用于治疗增殖疾病的含游如霉素－、雷尼拉霉素－、沙弗拉素－或沙弗拉霉素－相关化合物的制剂

摘要

提供了游如霉素、雷尼拉霉素、沙弗拉素和沙弗拉霉素相关化合物制剂，其制备方法，含有所述制剂的制品和药盒，以及用所述制剂治疗增殖疾病的方法。

说明书

本发明涉及制剂。更具体地说，本发明涉及游如霉素(jorumycin-)、雷尼拉霉素(renieramycin-)、沙弗拉素(safracin-)和沙弗拉霉素-相关化合物的组合物和制剂，例如化合物PM00104和PM00121。

发明背景

游如霉素是一种从太平洋裸鳃类软体动物海蛞蝓(Jorunna funebris)的皮肤和粘膜分离得到的天然化合物(Fontana A.等，Tetrahedron(2000)，56，7305-8)。此外，据报道雷尼拉霉素家族分离自海绵体和被囊动物(James M.F.等，J.Am.Chem.Soc.(1982)，104，265-269；Oku N.等，Journal Natural Products(2003)，66，1136-9)。沙弗拉素和沙弗拉霉素化合物在Manzanares I.等，Curr.Med.Chem.Anti-Cancer Agents(2001)，1，257-276，以及WO 00/18233和WO 01/87894中描述。

由于本文中的这些参考文献和引用文章所提供的细节描述，所以本文不再详细描述这类化合物的结构特征；本领域普通技术人员能直接从所引用的及相关来源的文献获取这种信息。本文将具体涉及至少两种化合物，PM00104和PM00121以阐明本发明的特征。

PM00104和PM00121是合成的与游如霉素和雷尼拉霉素有关的生物碱，也与沙弗拉素和沙弗拉霉素化合物有关。其化学结构为：

WO 01/87894中描述了一种包含PM00104或PM00121以及药学上可接受的载体的药物组合物。

PM00104显示对实体和非实体肿瘤细胞株具有显著体外活性以及对异种移植到小鼠中的一些人细胞株(例如乳腺和前列腺细胞)具有显著体外活性。PM00104作用机制的初步研究提示其具有改变细胞周期、DNA结合性能及转录抑制作用。此外，目前正在进行PM00104的I期临床研究。PM00104和PM00121更详细的活性数据参见WO 01/87894。

PM00104和PM00121及相关化合物是复杂的化学实体，如其结构特征所揭示那样。此外，它们的水溶性有限，而且尤其是其生物相容性形式和制剂的稳定性难以预测和实现。这些特征的阐明对本领域普通技术人员和常规方法，尤其是对制备易用于医疗目的的这些化合物制剂是一种挑战。这些应用宜依赖于制剂的一个或多个以下特征：生物相容性、环境条件下或尽可能接近环境条件下的稳定性、尽可能长的储存期，和易于重建形成在环境条件下或接近环境条件下的重建溶液在尽可能长的时间内保持稳定。

就这些化合物用作抗肿瘤药物的潜力而言，需要其能够解决常规制剂和制造方法不能解决或不能完全解决的问题。这些问题包括所述化合物的稳定性问题。PM00104、PM00121及相关化合物制剂的实施方式优选应具有优良的冻干性质，宜应易于重建，并且优选应具有可稀释性，例如用于输液的稀释液，同时应尽可能多地保留本文所述医疗应用制剂所需的特征。如上所述，这些制剂的实施应在长期储存期间保持稳定。此外，该制剂及其制造方法应符合生物相容性标准，从而实现至少在输液浓度下的无毒制剂运载体的有效应用。

母体制剂中辅料-药物相互作用的全面描述参见Akers M.J.，Journal ofPharmaceutical Sciences，91，2002，2283-2300。该文献提供了填充剂和冻干保护剂章节的内容，包括冻干内容中所用的材料。

