携带新黄素裂解酶基因的转基因植物

摘要

本发明提供了一种编码用于改进植物逆境耐性的新黄素裂解酶的DNA,一种通过将所述DNA引进植物来增强植物逆境耐性的方法,和一种其中引进了新黄素裂解酶基因的转基因植物。本发明还提供了一种用于降低植物逆境耐性的DNA,一种通过将所述DNA引进植物来降低植物逆境耐性的方法,和一种其中引进了所述DNA的转基因植物。本发明能够产生一种其中逆境耐性增强或降低的植物。

说明书

本发明领域

本发明涉及一种用于增强或降低植物的逆境耐性的DNA，和一种该DNA的转基因植物。

本发明背景

由于不能自由移动，所以植物必须调节它们本身来适应各种逆境，例如，干旱、土壤中的盐和低温。在这些不利的环境因素中，干旱被认为对植物的生长影响最严重。为了在干旱的条件下生存，一些植物在进化过程中获得了一种生理学和/或形态学的特性，而其它许多植物也具有一种应答干旱逆境的机制来保护它们自己。植物中这些对于水短缺的应答和对于干旱环境的适应是由包括干旱条件下基因表达发生改变在内的各种生理变化引起的(Shinozaki，K和Yamaguchi-Shinozaki，K.，植物生理学(Plant physiol.)，115：327-334，1997；Shinozaki，K.和Yamaguchi-Shinozaki，K.，“针对干旱逆境的分子应答(Molecular responses to drought stress)”在Shinozaki，K和Yamaguchi-Shinozaki(编辑)的“高等植物中针对冷、热和盐等不利环境的分子应答(Molecular responses to cold，drought，heat and salt stress in higherplants)”中，R.G.LANDES company，Austin，Texas，USA，pp.11-28，1999)。例如，在拟南芥属(拟南芥)中，已知干旱信息是通过脱落酸(ABA)依赖途径和脱落酸(ABA)非依赖途径进行传递来调控与干旱耐受性有关的基因表达。这些基因产物被认为具有调控例如渗透保护剂如蔗糖和脯氨酸的积累、蛋白质的半衰期、逆境信号传导途径和转录的功能(Bray，E.A.，Trends inPlant科学，2：48-54，1997；Bohnert，H.J.等，植物细胞，7：1099-1111，1995；Ingram，J.和Bartels，D植物生理学和植物分子生物学年鉴(Annu.Rev.Plant Physiol.Plant Mol.Biol.)，47：377-403，1996；Shinozaki，K和Yamaguchi-Shinozaki，K.，植物生理学，115：327-334，1997；Shinozaki，K.和Yamaguchi-Shinozaki，K“针对干旱逆境的分子应答”在Shinozaki和Yamaguchi-Shinozaki(编辑)的高等植物中针对冷干旱、热和盐等不利环境的分子应答，R.G.LANDES company，Austin，Texas，USA，pp.11-28，1999)。

C40途径被认为是高等植物中的ABA的生物合成途径。该C40途径，亦称作类胡萝卜素途径，是通过玉米黄质的环氧化作用，合成堇菜黄素、新黄素、黄氧素、ABA醛(ABA aldehyde)，然后得到ABA(Zeevaart，J.A.D.和Creelman R.A.，39：439-473，1998)。这一生物合成途径是通过对ABA生物合成的突变体进行生理学研究和分析后提出的。例如，从烟草(Nicotianatabacum)中分离的突变体aba2在催化玉米黄质发生环氧化反应的玉米黄质环氧化酶的基因(aba2)上具有一个突变(Marin E等，EMBOJ.，15：2331-2342，1996)。从玉米分离的突变体vp14在催化由新黄素向黄氧素转化的新黄素裂解酶的基因(vp14)上具有一个突变(Tan，B.C.等，美国国家科学院院报，94：12235-12240，1997)。从拟南芥属植物中分离出了在催化由黄氧素转化为ABA醛的反应的酶中发生了突变的突变体aba3和氧化ABA醛生成ABA的反应中所涉及的突变体aba4(Schwartz，S.H.等，植物生理学，114：161-166，1997；Leon-Kloosterziel，K.M.等，植物学杂志(Plant J.)，10：655-661，1996)。

已知新黄素裂解酶基因(vp14)中发生了突变的玉米表现出易失水分和易枯萎的特性。然而，还不清楚使用新黄素裂解酶基因是否是可以改善植物的逆境耐性。

发明简述

本发明的目的是提供一种编码用于改进植物逆境耐性的新黄素裂解酶的DNA，一种通过将所述DNA引进植物来提高植物逆境耐性的方法，和一种其中引进了新黄素裂解酶基因的转基因植物。本发明的另一个目的是提供一种用于降低植物逆境耐性的DNA，一种通过将所述DNA引进植物来降低植物逆境耐性的方法，和一种其中引进了所述DNA的转基因植物。植物逆境耐性的改进，例如，在植物培育中非常有用。

通过示差筛选制备于豇豆植物(Vigna unguiculata)的cDNA文库，该豇豆植物经脱水处理10小时后表现出很强的干旱耐受性，本发明人分离到对应于应答干旱处理有关的基因的cDNA克隆(CPRD65)。预测CPRD65 cDNA能编码被认为与脱落酸(ABA)生物合成有关的新黄素裂解酶。施加于8天龄(8-day-old)豇豆植物的干旱逆境强烈地诱导了ABA的积累和CPRD65的表达，表明CPRD65基因的密切相关性，尤其在应答干旱逆境方面。采用GST-CPRD65融合蛋白对酶活性的测定证实了CPRD65具有将9-顺式-新黄素裂解为黄氧素的活性。这些结果表明，CPRD65基因编码新黄素裂解酶并且其产物在干旱逆境下生物合成内源ABA的过程中起着关键性的作用。

尤其，通过以分离于豇豆植物的CPRD65基因的cDNA为探针从源自于拟南芥属植物的cDNA文库中筛选新黄素裂解酶基因，本发明人分离到了一种新型基因(AtNCED3)。另外，鉴定了从拟南芥属植物得到的与这些基因具有高度同源性的四种序列(AtNCED1，2，4和5)。这些基因在大肠杆菌(E.coli)中的表达和新黄素裂解活性的分析表明AtNCED1，3和5具有与CPRD65相同的的新黄素裂解酶活性。

本发明人采用AtNCED3，一种新黄素裂解酶基因，首次制备出一种拟南芥属的转基因植物。AtNCED3基因被连接到一个载体中的35S启动子的下游，并且通过真空渗入法将载体引进拟南芥属，所述载体用于以有义(一种过表达类型)或反义(一种表达抑制类型)方向将基因引进植物细胞(pBE2113N)。对所制备的转基因植物的干旱耐受性进行的评价表明过表达植物与它们的亲本株系比较，其逆境耐性有了显著的提高。相反，引进了反义的表达-抑制株系，其逆境耐受性降低了(图15和16)。以这种方式，本发明人发现，实际上引进了新黄素裂解酶基因的转基因植物显著地增强了逆境耐性并且通过降低所述基因的表达显著地降低逆境耐性来完成本发明。

特别是，本发明涉及一种编码用于改进植物逆境耐性的新黄素裂解酶的DNA，一种通过将所述DNA引进植物来提高植物逆境耐性的方法，和引进了新黄素裂解酶基因的转基因植物，还涉及一种用于降低植物逆境耐性的DNA，一种通过将所述DNA引进植物来降低植物逆境耐性的方法，和引进了所述DNA的转基因植物，更具体地说，本发明提供了：

(1)一种分离到的DNA，该DNA编码具有用于改进植物逆境耐性的新黄素裂解活性的蛋白质，

(2)一种分离的用于降低植物逆境耐性的DNA，其中所述DNA选自以下一组DNA：

(a)一种编码反义RNA的DNA，所述反义RNA与具有新黄素裂解活性的蛋白质的编码基因转录物互补；

(b)一种编码具有核酶活性的RNA的DNA，所述核酶裂解具有新黄素裂解活性的蛋白质的编码基因转录物；和

(c)一种编码RNA的DNA，所述RNA在植物细胞中通过共抑制效应抑制编码具有新黄素裂解活性的蛋白质的基因表达，

(3)(1)或(2)的DNA，其中具有新黄素裂解活性的蛋白选自下列一组蛋白质：

(a)具有SEQ ID NOS：2(AtNCED1)、6(AtNCED3)、10(AtNCED5)、12(CPRD65)、14(VP14)或16(LeNCED1)所示氨基酸序列的蛋白质，

(b)具有SEQ ID NOS：2(AtNCED1)、6(AtNCED3)、10(AtNCED5)、12(CPRD65)、14(VP14)或16(LeNCED1)所示序列中的一个或多个氨基酸发生了置换、缺失、添加，和/或插入的氨基酸序列的蛋白质，和

(c)在严格条件下由与具有SEQ ID NOS：1(AtNCED1)、5(AtNCED3)、9(AtNCED5)、11(CPRD65)、13(VP14)或15(LeNCED1)所示核苷酸序列的DNA杂交的DNA编码的蛋白质，

(4)(1)至(3)中的任意一种DNA，其中具有新黄素裂解活性的所述蛋白质源自于拟南芥属植物，

(5)一种携带(1)至(4)中任意一项的DNA的转化植物细胞，

(6)含有(5)中所述的转化植物细胞的转基因植物，

(7)(6)中所述的转基因植物的子代或克隆的转基因植物，

(8)(6)或(7)中所述的转基因植物，其中具有新黄素裂解活性的蛋白质的编码基因表达与其野生型相比被增强或降低了，

(9)(6)至(8)中的任意一种转基因植物，其中脱落酸的量与其野生型相比增加或减少了，

(10)(6)至(9)中任意一种转基因植物，其中与其野生型相比逆境耐性被提高或降低了，

(11)一种(6)至(10)中的任意一种转基因植物的繁殖材料，

(12)含有(1)至(4)中的任意一种DNA的载体，

(13)一种用于生产(6)至(10)中的任意一种转基因植物的方法，包括步骤：将(1)至(4)中的任意一种DNA引进植物细胞中并由所述植物细胞再生植物，

(14)一种用于增强或降低植物的逆境耐性的方法，包括(1)至(4)中的任意一种DNA在植物细胞中的表达，

(15)(1)中所述的DNA用于改进植物逆境耐性的用途，和

(16)(2)中所述的DNA用于降低植物逆境耐性的用途。

本发明中，“逆境耐性”是指抵抗环境逆境的耐性，例如，干旱逆境耐性、盐逆境耐性、低温逆境耐性、空气污染逆境耐性、对于低氧条件的耐性、病原体耐性、药物如那些农用化学品耐性等。已知利用ABA进行外源处理能改进多种植物抵抗这些逆境的耐性(参考Takahashi，N.和Masuda，Y(编辑)，“植物激素手册(Plant Hormone Handbook)(The Last)，”Baifukan，日本，pp.78-160；以及其中引用的参考文献)。

附图简述

图1表示经脱水或再水化作用的CPRD65基因表达的Northern印迹分析。由进行了0、1、2、4、6、8、10和12小时的脱水或脱水10小时后又进行了0、1、2、5、10和24小时的再水化作用的生长了8天(8-day-old)的豇豆植物制备总RNA。在每一电泳泳道上加上10μg的总RNA。将所述RNA在1％的琼脂糖凝胶中分级分离后，再印迹到尼龙膜上，并采用CPRD65克隆的[³²P]-标记的cDNA插入片段进行探测。

图2表示CPRD65，VP14(玉米中的新黄素裂解酶，Schwartz，S.H.等，科学，276：1872-1874，1997)和LeNCED1蛋白，番茄(Lycopersicon esculentum)中的新黄素裂解酶，Burbidge，A.等，实验植物学杂志47：2111-2112，1997；Burbidge，A.等，植物杂志17：427-431，1999)的推测氨基酸序列的比较。虚线条表示为了优化排列顺序所引进的缺口。封闭框表示相同的氨基酸。阴影区域表示相似的氨基酸。

图3表示对源自于豇豆植物2246栽种品种的基因组DNA进行的SOUTHERN印迹分析。用EcoRI(E)、HindIII(H)和XbaI(X)消化基因组DNA(每泳道10μg)，在1％的琼脂糖凝胶中分级分离后，再转移到尼龙膜上使该膜与CPRD65 cDNA的[³²P]-标记的片段进行杂交。“A”和“B”代表杂交条件的不同严格程度(参考实施例)。DNA片段的大小标记以kbp表示。

图4(A)表示通过高盐度(NaCl)、高温(加热)、低温(致冷)和使用脱落酸(ABA)对CPRD65基因进行诱导的Northern印迹分析。在指定时间处理后从豇豆植物中分离总RNA。每一泳道加上10μg的总RNA。每一泳道上端的数字表示处理持续的时间(小时)。

图4(B)表示没有经过或经过10小时脱水处理的CPRD65基因的Northern印迹分析。将从豇豆2246栽种品种的叶子(L)、茎(S)和根(R)中分离的总RNA各10μg加到每一泳道上。将所述RNA在1％的琼脂糖凝胶中分级分离后，再印迹到尼龙膜上，并采用CPRD65的[³²P]-标记的cDNA插入片段进行探测。

图5表示GST(A)或GST-CPRD65重组蛋白(B)的类胡萝卜素代谢产物的HPLC峰图。反应混合物含有作为底物的顺式-新黄素。cN；顺式-新黄素，C25；C25-产物。

图6表示原生质体中的CPRD65N-sGFP嵌合蛋白质的质体导向。利用聚乙二醇(PGE)将携带有35S-sGFP(A、C、E)或35S-CPRD65N-sGFP嵌合构建体(B、D、F)的构建体转染到拟南芥的原生质体中。通过光学显微镜检(A，B)或带有绿色(E、F)或红色(C、D)滤光片的荧光显微镜检观察转染的原生质体。E和F表示GFP的定位，C和D表示叶绿体。

图7表示脱水期间ABA的积累与CPRD65的基因表达之间的关系。滞留在图1尼龙膜上的放射性如下所示定量和作图。ABA的定量方法如实施例所述。误差线表示标准误差。实验重复三次。

图8表示器官分离后脱水处理期间豇豆植物的叶(L)、茎(S)和根(R)中的内源ABA的积累。ABA的定量方法与实施例7中所述的相同(图7)。

图9表示AtNCED3和CPRD65的推测氨基酸序列之间的比较。虚线条表示为了优化排列顺序所引进的缺口。封闭框表示相同的氨基酸。阴影区域表示相似的氨基酸。

图10表示AtNCED1、2、3、4和5的氨基酸序列的排列顺序。虚线条表示为了优化排列顺序所引进的缺口。封闭框表示相同的氨基酸。阴影区域表示相似的氨基酸。

图11表示测定AtNCED1、2、3、4、5和CPRD65的氨基酸序列之间关系的种系发生(phylogenic)分析的结果，以及数据库中与它们有关的序列。LeNCED1(登记号Z97215)和VP14(登记号U95953)分别表示从番茄和玉米中分离的蛋白。

图12表示AtNCED基因在每一种逆境中的表达。

图13表示AtNCED3基因在AtNCED3-转化体中的表达。上面和下面的图分别表示AtNCED3基因在进行干旱逆境处理前和干旱逆境处理后的植物中的表达。表达有义AtNCED3基因(过表达)(A和B)的植物和表达反义AtNCED3基因(表达抑制)(C和D)的植物均使用两例植株。

图14表示AtNCED3-转化体中的内源ABA量。与野生型植物相比，表达有义AtNCED3基因(过表达)(A和B)的植物中的内源ABA量增大，而表达反义AtNCED3基因(表达抑制)(C和D)的植物中的内源ABA量减小。

图15表示新黄素裂解酶转基因植物的干旱耐性的测试结果，表明结束灌溉后14天的植物和叶子中的相对含水量。

图16表示新黄素裂解酶转基因植物的干旱耐性的测试结果，表明结束灌溉后17天的植物。

发明详述

本发明涉及一种分离的DNA，该DNA编码具有用于改进逆境耐性的新黄素裂解活性的蛋白。已知新黄素裂解酶是一种与ABA生物合成有关的酶，然而，还没有证实在对植物的生长没有产生严重的影响条件下植物中引进编码这种酶的DNA是否确实导致了ABA的积累并改进了抵抗逆境的耐受性。

采用ABA进行的外源处理引起，例如，许多植物的生长抑制。已知在种籽中ABA也导致生长抑制(发芽的抑制)(参考Takahashi，N.和Masuda，Y(编)，“植物激素手册(The Last)，”Baifukan，日本，78-160页；以及其中引用的参考文献)。ABA含量的增加给植物带来了各种损伤。还没有报导通过外源基因造成ABA产生过量是否能导致逆境耐性的获得。采用ABA进行外源处理的传统实验方法需要高浓度的处理，其强烈地抑制了生长并妨碍了对耐性的精确测量。而且，外源性处理的实验没有确定出保证正常生长和获得耐性的合适ABA浓度。通过获得ABA生物合成基因和采用该基因来制备转基因植物，本发明人首次证实了植物的逆境耐性可以得到改进。

一种“分离DNA”是这样一种DNA，其结构不同于任何天然DNA结构或包括三个以上独立基因的天然基因组DNA片段的结构。因此该术语包括，例如，(a)一种具有天然存在于生物体基因组中的部分天然基因组DNA分子的序列的DNA；(b)结合到载体或原核或真核的基因组DNA上以致于所得分子不同于任何天然载体或基因组DNA的DNA；(c)分离的分子如cDNA、基因组片段、通过多聚酶链反应(PCR)制备的片段或限制性酶切片段；和(d)为杂交基因一部分的重组核苷酸序列，即编码融合蛋白的基因。特别是，除了这一定义以外，由不同的(i)DNA分子、(ii)转染细胞或(iii)细胞克隆，例如，源自于DNA文库如cDNA或基因组DNA文库的那些克隆所组成的混合物中存在的DNA分子。

作为用于增强逆境耐性的分离DNA，任何基因只要其编码具有新黄素裂解活性的蛋白，都能被使用。例如，玉米的VP14(Zea mays)(Schwartz，S.H.等，科学，276：1872-1874，1997；Tan，B.V.等，美国国家科学院院报，94：12235-12240，1997)(cDNA：SEQ ID NO：13，蛋白质：SEQ ID NO：14)，番茄(Lycopersicon esculentum)的LeNCED 1(Burbidge，A.等，实验植物学杂志(J.Exp.Bot.)，47：2111-2112，1997；  Burbidge，A.等，植物学杂志(Plant J.)17：427-431，1999)(cDNA：SEQ ID NO：15，蛋白质：SEQ ID NO：16)，将它们分离出来作为新黄素裂解酶基因。这些基因对改进逆境耐性有用并能用于本发明。另外，可以方便地使用编码AtNCED1(SEQ ID NO：2)、AtNCED3(SEQID NO：6)、AtNCED5(SEQ ID NO：10)和CPRD65(SEQ ID NO：12)的DNA(分别是SEQ ID Nos：1、5、9和11)。尤其是，编码SEQ ID NO：18所示的新黄素裂解酶的DNA(cDNA：SEQ ID NO：17，蛋白质：SEQ ID NO：18)(Neill，S.J.等，实验植物学杂志49：1893-1894，1998，登记号AJ005813)也可用于本发明。编码具有新黄素裂解活性的蛋白质的DNA还可用作增强逆境耐性的试剂(逆境耐性增强剂)。本发明还提供了编码具有新黄素裂解活性的蛋白质的DNA用于增强逆境耐性的用途。

本发明的编码具有新黄素裂解活性的蛋白质的DNA包括基因组DNA、cDNA和化学合成DNA。基因组DNA和cDNA通过本领域技术人员公知的方法来制备。基因组DNA可通过，例如，按照常规方法从植物中提取基因组DNA来制备，包括制备基因组文库(其中，作为载体，例如使用质粒、噬菌体、粘粒和BAC)，以本发明所述DNA(例如，SEQ ID Nos：1，5，9，11，13，15等)作为探针来进行菌落杂交或噬菌斑杂交。或者，也可通过采用特异于本发明DNA(例如，SEQ ID Nos：1，5，9，11，13，15等)的引物进行PCR反应来制备基因组DNA。根据从植物中提取出来的mRNA合成cDNA来制备cDNA，将该cDNA插入到载体如λ噬菌体上来制备和形成cDNA文库，并以与上述相同的方式进行菌落杂交或噬菌斑杂交，或进行PCR反应。本发明的DNA不仅包括SEQ ID Nos：1，5，9，11，13和15的DNA序列，而且还包括一种DNA，该DNA含有以编码每种蛋白质的氨基酸的密码简并性可选择的核苷酸序列。

本发明的DNA还包括，例如，编码一种蛋白质的DNA，该蛋白质含有SEQ ID Nos：2，6，10，12，14或16中的一个或多个氨基酸发生了置换、丢失、增加、和/或插入的氨基酸序列，并且该蛋白质具有新黄素裂解活性。因此，本发明的DNA包括SEQ ID Nos：1，5，9，11，13或15的突变体、衍生物、等位基因、变异体和同系物，一种从天然植物中衍生的基因。

由本发明的DNA编码的修饰蛋白含有的氨基酸序列至少70％(例如，80％、90％、95％或99％)与SEQ ID Nos：2，6，10，12，14或16相同。如本文使用的，两个氨基酸序列或两个核苷酸的“同一性百分率”是利用在Karlin和Altschul(美国国家科学院院报90：5873-5877，1993)中修正的Karlin和Altschul算法(美国国家科学院院报，87：2264-2268，1990)来确定的。这一算法被编入Altschul等的NBLAST和XBLAST程序(分子生物学杂志215：403-410，1990)中。利用NBLAST程序，比数＝100，字长＝12来进行BLAST核苷酸的搜索。利用XBLAST程序，比数＝50，字长＝3来进行BLAST蛋白的搜索。当两个序列之间存在缺口时，按照Altschul等中的描述使用缺口BLAST(核酸研究25：3389-3402，1997)。使用BLAST和缺口BLAST程序(例如，XBLAST和NBLAST)时，使用了每个程序的缺省参数。见http：//www.ncbi.nlm.nih.gov。

