中药断血流总皂苷的提取方法及断血流软胶囊

摘要

本发明公开了中药断血流总皂苷的提取方法及断血流软胶囊。由断血流中药材经过水提后，水提取液经过AB－8型(D－101型)大孔树脂柱上吸附断血流总皂苷成分，用70％乙醇洗脱，减压回收乙醇，减压干燥得细粉。断血流总皂苷与色拉油、蜂蜡、司盘－80或液体聚乙二胺、固体聚乙二胺、甘油、司盘－80混合，制备得到断血流软胶囊。用于治疗出血症，尤其是妇科出血性疾病，其疗效确切、服用量小且及为稳定。

说明书

技术领域

本发明属于一种中药有效成份的提取及其制剂，具体的说是一种治疗出血症，尤其是妇科出血性疾病的中药断血流总皂苷的提取方法及其软胶囊。

背景技术

我国约5亿女性中，15～39岁的年龄层约占2.5亿人左右，其中有60～80％的女性都会受到月经及子宫方面病症的困扰。尤其是已婚女性，服用避孕药、施行节育环、输孵管结扎、人工流产、引产术等措施实行计划生育，加上工作和家庭压力，常常会促发功能性子宫出血、月经过多、月经紊乱等病症，这些病症不仅影响生活、工作以及身体健康，也是影响皮肤健康和容颜的最重要因素。中医中药从整体出发，调整性腺周期，往往能收到良好的止血调经效果。目前市场上所供应的妇科止血药大多数存在因疗效稳定性差或不确切，有的疗效尚可但有效指标成分不明确，质量难以监控，制剂服用量大等问题。

断血流Herba Clinopodii是产于安徽大别山区的特色药材，其植物来源之一风轮菜始载于《救荒本草》。朱肃云：“……苗高二尺余，方茎，四棱，色淡绿微白，……叶微宽，边有锯齿，又两叶对生，……开淡粉红花，其叶味苦。”断血流作为法定中药材用于上述诸症的治疗首载于《中华人民共和国药典》1977年版一部，现为历版中国药典收载。

发明内容

本发明的目的是提供一种中药断血流总皂苷的提取方法及制备成新剂型断血流软胶囊，治疗出血症，尤其是妇科出血性疾病。由断血流药材经过两种途径的提取、浓缩得到含总皂苷浸膏，与色拉油、蜂蜡、司盘-80或液体聚乙二醇、固体聚乙二醇、甘油、司盘-80制备得断血流软胶囊。两种途径制得的软胶囊服用量不同，服用生药量同。

本发明的技术方案如下：

中药断血流总皂苷的提取方法，其特征于：取断血流，加中性水浸泡提取，离心得提取液；药渣再加中性水提取，滤液与提取液合并，浓缩至相对密度为1.02～1.05，加于已处理好的AB-8型(D-101型)大孔树脂柱上吸附断血流总皂苷成分，用70％乙醇洗大孔树脂柱，至洗脱液不含总皂苷成分，收集醇洗脱液，减压回收乙醇，浓缩至稠膏状，减压干燥成干浸膏，粉碎成细粉备用。

所述的中药断血流总皂苷的提取方法，

是：取断血流，切2～3cm段，加12倍重量中性水，浸泡12小时，提取1小时，过200目筛过滤，离心；药渣再加10倍量中性水提取3次，每次1小时，滤过，离心；提取液合并，浓缩至相对密度为1.02～1.05(50℃热测)，加热至约50℃，按生药∶树脂比为1∶1～2加于已处理好的AB-8型(D-101型)大孔树脂柱上，待药液成分吸附完全后，用水洗至洗脱液近无色，弃去洗脱液，再用70％乙醇洗至洗脱液不含总皂苷成分，收集醇洗脱液，减压回收乙醇，浓缩至稠膏状，减压干燥成干浸膏，粉碎成细粉备用；

或者是：取断血流，切2～3cm段，加12倍水浸泡12小时，提取1.5小时，滤过，药渣再加10倍水提取1.5小时，滤过，滤液合并，浓缩至相对密度为1.10～1.15(80℃热测)，加60～85％7醇，充分搅拌，静置24小时，取上清液，减压浓缩成稠膏状，减压干燥(80℃)成干浸膏，粉碎成细粉备用。

