用于改善血清脂类分布和预防动脉粥样硬化的含水解蛋白质和植物甾醇的组合物

摘要

本发明涉及一种治疗组合物，它含有水解蛋白质和植物甾醇，其中植物甾醇与水解蛋白质的重量比是1∶0.02至1∶150。本发明还涉及一种治疗组合物，它含有水解蛋白质和合成乳化剂和/或具有乳化性能的基于谷物的脂类部分。所述的组合物可以用于药物、营养品或食品，以改善血清脂类分布。

说明书

技术领域

本发明涉及营养和保健领域。本发明特别涉及用于口服的改良组合物，所述的组合物适合于改善血清脂类分布，包括降低血清总和/或LDL胆固醇和/或载脂蛋白B水平。

背景技术

心血管疾病(CVD)在西方世界中是主要的致死病因之一。升高的血清总和/或LDL(低密度脂蛋白)胆固醇和三酰甘油水平，以及HDL(高密度脂蛋白)胆固醇与LDL胆固醇的低比率是CVD的一些主要危险因素。近来还显示出载脂蛋白B 100(apo B)的血清水平是可靠的CVD危险信号。在大多数发达国家中，大量人群的血清胆固醇水平不在推荐水平范围内。改善血清脂类分布的首要步骤之一是改变生活方式，包括改变饮食和进行身体锻炼。但是，看起来难以改变饮食习惯，并遵循饮食建议。因此，显然需要这样的解决方案，它们超越常规的对饮食习惯和生活方式的改变，而可以借以改善血清脂类分布。

在一段时间里，富含具有降低胆固醇效果的成分而不是普通营养素的食品已经可以商购。典型的实例是富含植物甾烷醇(stanol)或甾醇脂肪酸酯的食品。甾烷醇脂肪酸酯和其降胆固醇效果公开于US专利No.5,502,045中，以及公开了一种合适的制备它们的方法。据报道人体每天膳食摄入2-3g的植物甾烷醇，则降低高达14％的血清LDL胆固醇水平，而不影响HDL胆固醇水平。还降低了血液中致动脉粥样化的载脂蛋白B微粒的量，从而降低了CVD的危险。

一些蛋白质已经被用来改善血清脂类分布。已经显示出降低血清总和/或LDL胆固醇的蛋白质包括例如，大豆蛋白质(Anderson J.W.等人，New Engl.J.Medicine 1995 333(5)276-282页)、乳清蛋白质(Nagaoka等人.，Agric.Biol.Chem.1991(55)813-818页)和小麦谷蛋白(EP 0 790 060 A1)。FDA已经核准了大豆蛋白质通过降低血液胆固醇水平从而降低CVD风险而具有的保健作用。为了取得这种保健作用的资格，每份食品必须含有至少6.25g的大豆蛋白质，这个量是每日25g有效水平的四分之一，并且包括在低饱和脂肪和胆固醇的膳食中。

EP0 669 835 B1描述了一种低血胆固醇膳食组合物，所述的组合物含大豆蛋白质和谷甾醇，该谷甾醇和大豆蛋白质是源自天然的，且具有协同的降低胆固醇作用。该组合物应用的形式例如是片剂、胶囊或糖浆。并没有提供该组合物有效的每日摄入量。另外，EP1 046 396 A2公开了一种含大豆蛋白质(优选大豆分离蛋白或大豆浓缩蛋白)和植物甾醇的组合物，其具有降低胆固醇的协同作用。当以足够的量服用大豆蛋白质和植物甾醇二者时，就实现了该协同作用，所述的足够的量是足以引发单独服用的各化合物的胆固醇降低活性的量。WO 01/37681公开了一种组合物，其含有植物甾醇和水溶分离蛋白，例如大豆蛋白质或酪蛋白酸盐且任选含有乳化剂。该组合物可以用于食品，其改善了含甾醇食品的口感和稳定性。与单独的植物甾醇实现的效果相比，该组合物并没有使胆固醇降低作用得到改善。

US 6,113,972公开了一种植物甾醇蛋白质复合物，其中该复合物提高了植物甾醇的生物可利用性。该组合物的蛋白质部分没有胆固醇降低效果，蛋白质的作用只是作为植物甾醇的载体。事实上，任何脂肪粘合蛋白质均可以用于该复合物，且卵蛋白质是特别优选的。含植物甾醇/甾烷醇和乳化剂的组合物(其混合进含蛋白质的产品中)公开于WO00/33669中。在该组合物中，该蛋白质并不具有任何的降低胆固醇作用，但其有助于乳剂的形成。

相对于对应的未水解的蛋白质，水解蛋白质显示出更好的降低血清胆固醇作用(Sugano等人.，J.Nutr.1990(120)977-985页)。该水解蛋白质的降低胆固醇作用可能归功于某种肽，例如Nagaoka等人发现的源自牛奶β-乳球蛋白的肽(Biochem.Biophys.Res.Commun.，2001，281(1)，11-17页)，但这仍有待通过良好控制的临床和/或动物研究得到证实。EP 0 790 060 A1公开了一种用于改善脂类代谢的水解蛋白质/磷脂复合物，其中该复合物含10％或更多的结合磷脂，特别是卵磷脂或酶改性卵磷脂。卵磷脂的脂类分布改善作用，特别是LDL-胆固醇降低和HDL-胆固醇升高作用在现有技术中是公知的(例如，Childs等人，1981，Atherosclerosis 38，217页)。相信在EP 0 790 060A1的复合物中，某些结合磷脂(卵磷脂或酶改性卵磷脂)明显有助于复合物的脂类代谢改善作用。

目前的文献且特别是FDA对植物甾醇健康作用的临时核准，提高了食品工业领域对食品中补充植物甾醇的兴趣。确实，近来许多这样的食品被引入市场。可以想象，含植物甾醇的新食品会快速出现在市场。

含植物甾醇的新食品的活跃发展引起了这样一种担心，这就是一部分人群对植物甾醇的每日摄入量可能高于获得最佳胆固醇降低效果所需要的摄入量。短时间的植物甾醇的高摄入并没有显示出是有害的。但也没有数据表明，植物甾醇每日高摄入量(＞3g/天或更高)是可能有长时间副作用的。而且，目前对于提高的血清水平和由此得到的植物甾醇较高的系统利用性的生物作用还没有一个清楚的了解，所述较高的植物甾醇系统利用性是通过提高对富含甾醇食品的摄入而实现的，所述的食品特别是富含不饱和植物甾醇的食品。

显然需要改进的解决方案，通过这些方案可以改善血清脂类分布，例如，升高血清总和/或降低LDL胆固醇水平和/或提高HDL胆固醇水平和/或降低三酰甘油水平和/或降低载脂蛋白B水平。需要基于活性成分组合的组合物，这样的组合物与单独活性成分相比具有增强的、附加的或甚至协同的作用。同样希望获得血清脂类分布方面有意义的和持续的改善，与目前采用的摄入量而获得的情况相比，这种改善使用各活性成分的较低每日摄入量。由此降低了活性成分可能的负面影响，这种负面影响例如是对脂溶性抗氧化剂可能的影响和其它消化不良。向更广泛的食品中添加活性成分，而不会对感官特性造成负面影响，这种添加同样是需要的。本发明提供的组合物满足了这些需求。

本发明概述

本发明提供了用于改善人和/或动物血清脂类分布的改良组合物，以及通过口服该组合物而改善人和/或动物血清脂类分布的方法。在一个方面，该组合物含有水解蛋白质和植物甾醇的组合。该组合物还可任选地含有乳化剂和/或脂肪和/或无机盐。该组合物含有一种或多种水解蛋白质与游离和/或酯化形式的一种或多种植物甾醇(甾醇和/或甾烷醇)、且任选地与一种或多种乳化剂和/或脂肪和/或无机盐组合。优选该乳化剂用来产生与水解蛋白质和/或甾醇的复合物。在第二个方面，该组合物含有水解蛋白质和合成乳化剂的组合。该组合物还可以选择性地含有脂肪和/或无机盐。在本发明的第三个方面，该组合物含有水解蛋白质和基于具有乳化性能的谷物部分的脂类的组合。该组合物还可以任意性地含有脂肪和/或无机盐。