SEQ ID Nos：2，6，10，12，14或16中一个或多个氨基酸被置换了的修饰蛋白优选地通过至少一个保守氨基酸的置换来制备。“保守氨基酸的置换”是指下组中与同组另一氨基酸有化学相似性侧链的氨基酸残基的置换。具有相似侧链的氨基酸残基组在本技术领域中已被定义。这些组包括具有碱性侧链的氨基酸(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸)，具有酸性侧链的氨基酸(例如，天冬氨酸、谷氨酸)，具有不带电极性侧链的氨基酸(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)，具有非极性侧链的氨基酸(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、色氨酸)，具有β-枝链侧链的氨基酸(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和具有芳族侧链的氨基酸(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。

制备这种编码具有修饰氨基酸序列的蛋白质的DNA的方法实例是本技术领域的技术人员熟知的，即利用PCR进行的体外诱变(Izawa，T.，“体外PCR诱变”在Shimamoto，K.和Sasaki，T.(主管s)，细胞技术，增刊，植物细胞技术系列VII，植物PCR实验方案，新版，151-158页，Shujunsha，日本)。在人工修饰的情况下，蛋白质中的氨基酸修饰通常在200个氨基酸的范围内，优选地在100个氨基酸的范围内，更优选地在50个氨基酸的范围内，进一步更优选地在10个氨基酸的范围内。由于核苷酸编码序列的修饰而导致的蛋白质的氨基酸修饰可以自然发生。编码野生型新霉素裂解酶的氨基酸序列中有一或多个氨基酸发生置换、丢失、加入、和/或插入，这样的编码DNA也包括在本发明中，只要其编码具有新黄素裂解活性的蛋白质。本发明的DNA还包括简并变异体，该简并变异体的核苷酸序列中的一个突变不导致蛋白质的氨基酸发生突变。

给定的DNA是否编码新黄素裂解酶可通过在大肠杆菌中表达该DNA来制备重组蛋白并按照以下实施例5，以顺式-新黄素为底物检测裂解活性来确定。

在编码已知新黄素裂解酶的DNA基础上，可分离到一种新型新黄素裂解酶基因。本技术领域的技术人员熟知的用于实现这一目的的方法实例是利用杂交技术的方法(Maniatis，T等，1982，分子克隆：实验室指南，冷泉港，纽约，冷泉港实验室出版社)和聚合酶链反应(PCR)技术的方法(Nakayama，H.，细胞技术，增刊，生物学实验举例(Biological ExperimentIllustrated)，卷3，新版，Shujunsha，1998)。特别是，本技术领域的技术人员可通过以已知新黄素裂解酶基因的核苷酸序列(例如，SEQ ID Nos：1，5，9，11，13，15等)或其部分序列为探针，并以与这些序列特异杂交的寡聚核苷酸为引物来从任何植物中常规地分离编码新黄素裂解酶基因的DNA。本发明中用于改进逆境耐性的DNA也包括能够通过这种杂交技术或PCR技术分离的编码新黄素裂解酶的DNA。

按照例如参考文献中的方法(Sambrook，J.等，分子克隆：实验室指南，第二版，冷泉港实验室出版社，冷泉港，NY，1989)，以随机引物法制备的[³²P]-标记的DNA为探针，在严格条件下进行杂交。将SOUTHERN印迹到尼龙膜上并与[³²P]-标记的片段，在例如含有30％，优选50％的甲酰胺、6XSSC、5X Denhardt溶液和100μg/ml变性鲑精DNA的杂交溶液中，于37℃，优选42℃下进行杂交。在严格条件下，例如在1X SSC、0.1％SDS(室温)中洗涤15分钟、两次，优选(更严格地)在0.5X SSC、0.5％SDS(37℃)中洗涤15分钟、两次，更优选(更严格地)在0.1X SSC、0.1％SDS(60℃)中洗涤15分钟、两次，并进行放射自显影。“严格条件下的杂交”指在上述条件下利用碱基配对与固相参照核苷酸的特异性和非共价平衡结合。

为了使用这些DNA来制备逆境耐性得到改进的转基因植物，将所述DNA插入到合适的载体，并将该载体导入植物细胞，然后由转化的植物细胞再生为转基因植物。

任何能在植物细胞中表达插入基因的载体都可用作转化该细胞的载体。例如，可使用含有在植物细胞中稳定表达基因所需之启动子(例如，花椰菜花叶病毒的35S启动子)的载体和含有经外源刺激能激活的启动子的载体。或者，通过采用特异于植物组织的启动子诱导目的基因的表达，可专为对逆境高度敏感的组织提供逆境耐性。例如，利用特异性表达于种子中的基因的启动子，如菜豆的B-菜豆碱基因启动子(Bustos等，欧洲分子生物学组织杂志，10：1469-1479，1991)和大豆的大豆球蛋白基因启动子(Lelievre等，植物生理学，98：387-391，1992)，特异性表达于叶子中的基因的启动子，如豌豆的RbcS基因的启动子，(Lam和Chua，科学，248：471-474，1990)和小麦的Cab1基因的启动子(GotoRN等，植物志3：509-518，1993)，特异性表达于根中的基因的启动子，例如番茄的TobRB7基因的启动子(Yamamoto等，植物细胞，3：371-382，1991)等，可在组织中特异性表达目的基因。或者，可以使用具有由外源刺激物诱导激活的启动子的载体。一个响应环境逆境如干旱、盐或低温的启动子的实例是rd29A基因的启动子(Yamaguchi-Shinozaki，K.和Shinozaki，K.，植物细胞，6：251-264，1994)。本发明还优选地使用通过环境逆境如干旱和高盐浓度激活的启动子。这些启动子实例是下列基因的启动子：拟南芥属AtNCED3基因、豇豆CPRD65基因等。尤其是，通过使用由药物诱导的表达系统，目的基因可以在合适的时间和合适的组织中表达。由类固醇激素(糖皮质激素)诱导的表达系统的实例是利用GVG基因(GAL4，VP16，糖皮质激素受体)的诱导系统(Aoyama T.和Chua，N.H.，植物杂志，11：605-12，1997)。

载体可被插入到任何植物细胞中，例如，拟南芥(Arabidopsis thaliana)，水稻(Oriza sativa)，烟草(Nicotiana tabacum)，番茄(Lycopersicon esculentum)，土豆(Solanum tuberosum)，玉米(Zea mays)，鸟的脚三叶(birds’foottrefoil)(Lotus japonicus)等。也可使用其它的作物或树。植物可以是针叶树，阔叶树，双子叶植物，单子叶植物等。本文所用的“植物细胞”包括不同形式的植物细胞，例如，悬浮培养细胞，原生质体，叶子切片，愈伤组织等。

为了将载体引入植物细胞中，采用了本技术领域的技术人员已知的方法，例如，聚乙二醇方法，电穿孔方法，农杆菌属方法，真空渗入方法，粒子枪方法等。可采用本领域技术人员已知的方法根据植物细胞的类型从转基因植物细胞再生出植物。例如，水稻，拟南芥属等的转化体能够按照“Simamoto，K.，Okada K.(主管)，细胞技术，增刊，植物细胞技术系列4，模型植物实验方案，Shujunsha，Japan.”中描述的方法来制备。

一旦获得了其基因组中引进了本发明的DNA的转基因植物，可通过该植物的有性或无性繁殖得到子代。或者，由植物、它的子代或克隆得到繁殖材料(例如，种籽、果实、接穗、块茎、有块茎的根、茎干、愈伤组织、原生质体等)，并且可以由它们大量制备植物。本发明包括其中引进了本发明的DNA的植物细胞，含有该细胞的植物，该植物的子代或克隆，以及该植物、它的子代和克隆的繁殖材料。

与相应野生型植物比较，以这种方式制备的转化植物具有增加的ABA含量。或者，与相应野生型植物比较，以这种方式制备的转化植物具有改进的逆境耐性。逆境耐性可通过已知的方法进行比较。例如，如下面实施例所描述的，植物生长在逆境条件下，如干旱、高盐、低温或炎热的条件下，并且比较个体的生长情况。例如，通过测定表观、植物大小或组织如叶子、茎和根的大小、重量(湿重或干重)、颜色、相对生长速率、光合活性等作为指标来进行比较。逆境耐性可在植物的至少一种组织中得到增强。植物中的ABA含量通过例如免疫分析、薄层层析(TLC)、气相色谱(GC)和HPLC(参考Takahashi，N.和Masuda，Y(eds)，“植物激素手册(最后一版)，”Baifukan，日本，pp.1-21；以及其中引用的参考文献)来测定。例如，如实施例7所描述的，以标记的ABA作为内标，通过HPLC和GC/MS可最终可靠地定量初制的纯化级分。

通过本发明，一种有价值的作物能够生长在受环境逆境影响的地区，例如，干旱地区、寒冷地区或盐浓度高的地区。另外，本发明可使除作物以外的植物在植物栽培环境中。

本发明还涉及一种DNA，该DNA能够降低具有新黄素裂解活性的蛋白质的编码基因的表达水平，所述蛋白质用于降低逆境耐性。所述DNA也可用作降低逆境耐性的试剂(逆境耐性降低试剂)。本发明还提供了一种DNA的用途，该DNA能够降低具有新黄素裂解活性的蛋白质的编码基因的表达水平，所述蛋白质用于降低逆境耐性。

通过施用于杂草等，降低了逆境耐性的植物有利于从环境中除掉杂草等。例如，制备能够引起逆境耐性降低的植物来改善土地等。对于再生能力强的植物，例如杂草，在其由化学试剂(例如，糖皮质激素等)诱导的启动子的下游引进一个抑制新黄素裂解酶基因表达(例如，以反义方向)的构建体。这一转化的植物在没有使用化学试剂的条件下就能正常生长。将这种转化种子种植几年，喷洒糖皮质激素以便通过特异性降低杂草的逆境耐性而迅速除去杂草，并种植一种作物可改善干旱的土地。就作物而言，可种植能过表达新黄素裂解酶的转化作物(该植物中以有义方向引进了此酶的DNA)。

本发明首先成功地制备了一种转化植物，通过采用表达新黄素裂解酶基因的反义RNA的基因构建体，该转化植物中新黄素裂解酶的表达被人为地抑制了。与其野生型比较，该植物在非灌溉条件下容易枯萎，表明其逆境耐性降低(图15和16)。以这种方式，本发明建立了一种人工抑制具有新黄素裂解活性的蛋白质的编码基因表达并因此成功地降低植物逆境耐性的方法。

本发明中，为了降低植物逆境耐性，可降低具有新黄素裂解活性之蛋白质的编码基因的表达。本文中基因“表达”包括基因的转录和转录物的翻译。表达的抑制包括表达的完全终止。为了抑制具有新黄素裂解活性的蛋白质的编码基因的转录和翻译，可通过抑制编码该基因的DNA、其转录控制区域、或其转录物来抑制该基因的表达。

任何植物可被用于本发明，因此可使用各种植物。例如，可以使用拟南芥属等。具有新黄素裂解活性的蛋白质的编码基因并可作为抑制表达的靶子的实例是玉米的VP14(Zea mays)，(Schwartz，S.H.等，科学276：1872-1874，1997；Tan，B.V.等，美国国家科学院院报94：12235-12240，1997)(cDNA：SEQ ID NO：13，蛋白质：SEQ ID NO：14)，番茄的LeNCED1(Lycopersicon esculentum)(Burbidge，A.等，实验植物学杂志47：2111-2112，1997；Burbidge，A.等，植物杂志17：427-431，1999)(cDNA：SEQ ID NO：15，蛋白质：SEQ ID NO：16)，AtNCED1(cDNA：SEQ ID NO：1，蛋白质：SEQ IDNO：2)，AtNCED 3(cDNA：SEQ ID NO：5，蛋白质：SEQ ID NO：6)，和/或拟南芥属的AtNCED 5(cDNA：SEQ ID NO：9，蛋白质：SEQ ID NO：10)，豇豆的CPRD65(cDNA：SEQ ID NO：11，蛋白质：SEQ ID NO：12)等。来自其它植物的同源基因也可以是一靶子。通过例如上文描述的杂交方法等可以鉴别和/或分离其它植物的同源基因。为了降低本发明中给定的植物的逆境耐性，可利用另一植物品种的基因或基因序列信息(例如，上述基因)，通过已知方法例如基因沉默和反义方法来抑制所需植物的靶基因的表达。因此，不需要分离也不需要鉴别目的植物的靶基因。

通过将抑制基因表达的DNA插入到合适的载体上，将该载体引入植物细胞中，由得到的转化细胞再生转基因植物能够抑制本发明中具有新黄素裂解活性的蛋白质的编码基因的表达。可以使用任何启动子，例如上述用于改进逆境耐性的启动子。例如，使用表达诱导型启动子只需在一种特定条件下就能降低逆境耐性。

作为抑制植物的特定内源基因表达的方法，本技术领域的技术人员最常使用的方法是反义技术。

反义方法是一种人工基因表达抑制方法，该方法中由靶mRNA与指定基因所转录的RNA的互补DNA分子(反义核酸)形成双链以抑制表达。1960年至1970年间建立了反义法抑制基因表达的方法，在1978年，Zamecnik等利用反义寡聚体成功地抑制了小鸡劳斯肉瘤病毒的复制和反转录酶的活性(Zamecnik，P.C.和Stephenson，M.L.，美国国家科学院院报，75：280-284，1978)。

在用于引入反义DNA的方法中，将反义寡聚体直接引入细胞中，或通过将靶基因的反义DNA连结到表达载体上进行转化。下面给出的实施例对后一方法做出了说明。具体是，将具有新黄素裂解活性的蛋白质的编码基因的cDNA以反义方向连接到花椰菜花叶病毒的35S启动子下游以便将载体引进植物细胞。采用过渡基因表达方法，Ecker等通过显示植物中以电穿孔方法引进的反义RNA的反义效应首次说明了植物细胞的反义效应(Ecker，J.R.和Davis，R.W.，美国国家科学院院报，83：5372，1986)。此后，报道了烟草和矮牵牛植物中反义RNA的表达对靶基因表达的抑制(van derKrol，A.R.等，自然，333：866，1988)。目前，反义方法被作为抑制植物中靶基因表达的好方法。用反义核酸抑制靶基因表达的模式包括通过三链的形成对转录起始产生的抑制，通过杂合体的形成对转录产生的抑制，所述杂合体含有由RNA聚合酶局部作用产生一个开环结构的位点，通过发生了合成的RNA杂合体的形成对剪接产生的抑制，通过与剪接体形成位点形成杂合体对剪接产生的抑制，通过与mRNA形成杂合体对由胞核到胞质的转移产生的抑制，通过与带帽位点或Poly(A)加入位点形成杂合体对剪接产生的抑制，通过与翻译起始因子结合位点形成杂合体对翻译的起始产生的抑制，通过与起始密码子侧翼的核糖体结合位点形成杂合体对翻译产生的抑制，通过与mRNA编码区域或多核糖体结合位点形成杂合体对肽链延伸产生的抑制，通过与核酸和蛋白之间的相互作用位点形成杂合体对基因表达的抑制等。这些抑制了转录、剪接或翻译过程，从而抑制了靶基因的表达(Hirajima和Inoue，“生物化学新实验2，核酸IV，基因的复制和表达”，日本生物化学会(编)，Tokyo-Kagakudojin，pp.319-347，1993)。

反义DNA的序列优选地是待转化的植物中与编码具有新黄素裂解活性的蛋白质的内源基因的转录物或其部分互补的序列，但是只要能够有效抑制基因的表达，但没有必要完全互补。转录RNA与靶基因的转录物优选地具有90％或更高的互补性，最优选地具有95％或更高的互补性。为了有效抑制使用反义序列的靶基因的表达，反义DNA的长度至少是15个或更多的核苷酸，优选地是100或更多的核苷酸，，更优选地是500或更多的核苷酸。通常，所使用的反义DNA短于5kb，优选地短于2.5kb。

采用编码核酶的DNA还能够抑制内源基因的表达。最近，对采用编码核酶的DNA来抑制基因的表达进行了研究。核酶是一种具有催化体内反应活性的RNA。核酶具有各种活性。针对核酶作为一种切割RNA的酶的研究使得设计一种用于在特异位点切割RNA的核酶成为可能。核酶包括I组内含子，有400或更多个核苷酸的大分子如包含在RnaseP中的M1RNA，和那些被称作锤头型和发夹型的核酶，其含有40个核苷酸长的活性结构域(Koizumi，M.，和Otsuka，E.，蛋白质，核酸和酶，35：2191，1990)。

例如，锤头型核酶的自切割结构域消化G13U14C15中的C15的3’位点。U14与第9位A之间碱基对的形成被认为对该活性非常重要，如果第15位核苷酸是A或U或C，那么也能被消化(Koizumi，M.等，FEBS Lett.，228：225，1988)。如果核酶的底物结合位点被涉设计成能与靶位点侧翼的RNA序列互补，那么就产生了一种能够识别靶RNA中的UC，UU，或UA序列的限制酶样核酶(Koizumi，M.等，FEBS Lett.，239：285，1988；Koizumi，M.，Otuska E.，蛋白质，核酸和酶，35：2191，1990；Koizumi，M.等，核酸研究，17：7059，1989)。例如，拟南芥属的AtNCED3基因的编码区存在上百个这样的位点。例如在烟草环斑病毒中的卫星RNA的负链中发现了发夹型核酶(Buzayan，J.M.，自然，323：349，1986)。也显示该核酶能够被设计用来特异地切割靶RNA(Kikuchi，Y.和Sasaki，N.，核酸研究，19：6751，1992；Kikuchi，H.，化学和生物学，30：112，1992)。

为了能在植物细胞中进行转录，将用于切割靶而设计的核酶与启动子例如花椰菜花叶病毒的35S启动子和转录终止序列连接。在转录RNA的5’端和3’端加入额外序列，就可以消除核酶的活性。在这种情况下，为了只从含有核酶的转录RNA上准确切除核酶部分，可以放置另一种在核酶部分的5端和3’端进行顺式剪切的剪切核酶(Taira，K.等，蛋白质工程，3：733，1990；Dzianott，A.M.和Bujarski，J.J.，美国国家科学院院报.，86：4823，1989；Grosshans，C.A和Cech，R.T.，核酸研究，19：3875，1991；Taira，K.等，核酸研究，19：5125，1991)。另外，为了提高效率，将这一结构单元串联排列以切割靶基因中的多个位点(Yuyama，N.等，Biochem.Biophys.Res.Commun.，186：1271，1992)。可通过采用这类核酶来切割本发明的靶基因转录物，从而抑制其表达。优选特异地切割靶基因的转录物的核酶。可通过采用这类核酶来特异切割本发明的靶基因转录物以抑制其表达。

通过引进含有与靶基因序列相同或相似的序列的DNA而产生的共抑制也可抑制内源基因的表达。“共抑制”是指这样一种现象，其中通过转化将与内源靶基因序列相同或相似的基因引进植物来同时抑制引进的外源基因和内源靶基因的表达。还不清楚共抑制的详细机制，然而，在植物中却能经常观察到共抑制。(Curr.Biol.，7：R793，1997；Curr.Biol.，6：810，1996)。例如，通过制备含有具有新黄素裂解活性的蛋白质的编码基因或相似序列的载体DNA，用该载体转化目的植物，并以其中具有新黄素裂解活性的蛋白质的编码基因的表达降低这一特性对获得的植物中进行筛选以便获得其中具有新黄素裂解活性的蛋白质的编码基因的表达受到共抑制的植物。

尽管用于共抑制的基因不需要与靶基因完全相同，但是通常应具有至少70％或更高，优选地80％或更高，更优选地90％或更高的同一性。Genetyx(Software Development)，一种基因信息处理软件能被用于测定同一性或互补性。这一程序采用了Lipman-Pearson方法(Lipman，D.J.和Pearson，W.R.，科学，227：1435-1441，1985)。这个方法首先比较序列数据，并计算具有高度同源性的序列之间的同一性，其中考虑了序列的缺失(GAP)。

通过采用用于本发明的上述抑制基因表达的DNA可以制备逆境耐性降低了的转化植物。具体是，通过将该DNA插入到合适的载体上，将该载体引入植物细胞中，由得到的转化细胞再生转基因植物。作为使用的载体，只要插入的基因能在植物细胞中表达，任何载体都可以以与上述增加逆境耐性时相同的方式来加以使用。任何植物细胞可以用来插入载体。植物可以是针叶树、阔叶树、双子叶植物(dicot)、单子叶植物等。本文引用的“植物细胞”包括各种形式的植物细胞，例如悬浮培养细胞、原生质体、叶子切片、愈伤组织等。

可通过采用本技术领域技术人员已知的方法，依据植物细胞的类型，以与改进逆境耐性时相同的方式将该载体引入植物细胞中并由转化细胞再生植物。一旦获得了其基因组中引进了本发明的DNA的转基因植物，通过有性或无性繁殖可由植物得到子代。或者，由植物、它的子代或克隆得到繁殖材料(例如，种籽、果实、接穗、块茎、有块茎的根、茎干、愈伤组织、原生质体等)，并且可以由它们大量制备植物。本发明涉及其中引进了本发明的DNA的植物细胞，含有该细胞的植物，植物的子代或克隆，以及植物、它的子代和克隆的繁殖材料。

与野生型植物比较，以这种方式制备的转化体植物具有降低的ABA含量。或者，与野生型植物比较，该转化体植物具有降低的逆境耐性。本发明可用于，例如杂草的有效清除。另外，采用上述的诱导型启动子，本发明的转化体植物可用于改善土质等。

本发明能够制备一种逆境耐性提高或降低的植物。逆境耐性改进的植物能够在至今植物不能生长的劣质土壤中生长。降低的逆境耐性可用于杂草而将杂草清除。本发明的方法可用于农业以扩大培育区域和提高作物产率。

将本文引用的任何专利、专利申请和公开出版物引入作为参考。

下面借助实施例来详细说明本发明，但并不是用于限制本发明。这些实施例中采用的实验条件如下所示。

豇豆的生长

将豇豆种籽(Vigna unguiculata IT84S-2246-4)种植在盆中并在光周期为16小时的温室(除了自然光外，当光照不充足时补充人工光照)中生长8天，温度为25℃，浇水适量。

脱水处理

为了进行脱水处理，将植物小心地从盆中拔出以免造成损伤，称重，并用3MM Whatman滤纸在室温和暗光(300lux)下大约60％的湿度下进行脱水。作为对照，将植物从盆中拔出后立刻转种在水份充足的土壤中，其中该土壤保持在与脱水处理组相同的条件下。