上述制得的细粉作为下列断血流胶囊的成份，即本发明的所述的断血流提取浸膏即是本发明的断血流总皂苷的提取物。

断血流软胶囊，其特征在于由下列重量组份组成：

断血流提取浸膏    120～150  色拉油    160～350

蜂蜡              6～15     司盘-80   4～15

或

断血流提取浸膏    120～150  固体聚乙二醇-4000  2～5

液体聚乙二醇-400  200～400  甘油               2～5

吐温-80           2～5。

所述的断血流软胶囊，其特征在于由下列重量组份组成：

断血流提取浸膏    135       色拉油     270

蜂蜡              8         司盘-80    4

或

断血流提取浸膏    135    固体聚乙二醇-4000    2

液体聚乙二醇-400  235    甘油                 2

吐温-80           2。

所述的断血流软胶囊，其特征在于由下列重量组份组成：

断血流提取浸膏    135    色拉油               322

蜂蜡              12     司盘-80              6

或

断血流提取浸膏    135    固体聚乙二醇-4000    3.3

液体聚乙二醇-400  333    甘油                 3.3

吐温-80           3.3。

药效学研究

断血流软胶囊的主要有效成份断血流总皂苷，大剂量40mg/kg和中剂量20mg/kg(相当临床试用量按体重计13.33倍和6.67倍)用于小鼠，可明显缩短小鼠断尾出血时间，减少出血量，并缩短凝血时间，家兔大剂量10mg/kg和中剂量5mg/kg(相当临床试用量3.34和1.67倍)可使血浆复钙凝血时间缩短；10mg/kg也可明显缩短凝血酶原时间和白陶土部分凝血活酶时间，但对大鼠优球蛋白溶解时间无明显影响，表明本品可通过激活凝血系统，促进纤维蛋白形成而凝血，从而发挥止血药效。

断血流总皂苷给大鼠大剂量20mg/kg(临床试用量6.67倍)，可明显促进血小板聚集，使最大聚集强度增大，并可增强血小板的粘附性。此作用与本品发挥止血作用有关。

断血流总皂苷20mg/kg用于米非司酮加米索前列醇致妊娠不完全流产大鼠，可明显降低子宫出血量，提示本品对药物流产所致流产有一定疗效。

血管试验：断血流总皂苷浓度0.0375mg/ml、0.075mg/ml、0.15mg/ml均可显著收缩离体血管，尤对子宫动脉效强；1mg、2mg、4mg可使兔耳灌流量显著降低，表明本品对血管有直接收缩作用，出血时有利于创口闭合，减少出血量。

断血流总皂苷浓度0.075mg/ml、0.15mg/ml可显著提高离体大鼠子宫收缩幅度，10mg/kg、5mg/kg、2.5mg/kg可使家兔在体子宫收缩幅度增加，并增加子宫活动力(频率×幅度)。由于子宫收缩，可压迫子宫血管，利于子宫血管闭合。此作用，可能是断血流总皂苷对子宫异常出血疗效显著的因素之一。

功能性子宫出血、月经过多等妇科出血往往与内分泌失调有关，断血流总皂苷40、20、10mg/kg能明显增加幼龄小鼠子宫重量，对大鼠雌二醇水平有一定升高趋势，此作用可能是本品对内分泌功能失调引起的子宫出血，发挥药效的药理基础之一。

子宫出血中医辨证多由热证引起，本品凉血止血，用现代医学观点，热证多与炎症有关，以前报道断血流总皂苷可降低毛细血管通透性，但本次试验对二甲苯致小鼠耳肿胀，角叉菜胶致大鼠足肿胀无明显影响。

毒理学研究

急性毒理试验

断血流总皂苷给小鼠灌服，测不出LD50，最大耐受量为4.0g/kg，相当临床试用量(按体重计)1333.3倍。断血流总甙腹腔给药，小鼠LD50为1.32g/kg，95％可信限为1.17～1.48g/kg.