该组合物本身就可以被利用，或作为药物或营养品或最优选用于食品。一般，这样的改善组合物是含大豆水解蛋白质、乳化剂和植物甾醇的复合物，优选用于食品中以改善血清脂类分布。

已经发现，水解蛋白质和植物甾醇、选择性的乳化剂和/或脂肪和/或无机盐的组合进一步增强了通过使用单独的活性成分而获得的血清脂类分布的改善效果，这种组合甚至于在改善整体血清总脂类分布方面具有协同作用，例如降低血液血清总和/或LDL胆固醇水平，具有比所预期的加合效果更好的效果。另外，一些组合，特别是含水解大豆蛋白质的组合显示出对HDL胆固醇水平的有益效果。还有显示，降血清甘油三酸酯水平是出人意料有效的。

本发明还提供了通过采用活性成分的组合而进一步改善血清脂类分布的方式，这是与单独采用一种活性成分时获得的效果相比较而言的。例如，采用本发明的组合物与健康推荐的膳食相结合提供了这样的方式，借助该方式血清LDL胆固醇水平甚至可以降低25％或更多。本发明由此提供一种通用的非药物方法，以改善血清脂类分布，例如降低血清总和/或LDL胆固醇，特别是在所具有的血清脂类水平不在推荐范围内的受治疗者中。本发明还提供活性成分的组合，特别是含无机盐和/或特定水解蛋白质的那些组合，这些组合有益于血压。因此，本发明的活性成分组合降低了CVD的风险，超越了只使用一种活性成分可以获得的效果。

本发明还提供了用于使人体植物甾醇每日摄入量最小化的方法，与通过市售的富含植物甾醇制品，以推荐的植物甾醇每日摄入量获得的效果相比，仍然实现了类似的血清脂类分布改善效果。这是特别重要的，因为获得血清总和/或LDL胆固醇降低所需的植物甾醇每日摄入量可以降低，由此防止了潜在的植物甾醇的过度消费。而且，市售的植物甾醇是有限制的。另外，市售的粗植物甾醇由于其有限的可利用性而价格昂贵，而用于本发明的水解蛋白质或水解蛋白质复合物的原料的可获量是没有限制的。

通过使用本发明的组合物，可以更有效地利用植物甾醇原料，有助于降低受治疗者以及整个人群的CVD风险。与单独的植物甾醇或水解蛋白质基成分获得的效果相比，本发明提供的方式获得了增强的血清脂类分布改善或类似的脂类分布改善，而且特别是采用了较低的植物甾醇和/或水解蛋白质每日摄入量。因为基于水解蛋白质的活性成分比植物甾醇更廉价，本发明还提供了一种更节省地实现最佳脂类分布改善效果的方法。

与本领域以前公知的植物甾醇和未水解蛋白质的组合相比，含有植物甾醇和水解蛋白质的组合、选择性地含有乳化剂和/或脂肪和/或无机盐的本发明的组合物具有增强的血清脂类分布改善效果，并且也可以用于多种多样的食品中，被各种各样的消费者使用。与未水解的蛋白质相比，除了具有更好的胆固醇降低效果以外，水解蛋白质的变应原性比未水解蛋白质更低，由此能够使更广泛的消费者受益于该血清脂类分布改善效果。本发明的组合物也可以被更容易地添加到食品中，所述的食品例如是饮料，与未水解的蛋白质相比，由于一些水解蛋白质的粘度降低，所以并没有对质地产生负面影响。

使用水解蛋白质以及将其添加进食品经常会产生一个问题，这就是水解物明显的苦味。蛋白质在具有疏水侧链的氨基酸处的断裂导致了苦味的产生，这种断裂导致了具有暴露的疏水氨基酸残基的肽的形成。由此水解物对其添加入的食品的味道可能有负面影响。除了水解蛋白质以外，一些水解蛋白质/磷脂复合物也具有苦味，可以对含有它们的产品的味道产生负面影响。除了异味以外，一些水解蛋白质/磷脂复合物，特别是含水解大豆蛋白和卵磷脂或改性卵磷脂的复合物，还具有强的黄色或褐色，将其用于淡色产品中，例如一些乳制品，可以由此引起该产品的变色。

通过在脂类分布改善产品，例如食品中将植物甾醇和水解蛋白质组合，选择性地与乳化剂和/或脂肪和/或无机盐组合，与单独使用水解蛋白质获得的效果相比，本发明提供一种获得至少类似的脂类分布改善效果，特别是胆固醇降低效果的方法，但使用更低的水解蛋白质含量，因此对于食品味道没有多大负面影响。将水解蛋白质与合成乳化剂或与植物甾醇或者有利地与乳化剂和植物甾醇两者复合也使水解蛋白质令人不快的味道最小化。本发明的组合物因此拓宽了可添加水解蛋白质的食品的范围，包括了淡味的食品，并仍然能实现至少类似的血清脂类分布改善效果。本发明的组合物也由此拓宽了可以添加水解蛋白质/乳化剂复合物的食品的范围，也包括了淡色产品。因此，本发明也提供了一种改善脂类分布食品的感官性质的方法，所述的食品含有水解蛋白质或水解蛋白质/乳化剂复合物。

本发明的详细说明

本发明一方面提供了一种含水解蛋白质和植物甾醇的组合物，其中植物甾醇与水解蛋白质的重量比是1∶0.02至1∶150。

本发明的组合物还可以含有乳化剂和/或脂肪。而且，该组合物可以含有无机盐。

该组合物中植物甾醇与水解蛋白质的重量比优选是1∶0.2至1∶30，更优选1∶0.4至1∶12.5，且最优选1∶1至1∶5。

这里所使用的术语“水解蛋白质”包括所有的蛋白质水解产物，所述的水解产物是通过采用蛋白酶制剂、含合适的水解蛋白质活性的微生物或酸水解或其任意组合而制备的，并具有血清脂类分布改善效果。可以使用市售的水解产物或制备水解产物。优选的水解产物具有的分子量是300-100 000 D，更优选500-50 000 D，最优选500-30 000 D和/或它们只是微溶于水。

可以使用植物、动物或微生物蛋白质和/或其混合物作为水解产物的蛋白质源。植物源蛋白质是优选的。最优选的是谷物或豆类源蛋白质。合适的植物蛋白质源例如是大豆蛋白质、小麦蛋白质，特别是小麦谷蛋白、玉米蛋白质、燕麦蛋白质、黑麦蛋白质、菜籽或低芥酸菜籽蛋白质、大麦蛋白质、大米蛋白质、亚麻籽蛋白质、马铃薯蛋白质、豌豆蛋白质、羽扇豆蛋白质、玉米蛋白质和荞麦蛋白质。动物蛋白质源，合适的实例包括乳蛋白质，例如乳清蛋白质和其级分。所有的这些蛋白质可以以不同的市售的提纯的或未提纯的形式用作水解产物源。含这些蛋白质和其它主要成分例如碳水化合物的原料也可以用作水解产物的来源。