DNA的序列分析

利用PI-100型自动质粒分离系统(Automatic Plasmid Isolation SystemModel PI-100)(KURABO)制备质粒DNA模板，并利用373A型DNA测序仪(ABI)进行测序。利用GeneWorks软件系统(IntelliGenetics，Inc.)，Sequencher 3.0(Hitachi软件)，和威斯康星大学基因计算机组(GCG)程序来分析核苷酸序列和氨基酸序列。

实施例1：对应于由脱水诱导的基因的cDNA克隆的分离

采用聚腺苷酸化(Poly(A)⁺)RNA构建cDNA文库，该聚腺苷酸化RNA是从按下述脱水逆境作用10小时后的8天龄的豇豆植物中分离出来的。

收获完整的植物，轻轻洗掉根上的土并用3MM Whatman滤纸在室温和暗光下大约60％的湿度下进行脱水。从通过上述方法脱水处理后的植物中制备全长RNA(Nagy，F.等，“转基因植物中基因表达的分析”在Gelvin和Schilperroort(编)，“植物分子生物学手册B4.，”Kluwer Academic Publishers，Dordrecht，1-29页，1988)。按照参考文献(Sambrook，J.等，“分子克隆：实验室手册，第二版，冷泉港实验室出版社，冷泉港，纽约，1989)，将全长RNA两次通过寡脱氧胸苷酸(Oligo-dT)纤维素柱以便制备聚腺苷酸化RNA。大约2％的加样到柱上的RNA作为聚腺苷酸化RNA级分收集。利用cDNA Synthesis System Plus(Amersham Pharmacia Biotech)由聚腺苷酸化RNA合成双链cDNA。利用cDNA Cloning System(Amersham PharmaciaBiotech)由该cDNA构建cDNA文库。

采用由分离于未经逆境作用的豇豆植物的聚腺苷酸化RNA制备的cDNA和分离于经脱水逆境作用10小时的植物的聚腺苷酸化RNA制备的cDNA对cDNA文库进行示差筛选。按照参考文献(Sambrook，J.等，“分子克隆：实验室手册，第二版，冷泉港实验室出版社，冷泉港，纽约，1989)，通过噬菌斑杂交来从cDNA文库中筛选1×10⁴个噬菌斑。

结果，从脱水10小时的豇豆植物中获得了与[³²P]-标记的cDNA有较强杂交信号的噬菌斑。噬菌体克隆子的质粒区域进行体内切除后被用来转化大肠杆菌的细胞。利用限制性酶切图谱和该cDNA片段的边缘序列对获得的质粒cDNA片段进行分析。根据这些分析，将cDNA分组，并鉴别了称作CPRD(能应答脱水处理的豇豆)65的cDNA克隆。

通过RNA印记杂交分析经脱水诱导的对应于CPRD65克隆的基因的表达。从土壤中拔出8天龄的植物并进行不同时间的脱水处理，最长脱水时间为12个小时。作为对照，从土壤中拔出相似的豇豆植物并立刻转种到水份充足的土壤中。然后从脱水的植物和对照植物中分离出用于RNA印记杂交的全长RNA。

根据Nagy等的方法分离全长RNA(Nagy，F.等，“转基因植物中基因表达的分析”在Gelvin和Schilperoort(编)，“植物分子生物学手册B4.，”Kluwer Academic Plublishers，Dordrecht，1-29页，1988)，在含甲醛的1％的琼脂糖凝胶中进行分离，并转移到尼龙膜上(Sambrook，J.等，“分子克隆：实验室手册，第二版，冷泉港实验室出版社，冷泉港，纽约，1989)。42℃下，在50％的甲酰胺、5X SSC、25mM的磷酸钠缓冲液(PH6.5)、10X Denhardt溶液和250μg/ml的变性鲑精DNA中将尼龙膜与[³²P]-标记的CPRD65 cDNA片段进行杂交。膜在60℃下用0.1X SSC、0.1％SDS中洗涤15分钟、两次，并进行放射自显影。

图1表示对应于经脱水处理的CPRD65基因的表达的诱导过程。通过脱水逆境作用，CPRD65的表达水平明显提高。观察到开始脱水处理后的2个小时内积累了对应于CPRD65的mRNA。

脱水10小时的豇豆植物发生枯萎。转移到水分充足的土壤(再水化处理)后的4个小时内，这些枯萎的植物得到恢复。再水化后，CPRD65 mRNA的含量降低了(图1)。CPRD65基因对干旱逆境表现出典型且明显的反应，即通过脱水诱导转录和通过再水化降低其含量。这些事实表明CPRD65基因与干旱耐性有关。

实施例2：CPRD65 cDNA的序列分析

由于实施例1中分离到的CPRD65 cDNA片段可能不是全长，所以为了分离到全长cDNA(SEQ ID NO：11)，还要以一种部分CPRD65 cDNA为探针再次筛选同一cDNA文库。由全长cDNA克隆(SEQ ID NO：12)编码的氨基酸序列如图2表示。全长CPRD65 cDNA由2432个碱基对组成，包括由125个碱基对组成的5’-侧翼区和由486个碱基对组成的3’-侧翼区。在3’-侧翼区发现了一个聚腺苷酸化的共同序列(AATAAA)。这个序列具有一个编码612个氨基酸多肽的开放读框，推测该假定蛋白的分子量为67.6 kDa。如图2所示，将推测的CPRD65蛋白的氨基酸序列与蛋白数据库进行比较，结果表明与玉米(Zea mays)的VP14(61％)(Schwartz，S.H.，科学，276：1872-1874，1997)和番茄(Lycopersicon esculentum)的新黄素裂解酶(69％)(Burbidge，A.等，实验植物学杂志47：2111-2112，1997；Burbidge，A.等，植物杂志，17：427-431，1999)具有很高的同源性。就像VP14蛋白一样，推测的CPRD65在其N-末端区域似乎含有一个转运多肽。CPRD65、VP14和番茄的新黄素裂解酶的N-末端序列具有较低的序列相似性，但却具有结构相似性。

实施例3：CPRD65基因的基因组SOUTHERN印迹分析

为了分析与豇豆植物的CPRD65有关的基因，在两个严格的条件下进行基因组SOUTHERN印迹杂交(图3)。

按照参考文献的方法进行基因组SOUTHERN印迹分析(Sambrook，J.等，“分子克隆：实验室手册，第二版，冷泉港实验室出版社，冷泉港，纽约，1989)。用限制酶消化10μg的基因组DNA，在1％的琼脂糖凝胶中进行分离，并印迹到尼龙膜上。在42℃条件下，滤膜与[³²P]-标记的片段在30％的甲酰胺、6X SSC、5X Denhardt溶液和100μg/ml的变性鲑精DNA中进行杂交。在60℃条件下，用0.1X SSC、0.1％SDS将膜洗涤两次，各15分钟(B)或在37℃条件下，0.5X SSC、0.5％SDS洗涤两次，各15分钟(A)，并进行放射自显影。    

通过测定其核苷酸序列，CPRD65 cDNA没有EcoRI和XbaI的内在限制酶切位点，而有HindIII的两个侧翼内在限制酶切位点。以CPRD65 cDNA作为探针，测出EcoRI和XbaI消化液中有一条杂交带和HindIII消化液中有两条杂交带。在上述严格的条件(A)下测出另外的一些模糊的杂交带。这些结果表明CPRD65基因与有关基因组成一个小基因家族。

实施例4：CPRD65基因的RNA印迹分析

分析各种环境逆境对CPRD65基因表达的影响。对于高盐浓度、ABA和水处理，以与脱水处理相同的方式将植物从土壤中拔出，并分别在含有250mM NaCl，100μM ABA和去离子水的溶液中通过含水培养进行生长。对于加热和冷处理，将盆中的植物分别转移到40℃和4℃的培养箱中。植物的各种逆境处理进行0、1、2、5、10和24小时。处理后，立刻用液氮冷冻被处理的植物，并分离RNA用于RNA印迹分析。

结果发现，这一基因的表达在高盐条件下受到很强的诱导，但不受冷或热逆境的诱导(图4A)。对于经ABA处理或水处理的情况，没有检测到CPRD65基因受到诱导。

为了确定干旱逆境下CPRD65基因表达的组织特异性，在正常或干旱条件下对从叶、茎、或根提取的全长RNA进行了RNA印迹杂交(图4B)。通过干旱处理，CPRD65转录物在茎和叶中受到强烈诱导，但在根中受到的诱导较弱。

实施例5：细菌表达的CPRD65蛋白的酶活性

CPRD65基因的推测氨基酸序列与由玉米VP14基因编码的新黄素裂解酶的氨基酸序列具有高度同源性(图2)。为了检验CPRD65基因是否编码新黄素裂解酶，分析在大肠杆菌中表达的重组CPRD65蛋白的生化特性。通过PCR扩增CPRD65编码区的DNA片段并利用pGEX4T-1(Pharmacia)将该片段与GST基因融合到同一读码框中来构建如下所述的嵌合质粒pGST-CPRD65。

采用引物5’-ATTGAATTCATGCCTTCAGCTTCAAAC-3’(SEQ IDNO：19)和5’-ATTGGATCCCAAAAGCTACACGCTGGTCCCC-3’(SEQ IDNO：20)，通过PCR扩增编码CPRD65蛋白的DNA。将PCR片段插入到pBluescript II SK⁺载体中的EcoRV位点上。证实插入的PCR片段的序列以测定通过PCR是否在核苷酸序列中发生了突变。利用限制酶(EcoRI和XhoI)，从pBluescript II SK⁺载体的核苷酸序列中没有发生任何突变的PCR片段作为DNA片段分离出，并将该片段插入到pGEX4T-1(Amersham PharmaciaBiotech)中的EcoRI至XhoI位点之间来构建pGST-CPRD65。用pGST-CPRD65或pGEX4T-1转化大肠杆菌菌株JM109的细胞并在37℃下于L肉汤培养基中进行培养。当D₆₀₀达到大约0.5时，加入异丙基β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)，在17℃下继续培养12小时。收集细胞，洗涤并悬浮在提取缓中液(10mM Tris-HCl(PH8.0)、5mM MgCl₂，5％的甘油、0.1mM苯甲基磺酰氟(PMSF)和0.1mM二硫苏糖醇(DTT))中。按照GST基因融合系统的说明书手册(Amersham Pharmacia Biotech)纯化融合蛋白并用凝血酶消化。采用蛋白分析试剂盒(Bio-Rad)测定蛋白的浓度。

GST-CPRD65融合蛋白以与上述相同的方式在大肠杆菌中过表达，并利用谷胱甘肽-Sepharose 4B从细胞粗提物中纯化。对于该纯化的GST-CPRD65重组蛋白是否能消化顺-新黄素、反-堇菜黄素和顺-堇菜黄素来产生黄氧素进行了鉴定。

分析新黄素裂解酶活性的方法已被描述过了(Schwartz，S.H.等，科学，276：1872-1874，1997)。从菠菜叶中制备顺-新黄素和反-堇菜黄素。从桔子皮中制备顺-堇菜黄素。反应混合物(100μl)含有100mM双-Tris(PH6.7)、0.05％的Triton X-100、10mM抗坏血酸、5mM FeSO₄和蛋白样品。反应在室温下进行1小时。加入1ml水后，用正己烷(1ml x 2)萃取反应混合物后再用乙酸乙酯(1ml x 2)萃取。浓缩正己烷级分并用Nucleosil 5 C₁₈柱(150mm长，8mm内径(i.d.))进行HPLC分析。以1.5ml/min的流速使用溶剂A(85％的乙醇)和溶剂B(氯仿和甲醇，1∶1)之间的线性梯度对柱进行洗脱。在25分钟内溶剂B的浓度从10％增加到50％，并在50％处保持5分钟。用紫外光检测仪在440nm处检测洗脱物的吸光度。在Nucleosil 5 C₁₈柱(150mm长，8mm内径(i.d.))上，采用HPLC提纯乙酸乙酯级分。以1.5ml/min的流速采用50％的含水甲醇对柱进行洗脱，并用紫外光检测仪在260nm处检测洗脱物的吸光度。收集预测的黄氧素级分并进行GC-MS分析。每一步骤中，样品尽可能避光。

GC-MS分析如下进行。配有5890气相色谱(Hewlett Packard)的AUTOMASS质谱仪(Nippon Denshi)用于本分析。分析条件如下：电离，EI70eV；柱，DB-5(15m长；0.25mmi.d.；0.25μm膜厚；J&W Scientific)；载体气体，He(1ml min^-1)；进样温度，250℃；转线温度，250℃；和初始加热温度80℃。进样1分钟后开始，加热温度以30℃min^-1的速率升高到200℃，接着以5℃min^-1的速率进一步升高到230℃。

如图5所示，通过HPLC分析，在含有GST-CPRD65蛋白和顺-新黄素的反应混合物中检测到预测的C25-产品和黄氧素。通过GC-MS分析证实了黄氧素的存在，分析过程中观察到了黄氧素的离子特性。离子及其相对强度是：m/z 250(4)，168(32)，149(77)，107(61)，和95(100)。由反-堇菜黄素没有生成黄氧素和C25-产物(没有显示数据)。这些结果不受凝血酶处理的影响，该凝血酶将GST-CPRD65重组蛋白分解成GST和CPRD65蛋白。

实施例6：由拟南芥属植物制备的原生质体中作为转运肽的CPRD65蛋白的N末端区域分析

CPRD65蛋白的N-末端区域具有与叶绿体导向有关的转运肽的典型结构特征。CPRD65蛋白的这一结构特征表明成熟的CPRD65蛋白定位在含有叶绿体的质体上。为了分析N-末端区域作为转运肽的作用，构建了编码CPRD65蛋白的N-末端区域(1-148)的嵌合基因35S∷CPRD65N-sGFP，该嵌合基因位于CaMV 35S启动子和水母Aequorea victoria的合成绿开花期(synthetic green florescent)蛋白(sGFP)基因之间(Chiu，W.，等，现代生物学(Curr.Biol.)，6：325-330，1996)。

采用引物  5’-ATATATCTAGAATGCCTTCATCAGCTTCAAACACTTGG-3’(SEQ ID NO：21)和5’-ATATAGGATCCCTCCGGCACCGGCGCGAAGTTCCCG-3’(SEQ ID NO：22)，通过PCR扩增对应于CPRD65蛋白N-末端肽(1至148个氨基酸)的DNA。将PCR片段插入到pBluescript II SK⁺载体中并证实通过PCR没有引起序列发生突变。将该DNA片段插入到35S-启动子与过渡表达载体的sGFP基因之间的位点上(Chiu，W.，等，现代生物学，6：325-330，1996)。按照上文中描述的方法进行制备、DNA转染和拟南芥属原生质体的培养(Abel，S.和Theologis，A.，植物杂志，5：421-427，1994)。

通过DNA-转染方法将35S∷CPRD65-sGFP融合构建体及其对照构建体(35S∷sGFP)引进由拟南芥属制备的原生质体中(Abel，S.和Theologis，A.，植物杂志，5：421-427，1994)。转化2-4天后，通过荧光显微术观察原生质体。如图6所示，当在原生质体中过渡表达35S∷sGFP构建体时，荧光定位不在质体中。另外，当引进35S∷sGFP构建体时，荧光定位不在质体中，而主要是定位在细胞质中。这些结果表明，CPRD65蛋白的N-末端区域作为转运肽起着将CPRD65蛋白导向到质体的作用。预测CPRD65蛋白定位在质体中，在质体中发挥着产生ABA的作用。

实施例7：通过脱水逆境作用在8天龄的豇豆植物中的ABA积累

通过脱水条件测定8天龄的豇豆植物中内源ABA含量的积累。

将样品在液氮中进行均质并用含水甲醇(20-80％)提取两次。加入[²H₃]ABA之后，浓缩提取物，并进行标准溶剂分馏过程以便得到酸性-乙酸乙酯可溶级分。通过以前报道的方法(Wijayanti，L.，等，Biosci.Biotech.Biochem.，59：1533-1535，1995)，采用结合洗脱柱体(C₁₈和DEA，Varian)进行纯化。然后采用Senshu PakODS-2101-N柱(100mm长，6mm的内径，SenshuScientific Co.)对从没有干燥的植物中纯化的样品进行HPLC分析。分析条件与前面所报道的相同(Wijayanti，L.，等，Biosci.Biotech.Biochem.，59：1533-1535，1995)。采用醚性重氮甲烷将如此纯化的样品甲基化并进行GC-SIM分析。

如图7所示，ABA在脱水后2小时内开始积累。ABA在经10小时脱水的植物中的含量比未经逆境的对照植物中的高140倍。CPRD65 mRNA积累时间比ABA mRNA积累时间要早。

在叶和茎中CPRD65基因的表达受干旱逆境的强烈诱导，而在根中受到很小的诱导作用(图4B)。检测了在干旱逆境作用下CPRD65基因的表达与内源ABA的积累之间的关系。将8天龄的豇豆植物分割成叶、茎和根，然后进行脱水。分别测定这些器官在脱水处理前或后的内源ABA含量。如图8所示，通过干旱逆境作用，叶和茎中积累了大量的内源ABA，而根中积累得很少。干旱逆境作用下的ABA积累的组织特异模式与图4B和8中所示的CPRD65基因的表达模式一致。

实施例8：豇豆叶中的叶黄素的分析

分析豇豆叶中的叶黄素以便发现与CPRD65蛋白有关的物质。

样品采用丙酮提取两次，浓缩提取物，溶解在80％的甲醇(1ml)中，并加样到结合洗脱C₁₈柱上。用另外的4ml、80％的甲醇洗柱，并用5ml的甲醇-水-氯仿(71∶9∶20)洗脱叶黄素。浓缩洗脱物并采用Nucleosil 5 C₁₈柱和Senshu Pak Silica-225 1-S柱(250mm长，6mmd内径)进行HPLC分析。ODS-HPLC采用的条件与上述相同。对于Silica-HPLC，使用的流速为1.5ml/分钟，溶剂B浓度的线性梯度是在30分钟内从10％到100％，其中溶剂A是乙酸乙酯-正己烷(1∶1)，溶剂B是乙酸乙酯。利用叶黄素的可见光谱和紫外光谱数据鉴定叶黄素。

通过可见光和紫外光分光光度分析，检测到豇豆叶中反-新黄素、反-堇菜黄素和顺-新黄素为主要叶黄素，顺-堇菜黄素为少量成分(没有显示数据)。在正常生长条件和干旱条件下，反-新黄素、反-堇菜黄素和顺-新黄素的内源含量没有明显的区别。

如上所示，豇豆干旱-诱导型CPRD65基因编码新黄素裂解酶，其产品定位于质体中。在干旱和高盐条件下，CPRD65基因主要在叶和茎中被强烈诱导。观察到在干旱条件下，叶和茎中ABA的大量积累，这表明一种类似于CPRD65基因的表达模式。这些结果有力地说明了CPRD65蛋白主要是一种与干旱逆境作用下豇豆植物中ABA的生物合成有关的酶。

实施例9：编码新黄素裂解酶基因的同系物的拟南芥属cDNA克隆的分离

以CPRD65为探针，筛选拟南芥属的cDNA文库(Abe H.等，植物细胞，9；1859-1868，1997)。结果，获得了许多具有强杂交信号的噬菌斑。从这些噬菌斑中分离出噬菌体克隆，用限制酶切出cDNA区域以便插入到pBluescrip SK⁺中并转化大肠杆菌。通过DNA序列分析，将这些克隆归为一组。将其命名为AtNCED3。该AtNCED3显示出与编码新黄素裂解酶的CPRD65具有高度的同源性(图9)。AtNCED3 cDNA的核苷酸序列和AtNCED3蛋白的氨基酸序列分别由SEQ ID NO：5和6表示。

实施例10：AtNCED1、2、4和5的分离，种系发生树(phylogenic tree)的分析

利用CPRD65和AtNCED3的核苷酸序列搜索DNA数据库，鉴定出具有高度同源性的四个序列(登记号AL021713，AL021687，AJ005813，AB028621)。

为了分离与AL021713序列具有高度同源性的基因，以gDNA为模板和以5’-CCCGGGATCCCTCAAGCCTCTCTATACCG-3’(SEQ ID NO：23)和5，-CCCGGGATCCTTTATACGGATTCTGAGGGAG-3’(SEQ ID NO：24)为引物，通过PCR法扩增靶基因片段。以该片段为探针，从gDNA文库(Clontech)中分离含有靶基因的克隆。以5’-CCCGGGATCCCTCAAGCCTCTCTATACCG-3’(SEQ ID NO：23)和5’-CCCGGGATCCTTTATACGGATTCTGAGGGAG-3’(SEQ ID NO：24)为引物，再次通过PCR方法扩增该基因，并将该基因克隆到pBluescript II SK⁺(Stratagene)中EcoRV位点上来测定核苷酸序列。该基因被命名为AtNCED1。AtNCED1 cDNA的核苷酸序列和AtNCED1蛋白的氨基酸序列分别由SEQ ID NO：1和2表示。

为了分离与AL021687序列具有高度同源性的基因，以gDNA为模板和以5’-ATTGAATTCATGGACTCTGTTTCTTCTTCTTCC-3’(SEQ ID NO：25)和5’-ATTGAATTCTTAAAGCTTATTAAGGTCACTTTCC-3’(SEQ ID NO：26)为引物，通过PCR法扩增靶基因片段。以该片段为探针，从gDNA文库(Clontech)中分离含有该靶基因的克隆。以5’-ATTGAATTCATGGACTCTGTTTCTTCTTCTTCC-3’(SEQ ID NO：25)和5’-ATTGAATTCTTAAAGCTTATTAAGGTCACTTTCC-3’(SEQ ID NO：26)为引物，再次通过PCR方法扩增基因，并将该基因克隆到pBluescript II SK⁺(Stratagene)中EcoRV位点上来测定核苷酸序列。该基因被命名为AtNCED2。AtNCED2 cDNA的核苷酸序列和AtNCED2蛋白的氨基酸序列分别由SEQ ID NO：3和4表示。

