一种用于防治奶牛乳房炎的干奶牛乳房灌注剂及其制备方法

摘要

本发明公开了一种用于防治奶牛乳房炎的干奶牛乳房灌注剂及其制备方法，其特点是：灌注剂每10ml处方量中含氨苄西林或阿莫西林100mg－150mg；醋酸氢化泼尼松4mg－7mg；氯化钠400mg－550mg；植物油6ml－6.5ml；聚山梨醇0.75ml－0.82ml；其余量为灭菌蒸馏水。其制备方法是：将植物油、氯化钠、灭菌蒸馏水三者混合，搅拌均匀后加入聚山梨醇，使混合液充分乳化；再加入醋酸氢化泼尼松混匀后，加入氨苄西林或阿莫西林混匀，低温乳化；无菌密封包装之，即得成品。其优点是：对奶牛干奶期隐性乳房炎具有明显的预防和治疗作用，同时具有无残留、生产成本低，治疗费用低的优点。

说明书

技术领域：

本发明涉及一种用于防治奶牛干奶期和产后期隐性和临床乳房炎的新型兽药。具体地说，是一种预防干奶牛乳房炎的乳房灌注剂。

背景技术：

乳房炎是奶牛的一种常见病，四季流行。在奶牛饲养管理中，当对奶牛群的管理措施不当时，会导致奶牛乳房炎的发生。乳房炎是奶牛疾病中花费最大的疾病之一，往往奶牛一个乳区被感染即可降低10％～20％的产奶量。另外，加上所报废的牛奶，用去的抗生素和因此病而早期淘汰的乳牛，损失更大。

奶牛乳房炎分为临床乳房炎和隐性乳房炎。临床乳房炎具有临床表现，易于发现，便于治疗。隐性乳房炎为没有临床表现的乳房感染，主要在奶牛干奶期诱发，如果得不到有效的处理，极易在奶牛产后转化成临床乳房炎。据估计，奶牛隐性乳房炎的发生比例是奶牛临床乳房炎的8～20倍。

隐性乳房炎的发病原因主要是两个：一是细菌感染，二是乳腺组织的炎性损伤，如长期泌乳、微生物毒素、化学刺激等。因此，预防奶牛隐性乳房炎的关键一是要防止干奶期奶牛感染，二是要防止乳腺组织的炎性反应。干奶期对牛进行干奶处理(治疗)因牛已停止产奶，乳房组织处于修复阶段，既利于处理效果，又避免了对牛奶的影响。

为避免奶牛的细菌感染，目前国内所用的均为单一抗生素类药物。如青霉素、链霉素等。这类药物存在作用时间短，仅对革兰氏阳性菌或革兰氏阴性菌发生作用的缺点，即不具有广谱性，对预防奶牛隐性乳房炎的效果并不明显。也有些奶牛场利用国外的干奶牛灌注剂(如法国、澳大利亚产的干奶牛乳房灌注剂)防治，但这些灌注剂多是由几种抗生素构成的复合剂，没有消炎成分，仅对特异性的细菌性感染有预防作用，对奶牛干奶期乳房组织不具消炎作用，且大多价格较贵。

发明内容：

本发明的目的是提供一种具有强烈的广谱性抑菌、杀菌作用和显著的组织抗炎、消炎作用，对奶牛干奶期乳房组织的修复、预防奶牛隐性乳房炎、降低产后乳房炎发生率有良好效果的复方干奶牛乳房灌注剂。该灌注剂具有药效可靠，无毒副作用，无残留，不影响奶牛正常妊娠，对产后牛奶质量安全的优点。