通过本领域公知的方法和工艺借助酶解制备水解蛋白质是优选的，但也可以使用其它公知的水解技术，例如酸水解。例如EP0 790 060 A1公开了一种制备合适水解蛋白质的方法。一般的制备方法包括在水性介质中用蛋白酶对蛋白质部分进行处理，其中蛋白质或含蛋白质物料被分散在水中，而pH用酸或碱调节，以达到使用酶的最佳的pH范围。基于底物蛋白质，酶的添加量优选是0.2-5％，更优选0.5-2％，该反应在最佳的温度和pH下进行，所需要的时间依赖于所需要的酶和水解程度。一般通过将混合物加热至高得足以钝化酶的温度来终止反应。在加热步骤之前或之后，可以通过使用合适的酸，例如盐酸，或碱，例如氢氧化钠，将该反应混合物选择性地中和。优选，接着将具有血清脂类分布改善效果的级分从反应混合物中分离。在需要反应混合物的不溶于水或微溶于水的级分的情形中，可以通过例如离心或过滤技术分离，以获得本文所述的水解蛋白质浆液。该水解蛋白质浆液其本身就可以被使用，或用水清洗和/或干燥使用。用于干燥的方法不是关键性的，例如可以采用冷冻干燥、喷雾干燥或任何其它本领域公知的方法，它们可以直接产生粉末或通过研磨步骤产生粉末。干燥的和粉状的水解蛋白质由于其有效地俘获脂类所以是特别优选的。可以用于制备本发明水解产物的蛋白酶包括源自植物、微生物和动物源的酶，也包括源自基因修饰生物体的酶，在合适的反应条件下，它们将蛋白质水解为具有血清脂类分布改善效果的水解产物。合适的蛋白酶是例如，胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰酶制剂和木瓜蛋白酶。也可以顺序使用不同的酶，例如胃蛋白酶和胰蛋白酶，或者胃蛋白酶和胰酶制剂。这样的酶或酶的组合是特别优选的，即，它们产生的水解蛋白质在人肠中只能低劣地消化或不再能消化且因此被称作“耐性蛋白质”。

如本文使用的，术语“植物甾醇”指的是如下定义的，且具有脂类分布改善效果的任何甾醇。植物甾醇既包括甾醇也包括饱和甾醇，即，甾烷醇，呈游离形式或例如与脂肪酸(2-24个碳原子，饱和的、单不饱和的或多不饱和的，也包括特殊的脂肪酸例如共轭的脂肪酸，例如CLA和EPA和DHA)、羟基苯甲酸或羟基肉桂酸(ferrulic acid或香豆酸)或其它有机酸诸如例如二或三羧酸和/或羟酸或与所述酸的任意组合酯化的形式。另外，植物甾醇的定义也包括糖苷甾醇和其衍生物。还包括游离的和各种酯化的和糖基化形式的任意组合。

如本文所使用的术语“酯化形式的植物甾醇”或“植物甾醇酯”指的是具有至少60％，优选至少85％，最优选至少95％的酯化形式植物甾醇的植物甾醇。

在本说明书中，甾醇包括4-脱甲基甾醇、4-单甲基甾醇和4，4-二甲基甾醇(包括三萜烯醇)，甾烷醇包括4-脱甲基甾烷醇、4-单甲基甾烷醇和4，4-二甲基甾烷醇。典型的4-脱甲基甾醇是谷甾醇、菜油甾醇、豆甾醇、菜籽甾醇、22-脱氢菜籽甾醇、Δ5-燕麦甾醇。典型的4，4-二甲基甾醇是环阿屯醇(cycloartenol)、24-亚甲基环阿屯醇和cyclobranol。典型的甾烷醇是谷甾烷醇、菜油甾烷醇和它们的24-差向异构体，环阿屯烷醇(cycloartanol)和通过例如三萜烯醇(环阿屯醇、24-亚甲基环阿屯醇和cyclobranol)的饱和而获得的饱和形式。该定义“植物甾醇”包括所有可能的天然混合物或命名的甾醇和/或甾烷醇的任意混合物以及任意独立的甾醇或甾烷醇。

在该说明书中以植物甾醇等量物计算植物甾醇的量，即游离植物甾醇的量。

可以原样使用市售的游离形式或酯化形式的植物甾醇。当使用其游离形式的植物甾醇时，优选将植物甾醇的粒径降低以增强植物甾醇的分散性、溶解性和溶解度。通过许多本领域公知的技术可以降低粒径，例如US 6 129 944、WO 98/58554和EP 1 142 494 A1中所述的不同的干法或湿法研磨或微研磨技术。其它的成分，例如合适的混合物可以与植物甾醇一起粉碎，其它成分的选择依赖于活性成分要添加到其中的食料、营养品或药物。该混合物的实例包括多种结构和风味增强剂，以及面粉，特别是在要将活性成分添加进焙烤食品的情况下采用面粉。

游离形式的植物甾醇还可以采用熔融的方式用于特别是含有乳化剂和/或脂肪的组合物。优选，易用于本发明组合物的均质的混合物是这样由植物甾醇和乳化剂和/或脂肪形成的：通过将植物甾醇加热至其熔点，至60-150℃，一般是至130-150℃，并将乳化剂和/或脂肪在加热之前或之后添加到甾醇中。可以使用的合适的技术描述于如US6,190,720 B1。最优选将植物甾醇和乳化剂和/或脂肪的混合物加热到直至这些成分溶解。在将其添加进本发明组合物之前，在搅拌下，将该混合物冷却。

优选植物甾醇被酯化，且最优选它是植物甾醇脂肪酸酯。该脂肪酸酯从技术上说非常适合于添加进多种不同的产品中且是特别优选的，因为它具有非常好的感官特性，能够制备出具有良好感官特性的本发明组合物。

优选植物甾醇是甾烷醇，这是因为它的吸收是可以忽略的，因此使用甾烷醇更安全。同样，使用甾烷醇似乎胆固醇降低效果更强。因此，最优选本发明的组合物中采用甾烷醇脂肪酸酯。

如本文所使用的术语“乳化剂”指的是促进乳液形成和改善其稳定性的物质。乳化剂是合成制备的，通过将天然存在的物质或天然产物进行化学改性而制备。乳化剂的特征在于其结构，其中分子的一部分是极性的(亲水的)，而其它部分是非极性的(疏水的)，这使乳化剂能使乳液的两个不可混溶的相的接触表面定位并稳定。分子的极性和非极性部分的相对大小和特性，以及其它因素影响了制备的乳液的种类和品质。HLB(亲水亲油平衡)量度通常被用于一般性描述乳化剂的乳化性能。具有低HLB值(最高是约6)的乳化剂趋向于促进W/O乳液，具有中间的HLB值的乳化剂趋向于形成W/O或O/W乳液，而具有高HLB值(约8以上)的乳化剂趋向于形成O/W乳液。

优选使用乳化剂或乳化剂混合物，以制备具有植物甾醇和/或水解蛋白质的复合物。合适乳化剂的典型的但非限制性的实例包括甘油单酯例如蒸馏的甘油单酯，甘油二酯，甘油单酯衍生物例如单甘油的乙酸、乳酸、琥珀酸或柠檬酸酯，卵磷脂，改性的卵磷脂例如酶改性卵磷脂如溶血卵磷脂，聚甘油酯，聚甘油聚蓖麻酸酯，脱水山梨醇酯，聚山梨酸酯，丙二醇酯，硬脂酰乳酰酸盐例如硬脂酰乳酰酸钠和硬脂酰乳酰酸钙，二乙酰酒石酸酯，二乙酰乳酸酯，糖酯和其混合物。具有乳化性能的基于谷物的脂类部分也可以用作乳化剂。这些乳化剂包括例如源自燕麦的脂类部分。

优选HLB值或乳化性能等于HLB值在4以上，更优选在6以上的乳化剂或乳化剂混合物。优选的乳化剂的实例包括单甘油的乙酸、琥珀酸、乳酸和柠檬酸酯、卵磷脂、改性的卵磷脂、聚甘油酯、聚山梨酸酯、二乙酰酒石酸酯、甘油单酯、硬脂酰乳酰酸盐和其混合物。

如本文所使用的“合成乳化剂”是指合成法制备的乳化剂，或源自天然存在的物质的化学改性的乳化剂。不象一些天然存在的乳化剂，例如卵磷脂和酶改性的卵磷脂，这些合成的乳化剂不具有强烈的色彩。该合成的乳化剂由此可以作为水解蛋白质/乳化剂复合物(该复合物也添加进淡色产品中)的一部分使用。相比天然存在的乳化剂该合成乳化剂通常也更纯。合适的但非限制性的合成乳化剂的实例是甘油单酯衍生物、聚甘油酯、丙二醇酯、聚山梨酸酯、脱水山梨醇酯、硬脂酰乳酰酸盐、二乙酰酒石酸酯、糖酯和其混合物。优选HLB值或乳化性能等于HLB值在4以上，更优选在6以上的合成乳化剂或合成乳化剂混合物。