认为本发明内容中所开发的方法和剂型，除PM00104和PM00121外，还可应用于其它相关化合物。

发明目的

具体地说，本发明涉及通式(I)化合物或其药学上可接受的盐、衍生物、前药或立体异构体的组合物和制剂：

式中，R₁选自：-CH₂-N(R_a)₂和-CH₂-OR_a，其中R_a各自独立地选自H、烷基-CO-、卤代烷基-CO-、环烷基烷基-CO-、卤代烷基-O-CO-、芳基烷基-CO-、芳基烯基-CO-、杂芳基-CO-、烯基-CO-、烷基、烯基和氨基酸酰基，或两个R_a基团与-CH₂-N(R_a)₂上的氮原子一起形成杂环基团；

R2选自烷基-CO-、环烷基-CO-和卤代烷基-CO-；和

R3是OH或CN。所述各基团可以是未取代或是取代的。

因此，本发明提供了通式(I)化合物的稳定制剂及所述制剂的制备方法。

本发明的目的是提供一种新的通式(I)化合物的稳定制剂。具体地说，需要一种具有极好储存稳定性的制剂。此外，尤其需要避免杂质的形成。

发明概述

根据本发明，提供了包含通式(I)的化合物和二糖的组合物，以及制备所述组合物的方法。所述组合物的优选实施方式是药学纯的。

提供的这类组合物的一些实施方式是包含通式(I)化合物和二糖的冻干制剂。还提供了制备所述制剂的方法。

发明详述

我们发现，在本发明的内容中，二糖能够稳定上述通式(I)化合物的制剂。

在这些化合物中，根据以下法则选择取代基：

烷基基团优选具有1-12碳原子。一种更优选的烷基基团具有约1-6碳原子，最优选具有1、2、3或4个碳原子。根据本发明，甲基、乙基和丙基(包括异丙基)是尤其优选的烷基基团。除非另有说明，本文所用术语烷基是指环状和非环状基团，虽然环状基团至少包含三个环上碳原子。

本发明化合物中优选的烯基基团具有一个或多个不饱和键以及大约2-12个碳原子。一种更优选的烯基基团具有约2-6个碳原子，最优选2、3或4个碳原子。本文所用术语烯基包括环状和非环状基团。

本发明化合物中合适的芳基基团包括单环和多环化合物，包括含有独立和/或稠合芳基的多环化合物。典型的芳基基团含有1-3独立或稠合环以及约6-18个环上碳原子。尤其优选的芳基基团包括取代或未取代的苯基、萘基、联苯基、菲基和蒽基。

合适的杂环基团包括杂芳环基团和杂脂环基团。本发明化合物中合适的杂芳环基团包含一个、两个或三个选自N、O或S原子的杂原子，包括例如香豆基如8-香豆基、喹啉基如8-喹啉基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、呋喃基、吡咯基、噻吩基、噻唑基、噁唑基、咪唑基、吲哚基、苯并呋喃基和苯并噻唑基。本发明化合物中合适的杂脂环基团包含一个、两个或三个选自N、O或S原子的杂原子，包括例如四氢呋喃基、四氢吡喃基、哌啶基、吗啉代和吡咯烷基。苯二酰亚氨基是另一种候选的杂环基团。

合适的氨基酸酰基包括丙氨酰、精氨酰、天冬氨酰、胱氨酰、谷氨酰、谷氨酰胺酰、甘氨酰、组氨酰、羟基脯氨酰、异亮氨酰、亮氨酰、赖氨酰、蛋氨酰、苯丙氨酰、脯氨酰、丝氨酰、苏氨酰、tyronyl、色氨酰、酪氨酰、缬氨酰以及其它氨基酸基团，这些氨基酸可以是L-或D-型。

本文所述基团可以在一个或多个位置被一种或多种合适的基团所取代，这些取代基团包括：R’、OR’、＝O、SR’、SOR’、SO2R’、NO2、NHR’、N(R’)₂、＝N-R’、NHCOR’、N(COR’)₂、NHSO2R’、CN、卤素、C(＝O)R’、CO2R’、OC(＝O)R’，其中R’各自独立地选自氢、OH、NO2、NH2、SH、CN、卤素、＝O、C(＝O)H、C(＝O)烷基、CO2H、取代或未取代的C1-C12烷基、取代或未取代的C2-C12烯基、取代或未取代的C2-C12炔基和取代或未取代的芳基。本发明化合物中合适的卤素取代基包括F、Cl、Br和I。如果这些基团本身也被取代，取代基可选自上述列表。