本发明的目的是通过如下技术解决方案实现的：

一种用于防治奶牛乳房炎的干奶牛乳房灌注剂，其特征在于：每10ml处方量中含有：

(1)氨苄西林或阿莫西林：100mg——150mg，  最佳为125mg；

(2)醋酸氢化泼尼松：    4mg——7mg，      最佳为4.5mg；

(3)氯化钠：            400mg——550mg，  最佳为450mg；

(4)植物油：            6ml——6.5ml，    最佳为6.5ml；

(5)聚山梨醇：          0.75ml——0.82ml，最佳为0.8ml；

其余量为灭菌蒸馏水。

上述用于防治奶牛乳房炎的干奶牛乳房灌注剂，可按照上述处方量之比例取各组份，采用如下制备方法制得：

(1)将植物油、氯化钠、灭菌蒸馏水三者混合，搅拌均匀；

(2)在所得混合液中加入聚山梨醇，使混合液充分乳化30分钟以上；

(3)在上述乳化液中再加入醋酸氢化泼尼松，充分混合均匀后，加入氨苄西林或阿莫西林，再混合均匀，于5℃-15℃的低温乳化20-25分钟；

(4)将最后乳化液无菌密封包装，即得成品。

按照本发明所述的乳房灌注剂，对预防和治疗干奶牛干奶期隐性乳房炎具有明显的作用，使产后牛奶体细胞数显著降低、临床乳房炎发生率明显降低，同时具有费用低、无残留的优点。

本发明具有强烈的抗菌效果。抑菌实验证明，对导致奶牛乳房炎的多种微生物，包括革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌均有强大的抗菌作用，其中对牛无乳链球菌、金黄色葡萄球菌的最低药效浓度在1μg/ml以下，对大肠杆菌也具有强抑菌效果。

本发明具有明显的抗炎效果，测定用药后牛奶中的体细胞数变化，结果证明可以大大的降低牛奶中的体细胞数尤其是白细胞数。药残实验证明停药48小时后牛奶即无药物残留，比同类灌注液短24小时以上。

本发明还具有无毒副作用，无药残隐患，可保障动物源性食品安全，生产成本低，治疗费用低的优点。

具体实施方式：

下面结合实施例对本发明技术方案的优点和效果作进一步详细说明：

按照本发明所述的技术方案，取如下实施例：

实施例1：                      实施例2：

按每10ml处方量，取：           按每10ml处方量，取：

(1)氨苄西林125mg；             (1)氨苄西林130mg；

(2)醋酸氢化泼尼松4.5mg；       (2)醋酸氢化泼尼松5mg；

(3)氯化钠450mg；               (3)氯化钠420mg；

(4)植物油6.2ml；               (4)植物油6.5ml；

(5)聚山梨醇0.8ml；             (5)聚山梨醇0.75ml；

其余量为灭菌蒸馏水。           其余量为灭菌蒸馏水。

实施例3：                      实施例4：

按每10ml处方量，取：           按每10ml处方量，取：

(1)阿莫西林105mg               (1)阿莫西林145mg

(2)醋酸氢化泼尼松5mg；        (2)醋酸氢化泼尼松6.5mg；

(3)氯化钠420mg；              (3)氯化钠520mg；

(4)植物油6.2ml；              (4)植物油6.5ml；

(5)聚山梨醇0.75ml；           (5)聚山梨醇0.8ml；

其余量为灭菌蒸馏水。          其余量为灭菌蒸馏水。

将上述四个实施例中的各组份，按照如下工艺制成灌注剂：

(1)将植物油、氯化钠、灭菌蒸馏水三者混合，搅拌均匀；

(2)在所得混合液中加入聚山梨醇，使混合液充分乳化30分钟；

(3)在上述乳化液中再加入醋酸氢化泼尼松，充分混合均匀后，加入氨苄西林，再混合均匀，于10℃的低温下乳化20分钟；

(4)将最后乳化液无菌密封包装。

通过上述工艺即制得四成品A(对应实施例1)、B(对应实施例2)、C(对应实施例3)、D(对应实施例4)。

(一)药效试验

[用法与用量]在奶牛最后一次手工挤净牛奶后(即干奶时)，用70％酒精(或碘酒)严格消毒奶牛乳头末端，干燥后，用专用注射器和灌注管乳腺内灌注药物，每个乳室灌注5ml(每头奶牛用药量为20ml)，用石蜡(或金霉素药膏)封闭乳头口。

[适应范围]所有无临床乳房炎感染症状的干奶牛。

[注意事项]对患临床乳房炎的奶牛，必须先治疗，待无临床症状后，再在干奶时使用本发明。

灌注多个乳区时，必须对奶牛每个乳头严格消毒，处理人员亦必须严格执行卫生程序。

1、抑菌实验：

[实验方法]将成品药物A稀释10倍、B稀释100倍、C稀释1000倍、D稀释10000倍，分别加到普通营养肉汤和普通THB培养基中，在培养基中接种不同浓度的大肠杆菌(M944，M314RH)、金黄色葡萄球菌(99330，94RH-1)和牛无乳链球菌(76LF，98071LF、从牛乳分离已纯化的菌珠)，每种细菌接种两株，然后划培养平板，观察其细菌数来看抑菌、杀菌效果。