长期毒理试验

(一)大鼠长期毒理试验：断血流总皂苷42、84、168mg/kg剂量给大鼠连续灌服4周，各剂量缚大鼠凝血时间缩短(与药效作用一致)，大、中剂量可升高TP、ALB、大剂量降低TC，除此外，大鼠一般状况良好，各项指标检测均无明显异常，停药两周后TP、ALB、TC均恢复正常。无毒反应量为42mg/kg，按公斤体重比相当于临床成人试用量14倍。

(二)犬长期毒理试验：断血流总皂苷30、120mg/kg剂量，给犬连续灌药4周，亦可缩短凝血时间(与药效作用一致)，血液学指标、血液生化学指标、脏器系数、一般状况、尸检和病理检查均无明显异常，但大剂量犬有恶心反应，可能为皂甙刺激胃粘膜所致，小剂量无任何异常反应，停药后大剂量组犬恶心反应消失。小剂量(30mg/kg)为断血流总甙犬长毒试验无毒反应量，按公斤体重比，相当临床成人试用量10倍。

临床研究

《中国药典》2000年一部所述断血流制剂的功能与主治为：“凉血止血。用于功能性子宫出血，月经过多，产后出血，子宫肌瘤出血，尿血，便血，吐血，咯血，鼻衄，单纯性紫癜，原发性血小板减少性紫癜等。”

治疗各种出血症：应用荫风轮粉剂、丸剂、胶囊剂、片剂及注射剂治疗各科出血277例，结果显效(完全止血)239例，有效(出血量明显减少)23例，无效15例，有效率为94.6％，其中以妇产科、外科及泌尿科止血疗效最佳，对内科及五官科的疗效较满意。内服病例142例观察，有70.4％患者在2d内止血，90.8％在5d内止血；外用治疗73例观察，有43.8％在5min内止血，67.1％在10min止血；

治疗功能失调性子宫出血(DUB)：李素红、温兰英等报道，应用断血流片与对照药安络血治疗69例DUB的比较，断血流治疗49例，安络血治疗20例，显效为用药后7天内血量减少三分之一者。结果为：断血流显效率为79.59％，安络血为20％，统计资料用χ2检验，两者相比p＜0.01，有显著差异；

治疗月经过多、产后药流出血：杨梅，袁芳报道，断血流口服液与断血流片剂治疗中医崩漏证的疗效观察，总有效率分别为86.67％和96.67％；还有病因治疗作用，如月经过多及功能性子宫出血病例，经治疗后月经周期、量及色均基本恢复正常；宫外孕患者用药后不仅止血效果满意，而且可以促血液吸收，使腹部剧痛和包块消失，从而未经手术即可获得痊愈；

治疗其他科出血的应用：临床研究发现对遗传性毛细血管扩张、过敏性紫癜、单纯性紫癜、血小板病及血友病等均有较好的疗效，还有报道配合青霉素用于治疗白喉，提高白喉治愈率。

具体实施方式

例1

(1)、断血流总皂苷的提取：取断血流4500份，切2～3cm段，加水54L浸泡12小时，提取1小时，滤过(过200目筛)，离心；药渣再加45L水提取3次，每次1小时，滤过，离心；提取液合并，浓缩至相对密度为1.05(50℃热测)，遉热加于D-101型大孔树脂柱上(5000ml)；待药液有效成份吸附完全后(流速依柱径大小调节，取流出液100ml，至水浴上浓缩至干，残渣经浓硫酸—醋酐反应检测应为阴性)；加水洗至洗脱液近无色，弃去水洗液，用70％乙醇洗至洗脱液不含皂苷成分(同上法检测应为阴性)；收集醇洗脱液，减压回收乙醇浓缩至稠膏状，80℃减压干燥，将干浸膏粉碎成细粉得约135g；

(2)、取液体聚乙二醇-400 235g，固体聚乙二醇-4000 2g，甘油2g，吐温-80 2g；

(3)、将(1)项中得到的原料药细粉约135g与(2)制得的材料混合，配与囊材制备成软胶囊667粒，每粒含皂苷成分醉鱼草苷IV(以高效液相法测定)不低于2.0mg，用法用量为：口服，一次2～4粒，一日3次。

例2

(1)断血流总皂苷的提取：取断血流4500份，切2～3cm段，加水54L浸泡12小时，提取1.5小时，滤过；药渣再加水45L提取1.5小时，滤过；滤液合并，浓缩至相对密度为1.15(80℃热测)，加乙醇至含醇量达63％，充分搅拌，静置24小时，取上清液，减压浓缩成稠膏状，减压干燥(80℃)成干浸膏，粉碎成细粉256g，备用；

(2)、取色拉油322g，蜂蜡12g，司盘-80 6g；

(3)将(1)项中得到的原料药细粉与(2)制得的材料混合，配已囊材制备成软胶囊1000粒，每粒含皂苷成分醉鱼草苷IV(以高效液相法测定)不低于1.2mg。用法用量为：口服，一次3～6粒，一日3次。