术语“药学上可接受的盐、衍生物、前药”是指给予受者后能够提供(直接或间接)本文所述化合物的任何药学上可接受的盐、酯、溶剂合物、水合物或任何其它化合物。但是应理解，非药学上可接受的盐也落在本发明的范围内，因为这些物质可用于制备药学上可接受的盐。所述盐、前药和衍生物的制备可通过本领域已知的方法来进行。

例如，通过常规化学方法，从碱性或酸性部分的母体化合物来合成本文所述化合物的药学上可接受的盐。通常，所述的盐的制备包括：使游离酸或碱形式的化合物与化学计量的合适的碱或酸在水或有机溶剂或水和有机溶剂混合液中反应。通常，优选非水介质如醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈。酸加成盐的例子包括：无机酸加成盐，例如盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐；和有机酸加成盐，例如乙酸盐、马来酸盐、富马酸盐、柠檬酸盐、草酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、苹果酸盐、扁桃酸盐、甲烷磺酸盐和对苯磺酸盐。碱加成盐的例子包括：无机盐，例如钠、钾、钙和铵盐；有机碱盐，例如乙二胺、乙醇胺、N，N-二烷撑乙醇胺、三乙胺和碱性氨基酸盐。

本发明化合物可以是游离化合物的结晶形式或溶剂合物(例如水合物)，这两种形式都包括的本发明的范围内。溶剂化方法是本领域公知的。

通式(I)化合物的前药化合物也包括在本发明的范围和精神内。术语“前药”使用其最广泛涵义，包括可在体内转化为本发明化合物的那些衍生物。这些衍生物是本领域技术人员容易明白的，包括例如游离羟基转化为酯衍生物的化合物。

上述通式(I)所示的本发明化合物包括根据其不对称性的对映体或非对映体。关于双键的立体异构体也是可能的，因此在一些情况下，此类分子以(E)-异构体或(Z)-异构体形式存在。单个异构体及异构体的混合物都落在本发明的范围内。

本发明化合物的例子包括在WO 00/18233和WO 01/87894中描述的化合物。我们具体参考了这两份PCT申请中各个实施例所鉴定的化合物。更一般地，我们具体参考了这两份PCT申请中本发明通式(I)化合物的内容。采用这些内容中给出的优选基团，尤其是适用于本发明的R₁和R2基团，特别是R₁。

R3通常是OH。

本发明优选的化合物是具有以下化学结构的化合物：

通式(I)的化合物(包括PM00104和PM00121)是复杂的化学物质，就其它不相关化学物质的性能而言，它们在制剂中的性能不可预测。当制剂中包含至少一种通式(I)化合物作为活性物质以满足生物相容性标准(包括医疗标准)时，这种性能甚至更加难以预测。我们还发现，此时使用二糖作为填充剂能够显著降低PM00104and PM00121组合物在冻干和储存期间的杂质形成。

此外，使用二糖还能改善其储存状况，使得其冻干制剂能在广泛的温度范围内长期储存，包括冰箱条件和室温下。本文所用术语“稳定的”用于表达“稳定的PM00104或PM00121制剂”时是指制剂满足本文所述的稳定性特征及其等同形式，而这种稳定性是常规制剂不具备的并且是用常规制造方法制备此制剂时不能实现的。