为了分离与AJ005813序列具有高度同源性的基因，以gDNA为模板和以5’-AAGAATTCATGGCGGAGAAACTCAGTGATGGCAGC-3’(SEQ IDNO：27)和5’-AAAAGAATTCGGCTTATATAAGAGTTTGTTCCTG G-3’(SEQID NO：28)为引物，通过PCR扩增靶基因片段。以该片段为探针，从cDNA文库(Clontech)中分离含有靶基因的克隆。以5’-AAGAATTCATGGCGGAGAAACTCAGTGATGGCAGC-3’(SEQ ID NO：27)和5’-AAAAGAATTCGGCTTATATAAGAGTTTGTTCCTGG-3’(SEQ ID NO：28)为引物，再次通过PCR方法扩增基因，并将该基因克隆到pBluescript II SK⁺(Stratagene)中EcoRV位点上来测定核苷酸序列。该基因被命名为AtNCED4。AtNCED4 cDNA的核苷酸序列和AtNCED4蛋白的氨基酸序列分别由SEQ ID NO：7和8表示。

为了分离与AB028621序列具有高度同源性的基因，从P1克隆MUJ8中分离DNA。以5’-CGGGATCCATGCAACACTCTCTTCGTTCTGATCTTCTTC-3’(SEQ ID NO：29)和5’-CGGGATCCTCAGAAAACTTGTTCCTTCAACTGATTCTCGC-3’(SEQ ID NO：30)为引物，通过PCR方法扩增基因，并将该基因克隆到pBluescript II SK⁺(Stratagene)中EcoRV位点上来测定核苷酸序列。该基因被命名为AtNCED5。AtNCED5 cDNA的核苷酸序列和AtNCED5蛋白的氨基酸序列分别由SEQ ID NO：9和10表示。

图10显示了AtNCED1至5的氨基酸序列的对比排列。为了检测由每一序列推导出的氨基酸序列与数据库中的序列之间的关系，进行种系发生树分析(图11)。利用基因分析软件Gene Works(Intelligenetics，Inc.)构建种系发生树。公式采用UPGMA(由Nei，M.撰写的，并由Gojo，H.和Saito，N.，Baifukan翻译的：Unweighted Pair Group Method with ArithmeticMean：Molecular Evolutionary genetics，252-256页，Japan)。

实施例11：AtNCED基因的RNA印迹分析

通过RNA印迹分析来分析各种环境逆境对每一鉴定的AtNCED基因表达的影响。

在琼脂平板上生长三周的植物被用于进行每种逆境处理。对于脱水逆境，从琼脂培养基中拔出植物，并在滤纸上风干(相对湿度为50％)。对于盐逆境、ABA处理和作为对照的水处理，从琼脂培养基中拔出植物，并放入分别含有250Mm NaCl溶液，100μM ABA溶液和蒸馏水的培养皿中，以便只将根浸入，盖上盖于室温下保持一段时间。对于冷和热逆境，将琼脂平板分别放置在4℃和40℃的恒温箱中保持一段时间。

在液氮中磨碎经上述各种逆境处理的植物，提取全长RNA(Nagy F，KaVSA和Chua N-H(1988)转基因植物中基因表达的分析。在Gelvin和Schilperoort(编)，植物分子生物学手册B4.Kluwer Academic Publishers，Dordrechrt，1-29页)，并取每一样品20μg点样到1％琼脂糖凝胶的每一泳道上进行电泳。电泳后将RNA从凝胶印迹到尼龙膜上，以[³²P]-标记的cDNA为探针进行RNA印迹分析(Sambrook，J.，Fritsch EF和Maniatis T(1989)“分子克隆：实验室手册”第二版，冷泉港实验室出版社，冷泉港，纽约)。

结果发现AtNCED3基因表达受到干旱、高盐浓度和冷条件的强烈诱导。加热条件不诱导表达。另外，对于ABA或水处理，没有观察到AtNCED3基因表达受到诱导(图12)。

实施例12：细菌表达的AtNCED蛋白的酶特性

推导的AtNCED3基因的氨基酸序列与编码新黄素裂解酶的豇豆CPRD65基因的氨基酸序列具有高度同源性(图9)。为了检验AtNCED3基因是否编码新黄素裂解酶，分析了由大肠杆菌表达的重组AtNCED3蛋白的生化特性。

以克隆的AtNCED3 cDNA为模板，以5’-ATTGAATTCATGGCTTCTTTCACGGCAACGGC-3’(SEQ ID NO：31)和5’-GTTTTCCCAGTCACGAC-3’(SEQ ID NO：32)为引物，通过PCR方法扩增编码AtNCED3蛋白的DNA。将该PCR片段克隆到pBluescript II SK⁺(Stratagene)中EcoRV位点上。证实插入的PCR片段以确定通过PCR合成的核苷酸序列是否产生了突变。将其中没有检测到任何突变的DNA片段以框架形式克隆到含有谷胱甘肽S-转移酶(GST)基因的pGEX4T-1中的EcoRI位点上(Amersham Pharmacia Biotech)来构建嵌合质粒pGST-AtNCED3。用pGST-AtNCED3或pGEX4T-1转化大肠杆菌菌株JM109的细胞并在37℃下于L肉汤培养基中进行培养。当OD₆₀₀达到大约0.5时，加入异丙基β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)，在17℃下继续培养12小时。收集大肠杆菌细胞，洗涤并悬浮在提取缓冲液(10mMTris-HCl(PH8.0)、5mM MgCl₂，5％d的甘油、0.1mM苯甲基磺酰氟(PMSF)和0.1mM二硫苏糖醇(DTT))中。使用谷胱甘肽-Sepharose 4B[GST基因融合系统(Amersham Pharmacia Biotech)]按其说明书纯化融合蛋白并用凝血酶消化。用蛋白分析试剂盒(Bio-Rad，CA，USA)测定蛋白浓度。

新黄素裂解酶活性分析的结果表明，在含有GST-AtCED3蛋白和顺-新黄素的反应混合物中检测到了预期的C25产物和黄氧素，证明AtNCED3蛋白具有新黄素裂解活性。类似的实验在AtNCED1和AtNCED5中检测到了新黄素裂解活性。

实施例13：转基因植物的制备

以拟南芥属(Arabidopsis thaliana(L.)Heynh.ecotype Columbia)作为样品。采用培养土壤在9cm-直径的塑料盆中播种野生型拟南芥属植物，以16小时的光周期在22℃下生长6星期，然后用于转化。

由含有卡那霉素抗性标记和花椰菜花叶病毒的35S启动子的pBE2113载体构建不含GUS报道基因的载体(pBE2113NOT)(Mitsuhara，I.等，植物细胞生理学，37：49-59，1996)，将从拟南芥属中分离到的AtNCED3的cDNA以右向(有义方向)或反向(反义方向)连接到载体的BamHI位点。通过混合载体和细菌，将获得的载体引进土壤细菌(根癌农杆菌菌株GV3101(pMP90))中。通过卡那霉素(Km)抗性筛选含有靶基因的根癌农杆菌，采用真空渗入方法感染野生型拟南芥属植物(Bechtold，N.等，C.R.Acad.Sci.Paris，LifeSci.，316：1194-1199，1993)。从感染的植物中获得干种籽，播种在加了Km的琼脂平板中进行生长以便选择转化体第一代(T1)的个体。将从转化体第一代得到的转化体第二代(T2)的种籽播种在加了Km的琼脂平板上，种植后从显示Km抗性的植物中收集第三代(T3)的种籽。此外，将第三代的种籽以类似的方式播种在加了Km的平板中，表现出抗药性的所有种籽作为T3同源株系被用于下面实验。最后，AtNCED3基因的每一有义和反义转化体分离出两个株系。

实施例14：转化体中AtNCED3基因表达的评价

通过Northern杂交方法评价AtNCED3基因在野生型拟南芥属和AtCED3-基因转化的植物中的表达。

培育了一个月的植物用于分析转化体中AtNCED3基因的表达。拔出植物，并在滤纸上风干(相对湿度为50％)作为干旱逆境处理。在液氮中裂解经上述环境逆境处理的植物以便提取全长RNA(Nagy F，Kay SA和Chua N.-H.(1998)转基因植物中基因表达的分析。在Gelvin和Schilperoort编，植物分子生物学手册B4.Kluwer Academic Publishers，Dordrechrt，1-29页)。RNA在1％琼脂糖凝胶中进行电泳(每一泳道20μg)，从电泳凝胶中转移到尼龙膜上，使用[³²P]-标记的RNA探针进行Northern杂交(Sambrook，J.，Fritsch，E.F.和Maniatis T.(1989)“分子克隆实验室手册”第二版，冷泉港实验室出版社，冷泉港，纽约)。

结果，在受到干旱逆境作用前，AtNCED3基因在野生型植物中不表达，但却在有义植物中表达了。另一方面，干旱处理后，AtNCED3基因在野生型植物中受干旱诱导进行表达，但是在反义植物中即使受到干旱逆境处理也不表达(图13)。

实施例15：转化体中内源ABA含量的评价

测定野生型拟南芥属和AtNCED3-基因转化的植物中的内源ABA含量。

培育了一个月的植物被用于评价野生型拟南芥属和转化体中的内源ABA含量。将样品在液氮中进行均质并用液体甲醇(20-80％)提取两次。加入[²H₃]ABA，浓缩提取物，并进行标准溶剂分馏过程来得到酸性-乙酸乙酯可溶级分。按照Wijayanti，L.，等，Biosci.Biotech.Biochem.，59：1533-1535，1995中描述的方法，采用结合洗脱柱体(C₁₈和DEA，Varian)纯化这些级分。然后采用Senshu PakODS-2101-N柱(100mm长，6mm的内径)(SenshuScientific Co.)对从没有干燥的植物中纯化的样品进行HPLC分析。分析条件与Wijayanti，L.等，Biosci.Biotech.Biochem.，59：1533-1535，1995中描述的相同。采用醚性重氮甲烷将纯化样品甲基化并进行GC-SIM分析。

结果，与其野生型相比，在有义植物中ABA含量增加了，在反义植物中ABA含量降低了(图14)。

实施例16：干旱耐受性的评价结果

将获得的转化体植物的种籽播种在加了营养盐的琼脂平板上(Valvekens，D.等，美国国家科学院院报，85：5536-5540，1988)，在上述种植条件下生长两周以便进行下面的实验。

将4株上述植物转种到填满土的9cm-直径的塑料盆(蛭石∶珍珠岩＝1∶1)中，在22℃和光周期为16小时的条件下生长。播种三周后(转种后两周)，通过中止浇水，使盆脱水以便自然产生干旱逆境。开始停止浇灌后14天和17天，对植物进行拍照。其中以反义方向引进AtNCED3基因的植物在开始停止浇灌后14天枯萎(图15)。相反，以有义方向引进基因的转化体植物没有枯萎。野生株系也在开始停止浇灌后17天枯萎，然而以有义方向引进基因的转化体植物对干旱表现出很高的耐受性(图16)。

                       序列表<110>RIKEN<120>携带新黄素裂解酶基因的转基因植物<130>R3-102DP1<140><141><150>JP 2000-010056<151>2000-01-13<160>32<170>PatentIn Ver.2.0<210>1<211>1752<212>DNA<213>拟南芥<220><221>CDS<222>(1)..(1752)<400>1atg gtt tct ctt ctt aca atg ccg atg agt ggt ggt att aaa aca tgg  48Met Val Ser Leu Leu Thr Met Pro Met Ser Gly Gly Ile Lys Thr Trp  1               5                  10                  15cct caa gcc caa att gat ttg ggt ttt agg ccc att aaa aga caa ccg  96Pro Gln Ala Gln Ile Asp Leu Gly Phe Arg Pro Ile Lys Arg Gln Pro

         20                  25                  30aag gtt att aaa tgc acg gtg cag atc gac gta acg gaa tta acc aaa  144Lys Val Ile Lys Cys Thr Val Gln Ile Asp Val Thr Glu Leu Thr Lys

     35                  40                  45aaa cgc caa tta ttt aca ccc aga acc acc gct act ccg ccg cag cat  192Lys Arg Gln Leu Phe Thr Pro Arg Thr Thr Ala Thr Pro Pro Gln His

 50                  55                  60aat cct ctc cgg cta aac atc ttc cag aaa gcg gcg gcg att gcg atc   240Asn Pro Leu Arg Leu Asn Ile Phe Gln Lys Ala Ala Ala Ile Ala Ile 65                  70                  75                  80gac gcg gct gag cgt gca tta atc tca cac gag caa gat tct cca ctt   288Asp Ala Ala Glu Arg Ala Leu Ile Ser His Glu Gln Asp Ser Pro Leu

             85                  90                  95ccc aaa acc gct gat cca cgt gtt cag att gcc ggg aat tat tcc ccg   336Pro Lys Thr Ala Asp Pro Arg Val Gln Ile Ala Gly Asn Tyr Ser Pro

        100                 105                 110gta ccg gaa tct tcc gtc cgg cga aac ctc acc gtc gaa gga aca atc   384Val Pro Glu Ser Ser Val Arg Arg Asn Leu Thr Val Glu Gly Thr Ile

    115                 120                 125cct gac tgc att gac ggt gtt tat atc cgt aac ggc gcg aat ccg atg   432Pro Asp Cys Ile Asp Gly Val Tyr Ile Arg Asn Gly Ala Asn Pro Met

130                 135                 140ttt gag cea aca gct ggg cac cat tta ttc gac gga gac gga atg gtt   480Phe Glu Pro Thr Ala Gly His His Leu Phe Asp Gly Asp Gly Met Val145                 150                 155                 160cac gca gtt aaa ata acc aac ggt tca gct agc tac gca tgc cgg ttt   528His Ala Val Lys Ile Thr Asn Gly Ser Ala Ser Tyr Ala Cys Arg Phe

            165                 170                 175aca aaa acc gag aga ttg gtt cag gaa aaa cga ttg ggt cga cca gtt   576Thr Lys Thr Glu Arg Leu Val Gln Glu Lys Arg Leu Gly Arg Pro Val

        180                 185                 190ttc ccg aaa gca atc ggc gag ctt cac ggt cac tcg gga atc gca cgt   624Phe Pro Lys Ala Ile Gly Glu Leu His Gly His Ser Gly Ile Ala Arg

    195                 200                 205ttg atg ctg ttt tac gca cgt ggg ctt tgt ggt ctg atc aac aac caa   672Leu Met Leu Phe Tyr Ala Arg Gly Leu Cys Gly Leu Ile Asn Asn Gln

210                 215                 220aac ggc gtc gga gta gca aac gcc ggt ttg gtt tac ttt aat aac cgg   720Asn Gly Val Gly Val Ala Asn Ala Gly Leu Val Tyr Phe Asn Asn Arg225                 230                 235                 240ctt tta gct atg tca gaa gac gat tta ccg tac caa tta aaa att act   768Leu Leu Ala Met Ser Glu Asp Asp Leu Pro Tyr Gln Leu Lys Ile Thr

            245                 250                 255caa acc ggc gat ctc caa acc gtt gga cgt tac gat ttc gac ggt cag   816Gln Thr Gly Asp Leu Gln Thr Val Gly Arg Tyr Asp Phe Asp Gly Gln

        260                 265                 270tta aaa tcc gca atg ata gct cac ccg aaa ctg gac ccg gtt acg aag   864Leu Lys Ser Ala Met Ile Ala His Pro Lys Leu Asp Pro Val Thr Lys

    275                 280                 285gag ctt cac gcg tta agc tac gac gtc gtt aag aaa cct tac ctg aaa   912Glu Leu His Ala Leu Ser Tyr Asp Val Val Lys Lys Pro Tyr Leu Lys

290                 295                 300tac ttc aga ttc tcg cca gac ggc gtt aaa tcg ccg gaa ttg gag atc   960Tyr Phe Arg Phe Ser Pro Asp Gly Val Lys Ser Pro Glu Leu Glu Ile305                 310                 315                 320ccg ctc gaa act ccg acg atg att cac gat ttc gct ata acg gag aat   1008Pro Leu Glu Thr Pro Thr Met Ile His Asp Phe Ala Ile Thr Glu Asn

            325                 330                 335ttt gtg gtg att cct gat caa caa gtc gtg ttc aag ctc ggc gag atg   1056Phe Val Val Ile Pro Asp Gln Gln Val Val Phe Lys Leu Gly Glu Met

        340                 345                 350att tcc ggt aaa tct ccg gtt gtt ttc gac gga gaa aag gtt tcc cga   1104Ile Ser Gly Lys Ser Pro Val Val Phe Asp Gly Glu Lys Val Ser Arg

    355                 360                 365ttg ggg ata atg ccc aag gac gcg aca gaa gct tct cag ata atc tgg   1152Leu Gly Ile Met Pro Lys Asp Ala Thr Glu Ala Ser Gln Ile Ile Trp

370                 375                 380gtg aac tct ccg gag acg ttc tgt ttt cat ctc tgg aat gca tgg gaa   1200Val Asn Ser Pro Glu Thr Phe Cys Phe His Leu Trp Asn Ala Trp Glu385                 390                 395                 400tcg ccg gag acg gag gag att gtg gtg atc gga tcg tgt atg tcg ccg   1248Ser Pro Glu Thr Glu Glu Ile Val Val Ile Gly Ser Cys Met Ser Pro

            405                 410                 415gcg gat tca atc ttc aac gag aga gac gag agc ttg aga agc gtt ttg   1296Ala Asp Ser Ile Phe Asn Glu Arg Asp Glu Ser Leu Arg Ser Val Leu

        420                 425                 430tcg gag atc agg ata aac ctc aga aca cgt aaa acc acg cgt cgt tcg   1344Ser Glu Ile Arg Ile Asn Leu Arg Thr Arg Lys Thr Thr Arg Arg Ser

    435                 440                 445ttg ttg gtt aac gag gat gta aat tta gag att ggt atg gtt aac cgg   1392Leu Leu Val Asn Glu Asp Val Asn Leu Glu Ile Gly Met Val Asn Arg

450                 455                 460aac cgg tta gga aga aaa acc cgg ttc gcg ttt ttg gct att gct tat   1440Asn Arg Leu Gly Arg Lys Thr Arg Phe Ala Phe Leu Ala Ile Ala Tyr465                 470                 475                 480cct tgg cea aaa gtt tcc ggt ttc gct aag gtc gat ctt tgc acc ggt   1488Pro Trp Pro Lys Val Ser Gly Phe Ala Lys Val Asp Leu Cys Thr Gly

            485                 490                 495gag atg aaa aaa tat att tac ggc ggt gag aaa tat ggc ggc gaa ccg   1536Glu Met Lys Lys Tyr Ile Tyr Gly Gly Glu Lys Tyr Gly Gly Glu Pro

        500                 505                 510ttt ttc ttg ccc ggc aac tcc ggt aac ggc gaa gaa aat gaa gat gac   1584Phe Phe Leu Pro Gly Asn Ser Gly Asn Gly Glu Glu Asn Glu Asp Asp

    515                 520                 525ggt tat ata ttt tgt cac gtt cat gac gaa gaa aca aag aca tca gag   1632Gly Tyr Ile Phe Cys His Val His Asp Glu Glu Thr Lys Thr Ser Glu

530                 535                 540ctt cag att att aac gct gtt aat tta aag ctt gaa gct acg att aaa   1680Leu Gln Ile Ile Asn Ala Val Asn Leu Lys Leu Glu Ala Thr Ile Lys545                 550                 555                 560cta ccg tct aga gta ccg tat ggg ttt cat ggc aca ttt gtg gat tcg   1728Leu Pro Ser Arg Val Pro Tyr Gly Phe His Gly Thr Phe Val Asp Ser

            565                 570                 575aat gaa ctc gtt gat caa tta taa                                   1752Asn Glu Leu Val Asp Gln Leu

        580<210>2<211>583<212>PRT<213>拟南芥<400> 2Met Val Ser Leu Leu Thr Met Pro Met Ser Gly Gly Ile Lys Thr Trp  1               5                  10                  15Pro Gln Ala Gln Ile Asp Leu Gly Phe Arg Pro Ile Lys Arg Gln Pro

         20                  25                  30Lys Val Ile Lys Cys Thr Val Gln Ile Asp Val Thr Glu Leu Thr Lys

     35                  40                  45Lys Arg Gln Leu Phe Thr Pro Arg Thr Thr Ala Thr Pro Pro Gln His

 50                  55                  60Asn Pro Leu Arg Leu Asn Ile Phe Gln Lys Ala Ala Ala Ile Ala Ile 65                  70                  75                  80Asp Ala Ala Glu Arg Ala Leu Ile Ser His Glu Gln Asp Ser Pro Leu

             85                  90                  95Pro Lys Thr Ala Asp Pro Arg Val Gln Ile Ala Gly Asn Tyr Ser Pro

        100                 105                 110Val Pro Glu Ser Ser Val Arg Arg Asn Leu Thr Val Glu Gly Thr Ile

    115                 120                 125Pro Asp Cys Ile Asp Gly Val Tyr Ile Arg Asn Gly Ala Asn Pro Met

130                 135                 140Phe Glu Pro Thr Ala Gly His His Leu Phe Asp Gly Asp Gly Met Val145                 150                 155                 160His Ala Val Lys Ile Thr Asn Gly Ser Ala Ser Tyr Ala Cys Arg Phe

            165                 170                 175Thr Lys Thr Glu Arg Leu Val Gln Glu Lys Arg Leu Gly Arg Pro Val

        180                 185                 190Phe Pro Lys Ala Ile Gly Glu Leu His Gly His Ser Gly Ile Ala Arg

    195                 200                 205Leu Met Leu Phe Tyr Ala Arg Gly Leu Cys Gly Leu Ile Asn Asn Gln

210                 215                 220Asn Gly Val Gly Val Ala Asn Ala Gly Leu Val Tyr Phe Asn Asn Arg225                 230                 235                 240Leu Leu Ala Met Ser Glu Asp Asp Leu Pro Tyr Gln Leu Lys Ile Thr

            245                 250                 255Gln Thr Gly Asp Leu Gln Thr Val Gly Arg Tyr Asp Phe Asp Gly Gln

        260                 265                 270Leu Lys Ser Ala Met Ile Ala His Pro Lys Leu Asp Pro Val Thr Lys

    275                 280                 285Glu Leu His Ala Leu Ser Tyr Asp Val Val Lys Lys Pro Tyr Leu Lys

290                 295                 300Tyr Phe Arg Phe Ser Pro Asp Gly Val Lys Ser Pro Glu Leu Glu Ile305                 310                 315                 320Pro Leu Glu Thr Pro Thr Met Ile His Asp Phe Ala Ile Thr Glu Asn

            325                 330                 335Phe Val Val Ile Pro Asp Gln Gln Val Val Phe Lys Leu Gly Glu Met

        340                 345                 350Ile Ser Gly Lys Ser Pro Val Val Phe Asp Gly Glu Lys Val Ser Arg