如本文所使用的术语“复合物”是指一种组合物，其中只有一部分的乳化剂和/或脂肪和/或植物甾醇是可采用非极性溶剂提取的，所述的非极性溶剂通常用于提取“游离脂类”。这些非极性溶剂包括例如石油醚和己烷。其余的乳化剂和/或脂肪和/或植物甾醇只有在水解(例如通过使用包括酸水解的方法，例如AOAC 922.06的方法)之后才能提取。

如本文所使用的“脂肪”指的是食用固体脂肪、半固体脂肪、液体油和其任意混合物。另外，脂肪取代物，例如糖聚酯也包括在内。可用的固体和半固体脂肪的实例包括牛油、猪油、奶油、人造奶油和起酥油以及半固体热带油，例如椰子油和棕榈仁油。液体油的典型实例包括低芥酸菜籽油/菜籽油、大豆油、向日葵油、橄榄油、棕榈油、玉米油、芝麻油、棉籽油、小麦胚芽油、花生油和鱼油。液体植物油是特别优选的。脂肪可以是天然存在的或改性的，例如氢化的、酯基转移的、含结构化的三酰基甘油或提高量的二酰基甘油。

如本文所使用的术语“无机盐”包括有营养益处的无机盐，与食用盐相比，所述的无机盐具有提高的K和/或Mg和/或Ca含量和/或降低的Na含量。在US专利6136349中，特别是在与植物甾醇一起服用和/或用于替代食品中的食盐时，建议用这种无机盐产生有益健康的效果，例如降低升高了的血压。合适的无机盐组合物的实例包括以Pansalt^或Cardia^盐为商品名售出的无机盐。该无机盐优选向水解蛋白质中添加，更优选向水解蛋白质浆液或洗过的水解蛋白质中添加。

下文中，将更详细地解释本发明的一些典型组合物及其制备方法。

含有一种或多种水解蛋白质和一种或多种植物甾醇的本发明的组合物本身可以使用，或作为药物或营养品使用，或最优选用于食品中，以改善人体血清脂类分布。水解蛋白质和植物甾醇可以以任何合适的方式作为成分独立添加进食品、药物或营养品中，或在形成本发明的组合物之前，它们可以进行适当的混合以形成组合物或复合物。通过降低所述组合物或其成分的粒径，例如通过研磨或微研磨，该组合物的制备和将其添加进食品、药物或营养品中可以轻易地实现。还可以添加其它成分例如水或无机盐。典型的但是非限制性地，该组合物和复合物的制备方法的典型但非限制性的实例描述于以下的实施方案中。

在本发明的一个实施方案中，将水解蛋白质和植物甾醇作为成分独立地添加进食品、药物或营养品中。通过用于制备这些产品的常规方法，将活性成分添加进食料、药物或营养品。

可以原样使用游离形式的市售的的植物甾醇，或更优选将植物甾醇的粒径降低以增强如上所述植物甾醇的分散性和溶解度。也可以使用其游离形式的熔融的植物甾醇。优选植物甾醇的主要部分是酯化形式，且如果需要，优选在添加进食品、药物或营养品之前它是熔融的。水解蛋白质可以以任何合适的形式被使用，包括水解蛋白质浆液、洗涤的和/或干燥的水解蛋白质，水溶液形式的水解蛋白质或降低了粒径的水解蛋白质。

在本发明的另一个实施方案中，将水解蛋白质和植物甾醇组合成一种组合物，它可以原样使用或添加进药物或营养品或食品中。当植物甾醇以其游离形式被使用时，将它们与干燥的水解蛋白质混合，以形成均质的组合物，或更优选与水解蛋白质浆液或水洗的水解蛋白质均化以形成水解蛋白质/植物甾醇复合物。可以原样使用该混合物或优选通过本领域常用的方法干燥，例如冷冻干燥或喷雾干燥，直接形成粉末或通过研磨步骤形成粉末。可以原样使用市售的植物甾醇，或优选使用降低了粒径的植物甾醇。在优选的实施方案中，植物甾醇的主要部分是酯化的形式。酯化的植物甾醇优选与干燥的和粉状的水解蛋白质混合，以形成水解蛋白质/植物甾醇复合物。

在本发明的又一个实施方案中，将水解蛋白质、无机盐和植物甾醇混合成一种组合物，可以原样使用该组合物或将其添加进药物、营养品或食品中。优选将无机盐添加进水解蛋白质中，更优选添加进水解蛋白质浆液或洗涤的水解蛋白质，且将该混合物与植物甾醇混合。

或者，含有水解蛋白质和植物甾醇的组合物可通过将未水解的蛋白质和植物甾醇的混合物水解而制备的，优选通过本领域公知的方法和工艺进行酶水解。

含有一种或多种水解蛋白质、一种或多种乳化剂和/或脂肪和一种或多种植物甾醇的本发明的组合物本身可以使用，或作为药物或营养品，或最优选用于食品中，以改善人体血清脂类分布。水解蛋白质、植物甾醇和乳化剂和/或脂肪可以以任何合适的方式作为成分独立添加进食品、药物或营养品中，或在形成本发明的组合物之前，可以将它们适当混合以形成组合物或复合物，将其添加进食品、药物或营养品中。通过降低所述组合物或其成分的粒径，例如通过研磨或微研磨，该组合物的制备和将其添加进食品、药物或营养品中可以轻易地实现。还可以添加其它成分例如水或无机盐。该组合物和复合物的制备方法的典型的但非限制性的实例描述于以下的实施方案中。

优选使用乳化剂制备与水解蛋白质和/或植物甾醇的复合物。

在本发明的一个实施方案中，使用水解蛋白质和乳化剂形成水解蛋白质/乳化剂复合物，并将该复合物和植物甾醇作为成分独立添加进食品、药物或营养品中。通过用于制备这些产品的常规方法，将活性成分添加进食料、药物或营养品中。

通过将乳化剂和水解蛋白质混合(例如通过高速混合器)可以制备水解蛋白质/乳化剂复合物，或更优选通过将各成分在水存在下混合，形成水解蛋白质/乳化剂复合物。优选将乳化剂分散在水中，添加水解蛋白质，接着在室温下彻底混合。选择性地，通过常规干燥技术，诸如例如冷冻干燥或喷雾干燥对复合物进行干燥，以直接形成粉末制品或通过研磨步骤形成粉末制品。在有或没有水存在的情况下，该复合物也可以由水解蛋白质和乳化剂与脂肪的混合物制备。以干重量为基准，该水解蛋白质/乳化剂复合物优选含至少5％，更优选至少10％且最优选至少20％的乳化剂。任何市售的水解蛋白质/磷脂复合物也可以用作水解蛋白质/乳化剂复合物。

现有技术公开了含10％或更多的结合磷脂(EP 0 790 060 A1)，尤其是卵磷脂或酶改性卵磷脂的蛋白质/磷脂和水解蛋白质/磷脂复合物，其中蛋白质或水解蛋白质和磷脂均具有脂类代谢改善效果。在本发明中可以使用多种乳化剂或其组合。当将该复合物添加进食品、药物或营养品时，这是特别有利的，这种情况下对乳化剂可以进行选择从而给终产品的属性，例如质地或味道带来有益的效果，而并不仅以增强该水解蛋白质的脂类分布改善效果为条件。

可以原样使用市售的游离形式的植物甾醇，或更优选降低植物甾醇的粒径，以增强植物甾醇的可分散性和溶解度。通过本领域许多公知的技术，例如通过研磨，可以降低粒径。有利的是，植物甾醇的主要部分呈酯化的形式，如果需要，优选在添加进食品、药物或营养品之前，其是熔融的。