[实验结果]实验发现(见表1)：本发明对金黄色葡萄球菌、牛无乳链球菌具有强杀菌效果，对大肠杆菌亦有强抑菌效果。其中对牛无乳链球菌、金黄色葡萄球菌的最低药效浓度在1/1000倍以上，对大肠杆菌也具有强抑菌效果。

2、体细胞检测实验

牛奶中的体细胞数含量反映乳房的组织状况：乳房出现炎症时，体细胞数增加，且随炎症的严重性而提高。因此，对用本发明处理的干奶牛在产犊后10天、15天和20天每天第一次挤奶采集奶样10ml，测定其中的体细胞数的变化，以判定本发明的抗炎效果。

体细胞数测定：将奶样涂抹于载玻片上一定的面积处，将涂片经过干燥、脱脂、固定、染色、脱色后在显微镜油镜下计数。

结果表明，本乳剂具有显著减少产后奶牛牛奶体细胞数、降低产后奶牛乳房炎发生率的作用(见表二)。

3、药物残留检测实验

[实验方法]药物残留检测按TTC法操作程序进行。TTC法的原理是，牛奶中有抗生素存在时，接种了嗜热链球菌(streptococcusther-mophilus)后，细菌的生长被抑制，牛奶不能成形。若牛奶中无抗生素存在，则细菌增殖，使得牛奶成形。采集用A、B、C、D四种药物处理12、24、36、48、60、72小时的奶样，吸取10ml放到已灭菌的试管中，然后将试管放在电炉上水浴加热，当达到100℃时，维持6min后取出试管，放在冷水中冷却至42℃，向每一个试管中加入嗜热链球菌菌种2.5ml，混匀后放在42℃的烘箱中2.5h，观察结果。

[实验结果]见表三，在停药12小时检测的奶样中有37.5％无残留，停药24小时检测的奶样中有50％无残留，停药36小时检测的奶样中有87.5％无残留，停药48小时以后检测的奶样均无药物残留。因此，在停药的48小时后牛奶中无药物残留，可以继续用奶。

4、稳定性试验：

对上述A、B、C、D四种药物保存1个月、3个月、6个月、1年、1年以上，分别进行乳剂的pH值、抑菌效果和乳化效果稳定性测定，证明本发明的pH值和乳化效果在1年内稳定，抑菌效果组间差异不显著，表明本发明主要成分在1年内的含量稳定。

   表一：药物抑菌实验结果

    含药量葡萄球菌结果大肠杆菌结果牛无乳链球菌结果    1/10无菌落形成无菌落形成无菌落形成    1/100无菌落形成无菌落形成无菌落形成    1/1000无菌落形成形成4个菌落无菌落形成    1/10000形成26个菌落形成很多菌落形成25个菌落    0有密集菌落形成有密集菌落形成，无菌苔有密集菌落形成

   表二：体细胞和临床乳房炎发生率检查结果

地点样本数        体细胞   临床乳房炎发生率 对照组(×1000)    处理组 对照组(乳区数) 处理组(乳区数)  南京  156 452    328 12 5  无锡  220 564    415 35 9

   表三：药物残留检测结果

处理后时间(h)                                乳区1234567812  无  有  有  无  有  无  有  有24  无  有  有  无  无  无  有  有36  无  无  无  无  无  无  有  无48  无  无  无  无  无  无  无  无60  无  无  无  无  无  无  无  无72  无  无  无  无  无  无  无  无

(二)实用验证

本发明研制后，先后在南京、无锡等地的4个奶牛场进行了试用验证。根据实验记录统计，用本发明处理的干奶牛共376例，证明奶牛产后体细胞数显著下降(降低27％)，临床乳房炎发生率降低70％(见表二)。

(三)药效总结

本发明为一种用于预防干奶牛乳房炎的乳房灌注剂，对金黄色葡萄球菌、牛无乳链球菌具有强杀菌效果，对大肠杆菌也有强抑菌效果，可有效预防奶牛干奶期乳房炎，显著减少产后牛奶体细胞数、降低奶牛产后乳房炎的发生率且具有无残留、稳定性好的优点。