    355                 360                 365Leu Gly Ile Met Pro Lys Asp Ala Thr Glu Ala Ser Gln Ile Ile Trp

370                 375                 380Val Asn Ser Pro Glu Thr Phe Cys Phe His Leu Trp Asn Ala Trp Glu385                 390                 395                 400Ser Pro Glu Thr Glu Glu Ile Val Val Ile Gly Ser Cys Met Ser Pro

            405                 410                 415Ala Asp Ser Ile Phe Asn Glu Arg Asp Glu Ser Leu Arg Ser Val Leu

        420                 425                 430Ser Glu Ile Arg Ile Asn Leu Arg Thr Arg Lys Thr Thr Arg Arg Ser

    435                 440                 445Leu Leu Val Asn Glu Asp Val Asn Leu Glu Ile Gly Met Val Asn Arg

450                 455                 460Asn Arg Leu Gly Arg Lys Thr Arg Phe Ala Phe Leu Ala Ile Ala Tyr465                 470                 475                 480Pro Trp Pro Lys Val Ser Gly Phe Ala Lys Val Asp Leu Cys Thr Gly

            485                 490                 495Glu Met Lys Lys Tyr Ile Tyr Gly Gly Glu Lys Tyr Gly Gly Glu Pro

        500                 505                 510Phe Phe Leu Pro Gly Asn Ser Gly Asn Gly Glu Glu Asn Glu Asp Asp

    515                 520                 525Gly Tyr Ile Phe Cys His Val His Asp Glu Glu Thr Lys Thr Ser Glu

530                 535                 540Leu Gln Ile Ile Asn Ala Val Asn Leu Lys Leu Glu Ala Thr Ile Lys545                 550                 555                 560Leu Pro Ser Arg Val Pro Tyr Gly Phe His Gly Thr Phe Val Asp Ser

            565                 570                 575Asn Glu Leu Val Asp Gln Leu

        580<210>3<211>1788<212>DNA<213>拟南芥<220><221>CDS<222>(1)..(1788)<400>3atg gac tct gtt tct tct tct tcc ttc ctc tcc tcc aca ttc tct ctt  48Met Asp Ser Val Ser Ser Ser Ser Phe Leu Ser Ser Thr Phe Ser Leu  l               5                  10                  l5cat cac tct ctt ctt cgc cgc cga tct tcc tct cct act ctc ctc cgt   96His His Ser Leu Leu Arg Arg Arg Ser Ser Ser Pro Thr Leu Leu Arg

         20                  25                  30atc aac tcc gcc gtc gtc gaa gaa cgt tct cca atc aca aac cca agc   144Ile Asn Ser Ala Val Val Glu Glu Arg Ser Pro Ile Thr Asn Pro Ser

     35                  40                  45gac aac aat gat cgt cgt aac aaa ccc aaa aca ctc cac aac cga acc   192Asp Asn Asn Asp Arg Arg Asn Lys Pro Lys Thr Leu His Asn Arg Thr

 50                  55                  60aat cac acc tta gtc tca tca cca ccg aaa ctc cga cca gaa atg act   240Asn His Thr Leu Val Ser Ser Pro Pro Lys Leu Arg Pro Glu Met Thr 65                  70                  75                  80ctc gca aca gct ctc ttc acc acc gtc gaa gat gta atc aac acg ttc   288Leu Ala Thr Ala Leu Phe Thr Thr Val Glu Asp Val Ile Asn Thr Phe

             85                  90                  95atc gat cca cct tca cgt cct tcc gtt gat cca aaa cat gtc ctc tct   336Ile Asp Pro Pro Ser Arg Pro Ser Val Asp Pro Lys His Val Leu Ser

        100                 105                 110gat aac ttc gct cct gtc ctc gac gag ctt cct cca aca gac tgt gaa   384Asp Asn Phe Ala Pro Val Leu Asp Glu Leu Pro Pro Thr Asp Cys Glu

    115                 120                 125atc atc cac ggc act ctt cca ctg tca ctt aac ggc gct tac atc cgt   432Ile Ile His Gly Thr Leu Pro Leu Ser Leu Asn Gly Ala Tyr Ile Arg

130                 135                 140aac ggt cca aat cca cag ttt ctc cct cgt ggt cct tac cat ctc ttc   480Asn Gly Pro Asn Pro Gln Phe Leu Pro Arg Gly Pro Tyr His Leu Phe145                 150                 155                 160gac ggc gac ggt atg ctt cac gcc ata aaa atc cac aac ggt aaa gcc   528Asp Gly Asp Gly Met Leu His Ala Ile Lys Ile His Asn Gly Lys Ala

            165                 170                 175act ctc tgt agc aga tac gtc aag act tat aaa tac aac gtc gag aaa   576Thr Leu Cys Ser Arg Tyr Val Lys Thr Tyr Lys Tyr Asn Val Glu Lys

        180                 185                 190caa acc gga gct ccg gtt atg cct aac gtg ttt tcc gga ttc aac ggt   624Gln Thr Gly Ala Pro Val Met Pro Asn Val Phe Ser Gly Phe Asn Gly

    195                 200                 205gta acg gcg tca gta gct cgt gga gct tta acg gca gct agg gtt tta   672Val Thr Ala Ser Val Ala Arg Gly Ala Leu Thr Ala Ala Arg Val Leu

210                 215                 220acc gga cag tat aat ccg gtt aac ggc att ggt tta gct aat aca agt   720Thr Gly Gln Tyr Asn Pro Val Asn Gly Ile Gly Leu Ala Asn Thr Ser225                 230                 235                 240cta gct ttc ttc agt aac cgt ctc ttt gct tta ggt gaa tct gat tta   768Leu Ala Phe Phe Ser Asn Arg Leu Phe Ala Leu Gly Glu Ser Asp Leu

            245                 250                 255ccc tac gcc gtc cga tta acc gaa tca gga gat att gaa acg atc gga   816Pro Tyr Ala Val Arg Leu Thr Glu Ser Gly Asp Ile Glu Thr Ile Gly

        260                 265                 270cgg tac gat ttc gac ggg aaa tta gcg atg agt atg aca gct cat cct   864Arg Tyr Asp Phe Asp Gly Lys Leu Ala Met Ser Met Thr Ala His Pro

    275                 280                 285aaa acc gat cca ata acc gga gaa act ttc gct ttc cgg tac ggt ccg   912Lys Thr Asp Pro Ile Thr Gly Glu Thr Phe Ala Phe Arg Tyr Gly Pro

290                 295                 300gtt cca ccg ttt tta aca tat ttc cgg ttt gat tcc gcc ggg aaa aaa   960Val Pro Pro Phe Leu Thr Tyr Phe Arg Phe Asp Ser Ala Gly Lys Lys305                 310                 315                 320caa aga gac gtt ccg ata ttc tcg atg acg tct ccg tcg ttt ctc cat   1008Gln Arg Asp Val Pro Ile Phe Ser Met Thr Ser Pro Ser Phe Leu His

            325                 330                 335gac ttc gcg atc acg aaa cgt cac gcg att ttc gca gag att cag ctt   1056Asp Phe Ala Ile Thr Lys Arg His Ala Ile Phe Ala Glu Ile Gln Leu

        340                 345                 350ggc atg agg atg aac atg ttg gat ttg gtt ctc gaa ggt ggt tct ccg   1104Gly Met Arg Met Asn Met Leu Asp Leu Val Leu Glu Gly Gly Ser Pro

    355                 360                 365gtt ggt act gat aac gga aaa act cca agg ctt gga gtg att cct aag   1152Val Gly Thr Asp Asn Gly Lys Thr Pro Arg Leu Gly Val Ile Pro Lys

370                 375                 380tac gcc gga gat gag tcg gag atg aaa tgg ttc gaa gtt cct gga ttc   1200Tyr Ala Gly Asp Glu Ser Glu Met Lys Trp Phe Glu Val Pro Gly Phe385                 390                 395                 400aat atc att cac gct att aat gct tgg gat gaa gat gat gga aac agc   1248Asn Ile Ile His Ala Ile Asn Ala Trp Asp Glu Asp Asp Gly Asn Ser

            405                 410                 415gtc gtt ttg att gca ccg aat att atg tcg att gaa cat act tta gag   1296Val Val Leu Ile Ala Pro Asn Ile Met Ser Ile Glu His Thr Leu Glu

        420                 425                 430agg atg gat ctg gtt cat gct ttg gtg gag aag gtg aag atc gat ctc   1344Arg Met Asp Leu Val His Ala Leu Val Glu Lys Val Lys Ile Asp Leu

    435                 440                 445gtc acc ggg att gtg aga cgt cat ccg atc tca gcg agg aat ctc gat   1392Val Thr Gly Ile Val Arg Arg His Pro Ile Ser Ala Arg Asn Leu Asp

450                 455                 460ttc gct gtg att aat ccg gcg ttt ctc ggg aga tgt agc agg tac gtt   1440Phe Ala Val Ile Asn Pro Ala Phe Leu Gly Arg Cys Ser Arg Tyr Val465                 470                 475                 480tac gcg gcg att gga gat ccg atg ccg aag atc tcc ggt gtg gtg aag   1488Tyr Ala Ala Ile Gly Asp Pro Met Pro Lys Ile Ser Gly Val Val Lys

            485                 490                 495ctt gat gtg tct aaa gga gat cgg gat gat tgt acg gtg gcc cgt aga   1536Leu Asp Val Ser Lys Gly Asp Arg Asp Asp Cys Thr Val Ala Arg Arg

        500                 505                 510atg tac ggt tca ggt tgt tac ggc gga gaa ccg ttt ttc gta gct agg   1584Met Tyr Gly Ser Gly Cys Tyr Gly Gly Glu Pro Phe Phe Val Ala Arg

    515                 520                 525gat cct ggt aat ccg gag gcg gag gag gat gat ggt tat gtg gtg acg   1632Asp Pro Gly Asn Pro Glu Ala Glu Glu Asp Asp Gly Tyr Val Val Thr

530                 535                 540tat gtt cac gat gaa gtg act gga gaa tcg aag ttt ctg gtg atg gac  1680Tyr Val His Asp Glu Val Thr Gly Glu Ser Lys Phe Leu Val Met Asp545                 550                 555                 560gct aaa tcg ccg gag ctt gaa atc gtc gcc gcc gtg agg ttg ccg cga  1728Ala Lys Ser Pro Glu Leu Glu Ile Val Ala Ala Val Arg Leu Pro Arg

            565                 570                 575agg gtt ccg tac gga ttc cat ggg tta ttt gtc aag gaa agt gac ctt  1776Arg Val Pro Tyr Gly Phe His Gly Leu Phe Val Lys Glu Ser Asp Leu

        580                 585                 590aat aag ctt taa                                                  1788Asn Lys Leu

    595<210>4<211>595<212>PRT<213>拟南芥<400>4Met Asp Ser Val Ser Ser Ser Ser Phe Leu Ser Ser Thr Phe Ser Leu  1               5                  10                  15His His Ser Leu Leu Arg Arg Arg Ser Ser Ser Pro Thr Leu Leu Arg

         20                  25                  30Ile Asn Ser Ala Val Val Glu Glu Arg Ser Pro Ile Thr Asn Pro Ser

     35                  40                  45Asp Asn Asn Asp Arg Arg Asn Lys Pro Lys Thr Leu His Asn Arg Thr

 50                  55                  60Asn His Thr Leu Val Ser Ser Pro Pro Lys Leu Arg Pro Glu Met Thr 65                  70                  75                  80Leu Ala Thr Ala Leu Phe Thr Thr Val Glu Asp Val Ile Asn Thr Phe

             85                  90                  95Ile Asp Pro Pro Ser Arg Pro Ser Val Asp Pro Lys His Val Leu Ser

        100                 105                 110Asp Asn Phe Ala Pro Val Leu Asp Glu Leu Pro Pro Thr Asp Cys Glu

    115                 120                 125Ile Ile His Gly Thr Leu Pro Leu Ser Leu Asn Gly Ala Tyr Ile Arg

130                 135                 140Asn Gly Pro Asn Pro Gln Phe Leu Pro Arg Gly Pro Tyr His Leu Phe145                 150                 155                 160Asp Gly Asp Gly Met Leu His Ala Ile Lys Ile His Asn Gly Lys Ala

            165                 170                 175Thr Leu Cys Ser Arg Tyr Val Lys Thr Tyr Lys Tyr Asn Val Glu Lys

        180                 185                 190Gln Thr Gly Ala Pro Val Met Pro Asn Val Phe Ser Gly Phe Asn Gly

    195                 200                 205Val Thr Ala Ser Val Ala Arg Gly Ala Leu Thr Ala Ala Arg Val Leu

210                 215                 220Thr Gly Gln Tyr Asn Pro Val Asn Gly Ile Gly Leu Ala Asn Thr Ser225                 230                 235                 240Leu Ala Phe Phe Ser Asn Arg Leu Phe Ala Leu Gly Glu Ser Asp Leu

            245                 250                 255Pro Tyr Ala Val Arg Leu Thr Glu Ser Gly Asp Ile Glu Thr Ile Gly

        260                 265                 270Arg Tyr Asp Phe Asp Gly Lys Leu Ala Met Ser Met Thr Ala His Pro

    275                 280                 285Lys Thr Asp Pro Ile Thr Gly Glu Thr Phe Ala Phe Arg Tyr Gly Pro

290                 295                 300Val Pro Pro Phe Leu Thr Tyr Phe Arg Phe Asp Ser Ala Gly Lys Lys305                 310                 315                 320Gln Arg Asp Val Pro Ile Phe Ser Met Thr Ser Pro Ser Phe Leu His

            325                 330                 335Asp Phe Ala Ile Thr Lys Arg His Ala Ile Phe Ala Glu Ile Gln Leu

        340                 345                 350Gly Met Arg Met Asn Met Leu Asp Leu Val Leu Glu Gly Gly Ser Pro

    355                 360                 365Val Gly Thr Asp Asn Gly Lys Thr Pro Arg Leu Gly Val Ile Pro Lys

370                 375                 380Tyr Ala Gly Asp Glu Ser Glu Met Lys Trp Phe Glu Val Pro Gly Phe385                 390                 395                 400Asn Ile Ile His Ala Ile Asn Ala Trp Asp Glu Asp Asp Gly Asn Ser

            405                 410                 415Val Val Leu Ile Ala Pro Asn Ile Met Ser Ile Glu His Thr Leu Glu

        420                 425                 430Arg Met Asp Leu Val His Ala Leu Val Glu Lys Val Lys Ile Asp Leu

    435                 440                 445Val Thr Gly Ile Val Arg Arg His Pro Ile Ser Ala Arg Asn Leu Asp

450                 455                 460Phe Ala Val Ile Asn Pro Ala Phe Leu Gly Arg Cys Ser Arg Tyr Val465                 470                 475                 480Tyr Ala Ala Ile Gly Asp Pro Met Pro Lys Ile Ser Gly Val Val Lys

            485                 490                 495Leu Asp Val Ser Lys Gly Asp Arg Asp Asp Cys Thr Val Ala Arg Arg

        500                 505                 510Met Tyr Gly Ser Gly Cys Tyr Gly Gly Glu Pro Phe Phe Val Ala Arg

    515                 520                 525Asp Pro Gly Asn Pro Glu Ala Glu Glu Asp Asp Gly Tyr Val Val Thr

530                 535                 540Tyr Val His Asp Glu Val Thr Gly Glu Ser Lys Phe Leu Val Met Asp545                 550                 555                 560Ala Lys Ser Pro Glu Leu Glu Ile Val Ala Ala Val Arg Leu Pro Arg

            565                 570                 575Arg Val Pro Tyr Gly Phe His Gly Leu Phe Val Lys Glu Ser Asp Leu

        580                 585                 590Asn Lys Leu

    595<210>5<211>1800<212>DNA<213>拟南芥<220><221>CDS<222>(1)..(1800)<400>5atg gct tct ttc acg gca acg gct gcg gtt tct ggg aga tgg ctt ggt  48Met Ala Ser Phe Thr Ala Thr Ala Ala Val Ser Gly Arg Trp Leu Gly  1               5                  10                  15ggc aat cat act cag ccg cca tta tcg tot tct caa agc tcc gac ttg  96Gly Asn His Thr Gln Pro Pro Leu Ser Ser Ser Gln Ser Ser Asp Leu

         20                  25                  30agt tat tgt agc tcc tta cct atg gcc agt cgt gtc aca cgt aag ctc  144Ser Tyr Cys Ser Ser Leu Pro Met Ala Ser Arg Val Thr Arg Lys Leu

     35                  40                  45aat gtt tca tct gcg ctt cac act cct cca gct ctt cat ttc cct aag  192Asn Val Ser Ser Ala Leu His Thr Pro Pro Ala Leu His Phe Pro Lys

 50                  55                  60caa tca tca aac tct ccc gcc att gtt gtt aag ccc aaa gcc aaa gaa  240Gln Ser Ser Asn Ser Pro Ala Ile Val Val Lys Pro Lys Ala Lys Glu 65                  70                  75                  80tcc aac act aaa cag atg aat ttg ttc cag aga gcg gcg gcg gca gcg  288Ser Asn Thr Lys Gln Met Asn Leu Phe Gln Arg Ala Ala Ala Ala Ala

             85                  90                  95ttg gac gcg gcg gag ggt ttc ctt gtc agc cac gag aag cta cac ccg  336Leu Asp Ala Ala Glu Gly Phe Leu Val Ser His Glu Lys Leu His Pro

        100                 105                 110ctt cct aaa acg gct gat cct agt gtt cag atc gcc gga aat ttt gct   384Leu Pro Lys Thr Ala Asp Pro Ser Val Gln Ile Ala Gly Asn Phe Ala

    115                 120                 125ccg gtg aat gaa cag ccc gtc cgg cgt aat ctt ccg gtg gtc gga aaa   432Pro Val Asn Glu Gln Pro Val Arg Arg Asn Leu Pro Val Val Gly Lys

130                 135                 140ctt ccc gat tcc atc aaa gga gtg tat gtg cgc aac gga gct aac cca   480Leu Pro Asp Ser Ile Lys Gly Val Tyr Val Arg Asn Gly Ala Asn Pro145                 150                 155                 160ctt cac gag ccg gtg aca ggt cac cac ttc ttc gac gga gac ggt atg   528Leu His Glu Pro Val Thr Gly His His Phe Phe Asp Gly Asp Gly Met

            165                 170                 175gtt cac gcc gtc aaa ttc gaa cac ggt tca gct agc tac gct tgc cgg   576Val His Ala Val Lys Phe Glu His Gly Ser Ala Ser Tyr Ala Cys Arg

        180                 185                 190ttt act cag act aac cgg ttt gtt cag gaa cgt caa ttg ggt cga ccg   624Phe Thr Gln Thr Asn Arg Phe Val Gln Glu Arg Gln Leu Gly Arg Pro

    195                 200                 205gtt ttc ccc aaa gcc atc ggt gag ctt cac ggc cac acc ggt att gcc   672Val Phe Pro Lys Ala Ile Gly Glu Leu His Gly His Thr Gly Ile Ala

210                 215                 220cga ctc atg cta ttc tac gcc aga gct gca gcc ggt ata gtc gac ccg   720Arg Leu Met Leu Phe Tyr Ala Arg Ala Ala Ala Gly Ile Val Asp Pro225                 230                 235                 240gca cac gga acc ggt gta gct aac gcc ggt ttg gtc tat ttc aat ggc   768Ala His Gly Thr Gly Val Ala Asn Ala Gly Leu Val Tyr Phe Asn Gly

            245                 250                 255cgg tta ttg gct atg tcg gag gat gat tta cct tac caa gtt cag atc   816Arg Leu Leu Ala Met Ser Glu Asp Asp Leu Pro Tyr Gln Val Gln Ile

        260                 265                 270act ccc aat gga gat tta aaa acc gtt ggt cgg ttc gat ttt gat gga   864Thr Pro Asn Gly Asp Leu Lys Thr Val Gly Arg Phe Asp Phe Asp Gly

    275                 280                 285caa tta gaa tcc aca atg att gcc cac ccg aaa gtc gac ccg gaa tcc   912Gln Leu Glu Ser Thr Met Ile Ala His Pro Lys Val Asp Pro Glu Ser

290                 295                 300ggt gaa ctc ttc gct tta agc tac gac gtc gtt tca aag cct tac cta   960Gly Glu Leu Phe Ala Leu Ser Tyr Asp Val Val Ser Lys Pro Tyr Leu305                 310                 315                 320aaa tac ttc cga ttc tca ccg gac gga act aaa tca ccg gac gtc gag   1008Lys Tyr Phe Arg Phe Ser Pro Asp Gly Thr Lys Ser Pro Asp Val Glu

            325                 330                 335att cag ctt gat cag cca acg atg atg cac gat ttc gcg att aca gag   1056Ile Gln Leu Asp Gln Pro Thr Met Met His Asp Phe Ala Ile Thr Glu

        340                 345                 350aac ttc gtc gtc gta cct gac cag caa gtc gtt ttc aag ctg ccg gag   1104Asn Phe Val Val Val Pro Asp Gln Gln Val Val Phe Lys Leu Pro Glu

    355                 360                 365atg atc cgc ggt ggg tct ccg gtg gtt tac gac aag aac aag gtc gca   1152Met Ile Arg Gly Gly Ser Pro Val Val Tyr Asp Lys Asn Lys Val Ala

370                 375                 380aga ttc ggg att tta gac aaa tac gcc gaa gat tca tcg aac att aag   1200Arg Phe Gly Ile Leu Asp Lys Tyr Ala Glu Asp Ser Ser Asn Ile Lys385                 390                 395                 400tgg att gat gct cca gat tgc ttc tgc ttc cat ctc tgg aac gct tgg   1248Trp Ile Asp Ala Pro Asp Cys Phe Cys Phe His Leu Trp Asn Ala Trp

            405                 410                 415gaa gag cca gaa aca gat gaa gtc gtc gtg ata ggg tcc tgt atg act   1296Glu Glu Pro Glu Thr Asp Glu Val Val Val Ile Gly Ser Cys Met Thr

        420                 425                 430cca cca gac tca att ttc aac gag tct gac gag aat ctc aag agt gtc   1344Pro Pro Asp Ser Ile Phe Asn Glu Ser Asp Glu Asn Leu Lys Ser Val