在本发明另一个实施方案中，植物甾醇是以植物甾醇/乳化剂复合物的形式，或植物甾醇溶于或悬浮于脂肪的形式，和水解蛋白质作为成分独立添加进食品、药物或营养品中。通过用于制备这些产品的常规方法，将活性成分添加进食料、药物或营养品中。这样制备植物甾醇/乳化剂复合物或含植物甾醇和脂肪的悬浮液或溶液：将植物甾醇以其游离形式(优选具有降低了的粒径)溶解或悬浮于乳化剂、脂肪的熔融体或乳化剂和脂肪的混合物中，混合形成均质的分散体或溶液，并搅拌冷却，其中所述的熔融体或混合物处于升高的温度下，优选＞60℃，更优选＞80℃。也可以使用熔融的植物甾醇。植物甾醇与乳化剂的重量比是1∶0.01至1∶5，优选1∶0.05至1∶2，更优选1∶0.1至1∶2。排除植物甾醇和乳化剂，基于复合物或分散体或溶液的重量，粗脂肪含量优选小于80％，更优选小于60％，最优选小于20％。也可以使用主要是其酯化形式的植物甾醇来替代游离形式的植物甾醇。水解蛋白质可以任何适合的形式使用，包括水解蛋白质浆液、洗涤的和/或干燥的水解蛋白质、水溶液形式的水解蛋白质、降低粒径的水解蛋白质和水解蛋白质/乳化剂复合物。

在本发明一个优选的实施方案中，将植物甾醇、乳化剂和水解蛋白质组合成水解蛋白质/植物甾醇/乳化剂复合物，其本身就可以利用或可将其添加进药物、营养品或食品中。

优选这样制备复合物：首先将植物甾醇溶于或悬浮于乳化剂、脂肪的熔融体或乳化剂和脂肪的混合物中，混合形成均质的分散体或溶液，并搅拌冷却，其中所述的熔融体或混合物处于升高的温度下，优选＞60℃，更优选＞80℃。植物甾醇与乳化剂的重量比可以是1∶0.01至1∶5，优选1∶0.05至1∶2，更优选1∶0.1至1∶2。排除植物甾醇和乳化剂，基于复合物或分散体或溶液的重量，脂肪含量优选0-80％，更优选0-60％，最优选0-20％。干燥形式的水解蛋白质、浆液或水洗的水解蛋白质或水解蛋白质水性悬浮液或溶液接着与冷却的植物甾醇/乳化剂或植物甾醇/脂肪或植物甾醇/乳化剂/脂肪混合物混合和均质，形成水解蛋白质/植物甾醇/乳化剂复合物，或者如果没有乳化剂，就形成水解蛋白质/植物甾醇复合物。该均质的混合物可以选择性地被干燥和/或在使用前将粒径降低。优选使用游离形式的植物甾醇。降低了粒径的游离形式的植物甾醇是特别优选的。还可以使用熔融的植物甾醇。主要是其酯化形式的植物甾醇也可以被使用。通过将水解蛋白质/乳化剂复合物和植物甾醇混合也可以制备该复合物。

或者，可以通过首先将未水解的蛋白质/乳化剂或未水解的蛋白质/植物甾醇或未水解的蛋白质/植物甾醇/乳化剂的复合物水解，并接着将水解的复合物与其它本发明成分混合而制备出由水解蛋白质、乳化剂和/或脂肪和植物甾醇组成的组合物，所述的水解优选是通过本领域公知的或前文描述的方法和工艺进行的酶解。

本发明第二个方面提供了一种含有水解蛋白质和乳化剂或乳化剂-脂肪混合物的组合物，用于改善人体中的血清脂类分布，其中使用合成的乳化剂。通过使用合成乳化剂，可以避免常常由含有天然乳化剂的组合物造成的味道、色泽和杂质问题。另外，具有乳化性能的基于谷物的脂类级分也可以用作含有水解蛋白质和乳化剂或乳化剂-脂肪混合物的组合物中的乳化剂。在本发明的第三个方面，优选水解蛋白质和乳化剂由同一来源获得。例如，将燕麦分级分离，富含蛋白质的级分被水解并与富含脂类的级分混合，形成混合物或复合物。这种组合的优势在于它由非变应原物料制成。

本发明的组合物含有一种或多种水解蛋白质和一种或多种合成乳化剂和选择性含有脂肪和/或一种或多种具有乳化性能的基于谷物的脂类级分，其本身可以使用，或作为药物或营养品，或最优选用于食品中，以改善人体血清脂类分布。水解蛋白质和合成乳化剂，和选择性的脂肪，或者水解蛋白质和具有乳化性能的基于谷物的脂类级分可以以任何合适的方式作为成分独立添加进食品、药物或营养品中，或在形成本发明的组合物(将其添加进食品、药物或营养品中)之前，它们可以进行适当的混合以形成组合物或复合物。优选使用合成乳化剂或基于谷物的脂类级分，通过前文所述的方法制备与水解蛋白质的复合物。

在本发明的另一个方面，提供了一种食品，它含有至少一种基本营养成分和至少上文定义的本发明组合物之一。

-该组合物植物甾醇组分的含量高于基本营养成分中天然存在的含量。

-通过用于制备食品的常规方法，将所述的组合物添加进食物中，可以制备本发明的食品。该组合物可以原样添加(以液体、半固体或干燥的形式)，或作为成分独立添加该组合物的各成分。

本发明的食品可以是各种食品组合物的形式，包括但不仅限于

-焙烤食品和甜食(新鲜的和干的焙烤食品，例如新鲜的面包、其它面包制品、蛋糕、脆皮松饼、华夫饼干、脆饼干、发面饼干、富含蛋白质的焙烤食品等)

-谷物食品和点心(早餐谷物食品、muesli、食品块，例如谷物基食品块和muesli食品块，这些可能含有巧克力、面食制品、面粉等)

-饮料(酒精性饮料和非酒精饮料，包括例如软饮料、果汁和果汁型混合饮料、强化饮料，诸如，例如蛋白质或钙强化饮料、益生饮料、运动和能量饮料、补充膳食或膳食替代饮料、饮料浓缩液或饮料预混合液和粉状饮料，其中本发明组合物的含量是以即用型等计算的)

-乳制品(奶、奶制品，例如干酪和稀奶油干酪等、酸奶、冷冻酸奶、其它冷冻乳制品、可饮用的酸奶、其它发酵的乳制品、乳饮料、冰淇淋、甜点、涂抹食品)

-发酵的谷物制品

-调味汁、汤

-肉、鱼、家禽和蛋制品(例如，香肠、肉丸等)

-人造的例如乳或肉制品(例如，仿制的干酪、酸奶、冰淇淋、甜点、人造肉、代乳品等)，非乳冷冻甜食

-豆制品

-植物油基制品(例如，人造黄油、涂抹食品、调味品、蛋黄酱等)

-用于制备或生产食品的即食混合料(用于焙烤食品，例如面包、蛋糕、脆皮松饼、华夫饼干、比萨饼、薄烤饼；或用于烹调的，例如汤、调味汁、甜点、布丁)。

本发明的食品也可以含有其它营养上有益的成分，其中的一些可以进一步增强本发明组合物的效果。可以用这些成分强化食品，或者这些成分可以是其它食品成分的内在部分。

营养上有益的成分的实例包括例如源自鱼油的二酰基甘油和n-3脂肪酸，其对脂类代谢具有有益的作用，并因此可以降低患心血管疾病的风险。n-3脂肪酸对血液特性具有有益的效果，例如，它们有降低甘油三酯的作用并降低血小板的凝结。二酰基甘油降低了血清三酰甘油水平和因此可以对患心血管疾病的风险具有有益的作用。通过其它机理，n-3脂肪酸和二酰基甘油可以降低患动脉粥样硬化的风险和CVD的死亡率。

