一种氟标记脂肪酸心肌代谢显像剂14(R,S)－氟

摘要

一种氟标记脂肪酸心肌代谢显像剂14(R，S)－氟[

说明书

技术领域

一种脂肪酸代谢显像剂14(R，S)-氟[¹⁸F]-6-硫十七烷酸的纯化方法，涉及一种氟标记脂肪酸心肌代谢显像剂。

背景技术

近十年来，正电子发射断层(PET)显像在临床上已广泛应用于肿瘤、神经精神疾病和心血管疾病等的临床和基础研究，并逐步成为基因功能和新药开发研究的新的科研手段。PET的应用和发展离不开PET正电子放射性药物，临床常用的正电子放射性药物，由于半衰期短，不能依赖从国外进口，要靠自行研制。在医用短半衰期核素中，¹⁸F具有相对较长的半衰期(110min)，可在PET中心以外近距离使用，近年，国外对¹⁸F标记的各种正电子放射性药物的研究异常活跃。

心肌活力估测的问题一直是近年核心脏病学的热点，虽然²⁰¹Tl和^99mTc-MIBI单光子计算机断层(SPECT)心肌灌注显像做了十分有效的工作，但PET方面，葡萄糖(¹⁸F-FDG)心肌代谢显像和¹³NH₃心肌灌注显像，被公认为判断心肌活力的“黄金”标准。国外，脂肪酸心肌SPECT代谢显像的工作已很深入，国内由于不能批量生产¹²³I，该工作无法深入。

脂肪酸是心肌的主要能量来源，心肌脂肪酸代谢与心肌所处的状态密切相关，在心肌局部缺血时，心肌脂肪酸的摄取和清除也随之改变，因此氟标记脂肪酸可用于心肌细胞存活的估测。近年来比较成功的有¹⁸F-FTHA和¹⁸F-FTP，分别在长链脂肪酸的6位和4位杂一硫原子，降低了脂肪酸的β氧化速率，明显延长其在心肌中的滞留时间，研究表明¹⁸F标记脂肪酸通过线粒体氧化摄取，心肌放射性浓集速度可反映长链脂肪酸的氧化速率，目前已用于临床非创伤性地测定心肌底物利用状态，指导临床药物治疗。

发明内容

本发明的目的是提供一种脂肪酸代谢显像剂14(R，S)-氟[¹⁸F]-6-硫十七烷酸的纯化方法，对文献的合成方法进行改进。

本发明的技术方案

FTHA的合成方法

本发明参照文献(Degrado TR，et al，J.Labelled Comps andRadiopharmaceuticals，Vol.X X IX，No.9；989-995)制备标记前体14(R，S)-对甲苯磺酰基-6-硫-十七烷酸苄酯(FTHA-OTs)，再进行亲核置换标记反应，得到¹⁸F标记产物¹⁸F-FTHA。本发明在于氟标记产物¹⁸F-FTHA的纯化方法，上述文献的方法是将反应混合物用HPLC分离制备，得到产品，而本发明改进为标记结束后，采用1)酯水解后立即加入乙酸(50μl)和水(1ml)，倾去水溶液，用乙醇(0.5～1ml)，将吸附在反应管壁上的¹⁸F-FTHA冲洗下来，溶解转移至一洁净瓶中，得到产品，或2)加入KOH溶液，在90～95℃酯水解5min后，放冷，加入乙酸(50μl)，水(1ml)，反应混合物过预先用乙醇活化的Sep-Pak ¹⁸C柱，再用注射用水(10ml)冲洗，弃去冲洗液，用乙醇(2.5ml)将吸附在Sep-Pak ¹⁸C柱上的¹⁸F-FTHA溶解至一洁净瓶中，过0.22μm无菌滤膜，无需用HPLC分离制备。

所用试剂是以标记前体FTHA-OTs为3～10mg计，酯水解物溶解所需试剂乙酸50μl，水1ml，乙醇0.5～1ml；Sep-Pak ¹⁸C柱冲洗所用水10ml，乙醇2.5ml。

本发明的有益效果

亲核标记结束后，反应混合物不经过HPLC分离制备，而是1)酯水解后趁热加入水进行后处理，2)用Sep-Pak ¹⁸C柱进行分离制备，与文献相比，本发明采用的后处理方法不仅操作简单，耗时短，¹⁸F-FTHA的放射化学产额和程度也有所提高，而且经紫外和放射性检测，¹⁸F-FTHA和FTHA的保留时间一致。