    435                 440                 445ctg tct gaa atc cgc ctg aat ctc aaa acc ggt gaa tca act cgc cgt   1392Leu Ser Glu Ile Arg Leu Asn Leu Lys Thr Gly Glu Ser Thr Arg Arg

450                 455                 460ccg atc atc tcc aac gaa gat caa caa gtc aac ctc gaa gca ggg atg   1440Pro Ile Ile Ser Asn Glu Asp Gln Gln Val Asn Leu Glu Ala Gly Met465                 470                 475                 480gtc aac aga aac atg ctc ggc cgt aaa acc aaa ttc gct tac ttg gct   1488Val Asn Arg Asn Met Leu Gly Arg Lys Thr Lys Phe Ala Tyr Leu Ala

            485                 490                 495tta gcc gag ccg tgg cct aaa gtc tca gga ttc gct aaa gtt gat ctc   1536Leu Ala Glu Pro Trp Pro Lys Val Ser Gly Phe Ala Lys Val Asp Leu

        500                 505                 510act act gga gaa gtt aag aaa cat ctt tac ggc gat aac cgt tac gga   1584Thr Thr Gly Glu Val Lys Lys His Leu Tyr Gly Asp Asn Arg Tyr Gly

    515                 520                 525gga gag cct ctg ttt ctc ccc gga gaa gga gga gag gaa gac gaa gga   1632Gly Glu Pro Leu Phe Leu Pro Gly Glu Gly Gly Glu Glu Asp Glu Gly

530                 535                 540tac atc ctc tgt ttc gtt cac gac gag aag aca tgg aaa tcg gag tta   1680Tyr Ile Leu Cys Phe Val His Asp Glu Lys Thr Trp Lys Ser Glu Leu545                 550                 555                 560cag ata gtt aac gcc gtt agc tta gag gtt gaa gca acg gtt aaa ctt   1728Gln Ile Val Asn Ala Val Ser Leu Glu Val Glu Ala Thr Val Lys Leu

            565                 570                 575ccg tca agg gtt ccg tac gga ttt cac ggt aca ttc atc gga gcc gat   1776Pro Ser Arg Val Pro Tyr Gly Phe His Gly Thr Phe Ile Gly Ala Asp

        580                 585                 590gat ttg gcg aag cag gtc gtg tga                                   1800Asp Leu Ala Lys Gln Val Val

    595             600<2l0>6<21l>599<212>PRT<213>拟南芥<400>6Met Ala Ser Phe Thr Ala Thr Ala Ala Val Ser Gly Arg Trp Leu Gly  1               5                  10                  15Gly Asn His Thr Gln Pro Pro Leu Ser Ser Ser Gln Ser Ser Asp Leu

         20                  25                  30Ser Tyr Cys Ser Ser Leu Pro Met Ala Ser Arg Val Thr Arg Lys Leu

     35                  40                  45Asn Val Ser Ser Ala Leu His Thr Pro Pro Ala Leu His Phe Pro Lys

 50                  55                  60Gln Ser Ser Asn Ser Pro Ala Ile Val Val Lys Pro Lys Ala Lys Glu 65                  70                  75                  80Ser Asn Thr Lys Gln Met Asn Leu Phe Gln Arg Ala Ala Ala Ala Ala

             85                  90                  95Leu Asp Ala Ala Glu Gly Phe Leu Val Ser His Glu Lys Leu His Pro

        100                 105                 110Leu Pro Lys Thr Ala Asp Pro Ser Val Gln Ile Ala Gly Asn Phe Ala

    115                 120                 125Pro Val Asn Glu Gln Pro Val Arg Arg Asn Leu Pro Val Val Gly Lys

130                 135                 140Leu Pro Asp Ser Ile Lys Gly Val Tyr Val Arg Asn Gly Ala Asn Pro145                 150                 155                 160Leu His Glu Pro Val Thr Gly His His Phe Phe Asp Gly Asp Gly Met

            165                 170                 175Val His Ala Val Lys Phe Glu His Gly Ser Ala Ser Tyr Ala Cys Arg

        180                 185                 190Phe Thr Gln Thr Asn Arg Phe Val Gln Glu Arg Gln Leu Gly Arg Pro

    195                 200                 205Val Phe Pro Lys Ala Ile Gly Glu Leu His Gly His Thr Gly Ile Ala

210                 215                 220Arg Leu Met Leu Phe Tyr Ala Arg Ala Ala Ala Gly Ile Val Asp Pro225                 230                 235                 240Ala His Gly Thr Gly Val Ala Asn Ala Gly Leu Val Tyr Phe Asn Gly

            245                 250                 255Arg Leu Leu Ala Met Ser Glu Asp Asp Leu Pro Tyr Gln Val Gln Ile

        260                 265                 270Thr Pro Asn Gly Asp Leu Lys Thr Val Gly Arg Phe Asp Phe Asp Gly

    275                 280                 285Gln Leu Glu Ser Thr Met Ile Ala His Pro Lys Val Asp Pro Glu Ser

290                 295                 300Gly Glu Leu Phe Ala Leu Ser Tyr Asp Val Val Ser Lys Pro Tyr Leu305                 310                 315                 320Lys Tyr Phe Arg Phe Ser Pro Asp Gly Thr Lys Ser Pro Asp Val Glu

            325                 330                 335Ile Gln Leu Asp Gln Pro Thr Met Met His Asp Phe Ala Ile Thr Glu

        340                 345                 350Asn Phe Val Val Val Pro Asp Gln Gln Val Val Phe Lys Leu Pro Glu

    355                 360                 365Met Ile Arg Gly Gly Ser Pro Val Val Tyr Asp Lys Asn Lys Val Ala

370                 375                 380Arg Phe Gly Ile Leu Asp Lys Tyr Ala Glu Asp Ser Ser Asn Ile Lys385                 390                 395                 400Trp Ile Asp Ala Pro Asp Cys Phe Cys Phe His Leu Trp Asn Ala Trp

            405                 410                 415Glu Glu Pro Glu Thr Asp Glu Val Val Val Ile Gly Ser Cys Met Thr

        420                 425                 430Pro Pro Asp Ser Ile Phe Asn Glu Ser Asp Glu Asn Leu Lys Ser Val

    435                 440                 445Leu Ser Glu Ile Arg Leu Asn Leu Lys Thr Gly Glu Ser Thr Arg Arg

450                 455                 460Pro Ile Ile Ser Asn Glu Asp Gln Gln Val Asn Leu Glu Ala Gly Met465                 470                 475                 480Val Asn Arg Asn Met Leu Gly Arg Lys Thr Lys Phe Ala Tyr Leu Ala

            485                 490                 495Leu Ala Glu Pro Trp Pro Lys Val Ser Gly Phe Ala Lys Val Asp Leu

        500                 505                 510Thr Thr Gly Glu Val Lys Lys His Leu Tyr Gly Asp Asn Arg Tyr Gly

    515                 520                 525Gly Glu Pro Leu Phe Leu Pro Gly Glu Gly Gly Glu Glu Asp Glu Gly

530                 535                 540Tyr Ile Leu Cys Phe Val His Asp Glu Lys Thr Trp Lys Ser Glu Leu545                 550                 555                 560Gln Ile Val Asn Ala Val Ser Leu Glu Val Glu Ala Thr Val Lys Leu

            565                 570                 575Pro Ser Arg Val Pro Tyr Gly Phe His Gly Thr Phe Ile Gly Ala Asp

        580                 585                 590Asp Leu Ala Lys Gln Val Val

    595<210>7<211>1617<212>DNA<213>拟南芥<220><221>CDS<222>(1)..(1617)<400>7atg gcg gag aaa ctc agt gat ggc agc agc atc atc tca gtc cat cct  48Met Ala Glu Lys Leu Ser Asp Gly Ser Ser Ile Ile Ser Val His Pro  1               5                  10                  15aga ccc tcc aag ggt ttc tcc tcg aag ctt ctc gat ctt ctc gag aga  96Arg Pro Ser Lys Gly Phe Ser Ser Lys Leu Leu Asp Leu Leu Glu Arg

         20                  25                  30ctt gtt gtc aag ctc atg cac gat gct tct ctc cct ctc cac tac ctc   144Leu Val Val Lys Leu Met His Asp Ala Ser Leu Pro Leu His Tyr Leu

     35                  40                  45tca ggc aac ttc gct ccc atc cgt gat gaa act cct ccc gtc aag gat   192Ser Gly Asn Phe Ala Pro Ile Arg Asp Glu Thr Pro Pro Val Lys Asp

 50                  55                  60ctc ccc gtc cat gga ttt ctt ccc gaa tgc ttg aat ggt gaa ttt gtg   240Leu Pro Val His Gly Phe Leu Pro Glu Cys Leu Asn Gly Glu Phe Val 65                  70                  75                  80agg gtt ggt cca aac ccc aag ttt gat gct gtc gct gga tat cac tgg   288Arg Val Gly Pro Asn Pro Lys Phe Asp Ala Val Ala Gly Tyr His Trp

             85                  90                  95ttt gat gga gat ggg atg att cat ggg gta cgc atc aaa gat ggg aaa   336Phe Asp Gly Asp Gly Met Ile His Gly Val Arg Ile Lys Asp Gly Lys

        100                 105                 110gct act tat gtt tct cga tat gtt aag aca tca cgt ctt aag cag gaa   384Ala Thr Tyr Val Ser Arg Tyr Val Lys Thr Ser Arg Leu Lys Gln Glu

    115                 120                 125gag ttc ttc gga gct gcc aaa ttc atg aag att ggt gac ctt aag ggg   432Glu Phe Phe Gly Ala Ala Lys Phe Met Lys Ile Gly Asp Leu Lys Gly

130                 135                 140ttt ttc gga ttg cta atg gtc aat gtc caa cag ctg aga acg aag ctc   480Phe Phe Gly Leu Leu Met Val Asn Val Gln Gln Leu Arg Thr Lys Leu145                 150                 155                 160aaa ata ttg gac aac act tat gga aat gga act gcc aat aca gca ctc   528Lys Ile Leu Asp Asn Thr Tyr Gly Asn Gly Thr Ala Asn Thr Ala Leu

            165                 170                 175gta tat cac cat gga aaa ctt cta gca tta cag gag gca gat aag ccg   576Val Tyr His His Gly Lys Leu Leu Ala Leu Gln Glu Ala Asp Lys Pro

        180                 185                 190tac gtc atc aaa gtt ttg gaa gat gga gac ctg caa act ctt ggt ata   624Tyr Val Ile Lys Val Leu Glu Asp Gly Asp Leu Gln Thr Leu Gly Ile

    195                 200                 205ata gat tat gac aag aga ttg acc cac tcc ttc act gct cac cca aaa   672Ile Asp Tyr Asp Lys Arg Leu Thr His Ser Phe Thr Ala His Pro Lys

210                 215                 220gtt gac ccg gtt acg ggt gaa atg ttt aca ttc ggc tat tcg cat acg   720Val Asp Pro Val Thr Gly Glu Met Phe Thr Phe Gly Tyr Ser His Thr225                 230                 235                 240cca cct tat ctc aca tac aga gtt atc tcg aaa gat ggc att atg cat   768Pro Pro Tyr Leu Thr Tyr Arg Val Ile Ser Lys Asp Gly Ile Met His

            245                 250                 255gac cca gtc cca att act ata tca gag cct atc atg atg cat gat ttt   816Asp Pro Val Pro Ile Thr Ile Ser Glu Pro Ile Met Met His Asp Phe

        260                 265                 270gct att act gag act tat gca atc ttc atg gat ctt cct atg cacttc   864Ala Ile Thr Glu Thr Tyr Ala Ile Phe Met Asp Leu Pro Met His Phe

    275                 280                 285agg cca aag gaa atg gtg aaa gag aag aaa atg ata tac tca ttt gat   912Arg Pro Lys Glu Met Val Lys Glu Lys Lys Met Ile Tyr Ser Phe Asp

290                 295                 300ccc aca aaa aag gct cgt ttt ggt gtt ctt cca cgc tat gcc aag gat   960Pro Thr Lys Lys Ala Arg Phe Gly Val Leu Pro Arg Tyr Ala Lys Asp305                 310                 315                 320gaa ctt atg att aga tgg ttt gag ctt ccc aac tgc ttt att ttc cac   1008Glu Leu Met Ile Arg Trp Phe Glu Leu Pro Asn Cys Phe Ile Phe His

            325                 330                 335aac gcc aat gct tgg gaa gaa gag gat gaa gte gtc ctc atc act tgt   1056Asn Ala Asn Ala Trp Glu Glu Glu Asp Glu Val Val Leu Ile Thr Cys

        340                 345                 350cgt ctt gag aat cca gat ctt gac atg gtc agt ggg aaa gtg aaa gaa   1104Arg Leu Glu Asn Pro Asp Leu Asp Met Val Ser Gly Lys Val Lys Glu

    355                 360                 365aaa ctc gaa aat ttt ggc aac gaa ctg tac gaa atg aga ttc aac atg   1152Lys Leu Glu Asn Phe Gly Asn Glu Leu Tyr Glu Met Arg Phe Asn Met

370                 375                 380aaa acg ggc tca gct tct caa aaa aaa cta tcc gca tct gcg gtt gat   1200Lys Thr Gly Ser Ala Ser Gln Lys Lys Leu Ser Ala Ser Ala Val Asp385                 390                 395                 400ttc ccc aga atc aat gag tgc tac acc gga aag aaa cag aga tac gta   1248Phe Pro Arg Ile Asn Glu Cys Tyr Thr Gly Lys Lys Gln Arg Tyr Val

            405                 410                 415tat gga aca att ctg gac agt atc gca aag gtt acc gga atc atc aag   1296Tyr Gly Thr Ile Leu Asp Ser Ile Ala Lys Val Thr Gly Ile Ile Lys

        420                 425                 430ttt gat ctg cat gca gaa gct gag aca ggg aaa aga atg ctg gaa gta   1344Phe Asp Leu His Ala Glu Ala Glu Thr Gly Lys Arg Met Leu Glu Val

    435                 440                 445gga ggt aat atc aaa gga ata tat gac ctg gga gaa ggc aga tat ggt   1392Gly Gly Asn Ile Lys Gly Ile Tyr Asp Leu Gly Glu Gly Arg Tyr Gly

450                 455                 460tca gag gct atc tat gtt ccg cgt gag aca gca gaa gaa gac gac ggt   1440Ser Glu Ala Ile Tyr Val Pro Arg Glu Thr Ala Glu Glu Asp Asp Gly465                 470                 475                 480tac ttg ata ttc ttt gtt cat gat gaa aac aca ggg aaa tca tgc gtg   1488Tyr Leu Ile Phe Phe Val His Asp Glu Asn Thr Gly Lys Ser Cys Val

            485                 490                 495act gtg ata gac gca aaa aca atg tcg gct gaa ccg gtg gca gtg gtg   1536Thr Val Ile Asp Ala Lys Thr Met Ser Ala Glu Pro Val Ala Val Val

        500                 505                 510gag ctg ccg cac agg gtc cca tat ggc ttc cat gcc ttg ttt gtt aca   1584Glu Leu Pro His Arg Val Pro Tyr Gly Phe His Ala Leu Phe Val Thr

    515                 520                 525gag gaa caa ctc cag gaa caa act ctt ata taa                       1617Glu Glu Gln Leu Gln Glu Gln Thr Leu I1e

530                 535<210> 8<211> 538<212>PRT<2l3>拟南芥<400> 8Met Ala Glu Lys Leu Ser Asp Gly Ser Ser Ile Ile Ser Val His Pro  1               5                  10                  15Arg Pro Ser Lys Gly Phe Ser Ser Lys Leu Leu Asp Leu Leu Glu Arg

         20                  25                  30Leu Val Val Lys Leu Met His Asp Ala Ser Leu Pro Leu His Tyr Leu

     35                  40                  45Ser Gly Asn Phe Ala Pro Ile Arg Asp Glu Thr Pro Pro Val Lys Asp

 50                  55                  60Leu Pro Val His Gly Phe Leu Pro Glu Cys Leu Asn Gly Glu Phe Val 65                  70                  75                  80Arg Val Gly Pro Asn Pro Lys Phe Asp Ala Val Ala Gly Tyr His Trp

             85                  90                  95Phe Asp Gly Asp Gly Met Ile His Gly Val Arg Ile Lys Asp Gly Lys

        100                 105                 110Ala Thr Tyr Val Ser Arg Tyr Val Lys Thr Ser Arg Leu Lys Gln Glu

    115                 120                 125Glu Phe Phe Gly Ala Ala Lys Phe Met Lys Ile Gly Asp Leu Lys Gly

130                 135                 140Phe Phe Gly Leu Leu Met Val Asn Val Gln Gln Leu Arg Thr Lys Leu145                 150                 155                 160Lys Ile Leu Asp Asn Thr Tyr Gly Asn Gly Thr Ala Asn Thr Ala Leu

            165                 170                 175Val Tyr His His Gly Lys Leu Leu Ala Leu Gln Glu Ala Asp Lys Pro

        180                 185                 190Tyr Val Ile Lys Val Leu Glu Asp Gly Asp Leu Gln Thr Leu Gly Ile

    195                 200                 205Ile Asp Tyr Asp Lys Arg Leu Thr His Ser Phe Thr Ala His Pro Lys

210                 215                 220Val Asp Pro Val Thr Gly Glu Met Phe Thr Phe Gly Tyr Ser His Thr225                 230                 235                 240Pro Pro Tyr Leu Thr Tyr Arg Val Ile Ser Lys Asp Gly Ile Met His

            245                 250                 255Asp Pro Val Pro Ile Thr Ile Ser Glu Pro Ile Met Met His Asp Phe

        260                 265                 270Ala Ile Thr Glu Thr Tyr Ala Ile Phe Met Asp Leu Pro Met His Phe

    275                 280                 285Arg Pro Lys Glu Met Val Lys Glu Lys Lys Met Ile Tyr Ser Phe Asp

290                 295                 300Pro Thr Lys Lys Ala Arg Phe Gly Val Leu Pro Arg Tyr Ala Lys Asp305                 310                 315                 320Glu Leu Met Ile Arg Trp Phe Glu Leu Pro Asn Cys Phe Ile Phe His

            325                 330                 335Asn Ala Asn Ala Trp Glu Glu Glu Asp Glu Val Val Leu Ile Thr Cys

        340                 345                 350Arg Leu Glu Asn Pro Asp Leu Asp Met Val Ser Gly Lys Val Lys Glu

    355                 360                 365Lys Leu Glu Asn Phe Gly Asn Glu Leu Tyr Glu Met Arg Phe Asn Met

370                 375                 380Lys Thr Gly Ser Ala Ser Gln Lys Lys Leu Ser Ala Ser Ala Val Asp385                 390                 395                 400Phe Pro Arg Ile Asn Glu Cys Tyr Thr Gly Lys Lys Gln Arg Tyr Val

            405                 410                 415Tyr Gly Thr Ile Leu Asp Ser Ile Ala Lys Val Thr Gly Ile Ile Lys

        420                 425                 430Phe Asp Leu His Ala Glu Ala Glu Thr Gly Lys Arg Met Leu Glu Val

    435                 440                 445Gly Gly Asn Ile Lys Gly Ile Tyr Asp Leu Gly Glu Gly Arg Tyr Gly

450                 455                 460Ser Glu Ala Ile Tyr Val Pro Arg Glu Thr Ala Glu Glu Asp Asp Gly465                 470                 475                 480Tyr Leu Ile Phe Phe Val His Asp Glu Asn Thr Gly Lys Ser Cys Val

            485                 490                 495Thr Val Ile Asp Ala Lys Thr Met Ser Ala Glu Pro Val Ala Val Val

        500                 505                 510Glu Leu Pro His Arg Val Pro Tyr Gly Phe His Ala Leu Phe Val Thr

    515                 520                 525Glu Glu Gln Leu Gln Glu Gln Thr Leu Ile

530                 535<210>9<21l>1734<212>DNA<213>拟南芥<220><221>CDS<222>(1)..(1734)<400>9atg caa cac tct ctt cgt tct gat ctt ctt ccg acg aag act tct cct  48Met Gln His Ser Leu Arg Ser Asp Leu Leu Pro Thr Lys Thr Ser Pro  1               5                  10                  15cgt tct cat tta ctt cca caa ccc aaa aat gca aat att tct cga cga  96Arg Ser His Leu Leu Pro Gln Pro Lys Asn Ala Asn Ile Ser Arg Arg

         20                  25                  30att ctc att aac cct ttc aag ata ccg aca ctt cct gat ctc act tct  144Ile Leu Ile Asn Pro Phe Lys Ile Pro Thr Leu Pro Asp Leu Thr Ser

     35                  40                  45ccg gtt ccg tca ccg gtt aag ctc aaa cca acg tat cca aac tta aac  192Pro Val Pro Ser Pro Val Lys Leu Lys Pro Thr Tyr Pro Asn Leu Asn

 50                  55                  60ctt ctt cag aag cta gcg gct acg atg ctc gac aag att gag tcc tct   240Leu Leu Gln Lys Leu Ala Ala Thr Met Leu Asp Lys Ile Glu Ser Ser 65                  70                  75                  80atc gtt att cct atg gag cag aat cgc ccg ctt cct aaa ccg acc gac   288Ile Val Ile Pro Met Glu Gln Asn Arg Pro Leu Pro Lys Pro Thr Asp

             85                  90                  95ccg gcg gtt caa tta tca ggt aac ttc gct ccg gtt aat gaa tgt ccg   336Pro Ala Val Gln Leu Ser Gly Asn Phe Ala Pro Val Asn Glu Cys Pro

        100                 105                 110gtt cag aac ggt tta gaa gtg gtt ggt cag att cct tct tgt cta aaa   384Val Gln Asn Gly Leu Glu Val Val Gly Gln Ile Pro Ser Cys Leu Lys

    115                 120                 125gga gtt tac atc cgt aac ggt gca aac cct atg ttt ccg ccg tta gcc   432Gly Val Tyr Ile Arg Asn Gly Ala Asn Pro Met Phe Pro Pro Leu Ala

130                 135                 140gga cat cat tta ttt gac ggt gac gga atg att cac gcc gtt agt atc   480Gly His His Leu Phe Asp Gly Asp Gly Met Ile His Ala Val Ser Ile145                 150                 155                 160ggt ttt gat aac cag gtt agt tac agc tgc cgg tac act aaa aca aac   528Gly Phe Asp Asn Gln Val Ser Tyr Ser Cys Arg Tyr Thr Lys Thr Asn