有益的营养成分的其它非限制性实例包括膳食纤维和有益的微量成分，例如诸如异黄酮、生育酚、生育三烯酚类、类胡萝卜素、维生素C、叶酸盐和类黄酮。其它的维生素和矿物质也可以被添加在或包含在本发明的食品中。

特别是，膳食纤维的使用可以进一步增强本发明组合物的作用。膳食纤维指的是源自植物原料的食品成分或其它来源的类似碳水化合物，这些物质对人体消化酶的消化和吸收有抗性。这包括难以消化的各种多糖、寡糖、木质素及相关物质。膳食纤维可以被进一步分为水溶级分和水不溶级分。水溶级分的实例是例如，果胶、植物胶，β-葡聚糖和抗性淀粉，而不溶级分例如是纤维素和半纤维素。适当的纤维摄取被认为具有许多有益的效果，例如已知各种可溶性纤维通过降低血浆胆固醇水平，从而降低了患心血管疾病的风险。本发明的又一方面提供了一种用于改善血清脂类分布的药物或营养品，它含有前文定义的本发明的组合物。所述的产品还可以含有至少一种配合剂。该配合剂可以是任何药物可接受的粘合剂、载体、稀释剂、赋形剂或涂覆剂。该产品可以是任何适当形式的，例如片剂、粒剂、粉剂、胶囊、糖浆、分散体或用于口服的其它液体制剂。

本发明的产品和组合物优选含有至少两种活性成分，即水解蛋白质和植物甾醇，其以足量提供改善的血清脂类分布，例如降低血清总和/或LDL胆固醇水平。本发明特别涉及至少两种活性成分，即水解蛋白质和植物甾醇的协同组合，与只使用其中的一种成分时获得的效果相比，该组合的使用增强了血清脂类分布的改善。本发明的某些水解蛋白质/植物甾醇/乳化剂复合物是特别有利的，因为通过在作用的临界点确保活性成分最佳的利用性，而使脂类分布改善效果最佳化。除了降低血清总和LDL胆固醇水平以外，本发明的一些组合物还提供了理想的血清HDL胆固醇水平增加。一些组合物对血压具有有益的作用。本发明还涉及活性成分和确保活性成分在作用点具有最佳利用性的成分的组合，即水解蛋白质和合成乳化剂。

本发明还能够降低人体植物甾醇的每日摄入量，并还能够实现类似的胆固醇降低效果，所述的胆固醇降低效果是通常的植物甾醇推荐每日摄入量(2-3g)获得的效果，可以通过例如食用市售的富含植物甾醇产品而实现。本发明组合物自身或用于食品、营养品或药物时的最佳每日摄入量是这样的，所提供的植物甾醇的每日摄入量(以甾醇等量物计算)是0.4-5g，优选0.5-2.5g，更优选0.8-2g。

本发明还能够降低含水解蛋白质的食品的水解蛋白质含量，所述食品特别是用于改善血清脂类分布，并由此改善了这样的食品的感官性质。本发明组合物自身或用于食品、营养品或药物时的最佳每日摄入量是这样的，所提供的水解蛋白质的每日摄入量是0.1-60g，优选0.5-15g，更优选0.8-10g。

本发明还涉及每份含有植物甾醇和水解蛋白质最佳每日摄取量的至少10％的食品。优选所述食品每份含有植物甾醇和水解蛋白质最佳每日摄取量的10％至200％食品。

通常，食品的植物甾醇含量是每100g食品0.05-20g，优选0.1-15g/100g，更优选0.1-10g/100g，且最优选0.5-5g/100g，而水解蛋白质含量是每100g食品0.0002-20g，优选0.0005-15g/100g，更优选0.001-10g/100g，且最优选0.1-10g/100g。

本发明的又一方面提供了一种用于改善血清脂类分布的方法，所述的改善血清脂类分布是例如降低受治疗者总和/或LDL胆固醇，提高HDL胆固醇，降低三酰基甘油，降低载脂蛋白B和/或提高HDL胆固醇与LDL胆固醇的比率，该方法包括以有效改善血清脂类分布的量给受治疗者口服本发明的组合物。

另外，本发明提供了一种通过膳食方式降低或预防人动脉粥样硬化进展的方法，包括以有效改善血清脂类分布的量给受治疗者口服本发明的组合物。

通过组合摄入两种活性成分而获得的本发明的主要优点是：

-植物甾醇和水解蛋白质协同的血清脂类分布改善效果

-与单独使用植物甾醇或水解蛋白质实现的效果相比，增强了血清脂类分布改善效果

-需要较低的植物甾醇每日摄入量，与单独使用植物甾醇相比实现同样的血清脂类分布改善效果

-需要较低的水解蛋白质每日摄入量，与单独使用水解蛋白质相比实现同样的血清脂类分布改善效果

-通过改善血清脂类分布而降低了心血管疾病的风险。

本发明特别涉及增强的血清脂类分布改善效果，这是通过利用植物甾醇和水解蛋白质，选择性地与乳化剂和/或脂肪和/或无机盐的协同组合而实现的。本发明也涉及在作用点确保活性成分，特别是水解蛋白质的最佳利用性。本发明的某些含水解蛋白质和乳化剂或水解蛋白质、乳化剂和植物甾醇的组合物是特别有益的，因为通过确保活性成分的最佳利用性而使脂类分布改善效果最佳化。

本发明还特别涉及最佳的植物甾醇和水解蛋白质的每日摄入量，以作为膳食的一部分的食品形式，实现显著的血清脂类分布改善效果。通过将植物甾醇和其它脂类分布改善膳食成分的有益效果组合实现了植物甾醇每日摄入量的降低，这种组合与目前推荐的植物甾醇每日摄入量(2-3g/d)获得的效果相比，实现了同样的脂类分布改善效果。该方法有益地降低了植物甾醇每日摄入量，使植物甾醇更平衡地被使用。植物甾醇每日摄入量在最多2g时，协同效果是特别明显的。

在本发明一个优选的实施方案中，该组合物含有植物甾醇和水解大豆蛋白，选择性地含有乳化剂。优选使用的植物甾醇是植物甾醇脂肪酸酯，且更优选含大量的甾烷醇脂肪酸酯，优选至少30％的甾烷醇脂肪酸酯的植物甾醇脂肪酸酯。

最优选将本发明的组合物添加进食品中，所述食品是为成为保健饮食的一部分而设计的。

本发明的其它方面是：

根据权利要求1至13任一权利要求所述的组合物用于制备改善血清脂类分布的药物、营养品或食品的用途，所述的改善血清脂类分布特别是用于降低血清总和/或LDL胆固醇和/或用于提高HDL胆固醇与LDL胆固醇的比例和/或用于降低血清载脂蛋白B水平。

根据权利要求1至13任一权利要求所述的组合物的用途，用于制备降低或预防动脉粥样硬化的进展的药物、营养品或食品。

上述用途，其中水解蛋白质的服用量是每日0.1至60g，优选0.5至15g，且更优选0.8至10g，而植物甾醇的服用量是每日0.4至5g，优选0.5至2.5g，且更优选0.8至0.2g，这是以甾醇等量物计算的。

一种用于改善受治疗者血清脂类分布的方法，特别用于降低血清总和/或LDL胆固醇水平和/或用于提高HDL胆固醇与LDL胆固醇的比例和/或用于降低血清载脂蛋白B水平，该方法包括以有效改善血清脂类分布的量给受治疗者口服权利要求1-13任一权利要求所述的组合物。

一种通过膳食方式降低或预防受治疗者动脉粥样硬化的进展的方法，包括以有效改善血清脂类分布的量给受治疗者口服权利要求1-13中任一权利要求所述的组合物。

上述方法，其中水解蛋白质的服用量是每日0.1至60g，优选0.5至15g，且更优选0.8至10g，而植物甾醇的服用量是每日0.4至5g，优选0.5至2.5g，且更优选0.8至2g，这是以甾醇等量物计算的。