本发明实施方式提供了新的药学上可接受的组合物，所述组合物包含通式(I)的化合物和二糖。合适的二糖的例子包括：乳糖、海藻糖、蔗糖及其组合。本发明一些实施方式中可使用的二糖的其它例子包括：麦芽糖、异麦芽糖、纤维二糖、异蔗糖、异海藻糖、山梨糖、松二糖、蜜二糖、龙胆二糖中至少一种以及它们的混合物。目前优选蔗糖。在本发明的其它实施方式中，组合物包含通式(I)的化合物和不含乳糖的二糖。在本发明的其它实施方式中，该组合物包含通式(I)的化合物和不含海藻糖的二糖。在本发明的其它实施方式中，组合物包含通式(I)的化合物和不含蔗糖的二糖。在本发明的其它实施方式中，组合物包含通式(I)的化合物和不含麦芽糖的二糖。在本发明的其它实施方式中，组合物包含通式(I)的化合物和不含异麦芽糖的二糖。在本发明的其它实施方式中，组合物包含通式(I)的化合物和不含纤维二糖的二糖。在本发明的其它实施方式中，组合物包含通式(I)的化合物和不含异蔗糖的的二糖。在本发明的其它实施方式中，组合物包含通式(I)的化合物和不含异海藻糖的二糖。在本发明的其它实施方式中，组合物包含通式(I)的化合物和不含山梨糖的二糖。在本发明的其它实施方式中，组合物包含通式(I)的化合物和不含松二糖的二糖。在本发明的其它实施方式中，组合物包含通式(I)的化合物和不含蜜二糖的二糖。在本发明的其它实施方式中，组合物包含通式(I)的化合物和不含龙胆二糖的二糖。因此，在一些实施方式中，本发明组合物包含质量百分比小于2％或小于1％或小于或小于0.5％或小于0.2％或小于0.1％的乳糖、海藻糖、蔗糖、麦芽糖、异麦芽糖、纤维二糖、异蔗糖、异海藻糖、山梨糖、松二糖、蜜二糖和龙胆二糖中至少一种，优选包含每一种。

本文所用术语“其混合物”和“其组合”指提供前述术语“其混合物”或“其组合”基础的至少两种物质。通过示例的方式，而非限制性地，术语“包含A、B、C中至少一种及其混合物的产品”指该产品的实施方式满足以下任一条件：产品中包含A；产品中包含B；产品中包含C；产品中包含A和B；产品中包含A和C；产品中包含B和C；以及产品中包含A、B和C。

而且，应理解，术语如“反应”、“形成”及相关术语用于化学结构时是指以下任一种：(a)化学结构本身，和(b)所述结构在反应介质中存在的形式。类似地，为了在操作或反应步骤中命名化学结构或给出其通式，或者为了命名或给出其在介质中(无论是固体还是液体介质)的通式，包括产品、制剂及其组合，在这里是指以下任一种：(a)结构本身，和(b)所述结构在反应介质中存在的形式。例如，命名酸性化学结构在这里是指所述化学结构在其所命名的环境中存在的形式。通过例如的方式，但非限制性地，命名化学结构“氯化钠”或提供其化学通式在这里是指NaCl这种双原子分子，如果这是氯化钠在相关介质中存在的形式；也指未溶解和/或溶解的化学物质的集合，如果相关介质中的氯化钠完全或部分地溶解，包括在该介质中的溶剂化、部分掩蔽(cage)、与其它物质结合等。

为了提供更简洁的描述，这里给出的一些量化表达没有添加术语“约”。应理解，无论是否有术语“约”，本文给出的每个量值表示实际给出值，也表示本领域普通技术人员经合理推算得到的该给出值的近似值，包括由于该给出值的实验和/或测量条件导致的等价值和近似值。

本发明内容中的活性物质可以是天然、半合成或合成来源，包括各来源的组合。在活性物质是诸如PM00104或PM00121的化合物时，这些化合物是合成或半合成来源，可根据WO 01/87894的描述来制备，其全部内容以参考的方式包括在本说明书中。

本发明的实施方式中所述活性物质与填充剂的比例根据填充剂的溶解性来确定，当制剂冻干时也根据填充剂的冻干能力来确定。在一些实施方式中认为该比例(w/w)约为1∶1，在另一些实施方式中约为1∶5，在另一些实施方式中约为1∶10，而另一些实施方式显示比例约为1∶10到约1∶1。认为在另一些实施方式中，该比例约为1∶10到约1∶80，在另一些实施方式中该比例约为1∶80到约1∶1500。当活性化合物是PM00104或PM00121时，活性成分与填充剂的比例(w/w)通常约为1∶80到约1∶1500，优选约1∶100到约1∶800，更优选约1∶100到约1∶400，甚至更优选约1∶200。

