H3:0.12，H4:0.40 H5:0.04 H6:96.16，H6峰面积与 H1-5五个特征峰面积和的比值为：129.9；图5中各个峰面积百分比为： H1:0.42，H2:2.08，H3:0.38，H4:0.19 H5:1.02 H6:82.32，H6峰面积与H1-5五个特 征峰面积和的比值为：20.1。综上，将本发明苹果属花楸苹果组HPLC图谱 中H6峰面积与H1-5五个特征峰面积和的比例大于10。

以下通过具体药效学试验证明本发明的有益效果。

试验例1 本发明植物提取物的药效实验

一、实验材料

药品：变叶海棠(Malus kansuensis Rehd.)茶由四川省炉霍县林业局 提供。维E烟碱酯胶囊(黑龙江省佳木斯晨星药业有限责任公司)。四氧嘧啶 (sigma公司)。血脂检测试剂盒(上海蓝怡科技有限公司)。优降糖(天津太 平洋制药有限公司)。

动物：KM小鼠，18～22g，鼠龄7-8周，由华中科技大学同济医学部实验 动物中心提供。

仪器：；电子天平(上海第二天平制造厂MA-200型)。恒温水浴锅(上 海精宏实验设备有限公司)。全自生化分析仪(美国贝克曼CX7型)。美国 强生ONE Touch血糖仪及其随机试纸条。

数据处理

各组数据以x士s表示，用SPSS11.0统计软件包处理。两两比较用t 检验，多组比较采用方差分析。

二、实验方法与结果

1、药物配制

变叶海棠茶加水煎煮二次，过滤后，浓缩至0.5g/ml(以原药材计)，使 用时根据需要调节药物浓度。维E烟碱酯，取粉末0.7g溶于40ml蒸馏水，混匀。

2、对高血脂症小鼠血脂的影响

高脂饲料组成：基础饲料(面粉25，玉米面20，麦片25，豆饼粉12，鱼 粉8，骨粉2，酵母粉2，精盐1)84.5％，蛋黄粉10％，猪油5％，胆酸钠0.5％。

取小鼠饲养高脂饲料10天，后随机分成5组，每组10只，雌雄各半。空白 对照组，灌胃给予生理盐水，饲养普通饲料；实验组以高脂饲料喂养并同时 以不同药物灌胃。每只0.1ml/10g，每天1次。

上述动物自由饮水，喂养7天，称重后禁食12h，眼眶后从静脉采血，4000G 离心，分离血清，用试剂盒检测血清中胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密 度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)含量。结果见表1。

表1 变叶海棠茶对实验性高脂血症小鼠血清TC、TG、HDL、LDL含量的影响

*表示与模型组相比p<0.05 **表示与模型组相比p<0.01

结果表明：变叶海棠茶能显著降低实验型高血脂动物血清中胆固醇、低 密度脂蛋白含量；增大剂量还可降低实验型高血脂动物血清中甘油三酯含量。

试验例2：变叶海棠提取物调节血脂作用药效实验

1、材料和方法

1.1 样品

本发明药物(由实施例4制备的变叶海棠醇提取物，再按实施例6的方法 制备成胶囊剂)。人体推荐剂量为0.3g×9/人/日(相当于0.045g/kg.b.w./d)。 试验样品外观为白色粉末(胶囊内容物)。

1.2 试验动物及饲养

1.2.1 动物：SPF雄性SD大鼠40只，体重170-220g，由四川省医学实验动 物中心提供[SCXK(川)2004-16]。

1.2.2 饲料：基础饲料由四川大学华西实验动物中心提供，高脂饲料配方 为：基础饲料78.8％，猪油10％，胆固醇1％(BR级，上海伯奥生物科技有限 公司)，胆盐0.2％(BR级，中国医药集团上海试剂公司)，10％蛋黄粉。

1.3 剂量选择

实验设高脂对照组和三个实验组，受试物剂量分别为0.23g/kg、0.68g/kg、 1.35g/kg(分别相当于人体推荐摄入量的5、15和30倍)。

1.4 主要仪器与试剂

奥林巴斯AU400自动生化分析仪。

1.5 实验方法

大鼠用基础饲料适应性喂饲一周后，取尾血测定基础血清总胆固醇 (TC)、甘油三酯(TG)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平。根据TC 水平，随机分为受试物三个剂量组和高脂对照组，每组10只。动物喂养环境： 温度22-24℃，湿度62-65％。本发明药物按设计的低、中、高三剂量分别配制 为2.3g/100ml、6.8g/100ml、13.5g/100ml的水溶液，按动物体重的1％灌胃， 高脂对照组以蒸馏水灌胃，每日一次，连续灌胃45天。各组动物喂饲高脂饲 料，自由饮水，实验每45天，从大鼠股动脉取血测定TC、TG及HDL-C。

1.6 实验数据统计

实验数据用PEMS for windows 3.1统计软件包进行方差分析。方差不齐数 据进行适当的变量转换；若变量转换后仍未达到方差齐者，用秩和检验统计。

2 结果

2.1 本发明药物对大鼠体重的影响：见表2

表2 本发明药物对大鼠体重的影响(X±S)

 

剂量(g/kg.kw)动物数(只)初始体重(g)中期体重(g)结束体重(g)高脂对照10221.2±17.1324.5±22.4358.2±25.80.2310225.1±15.5311.5±31.4343.1±34.50.6810221.6+9.4305.9±11.1330.6±12.01.3510224.4±15.0298.3±37.3322.5±41.8

由表2可见，各实验组大鼠各期的体重及增重与高脂对照组相比，差异无 显著性(P>0.05)。

2.2 本发明药物对大鼠血脂的影响：见表3

表3 本发明药物对大鼠血清TC、TG、HDL-C的影响(X±S)

●与实验前比，P<0.05；*与高脂对照组比，P<0.05；**与高脂对照 组比较，P<0.01

由表3可见，高脂对照组在实验结束后其TC和TG水平均显著高于实验 前，说明模型成功(P<0.05)。实验结束时0.23g/kg.bw组、0.68g/kg.bw组的TC 和0.23g/kg.bw组的TG水平显著低于高脂对照组(P<0.05，P<0.01)，而各实验 组的HDL-C水平与高脂对照组比较显著无显著性(P>0.05)。

3 小结

采用雄性SD大鼠，本发明药物连续灌胃45天，结果表明0.23g/kg.bw组、 0.68g/kg.bw组的TC和0.23g/kg.bw组的TC水平显著低于高脂对照组(P<0.05， P<0.01)。依据评价标准，本发明药物具有降血脂的作用。

试验例3 本发明药物临床试验

临床人数：25人，按高脂血症(hyperlipidemias)胆固醇高于220— 230mg/dl，甘油三酯高于130—150mg/dl作为诊断标准，25人均为高血脂症；

口服给药：本发明药物胶囊(按实施例6制备)，每人每次2粒，每天两次， 饭后服用。

结果：服用一个疗程(3个月)后其血脂恢复到正常值，有效率100％。

综上所述，本发明药物具有降低血脂作用，是一种疗效明显，毒副作用 低，适于长期服用的药品或保健食品。