            165                 170                 175cgg ctt gtt caa gaa acc gcg ctt gga cga tcg gtt ttc cct aaa cca   576Arg Leu Val Gln Glu Thr Ala Leu Gly Arg Ser Val Phe Pro Lys Pro

        180                 185                 190atc ggc gag ctt cac ggc cat tcc ggt cta gct cga ctc gct ctc ttc   624Ile Gly Glu Leu His Gly His Ser Gly Leu Ala Arg Leu Ala Leu Phe

    195                 200                 205acg gct cga gct ggg atc ggt cta gtg gac ggg aca cgt ggc atg ggc   672Thr Ala Arg Ala Gly Ile Gly Leu Val Asp Gly Thr Arg Gly Met Gly

210                 215                 220gta gct aac gcc ggt gtg gtt ttc ttt aac ggc agg tta tta gcc atg   720Val Ala Asn Ala Gly Val Val Phe Phe Asn Gly Arg Leu Leu Ala Met225                 230                 235                 240tca gaa gat gat ctt cct tac caa gtg aag atc gac ggt caa gga gat   768Ser Glu Asp Asp Leu Pro Tyr Gln Val Lys Ile Asp Gly Gln Gly Asp

            245                 250                 255ctt gag acg atc gga cgg ttc gga ttc gat gac cag att gac tct tca   816Leu Glu Thr Ile Gly Arg Phe Gly Phe Asp Asp Gln Ile Asp Ser Ser

        260                 265                 270gtg ata gcg cat cct aag gtg gac gcg acc aca gga gat ctc cat aca   864Val Ile Ala His Pro Lys Val Asp Ala Thr Thr Gly Asp Leu His Thr

    275                 280                 285ctg agc tac aac gtt ttg aag aaa cct cat ctc agg tat ctt aaa ttc   912Leu Ser Tyr Asn Val Leu Lys Lys Pro His Leu Arg Tyr Leu Lys Phe

290                 295                 300aac acg tgc ggg aaa aag aca cgt gac gtg gag atc acg ctc cct gaa   960Asn Thr Cys Gly Lys Lys Thr Arg Asp Val Glu Ile Thr Leu Pro Glu305                 310                 315                 320cca acg atg att cat gat ttc gcg ata acc gag aat ttt gtc gtt ata   1008Pro Thr Met Ile His Asp Phe Ala Ile Thr Glu Asn Phe Val Val Ile

            325                 330                 335ccg gat cag caa atg gta ttc aaa tta tcc gaa atg att cgg ggc ggg   1056Pro Asp Gln Gln Met Val Phe Lys Leu Ser Glu Met Ile Arg Gly Gly

        340                 345                 350tca ccc gtt atc tac gtt aaa gaa aaa atg gcg aga ttt gga gtt ttg   1104Ser Pro Val Ile Tyr Val Lys Glu Lys Met Ala Arg Phe Gly Val Leu

    355                 360                 365tca aag cag gat ctg acc ggg tcg gat ata aat tgg gtt gat gta ccg   1152Ser Lys Gln Asp Leu Thr Gly Ser Asp Ile Asn Trp Val Asp Val Pro

370                 375                 380gat tgt ttc tgt ttc cat cta tgg aat gcg tgg gaa gag aga acc gaa   1200Asp Cys Phe Cys Phe His Leu Trp Asn Ala Trp Glu Glu Arg Thr Glu385                 390                 395                 400gag gga gac cca gtt atc gtc gta atc ggg tca tgt atg agc cca ccc   1248Glu Gly Asp Pro Val Ile Val Val Ile Gly Ser Cys Met Ser Pro Pro

            405                 410                 415gac acg atc ttt agt gaa tca gga gaa cca acc cgg gtt gaa tta agt   1296Asp Thr Ile Phe Ser Glu Ser Gly Glu Pro Thr Arg Val Glu Leu Ser

        420                 425                 430gag atc cgg tta aac atg cgt aca aaa gaa tcg aac cgt aag gtt atc   1344Glu Ile Arg Leu Asn Met Arg Thr Lys Glu Ser Asn Arg Lys Val Ile

    435                 440                 445gta acc gga gtg aat tta gaa gcg ggt cac ata aac cgt agt tac gtg   1392Val Thr Gly Val Asn Leu Glu Ala Gly His Ile Asn Arg Ser Tyr Val

450                 455                 460ggc cgg aaa agc cag ttc gtt tac ata gca ata gcc gat cct tgg ccc   1440Gly Arg Lys Ser Gln Phe Val Tyr Ile Ala Ile Ala Asp Pro Trp Pro465                 470                 475                 480aaa tgc agt ggc att gcg aag gta gat ata caa aac ggc acc gtt tca   1488Lys Cys Ser Gly Ile Ala Lys Val Asp Ile Gln Asn Gly Thr Val Ser

            485                 490                 495gag ttt aat tac gga ccg agc cgg ttc ggt gga gaa ccg tgc ttt gta   1536Glu Phe Asn Tyr Gly Pro Ser Arg Phe Gly Gly Glu Pro Cys Phe Val

        500                 505                 510ccg gag gga gaa gga gaa gaa gac aaa ggt tat gta atg ggg ttt gtg   1584Pro Glu Gly Glu Gly Glu Glu Asp Lys Gly Tyr Val Met Gly Phe Val

    515                 520                 525aga gac gaa gag aaa gac gag tcg gag ttt gtg gtg gtc gac gcg acg   1632Arg Asp Glu Glu Lys Asp Glu Ser Glu Phe Val Val Val Asp Ala Thr

530                 535                 540gat atg aag caa gtc gcg gcg gtg cgc ttg ccg gag agg gta cct tat   1680Asp Met Lys Gln Val Ala Ala Val Arg Leu Pro Glu Arg Val Pro Tyr545                 550                 555                 560ggt ttc cat gga acg ttc gtg agc gag aat cag ttg aag gaa caa gtt   1728Gly Phe His Gly Thr Phe Val Ser Glu Asn Gln Leu Lys Glu Gln Val

            565                 570                 575ttc tga                                                           1734Phe<210>10<211>577<212>PRT<213>拟南芥<400>10Met Gln His Ser Leu Arg Ser Asp Leu Leu Pro Thr Lys Thr Ser Pro  1               5                  10                  15Arg Ser His Leu Leu Pro Gln Pro Lys Asn Ala Asn Ile Ser Arg Arg

         20                  25                  30Ile Leu Ile Asn Pro Phe Lys Ile Pro Thr Leu Pro Asp Leu Thr Ser

     35                  40                  45Pro Val Pro Ser Pro Val Lys Leu Lys Pro Thr Tyr Pro Asn Leu Asn

 50                  55                  60Leu Leu Gln Lys Leu Ala Ala Thr Met Leu Asp Lys Ile Glu Ser Ser 65                  70                  75                  80Ile Val Ile Pro Met Glu Gln Asn Arg Pro Leu Pro Lys Pro Thr Asp

             85                  90                  95Pro Ala Val Gln Leu Ser Gly Asn Phe Ala Pro Val Asn Glu Cys Pro

        100                 105                 110Val Gln Asn Gly Leu Glu Val Val Gly Gln Ile Pro Ser Cys Leu Lys

    115                 120                 125Gly Val Tyr Ile Arg Asn Gly Ala Asn Pro Met Phe Pro Pro Leu Ala

130                 135                 140Gly His His Leu Phe Asp Gly Asp Gly Met Ile His Ala Val Ser Ile145                 150                 155                 160Gly Phe Asp Asn Gln Val Ser Tyr Ser Cys Arg Tyr Thr Lys Thr Asn

            165                 170                 175Arg Leu Val Gln Glu Thr Ala Leu Gly Arg Ser Val Phe Pro Lys Pro

        180                 185                 190Ile Gly Glu Leu His Gly His Ser Gly Leu Ala Arg Leu Ala Leu Phe

    195                 200                 205Thr Ala Arg Ala Gly Ile Gly Leu Val Asp Gly Thr Arg Gly Met Gly

210                 215                 220Val Ala Asn Ala Gly Val Val Phe Phe Asn Gly Arg Leu Leu Ala Met225                 230                 235                 240Ser Glu Asp Asp Leu Pro Tyr Gln Val Lys Ile Asp Gly Gln Gly Asp

            245                 250                 255Leu Glu Thr Ile Gly Arg Phe Gly Phe Asp Asp Gln Ile Asp Ser Ser

        260                 265                 270Val Ile Ala His Pro Lys Val Asp Ala Thr Thr Gly Asp Leu His Thr

    275                 280                 285Leu Ser Tyr Asn Val Leu Lys Lys Pro His Leu Arg Tyr Leu Lys Phe

290                 295                 300Asn Thr Cys Gly Lys Lys Thr Arg Asp Val Glu Ile Thr Leu Pro Glu305                 310                 315                 320Pro Thr Met Ile His Asp Phe Ala Ile Thr Glu Asn Phe Val Val Ile

            325                 330                 335Pro Asp Gln Gln Met Val Phe Lys Leu Ser Glu Met Ile Arg Gly Gly

        340                 345                 350Ser Pro Val Ile Tyr Val Lys Glu Lys Met Ala Arg Phe Gly Val Leu

    355                 360                 365Ser Lys Gln Asp Leu Thr Gly Ser Asp Ile Asn Trp Val Asp Val Pro

370                 375                 380Asp Cys Phe Cys Phe His Leu Trp Asn Ala Trp Glu Glu Arg Thr Glu385                 390                 395                 400Glu Gly Asp Pro Val Ile Val Val Ile Gly Ser Cys Met Ser Pro Pro

            405                 410                 415Asp Thr Ile Phe Ser Glu Ser Gly Glu Pro Thr Arg Val Glu Leu Ser

        420                 425                 430Glu Ile Arg Leu Asn Met Arg Thr Lys Glu Ser Asn Arg Lys Val Ile

    435                 440                 445Val Thr Gly Val Asn Leu Glu Ala Gly His Ile Asn Arg Ser Tyr Val

450                 455                 460Gly Arg Lys Ser Gln Phe Val Tyr Ile Ala Ile Ala Asp Pro Trp Pro465                 470                 475                 480Lys Cys Ser G1y Ile Ala Lys Val Asp Ile Gln Asn Gly Thr Val Ser

            485                 490                 495Glu Phe Asn Tyr Gly Pro Ser Arg Phe Gly Gly Glu Pro Cys Phe Val

        500                 505                 510Pro Glu Gly Glu Gly Glu Glu Asp Lys Gly Tyr Val Met Gly Phe Val

    515                 520                 525Arg Asp Glu Glu Lys Asp Glu Ser Glu Phe Val Val Val Asp Ala Thr

530                 535                 540Asp Met Lys Gln Val Ala Ala Val Arg Leu Pro Glu Arg Val Pro Tyr545                 550                 555                 560Gly Phe His Gly Thr Phe Val Ser Glu Asn Gln Leu Lys Glu Gln Val

            565                 570                 575Phe<210>11<211>1839<212>DNA<213>Vigna unguiculata<220><221>CDS<222>(1)..(1839)<400>11atg cct tca tca gct tca aac act tgg ttt aac gcc aca ctc cca tct    48Met Pro Ser Ser Ala Ser Asn Thr Trp Phe Asn Ala Thr Leu Pro Ser  l               5                  10                  15ccc ccc ttc aaa gac cta cct tcc aca tct tct ccc aca aac tta ctt   96Pro Pro Phe Lys Asp Leu Pro Ser Thr Ser Ser Pro Thr Asn Leu Leu

         20                  25                  30cct tta agg aaa aca tcc tct tcc aac acc atc aca tgt tcc ctt caa   144Pro Leu Arg Lys Thr Ser Ser Ser Ash Thr Ile Thr Cys Ser Leu Gln

     35                  40                  45aca ctc cac ttc ccc aaa cag tac caa cca aca tcc aca tcc aca tcc   192Thr Leu His Phe Pro Lys Gln Tyr Gln Pro Thr Ser Thr Ser Thr Ser

 50                  55                  60aca gcc acc acc aca aca ccc acc cca atc aaa act acc acc atc acc   240Thr Ala Thr Thr Thr Thr Pro Thr Pro Ile Lys Thr Thr Thr Ile Thr 65                  70                  75                  80acc acc aca ccg ccc agg gaa acc aac cct ctc tct gac acc aac caa   288Thr Thr Thr Pro Pro Arg Glu Thr Asn Pro Leu Ser Asp Thr Asn Gln

             85                  90                  95cca tta cct caa aaa tgg aac ttt ctc cag aaa gcc gct gcc acg gcc   336Pro Leu Pro Gln Lys Trp Asn Phe Leu Gln Lys Ala Ala Ala Thr Ala

        100                 105                 110ttg gac ctg gtc gaa acg gcg ctc gtc tcg cac gag cgc aaa cac ccg   384Leu Asp Leu Val Glu Thr Ala Leu Val Ser His Glu Arg Lys His Pro

    115                 120                 125ctc ccc aaa acg gcg gac ccg agg gtc caa atc gcc ggg aac ttc gcg   432Leu Pro Lys Thr Ala Asp Pro Arg Val Gln Ile Ala Gly Asn Phe Ala

130                 135                 140ccg gtg ccg gag cat gcc gcg gat caa gga ctc ccg gtg gtc gga aaa   480Pro Val Pro Glu His Ala Ala Asp Gln Gly Leu Pro Val Val Gly Lys145                 150                 155                 160atc ccc aaa tgc att gac ggc gtg tac gtg cgc aac ggt gcc aat ccg   528Ile Pro Lys Cys Ile Asp Gly Val Tyr Val Arg Asn Gly Ala Asn Pro

            165                 170                 175ctc tac gag cct gtg gcc ggg cac cac ttc ttc gac ggc gac ggc atg   576Leu Tyr Glu Pro Val Ala Gly His His Phe Phe Asp Gly Asp Gly Met

        180                 185                 190gtc cac gcc gtg aag ttc acg aac ggc gcc gcc agc tac gcc tgc cgc   624Val His Ala Val Lys Phe Thr Asn Gly Ala Ala Ser Tyr Ala Cys Arg

    195                 200                 205ttc acc gag acg cag cgt ctc tcg cag gag aaa tct cta ggc cgc ccg   672Phe Thr Glu Thr Gln Arg Leu Ser Gln Glu Lys Ser Leu Gly Arg Pro

210                 215                 220gtg ttc ccg aag gcc atc ggg gag ctc cac ggc cac tcc ggc atc gcg   720Val Phe Pro Lys Ala Ile Gly Glu Leu His Gly His Ser Gly Ile Ala225                 230                 235                 240cgg ctc ctc ctc ttc tac gcg cgc ggt ctc ttc ggg ctc gtt gat ggg   768Arg Leu Leu Leu Phe Tyr Ala Arg Gly Leu Phe Gly Leu Val Asp Gly

            245                 250                 255tcc cag ggc atg ggc gtg gcg aac gcc ggt ctc gtc tac ttc aac aac   816Ser Gln Gly Met Gly Val Ala Asn Ala Gly Leu Val Tyr Phe Asn Asn

        260                 265                 270cac ctc ttg gcc atg tcc gaa gac gat tta ccc tac cac gtg aga atc   864His Leu Leu Ala Met Ser Glu Asp Asp Leu Pro Tyr His Val Arg Ile

    275                 280                 285acc cct aac ggc gac tta acc acc gtt ggc cgt tac gac ttc aac ggg   912Thr Pro Asn Gly Asp Leu Thr Thr Val Gly Arg Tyr Asp Phe Asn Gly

290                 295                 300cag ctc aac tca aca atg atc gcc cac ccg aaa ctg gac ccc gtc gac   960Gln Leu Asn Ser Thr Met Ile Ala His Pro Lys Leu Asp Pro Val Asp305                 310                 315                 320ggc gac ctc cac gcg ctc agc tac gac gtc att cag aag cct tac ctc   1008Gly Asp Leu His Ala Leu Ser Tyr Asp Val Ile Gln Lys Pro Tyr Leu

            325                 330                 335aag tac ttc cgt ttc tcc ccc gac ggc gtc aag tcc ccc gac gtg gaa   1056Lys Tyr Phe Arg Phe Ser Pro Asp Gly Val Lys Ser Pro Asp Val Glu

        340                 345                 350atc ccc ctg aag gag ccc acc atg atg cac gat ttc gcc ata acg gag   1104Ile Pro Leu Lys Glu Pro Thr Met Met His Asp Phe Ala Ile Thr Glu

    355                 360                 365aat ttc gtc gtc gtc ccc gac cag cag gtg gtc ttc aaa cta acg gag   1152Asn Phe Val Val Val Pro Asp Gln Gln Val Val Phe Lys Leu Thr Glu

370                 375                 380atg atc acc ggc ggg tcc ccc gtg gtc tac gac aag aac aaa acc tca   1200Met Ile Thr Gly Gly Ser Pro Val Val Tyr Asp Lys Asn Lys Thr Ser385                 390                 395                 400cgg ttt ggg att ctg cac aag aat gcg aag gac gcg aat gcg atg cgg   1248Arg Phe Gly Ile Leu His Lys Asn Ala Lys Asp Ala Asn Ala Met Arg

            405                 410                 415tgg atc gac gcg ccg gat tgt ttc tgc ttc cac ctc tgg aac gcg tgg   1296Trp Ile Asp Ala Pro Asp Cys Phe Cys Phe His Leu Trp Asn Ala Trp

        420                 425                 430gag gag ccc gaa acc gag gag gtt gtg gtg att ggg tcc tgc atg acc   1344Glu Glu Pro Glu Thr Glu Glu Val Val Val Ile Gly Ser Cys Met Thr

    435                 440                 445cct gcg gac tcc att ttc aac gaa tgc gag gag agt ttg aag agc gtg   1392Pro Ala Asp Ser Ile Phe Asn Glu Cys Glu Glu Ser Leu Lys Ser Val

450                 455                 460ctg tca gag ata agg ctg aac ttg agg acc ggc aag tcc act cgg cgc   1440Leu Ser Glu Ile Arg Leu Asn Leu Arg Thr Gly Lys Ser Thr Arg Arg465                 470                 475                 480ccc att atc tcc gac gcc gaa caa gtg aac ctg gaa gcc ggc atg gtg   1488Pro Ile Ile Ser Asp Ala Glu Gln Val Asn Leu Glu Ala Gly Met Val

            485                 490                 495aac aga aac aag ctc gga agg aag acc cag ttc gcg tat ctg gct ctg   1536Asn Arg Asn Lys Leu Gly Arg Lys Thr Gln Phe Ala Tyr Leu Ala Leu

        500                 505                 510gcg gag ccc tgg ccc aaa gtc tcg ggc ttt gcg aaa gtt gat ttg ctg   1584Ala Glu Pro Trp Pro Lys Val Ser Gly Phe Ala Lys Val Asp Leu Leu

    515                 520                 525agt ggg gaa gtg aag aag tac atg tat gga gaa gag aag ttc ggt ggg   1632Ser Gly Glu Val Lys Lys Tyr Met Tyr Gly Glu Glu Lys Phe Gly Gly

530                 535                 540gag cct ctg ttt ctt ccc aac ggc caa aaa gaa gac gat ggg tat att    1680Glu Pro Leu Phe Leu Pro Asn Gly Gln Lys Glu Asp Asp Gly Tyr Ile545                 550                 555                 560ctg gca ttc gtg cac gac gag aaa gaa tgg aaa tcc gag ctg cag att    l728Leu Ala Phe Val His Asp Glu Lys Glu Trp Lys Ser Glu Leu Gln Ile

            565                 570                 575gtg aat gcc caa aat tta aag ctc gaa gct tcc atc aaa ctc ccc tct    1776Val Asn Ala Gln Asn Leu Lys Leu Glu Ala Ser Ile Lys Leu Pro Ser

        580                 585                 590cgt gtt ccc tac ggt ttt cat gga act ttc att cat tcc aag gat ttg    1824Arg Val Pro Tyr Gly Phe His Gly Thr Phe Ile His Ser Lys Asp Leu

    595                 600                 605agg aaa caa gct tga                                                1839Arg Lys Gln Ala

610<2l0>12<211>612<212>PRT<213>Vigna unguiculata<400>12Met Pro Ser Ser Ala Ser Asn Thr Trp Phe Asn Ala Thr Leu Pro Ser  1               5                  10                  15Pro Pro Phe Lys Asp Leu Pro Ser Thr Ser Ser Pro Thr Asn Leu Leu

         20                  25                  30Pro Leu Arg Lys Thr Ser Ser Ser Asn Thr Ile Thr Cys Ser Leu Gln

     35                  40                  45Thr Leu His Phe Pro Lys Gln Tyr Gln Pro Thr Ser Thr Ser Thr Ser

 50                  55                  60Thr Ala Thr Thr Thr Thr Pro Thr Pro Ile Lys Thr Thr Thr Ile Thr 65                  70                  75                  80Thr Thr Thr Pro Pro Arg Glu Thr Asn Pro Leu Ser Asp Thr Asn Gln

             85                  90                  95Pro Leu Pro Gln Lys Trp Asn Phe Leu Gln Lys Ala Ala Ala Thr Ala

        100                 105                 110Leu Asp Leu Val Glu Thr Ala Leu Val Ser His Glu Arg Lys His Pro

    115                 120                 125Leu Pro Lys Thr Ala Asp Pro Arg Val Gln Ile Ala Gly Asn Phe Ala

130                 135                 140Pro Val Pro Glu His Ala Ala Asp Gln Gly Leu Pro Val Val Gly Lys145                 150                 155                 160Ile Pro Lys Cys Ile Asp Gly Val Tyr Val Arg Asn Gly Ala Asn Pro

            165                 170                 175Leu Tyr Glu Pro Val Ala Gly His His Phe Phe Asp Gly Asp Gly Met

        180                 185                 190Val His Ala Val Lys Phe Thr Asn Gly Ala Ala Ser Tyr Ala Cys Arg

    195                 200                 205Phe Thr Glu Thr Gln Arg Leu Ser Gln Glu Lys Ser Leu Gly Arg Pro

210                 215                 220Val Phe Pro Lys Ala Ile Gly Glu Leu His Gly His Ser Gly Ile Ala225                 230                 235                 240Arg Leu Leu Leu Phe Tyr Ala Arg Gly Leu Phe Gly Leu Val Asp Gly