附图说明

图1  ¹⁸F-FTHA和FTHA色谱图

具体实施方式

1、¹⁸F标记

由¹⁸O(p，n)¹⁸F反应生成的无载体¹⁸F^-(740～1850MBq)，富集在阴离子交换柱QMA上，用1ml K₂CO₃-K_2.2.2溶液将其淋洗至反应管中，在氮气流下于105℃油浴加热吹干，残余物继续用无水乙腈(3×1ml)共沸蒸干。加入14(R，S)-甲苯磺酰基-6-硫-十七烷酸苄酯(3～10mg)的乙腈溶液(1ml)，90～95℃油浴中反应20min。在上述反应管中加入氢氧化钾(0.2mol/L，0.5ml)，继续在90～95℃油浴中进行酯水解反应，反应5min后，a)立即加入乙酸(50μl)和水(1ml)，倾去水溶液，用乙醇(0.5～1ml)将吸附在反应管壁上的¹⁸F-FTHA溶解转移至一洁净的青霉素瓶中；b)反应混合物过Sep-Pak ¹⁸C柱(预先用乙醇活化)，再用水(10ml)冲洗，弃去冲洗液，用乙醇(2.5ml)将吸附在Sep-Pak ¹⁸C柱上的¹⁸F-FTHA溶解至一洁净的青霉素瓶中，过0.22μm无菌滤膜。

2、¹⁸F-FTHA注射液制备

注射前，将上述样品加至4～6％的HSA(或BSA)溶液中，于37℃孵育30min后，过0.22μm无菌滤膜即得。

3、RCP测定

TLC：将产品¹⁸F-FTHA点样于硅胶纸一端，以乙醚为展开剂上行展开，晾干后分段测量，计算RCP。¹⁸F-FTHA的R_f为0.9～1.0，游离¹⁸F-的R_f值为0.0。

HPLC：C-18反相柱(3.9×150mm)，流动相为85％乙腈，流速1.0ml/min。取产品¹⁸F-FTHA 10μl(计数约10K)进样，分别用放射性检测器和紫外检测器(λ＝210nm)测定¹⁸F-FTHA和FTHA，观察非标记FTHA的保留时间与标记物的放-射峰的保留时间是否一致，¹⁸F-FTHA的Rt为8.78min，游离¹⁸F^-的Rt值为3.42min，FTHA的Rt为8.00min。

4、¹⁸F-FTHA稳定性考察

将所得注射液在室温(25℃)下放置，分别于1h、2h和3h，测定标记物的RCP。

5、PC的测定

取标记物(RCP＞90％，5×10⁴cpm)分别加入正辛醇-磷酸盐缓冲液(0.1mo/LpH7.00和7.40)二相系统(V/V＝3/3)中，混匀，涡旋振荡3×1min后，4000转/分离心分离5min，于两管中分别取1ml正辛醇和1ml水溶液测计数，再取1ml正辛醇注入3.0ml磷酸盐缓冲液/2.0ml正辛醇二相系统中，如此重复多次，计算[cpm_{有机>/cpm水]的比值，直至恒定，PC＝1g[cpm有机相/cpm水]}

6、¹⁸F-FTHA体外血浆蛋白结合

将¹⁸F-FTHA(不加BSA，放射性计数5×10⁴cpm)，加至1ml人血清白蛋白(HSA，10g/L，pH7.40，PBS)中，分别于37℃孵育15s、30s、1min、3min、5min、10min、30min、1h、1.5h和2h后，加入10％的三氯醋酸1ml，离心20min(4000转/min，)，计算¹⁸F-FTHA的体外蛋白结合率。

7、¹⁸F-FTHA小鼠体内分布

昆明小鼠，体重20～22g，每组3只，共6组。尾静脉注入¹⁸F-FTHA溶液0.2ml(约3.7MBq)后，不同时间断头处死，取血、心、肝、脾、肺、肾和骨等脏器，称重，同时按注射剂量配制标准管，跟踪测量，计算各主要脏器的放射性占总注射剂量的百分比值(％ID/g湿组织)。

8、大鼠血药清除动力学

SD大鼠4只，从股静脉注入¹⁸F-FTHA注射液0.2ml(14.8MBq)，在注药后1min、3min、5min、8min、10min、15min、20min、30min、45min、60min、90min、120min和1 80min，从大鼠尾静脉取血20μl，用γ计数器测放射性，同时按注射剂量配制标准管，跟踪测量，计算并换算成％ID/ml血，作放射性活度---时间曲线。

9、异常毒性实验

昆明小鼠(18-20g)3只，尾静脉注入¹⁸F-FTHA注射液0.2ml(人用量的1/5)，常规饲养48小时，并由每公斤小鼠接受的量与每公斤人接受的最大量之比计算安全倍数。