本发明还通过以下述实施例进一步说明。实施例1-4例举了本发明成分的制备，实施例5-8例举了本发明组合物的制备，实施例9-16例举了该组合物在食品中的用途，而实施例17例举了本发明组合物在降低血清胆固醇方面的效果。除非特别说明，本发明说明书中的百分数是指重量％。

实施例1

水解蛋白质的制备

将1500g的大豆分离蛋白(SUPRO^牌大豆分离蛋白，ProteinTechnologies International)分散于151的水中，用盐酸调节pH至2，并将胃蛋白酶(P7000，Sigma Aldrich，活性1∶10,000)添加到溶液(大豆分离蛋白量的1％)中。在37℃进行24小时反应，将该反应混合物加热至85℃持续1小时而终止反应。用氢氧化钠(2mol/l)中和该混合物，并离心。将沉淀物用水洗涤两次，之后对水解蛋白质进行冷冻干燥，并研磨，得到300g干燥的水解蛋白质。在水解中获得的肽的分子量通过SDS-聚丙稀酰胺凝胶电泳(SDS-page)方法确定。水解产物中肽的分子量范围是3000至30000D。

实施例2

水解蛋白质/乳化剂复合物的制备

将62g的乳化剂(溶血卵磷脂，Precept 8160，Central Soya)在室温下分散于2500ml的水中，并将实施例1中制备的500g大豆水解蛋白质添加进来。通过高速混合器(10 000rpm)混合该溶液，对混合物进行冷冻干燥，并研磨得到水解蛋白质/乳化剂复合物。

通过酸水解方法(AOAC 922.06)确定该复合物的总脂类含量。通过石油醚直接提取测定不与复合物结合或只是松散地与复合物结合的脂类(游离脂类)。计算结合的脂类含量，作为总脂类和“游离”脂类的差值。总脂类含量是复合物的11.0％，游离脂类含量是复合物的7.9％，因此“结合”脂类含量是复合物的3.1％。

实施例3

使用游离形式的植物甾醇制备植物甾醇/乳化剂复合物

从游离形式的植物甾醇(植物甾醇，Archer Daniels MidlandCompany)，硬脂酰乳酰酸钠(Grindsted SSL P 55，Danisco Cultor)和单甘油柠檬酸酯(Grindsted^TM Citrem P 70，Danisco Cultor)制备植物甾醇/乳化剂复合物。硬脂酰乳酰酸钠(30g，珠粒)和单甘油柠檬酸酯(70g，糊)在60℃熔融，并均质混合。将100g的植物甾醇添加到乳化剂混合物中，将各成分一起混合，并在搅拌下加热至约145℃。得到澄清的液体，随后搅拌下冷却至70℃，并用于制备色拉调料(实施例11)。

实施例4

使用游离形式和酯化形式的植物甾醇制备植物甾醇/乳化剂复合物

由游离形式和酯化形式的植物甾醇和卵磷脂的混合物制备植物甾醇/乳化剂复合物。将植物甾醇酯(150g，甾醇酯-115，RaisioBenecol)在80℃熔融。降低了粒径的植物甾醇(100g，植物甾醇，ArcherDaniels Midland Company)和卵磷脂(100g，Adlec，Archer DanielsMidland Company)被混合进熔融的甾醇酯，并在搅拌下将混合物加热以使结晶的植物甾醇熔融。用高速混合器(25 000rpm)对该产品均质，并在搅拌下冷却至60℃。

实施例5

使用合成乳化剂制备水解蛋白质/乳化剂复合物

将35g乳化剂(单甘油柠檬酸酯，Grindsted^TM Citrem P 70，DaniscoCultor)分散在50℃的水(1500ml)中，并添加150g实施例1制备的大豆水解蛋白质。通过高速混合器(25 000rpm)混合该溶液，对该混合物冷冻干燥并研磨，得到水解蛋白质/乳化剂复合物。

实施例6

使用游离形式的植物甾醇制备水解蛋白质/植物甾醇复合物

大豆分离蛋白(500g，SUPRO^牌大豆分离蛋白，ProteinTechnologies International)如实施例1进行水解，并在水解之后用水洗涤两次。添加游离形式的植物甾醇(40g，植物甾醇，ArcherDaniels Midland Company)，并与洗涤过的水解蛋白质一起用高速混合器(25 000rpm)均质。将该组合物冷冻干燥和研磨。

实施例7

使用酯化形式的植物甾醇制备含无机盐的水解蛋白质/植物甾醇复合物

大豆分离蛋白(500g，SUPRO^牌大豆分离蛋白，ProteinTechnologies International)如实施例1进行水解，并在水解之后用水洗涤两次。向洗过的水解物浆液添加无机盐(5g，Pansalt^)，并将浆液冷冻干燥和研磨。将34.4g植物甾醇酯(甾醇酯-115，RaisioBenecol)添加到65.6g的干燥的水解物中。用高速混合器(25 000rpm)对该混合物进行均质。

实施例8

水解蛋白质/植物甾醇/乳化剂复合物的制备

如实施例1制备大豆水解蛋白质。酶改性卵磷脂(20g，Precept8160，Central Soy Company)和单甘油柠檬酸酯(50g Grindsted^TmCitrem P 70，Danisco Cultor)在60℃熔融并混合均质。将粒径降低了的植物甾醇(50g，植物甾醇，Archer Daniels Midland Company)添加进乳化剂混合物中，各成分一起混合，在搅拌下加热至100℃。得到澄清的液体，随后在搅拌下冷却至温度达到90℃。将干燥的和粉碎的大豆水解蛋白质(90g)添加进90℃的植物甾醇乳化剂混合物中并均质。该混合物被冷却至70℃，并用于制备代乳品(实施例15)和水果饮料(实施例16)。

复合物中植物甾醇与水解蛋白质的重量比是1∶1.8，且该复合物含有23.8％的植物甾醇和42.9％的大豆水解蛋白质。

实施例9

含有水解蛋白质/植物甾醇复合物的食品块

根据下述成分制备食品块：

300g                        燕麦片

95g                         富含纤维的燕麦糠麸

140g                        米糖浆

50g                         粗糖

40g                         浓缩的苹果汁

20g                         苹果

30g                         葡萄干

100g                        植物脂

3g                          盐

8g                          调味剂

110g                        得自实施例6的复合物

4g                          卵磷脂

A45g                        含1.6g的植物甾醇和3.9g大

                            豆水解蛋白质的食品块

实施例10

含有水解蛋白质/乳化剂复合物和植物甾醇的酸奶

将植物甾烷醇酯(STAEST-115，Raisio Benecol)和得自实施例5的水解蛋白质/乳化剂复合物分别作为成分用于制备酸奶。在70℃将植物甾烷醇酯(STAEST-115)熔融。将熔融的甾烷醇酯(110g)和140g得自实施例5的大豆水解蛋白质/乳化剂复合物添加到70℃的5,751的脱脂奶中，用高速混合器混合，并将混合物进行巴氏杀菌。将普通的酸奶培养基和双歧杆菌搅拌进该混合物，并将混合物保持在42℃7小时。

每份150g的产品含1.7g的植物甾烷醇和3.0g的水解蛋白质。

实施例11

含有植物甾醇/乳化剂复合物和水解蛋白质的低脂色拉调料。

得自实施例3的植物甾醇/乳化剂复合物和得自实施例1的大豆水解蛋白质分别作为成分用于制备低脂色拉调料。

色拉调料的成分是：

7.5g                           得自实施例3的植物甾醇/乳化剂复合物

7g                             得自实施例1的大豆水解蛋白质

16g                            大豆油

56g                            水

6g                             醋

4.5g                           糖

1.5g                           盐

0.1g                           黄原胶

0.4g                           柠檬汁

1g                             辛香料

30g                            每份色拉调料含1.1g植物甾醇和2.1g大

                               豆水解蛋白质

实施例12

含有植物甾醇/乳化剂复合物和水解蛋白质的类似于酸奶的谷物制品

以与实施例1中大豆水解蛋白质类似的方法，由小麦面筋(Raisio)制备水解蛋白质，只是没有干燥水解物。向洗过的面筋水解产物中添加水，得到固体含量是20％的产品。

使用得自实施例4的植物甾醇/乳化剂复合物和小麦面筋水解物制备发酵的、类似于酸奶的谷物制品。

成分

45％            水

16.5％          制备的面筋水解物和水的混合物

8.9％           燕麦糠

28％            浆果果酱(含果糖、乌饭树的紫黑浆果、

                草莓、覆盆子、果胶、调味剂)