冻干物质通常装在小瓶中，其中包含特定量的活性化合物。当活性化合物是PM00104时，活性含量为2.5毫克/瓶。当活性化合物是PM00121时，活性含量为1毫克/瓶。

本发明并不限于具体容器形式或设计，只要容器适合指定应用及其标准。本发明的实施方式以小瓶制剂的形式提供。

本发明的冻干制剂可重建并稀释而形成适用于静脉内注射的溶液形式的本发明组合物。重建液体的实际量并不限制本发明实施方式的特征。通过示例的方式但非限制性地，可用一定体积的水来重建本发明冻干制剂的实施方式。大多数情况下该体积不超过约20毫升，优选体积约为1-15毫升，更优选约为1-10毫升，甚至更优选约为3-8毫升，甚至更优选约为5毫升。如果活性物质是PM00104，则该实施方式中重建的溶液包含PM00104的浓度最高达5毫克/毫升，优选浓度约为2.5毫克/毫升，约1毫克/毫升，约0.5毫克/毫升。

需要时本发明重建实施方式可进一步稀释，但进一步稀释不是本发明的限制条件。通常优选用0.9％氯化钠或5％葡萄糖的水性系统作进一步的稀释。重建的溶液将根据重建溶液中的浓度和稀释溶液中的所需浓度进行稀释。

本发明通式(I)化合物的制剂的实施方式可用于治疗多种癌症。应理解本文中“治疗”是指缓解癌症。而且，本发明制剂的实施方式可用于实验室机构的试验，包括但不限于临床试验、分析试验和模型构建试验。

本发明包含通式(I)化合物的实施方式优选通过输注给予。输注步骤典型地循环重复，适当时重复超过1-20个循环。循环包括：输注通式(I)化合物制剂的阶段，以及通常不输注活性物质的阶段。典型地，循环持续几周，因而循环通常包括一周或几周的活性物质输注相以及一周或几周来完成该轮循环。优选采用输注时间最高达24小时，更优选1-12小时，最优选1-6小时。尤其理想的是，实现治疗而不需要在医院过夜的短时间输注。但是，需要时输注可以是12-24小时或者甚至更长。

本发明制剂的实施方式包括通过冻干含有通式(I)的化合物和二糖的半成品溶液形式的本发明组合物制备的本发明包含通式(I)化合物。。通常，将半成品溶液缓冲至pH约为4。合适的缓冲剂包括磷酸盐缓冲剂、柠檬酸盐缓冲剂、磷酸盐/柠檬酸盐缓冲剂(磷酸盐缓冲剂和柠檬酸盐缓冲剂的混合物)、乳酸、缓冲剂、抗坏血酸盐缓冲剂、酒石酸盐/柠檬酸盐缓冲剂、碳酸氢盐/盐酸缓冲剂、乙酸盐缓冲剂、琥珀酸盐缓冲剂和甘氨酸/盐酸缓冲剂。也可使用缓冲剂的混合物。能够将pH控制在所需值的生物相容性缓冲剂提供了本发明的其它实施方式。

半成品溶液中可包含其它成分，例如表面活性剂如聚氧乙烯去水山梨糖醇单油酸酯(也称为聚山梨酯)或聚氧乙烯(40)硬脂酸酯。其它可能的表面活性剂包括磷脂，例如卵磷脂；聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物，例如Pluronic表面活性剂；12-羟基硬脂酸的聚氧乙烯酯，例如Solutol表面活性剂；胆固醇的乙氧基化物，例如二酰基甘油、二烷基甘油；胆盐，例如胆酸钠、去氧胆酸钠；蔗糖酯，例如蔗糖单月桂酸酯，蔗糖单油酸酯；聚乙烯吡咯烷酮(PVP)；或聚乙烯醇(PVA)。

制剂通常以包含冻干产品的小瓶形式提供。但是，该供应形式并不是本发明的限制条件。为了提供包含冻干产品的小瓶，将半成品溶液加入到小瓶中并冻干。

在本发明的一些实施方式中，采用降低温度的二次干燥法进行冻干。一种优选的方案包括：冷却至温度约-40℃到约-50℃，在80-85微巴低压下第一次干燥25-50小时，在更低的压力和0℃以上进行第二次干燥3-20小时。