1.6％           得自实施例4的植物甾醇/乳化剂复合物

使用双歧杆菌培养物，对水和燕麦糠的混合物进行发酵。添加浆果果酱、甾醇/乳化剂复合物和面筋水解物与水的混合物，且所有的成分一起被加工。

每份150g的产品含1.3g的植物甾醇和5.0g的水解蛋白质。

实施例13

具有含无机盐的水解蛋白质/植物甾醇复合物的面包卷。

由下述成分以常规方式制备含得自实施例7的复合物的面包卷：

800g                   小麦粉

20g                    糖

20g                    盐

10g                    人造黄油(80％脂肪含量)

94g                    得自实施例7的复合物

500g                   水

11g                    干燥的酵母

24                     由面团得到面包卷。两个50g的面包

                       卷含有合适的每日剂量的植物甾醇

                       (1.3g)和水解蛋白质(4.0g)

实施例14

具有植物甾醇和含无机盐的水解蛋白质的稀奶油干酪型涂抹料

植物甾烷醇酯(STAEST-115，Raisio Benecol)和含无机盐的大豆水解蛋白质分别作为成分用于制备稀奶油干酪型涂抹料。以实施例7中的复合物类似的方法制备含无机盐的大豆水解蛋白质，只是没有向干燥的和粉碎的水解蛋白质添加植物甾醇酯。该干燥的大豆水解蛋白质含有4.8％无机盐。

首先将植物甾烷醇酯添加进脂肪混合物中，该混合物由59.7％菜籽油、7％的棕榈硬脂精和椰子油的酯交换混合物以及33.3％的植物甾烷醇酯(STAEST-115，Raisio Benecol)组成。通过将熔融的甾烷醇酯与菜籽油和硬浆成分混合制备该混合物。

根据下述配方制备稀奶油干酪型涂抹料：

51.3％                凝乳

24.6％                包括甾烷醇酯的脂肪混合物

12.0％                冷凝液

1.0％                 稳定剂

1.0％                 乳蛋白质

7.9％                 含有4.8％无机盐的大豆水解蛋白质

0.3％                 盐

0.1％                 山梨酸钾

1.7％                 大蒜调味制剂

0.05％                作为pH调节剂、调味剂的乳酸

每份20g的稀奶油干酪型涂抹料含有1g植物甾醇(植物甾烷醇)和1.5g水解蛋白质(大豆水解蛋白质)。

实施例15

含有水解蛋白质/植物甾醇/乳化剂复合物的代乳品

将得自实施例8的水解蛋白质/植物甾醇/乳化剂复合物用于制备香草调味的代乳品。

成分：

51                        豆浆(2％脂肪)

94.5g                     得自实施例8的复合物

                          香草香精

将得自实施例8的大豆水解蛋白质/植物甾醇/乳化剂复合物在剧烈搅拌下添加到70℃的豆浆中，并均质。2d1每份的豆浆含有0.9g植物甾醇和1.6g大豆水解蛋白质。

实施例16

含有水解蛋白质/植物甾醇/乳化剂复合物的水果饮料

将得自实施例8的水解蛋白质/植物甾醇/乳化剂复合物用于制备具有下述成分的水果饮料：

200g                      浓缩果汁(橙子、波萝、西番

                          莲果、番石榴、芒果)

776g                      水

8.5g                      果糖

1.5g                      乳酸钙

14g                       得自实施例8的复合物

将浓缩果汁、水、果糖和乳酸钙一起混合，并加热至70℃。将得自实施例8的大豆水解蛋白质/植物甾醇/乳化剂复合物在剧烈的搅拌下添加到饮料中，并均匀化。

两杯饮料(á2d1)含有1.3g植物甾醇和2.4g水解蛋白质。

实施例17

使用本发明的组合物获得的脂类分布的改善

采用LDL-感受器缺陷型雌性小鼠作为测试动物，对含植物甾醇(植物甾烷醇脂肪酸酯)和水解蛋白质/乳化剂复合物(得自实施例2的大豆水解蛋白质/溶血卵磷脂复合物)的组合物的脂类分布改善效果进行研究。

该测试的目的是研究血清总胆固醇和甘油三酯降低效果，该效果是通过只使用少量的植物甾醇(0.5％，甾醇等量物)作为含水解蛋白质的致动脉粥样化膳食的一部分而获得的。以一定的量服用水解蛋白质以获得最大的胆固醇降低效果，这是通过在动物模式中使用水解产物并且没有损害小鼠的营养需求和生长的条件下获得的。发现水解产物合适的量是膳食总蛋白含量(N当量)的1/2。

将动物分为4组(各组n＝8-10)，并用实验食物喂养8周。

所有的实验食物被配制成含20％蛋白质。在对照组中和测试组2中，唯一的蛋白质源是酪蛋白(88％纯度)。在测试组3和4中，蛋白质源是一半酪蛋白和一半(N当量)水解蛋白质/乳化剂复合物。测试组2和4含有0.84％植物甾烷醇脂肪酸酯(0.5％，甾醇等量物)。对照组和测试组3含有0.35％菜籽油，与获得植物甾烷醇酯的测试组相比，带来了等量的热量和相等的脂肪酸组合物。

实验食物和结果：

成分    组1(对照)  组2(植物甾烷醇酯)组3(水解蛋白质/乳化剂复合物)  组4(植物甾烷醇酯+水解蛋白质/乳化剂复合物)    总％    总％    总％    总％膳食预混合料^*    58.72    58.22    55.44    54.95可可脂    17.96    17.96    17.97    17.97菜籽油    0.35    0.00    0.35    0.00植物甾烷醇酯    0.00    0.84    0.00    0.84酪蛋白粉    22.72    22.73    11.36    11.37得自实施例2的大豆水解蛋白质/溶血卵磷脂复合物    0.00    0.00    14.62    14.62胆固醇    0.250    0.250    0.250    0.250结果血清总胆固醇(mmol/l)，平均值    20.6    14.7    15.5    11.4与对照组相比的改变(％)    -    -28.5    -25.0    -44.5血清甘油三酯(mmol/l)，平均值    2.2    2.4    1.9    1.3与对照组相比的改变(％)    +8.8    -10.9    -39.1

*Clinton/Cybulsky(D12106px，没有蛋白质)，得自ResearchDiets Inc.

如表中所示，植物甾烷醇酯和水解蛋白质/乳化剂复合物均具有血清胆固醇降低效果(分别是组2和3)。与单独的植物甾醇(组2)或水解蛋白质/乳化剂复合物(组3)相比，本发明的组合物(组4)，即，植物甾醇和水解蛋白质/乳化剂复合物的组合具有甚至增强的胆固醇降低效果，与该组合所期望的效果相比也是增强的。由此，甚至于当在饲料中使用最大量的水解蛋白质时，添加植物甾醇有效地进一步降低血清总胆固醇水平。

水解蛋白质/乳化剂复合物(组3)具有血清甘油三酯降低效果，而在接受植物甾醇的组2中血清甘油三酯水平多少有些上升。出乎意料的是，植物甾醇和水解蛋白质/乳化剂复合物的组合具有强的协同的甘油三酯降低作用。

根据本发明，通过组合植物甾醇和水解蛋白质，可以观察到显著的协同的脂类分布改善。