本发明的实施方式包括将产品冷却至-40℃以下进行冻干。在温度约-20℃到约-27℃，压力约85微巴下进行第一次干燥约35-46小时。在温度约20℃到约25℃下进行第二次干燥约30-45小时。

本发明制剂的实施方式适合在显著高于常规制剂储存温度的温度下储存。例如，本发明制剂的储存温度约为+5℃。这些温度是普通冰箱易于提供的。

附图说明

图1比较了两种PM00104制剂(一种包含蔗糖，另一种包含甘露醇)在40℃/70％RH下储存3个月的PM00104％纯度变化。

实施例

实施例1

该实施例描述了两种PM00104制剂(其中的二糖一种采用甘露醇作为填充剂，另一种采用蔗糖作为填充剂)的稳定性研究比较，阐述了本发明。

每种制剂半成品溶液的组成如下(表I)

表I

  组分  甘露醇制剂  蔗糖制剂  PM00104  0.1mg/ml  0.1mg/ml  甘露醇  5％  -  D-(+)-蔗糖  -  100mg/ml  磷酸二氢钾  6.8mg/ml  6.8mg/ml  磷酸  适量至pH4  适量至pH4  注射用水  -  适量至1ml

用标准程序制备和冻干半成品溶液。

甘露醇制剂

制备50毫升甘露醇制剂：将40毫升磷酸二氢钾溶液0.05M(pH 4)加入到5.493毫克PM00104中，并将该混合液搅拌1小时。

然后，加入2.5克甘露醇，用5毫升磷酸盐缓冲液(pH 4)洗涤板。将混合物再搅拌1小时。然后，用1N的磷酸将溶液的pH调节至pH 4，用磷酸盐缓冲液0.05M(pH 4)调节至最终重量52克。

将溶液过滤通过PVDF滤器，并以2毫升/瓶的形式将滤液分装到10毫升玻璃瓶中，根据以下过程冻干小瓶(表II)：

表II

冻干后，密封小瓶并转移至冰箱(-20℃)。

蔗糖制剂

制备300毫升的蔗糖制剂：将32.615毫克PM00104加入到100毫升磷酸二氢钾溶液0.05M(pH 4)中，用110毫升额外的磷酸二氢钾溶液0.05M(pH 4)洗涤板。然后，将混合物搅拌1小时。

加入30克蔗糖，用30毫升磷酸盐缓冲液(pH 4)洗涤板。将混合物再搅拌1小时。

然后，用1M磷酸将溶液的pH调节至pH 4，并用注射用水调节最终重量为300克。

将溶液过滤通过Millipore-Optiscale滤器，将滤液以2毫升/瓶的形式分装到10毫升玻璃瓶中并冻干小瓶。

对于蔗糖制剂，在温度5℃，25℃/60％RH和40℃/75％RH，对于甘露醇制剂则在40℃/75％RH下进行稳定性测定。

表III和图1显示了试验期间各制剂的PM00104色谱纯度变化。

表III

表III和图1中的数据表明，含蔗糖的制剂在40℃/75％RH下稳定性提高且纯度非显著性降低。这种降低显著低于甘露醇制剂中观察到的结果。

实施例2

制备了含蔗糖作为填充剂的PM00121制剂并在温度5℃，25℃/60％RH和40℃/75％RH下评价其稳定性。

每个小瓶中半成品溶液的组成如下所示(表IV)：

表IV

  组分  毫克/瓶  PM00121  1mg  蔗糖  200mg  磷酸二氢钾  13.6mg  聚山梨酯80  0.2mg

  磷酸  适量至pH4  注射用水  适量至2ml

PM00121制剂的制备如下：

将100毫升聚山梨酯80溶液0.1％(pH 2.5)加入到161.05毫克PM00121中，然后再加入110毫升聚山梨酯80溶液0.1％(pH 2.5)。将该混合物搅拌1小时。

然后，加入2.04克磷酸二氢钾，用15毫升聚山梨酯80溶液0.1％(pH 2.5)洗涤板。称取30克蔗糖并加入该溶液中，用15毫升聚山梨酯80溶液0.1％(pH2.5)洗涤板。然后，将混合物搅拌1小时以上。

然后，用1M磷酸将溶液的pH调节至pH 4，并用注射用水将溶液的最终重量调节至300克。

用Millipore-Optiscale滤器过滤溶液。将滤液以2毫升/瓶的形式分装到10毫升玻璃瓶中，保持-20℃直到冻干过程。

根据下表V进行冻干过程：

表V

  冷冻至-45℃的时间  150分钟  115mTorr和-20℃下进行初步干燥  2300分钟  75mTorr和25℃下进行第二次干燥  600分钟

冻干后，密封小瓶并转移至冰箱(-20℃)。

在温度5℃，25℃/60％RH和40℃/75％RH下进行稳定性试验。

表VI显示了研究期间制剂中PM00121的色谱纯度。

表VI

发现含二糖制剂在5℃和25℃/60％RH下稳定。

实施例3

制备了两种包含蔗糖作为填充剂的PM00104制剂(104-F A和104-F B)，并在温度-20℃，5℃，25℃/60％RH和40℃/75％RH下评价其稳定性。

对于每一种制剂，各个小瓶中半成品溶液的组成如下(表VIII)

表VIII

  组分  甘露醇制剂  PM00104  2.5mg  D-(+)-蔗糖  500mg  磷酸二氢钾  34mg  磷酸  适量至pH4  注射用水  适量至5ml

采用以下具体方案来制备半成品溶液并冻干。

制剂104-F A

1.750升半成品溶液的制备如下：

将153.125毫升磷酸液0.05N加入到905.61毫克PM00104中。将混合物搅拌15分钟。然后加入1400毫升注射用水，再加入11.9克磷酸二氢钾和175克蔗糖。将混合物再次搅拌1小时15分钟。

该溶液的pH无需调节至3.8≤pH≤4，因为其pH值已经是3.91。用注射用水将该溶液的最终重量调节至1820克。

然后，将溶液过滤通过0.22μm滤器。将滤液以5.4毫升半成品溶液/瓶的形式分装到25毫升小瓶中，保持在-20℃直到冻干过程。

根据下表VIII进行冻干过程：

表VIII

冻干后，密封小瓶并转移至冰箱(-20℃)。

制剂104-F B

将2.271克PM00104加入到100毫升磷酸液0.05N中，用265毫升磷酸0.05N洗涤板。将混合物搅拌15分钟。然后，加入3360毫升注射用水，再加入28.56克磷酸二氢钾。将混合物搅拌3分钟，加入420克蔗糖。再次将混合物搅拌1小时15分钟。

该溶液的pH无需调节至3.8≤pH≤4，因为其pH值已经是3.84。用注射用水将该溶液的最终重量调节至4369克。

然后，将溶液过滤通过0.22μm滤器。将滤液以5毫升半成品溶液/瓶的形式填充到25毫升小瓶中，保持在-20℃直到冻干过程。

根据下表IX进行冻干过程：

表VIII

冻干后，密封小瓶并转移至冰箱(-20℃)。

两种制剂在温度-20℃±5℃，5℃±3℃，25℃±2℃/60％RH±5％RH和40℃±2℃/75％RH±5％RH下进行稳定性试验。

表X显示了储存期间-20℃，5℃，25℃/60％RH和40℃/70％RH下制剂104-FA中PM00104的色谱纯度变化。

表X

表XI显示了储存期间-20℃，5℃，25℃/60％RH和40℃/70％RH下制剂104-FB中PM00104的色谱纯度变化。

表XI

表X和XI中的数据表明，5℃和25℃/60％RH下储存制剂的纯度变化相当于-20℃下储存的制剂变化。因此，5℃和25℃/60％RH下无明显降解表明，含二糖的制剂至少可在+5℃下长期储存。

这里引用的所有文献的内容以参考的方式包括在本说明书中。根据所述内容，本发明的特征和优点将显而易见。基于这些发现，可对各种条件和用途进行改进和改变，这样得到的实施方式仍然在本发明的范围内。