            245                 250                 255Ser Gln Gly Met Gly Val Ala Asn Ala Gly Leu Val Tyr Phe Asn Asn

        260                 265                 270His Leu Leu Ala Met Ser Glu Asp Asp Leu Pro Tyr His Val Arg Ile

    275                 280                 285Thr Pro Asn Gly Asp Leu Thr Thr Val Gly Arg Tyr Asp Phe Asn Gly

290                 295                 300Gln Leu Asn Ser Thr Met Ile Ala His Pro Lys Leu Asp Pro Val Asp305                 310                 315                 320Gly Asp Leu His Ala Leu Ser Tyr Asp Val Ile Gln Lys Pro Tyr Leu

            325                 330                 335Lys Tyr Phe Arg Phe Ser Pro Asp Gly Val Lys Ser Pro Asp Val Glu

        340                 345                 350Ile Pro Leu Lys Glu Pro Thr Met Met His Asp Phe Ala Ile Thr Glu

    355                 360                 365Asn Phe Val Val Val Pro Asp Gln Gln Val Val Phe Lys Leu Thr Glu

370                 375                 380Met Ile Thr Gly Gly Ser Pro Val Val Tyr Asp Lys Asn Lys Thr Ser385                 390                 395                 400Arg Phe Gly Ile Leu His Lys Asn Ala Lys Asp Ala Asn Ala Met Arg

            405                 410                 415Trp Ile Asp Ala Pro Asp Cys Phe Cys Phe His Leu Trp Asn Ala Trp

        420                 425                 430Glu Glu Pro Glu Thr Glu Glu Val Val Val Ile Gly Ser Cys Met Thr

    435                 440                 445Pro Ala Asp Ser Ile Phe Asn Glu Cys Glu Glu Ser Leu Lys Ser Val

450                 455                 460Leu Ser Glu Ile Arg Leu Asn Leu Arg Thr Gly Lys Ser Thr Arg Arg465                 470                 475                 480Pro Ile Ile Ser Asp Ala Glu Gln Val Asn Leu Glu Ala Gly Met Val

            485                 490                 495Asn Arg Asn Lys Leu Gly Arg Lys Thr Gln Phe Ala Tyr Leu Ala Leu

        500                 505                 510Ala Glu Pro Trp Pro Lys Val Ser Gly Phe Ala Lys Val Asp Leu Leu

    515                 520                 525Ser Gly Glu Val Lys Lys Tyr Met Tyr Gly Glu Glu Lys Phe Gly Gly

530                 535                 540Glu Pro Leu Phe Leu Pro Asn Gly Gln Lys Glu Asp Asp Gly Tyr Ile545                 550                 555                 560Leu Ala Phe Val His Asp Glu Lys Glu Trp Lys Ser Glu Leu Gln Ile

            565                 570                 575Val Asn Ala Gln Asn Leu Lys Leu Glu Ala Ser Ile Lys Leu Pro Ser

        580                 585                 590Arg Val Pro Tyr Gly Phe His Gly Thr Phe Ile His Ser Lys Asp Leu

    595                 600                 605Arg Lys Gln Ala

610<210>13<211>1815<212>DNA<213>玉米<220><221>CDS<222>(1)..(1815)<400>13atg cag ggt ctc gcc ccg ccc acc tct gtt tcc ata cac cgg cac ctg    48Met Gln Gly Leu Ala Pro Pro Thr Ser Val Ser Ile His Arg His Leu  1               5                  10                  15ccg gcc cgg tcc agg gcc cgg gcc tcc aat tcc gtc agg ttc tcg ccg    96Pro Ala Arg Ser Arg Ala Arg Ala Ser Asn Ser Val Arg Phe Ser Pro

         20                  25                  30cgc gcc gtc agc tcc gtg ccg ccc gcc gag tgc ctc cag gcg ccg ttc    144Arg Ala Val Ser Ser Val Pro Pro Ala Glu Cys Leu Gln Ala Pro Phe

     35                  40                  45cac aag ccc gtc gcc gac ctg cct gcg ccg tcc agg aag ccc gcc gcc    192His Lys Pro Val Ala Asp Leu Pro Ala Pro Ser Arg Lys Pro Ala Ala

 50                  55                  60att gcc gtc cca ggg cac gcc gcg gcg ccg agg aaa gcg gag ggc ggc    240Ile Ala Val Pro Gly His Ala Ala Ala Pro Arg Lys Ala Glu Gly Gly 65                  70                  75                  80aag aag cag ctc aac ttg ttc cag cgc gcc gcg gcg gcc gcg ctc gac    288Lys Lys Gln Leu Asn Leu Phe Gln Arg Ala Ala Ala Ala Ala Leu Asp

             85                  90                  95gcg ttc gag gaa ggg ttc gtg gcc aac gtc ctc gag cgg ccc cac ggg   336Ala Phe Glu Glu Gly Phe Val Ala Asn Val Leu Glu Arg Pro His Gly

        100                 l05                 110ctg ccc agc acg gcc gac ccg gcc gtg cag atc gcc ggc aac ttc gcg   384Leu Pro Ser Thr Ala Asp Pro Ala Val Gln Ile Ala Gly Asn Phe Ala

    115                 120                 125ccc gtc ggg gag agg ccg ccc gtg cac gag ctc ccc gtc tcc ggc cgc   432Pro Val Gly Glu Arg Pro Pro Val His Glu Leu Pro Val Ser Gly Arg

130                 135                 140atc ccg ccc ttc atc gac ggg gtc tac gcg cgc aac ggc gcc aac ccc   480Ile Pro Pro Phe Ile Asp Gly Val Tyr Ala Arg Asn Gly Ala Asn Pro145                 150                 155                 160tgc ttc gac ccc gtc gcg ggg cac cac ctc ttc gac ggc gac ggc atg   528Cys Phe Asp Pro Val Ala Gly His His Leu Phe Asp Gly Asp Gly Met

            165                 170                 175gtg cac gcg ctg cgg ata cgc aac ggc gcc gcc gag tcc tac gcc tgc   576Val His Ala Leu Arg Ile Arg Asn Gly Ala Ala Glu Ser Tyr Ala Cys

        180                 185                 190cgc ttc acg gag acc gcg cgc ctg cgc cag gag cgc gcg atc ggc cgc   624Arg Phe Thr Glu Thr Ala Arg Leu Arg Gln Glu Arg Ala Ile Gly Arg

    195                 200                 205ccc gtc ttc ccc aag gcc att ggc gag ctg cac ggg cac tcc ggg atc   672Pro Val Phe Pro Lys Ala Ile Gly Glu Leu His Gly His Ser Gly Ile

210                 215                 220gcg cgc ctc gcc ctg ttc tac gcg cgc gcc gcg tgc ggc ctc gtg gac   720Ala Arg Leu Ala Leu Phe Tyr Ala Arg Ala Ala Cys Gly Leu Val Asp225                 230                 235                 240ccc tcg gcc ggc acc ggc gtg gcc aac gcc ggc ctc gtc tac ttc aac   768Pro Ser Ala Gly Thr Gly Val Ala Asn Ala Gly Leu Val Tyr Phe Asn

            245                 250                 255ggc cgc ctg ctc gcc atg tcc gag gac gac ctc ccc tac cac gtc cgc   816Gly Arg Leu Leu Ala Met Ser Glu Asp Asp Leu Pro Tyr His Val Arg

        260                 265                 270gtg gcg gac gac ggc gac ctc gag acc gtc ggc cgc tac gac ttc gac   864Val Ala Asp Asp Gly Asp Leu Glu Thr Val Gly Arg Tyr Asp Phe Asp

    275                 280                 285ggg cag ctc ggc tgc gcc atg atc gcg cac ccc aag ctg gac ccg gcc   912Gly Gln Leu Gly Cys Ala Met Ile Ala His Pro Lys Leu Asp Pro Ala

290                 295                 300acc ggg gag ctc cac gcg ctc agc tac gac gtc atc aag agg ccg tac   960Thr Gly Glu Leu His Ala Leu Ser Tyr Asp Val Ile Lys Arg Pro Tyr305                 310                 315                 320ctc aag tac ttc tac ttc agg ccc gac ggc acc aag tcc gac gac gtg   1008Leu Lys Tyr Phe Tyr Phe Arg Pro Asp Gly Thr Lys Ser Asp Asp Val

            325                 330                 335gag atc ccg ctg gag cag ccc acg atg atc cac gac ttc gcc atc acc   1056Glu Ile Pro Leu Glu Gln Pro Thr Met Ile His Asp Phe Ala Ile Thr

        340                 345                 350gag aac ttc gtg gtt gtg ccc gac cac cag gtg gtg ttc aag ctc cag   1104Glu Asn Phe Val Val Val Pro Asp His Gln Val Val Phe Lys Leu Gln

    355                 360                 365gag atg ctg cgc ggc ggg tcg ccc gtg gtg ctg gac aag gag aag acg   1152Glu Met Leu Arg Gly Gly Ser Pro Val Val Leu Asp Lys Glu Lys Thr

370                 375                 380tcg cgg ttc ggc gtg ctc ccc aag cac gcc gcg gac gcg tcg gag atg   1200Ser Arg Phe Gly Val Leu Pro Lys His Ala Ala Asp Ala Ser Glu Met385                 390                 395                 400gcg tgg gtg gac gtg ccg gac tgc ttc tgc ttc cac ctg tgg aac gcg   1248Ala Trp Val Asp Val Pro Asp Cys Phe Cys Phe His Leu Trp Asn Ala

            405                 410                 415tgg gag gac gag gcg acg ggc gag gtg gtg gtg atc ggc tcc tgc atg   1296Trp Glu Asp Glu Ala Thr Gly Glu Val Val Val Ile Gly Ser Cys Met

        420                 425                 430acc ccc gcc gac tcc atc ttc aac gag tcc gac gag cgc ctg gag agc   1344Thr Pro Ala Asp Ser Ile Phe Asn Glu Ser Asp Glu Arg Leu Glu Ser

    435                 440                 445gtg ctg acc gag atc cgc ctg gac gcg cgc acg ggc cgg tcc acg cgc   1392Val Leu Thr Glu Ile Arg Leu Asp Ala Arg Thr Gly Arg Ser Thr Arg

450                 455                 460cgc gcc gtc ctg ccg ccg tcg cag cag gag aac ctg gag gtg ggc atg   1440Arg Ala Val Leu Pro Pro Ser Gln Gln Glu Asn Leu Glu Val Gly Met465                 470                 475                 480gtg aac cgc aac ctg ctg ggc cgc gag agc cgg tac gcg tac ctc gcg   1488Val Asn Arg Asn Leu Leu Gly Arg Glu Ser Arg Tyr Ala Tyr Leu Ala

            485                 490                 495gtg gcg gag ccg tgg ccc aag gag tcg ggc ttc gcc aag gag gac ctg   1536Val Ala Glu Pro Trp Pro Lys Glu Ser Gly Phe Ala Lys Glu Asp Leu

        500                 505                 510tcc acg ggc gag ctc acc aag ttc gag tac ggc gag ggc cgg ttc ggc   1584Ser Thr Gly Glu Leu Thr Lys Phe Glu Tyr Gly Glu Gly Arg Phe Gly

    515                 520                 525ggc gag ccc tgc ttc gtt ccc atg gac ccg gcc gcg gcc cac ccg cgc   1632Gly Glu Pro Cys Phe Val Pro Met Asp Pro Ala Ala Ala His Pro Arg

530                 535                 540ggc gag gac gac ggg tac gtg ctc acc ttc gtc cac gac gag cgc gcc   1680Gly Glu Asp Asp Gly Tyr Val Leu Thr Phe Val His Asp Glu Arg Ala545                 550                 555                 560ggc acg tcg gag cta ctt gtg gtc aat gcc gcc gac atc cgg ctg gag   1728Gly Thr Ser Glu Leu Leu Val Val Asn Ala Ala Asp Ile Arg Leu Glu

            565                 570                 575gcc acg gtt cag ctg ccg tcc cgc gtg ccc ttc ggc ttc cac ggc acc   1776Ala Thr Val Gln Leu Pro Ser Arg Val Pro Phe Gly Phe His Gly Thr

        580                 585                 590ttc atc acg ggc cag gag ctc gag gcc cag gcg gcc tga               1815Phe Ile Thr Gly Gln Glu Leu Glu Ala Gln Ala Ala

    595                 600                 605<210>14<211>604<212>PRT<213>玉米<400> 14Met Gln Gly Leu Ala Pro Pro Thr Ser Val Ser Ile His Arg His Leu  1               5                  10                  15Pro Ala Arg Ser Arg Ala Arg Ala Ser Asn Ser Val Arg Phe Ser Pro

         20                  25                  30Arg Ala Val Ser Ser Val Pro Pro Ala Glu Cys Leu Gln Ala Pro Phe

     35                  40                  45His Lys Pro Val Ala Asp Leu Pro Ala Pro Ser Arg Lys Pro Ala Ala

 50                  55                  60Ile Ala Val Pro Gly His Ala Ala Ala Pro Arg Lys Ala Glu Gly Gly 65                  70                  75                  80Lys Lys Gln Leu Asn Leu Phe Gln Arg Ala Ala Ala Ala Ala Leu Asp

             85                  90                  95Ala Phe Glu Glu Gly Phe Val Ala Asn Val Leu Glu Arg Pro His Gly

        100                 105                 110Leu Pro Ser Thr Ala Asp Pro Ala Val Gln Ile Ala Gly Asn Phe Ala

    115                 120                 125Pro Val Gly Glu Arg Pro Pro Val His Glu Leu Pro Val Ser Gly Arg

130                 135                 140Ile Pro Pro Phe Ile Asp Gly Val Tyr Ala Arg Asn Gly Ala Asn Pro145                 150                 155                 160Cys Phe Asp Pro Val Ala Gly His His Leu Phe Asp Gly Asp Gly Met

            165                 170                 175Val His Ala Leu Arg Ile Arg Asn Gly Ala Ala Glu Ser Tyr Ala Cys

        180                 185                 190Arg Phe Thr Glu Thr Ala Arg Leu Arg Gln Glu Arg Ala Ile Gly Arg

    195                 200                 205Pro Val Phe Pro Lys Ala Ile Gly Glu Leu His Gly His Ser Gly Ile

210                 215                 220Ala Arg Leu Ala Leu Phe Tyr Ala Arg Ala Ala Cys Gly Leu Val Asp225                 230                 235                 240Pro Ser Ala Gly Thr Gly Val Ala Asn Ala Gly Leu Val Tyr Phe Asn

            245                 250                 255Gly Arg Leu Leu Ala Met Ser Glu Asp Asp Leu Pro Tyr His Val Arg

        260                 265                 270Val Ala Asp Asp Gly Asp Leu Glu Thr Val Gly Arg Tyr Asp Phe Asp

    275                 280                 285Gly Gln Leu Gly Cys Ala Met Ile Ala His Pro Lys Leu Asp Pro Ala

290                 295                 300Thr Gly Glu Leu His Ala Leu Ser Tyr Asp Val Ile Lys Arg Pro Tyr305                 310                 315                 320Leu Lys Tyr Phe Tyr Phe Arg Pro Asp Gly Thr Lys Ser Asp Asp Val

            325                 330                 335Glu Ile Pro Leu Glu Gln Pro Thr Met Ile His Asp Phe Ala Ile Thr

        340                 345                 350Glu Asn Phe Val Val Val Pro Asp His Gln Val Val Phe Lys Leu Gln

    355                 360                 365Glu Met Leu Arg Gly Gly Ser Pro Val Val Leu Asp Lys Glu Lys Thr

370                 375                 380Ser Arg Phe Gly Val Leu Pro Lys His Ala Ala Asp Ala Ser Glu Met385                 390                 395                 400Ala Trp Val Asp Val Pro Asp Cys Phe Cys Phe His Leu Trp Asn Ala

            405                 410                 415Trp Glu Asp Glu Ala Thr Gly Glu Val Val Val Ile Gly Ser Cys Met

        420                 425                 430Thr Pro Ala Asp Ser Ile Phe Asn Glu Ser Asp Glu Arg Leu Glu Ser

    435                 440                 445Val Leu Thr Glu Ile Arg Leu Asp Ala Arg Thr Gly Arg Ser Thr Arg

450                 455                 460Arg Ala Val Leu Pro Pro Ser Gln Gln Glu Asn Leu Glu Val Gly Met465                 470                 475                 480Val Asn Arg Asn Leu Leu Gly Arg Glu Ser Arg Tyr Ala Tyr Leu Ala

            485                 490                 495Val Ala Glu Pro Trp Pro Lys Glu Ser Gly Phe Ala Lys Glu Asp Leu

        500                 505                 510Ser Thr Gly Glu Leu Thr Lys Phe Glu Tyr Gly Glu Gly Arg Phe Gly

    515                 520                 525Gly Glu Pro Cys Phe Val Pro Met Asp Pro Ala Ala Ala His Pro Arg

530                 535                 540Gly Glu Asp Asp Gly Tyr Val Leu Thr Phe Val His Asp Glu Arg Ala545                 550                 555                 560Gly Thr Ser Glu Leu Leu Val Val Asn Ala Ala Asp Ile Arg Leu Glu

            565                 570                 575Ala Thr Val Gln Leu Pro Ser Arg Val Pro Phe Gly Phe His Gly Thr

        580                 585                 590Phe Ile Thr Gly Gln Glu Leu Glu Ala Gln Ala Ala

    595                 600<210>15<211>1818<212>DNA<213>番茄<220><221>CDS<222>(1)..(1818)<400>15atg gca act act act tca cat gcc aca aat aca tgg att aag act aag  48Met Ala Thr Thr Thr Ser His Ala Thr Asn Thr Trp Ile Lys Thr Lys  1               5                  10                  15ttg tca atg cca tca tca aag gag ttt ggt ttt gca tca aac tct att   96Leu Ser Met Pro Ser Ser Lys Glu Phe Gly Phe Ala Ser Asn Ser Ile

         20                  25                  30tct cta ctc aaa aat caa cat aat agg caa agt ctc aac att aat tcc   144Ser Leu Leu Lys Asn Gln His Asn Arg Gln Ser Leu Asn Ile Asn Ser

     35                  40                  45tct ctt caa gct cca cct ata ctt cat ttt cct aaa caa tct tca aat   192Ser Leu Gln Ala Pro Pro Ile Leu His Phe Pro Lys Gln Ser Ser Asn

 50                  55                  60tat caa aca cca aag aat aat aca att tca cac cca aaa caa gaa aac   240Tyr Gln Thr Pro Lys Asn Asn Thr Ile Ser His Pro Lys Gln Glu Asn 65                  70                  75                  80aac aac tcc tct tct tct tca act tcc aag tgg aat tta gtg cag aaa   288Asn Asn Ser Ser Ser Ser Ser Thr Ser Lys Trp Asn Leu Val Gln Lys

             85                  90                  95gca gca gca atg gct tta gat gct gta gaa agt gct tta act aaa cat   336Ala Ala Ala Met Ala Leu Asp Ala Val Glu Ser Ala Leu Thr Lys His

        100                 105                 110gaa ctt gaa cac cct ttg ccg aaa aca gcc gac cca cga gtc cag att   384Glu Leu Glu His Pro Leu Pro Lys Thr Ala Asp Pro Arg Val Gln Ile

    115                 120                 125tct ggg aat ttt gct ccg gta ccg gaa aat cca gtc tgt caa tct ctt   432Ser Gly Asn Phe Ala Pro Val Pro Glu Asn Pro Val Cys Gln Ser Leu

130                 135                 140ccg gtc acc gga aaa ata ccc aaa tgt gtt caa ggc gtt tac gtt cga   480Pro Val Thr Gly Lys Ile Pro Lys Cys Val Gln Gly Val Tyr Val Arg145                 150                 155                 160aac gga gct aac cct ctt ttt gaa cca acc gcc gga cac cat ttc ttc   528Asn Gly Ala Asn Pro Leu Phe Glu Pro Thr Ala Gly His His Phe Phe

            165                 170                 175gac ggc gac ggt atg gtt cac gcc gtt caa ttc aaa aat ggg tcg gct   576Asp Gly Asp Gly Met Val His Ala Val Gln Phe Lys Asn Gly Ser Ala

        180                 185                 190agt tac gct tgc cgt ttc act gaa aca gag agg ctt gtt caa gaa aaa   624Ser Tyr Ala Cys Arg Phe Thr Glu Thr Glu Arg Leu Val Gln Glu Lys

    195                 200                 205gct ttg ggt cgc cct gtt ttc cct aaa gcc att ggt gaa tta cat ggt   672Ala Leu Gly Arg Pro Val Phe Pro Lys Ala Ile Gly Glu Leu His Gly

210                 215                 220cac tct gga att gca agg ctt atg ctg ttt tac gct cgt ggg ctc ttc   720His Ser Gly Ile Ala Arg Leu Met Leu Phe Tyr Ala Arg Gly Leu Phe225                 230                 235                 240gga ctt gtt gat cac agt aaa gga act ggt gtt gca aac gcc ggt tta   768Gly Leu Val Asp His Ser Lys Gly Thr Gly Val Ala Asn Ala Gly Leu

            245                 250                 255gtc tat ttc aat aac cga tta ctt gct atg tct gaa gat gat ttg cct   816Val Tyr Phe Asn Asn Arg Leu Leu Ala Met Ser Glu Asp Asp Leu Pro

        260                 265                 270tac cat gta aag gta aca ccc acc ggc gat ctt aaa aca gag ggt cga   864Tyr His Val Lys Val Thr Pro Thr Gly Asp Leu Lys Thr Glu Gly Arg

    275                 280                 285ttc gat ttc gac ggc cag cta aaa tcc acc atg ata gct cac cca aag   912Phe Asp Phe Asp Gly Gln Leu Lys Ser Thr Met Ile Ala His Pro Lys

290                 295                 300ctc gac cca gtt tcc ggt gag cta ttt gct ctt agc tac gat gtg att   960Leu Asp Pro Val Ser Gly Glu Leu Phe Ala Leu Ser Tyr Asp Val Ile305                 310                 315                 320cag aag cca tac ctc aag tac ttc aga ttt tca aaa aat ggg gaa aaa   1008Gln Lys Pro Tyr Leu Lys Tyr Phe Arg Phe Ser Lys Asn Gly Glu Lys

            325                 330                 335tca aat gat gtt gaa att cca gtt gaa gac cca aca atg atg cat gat   1056Ser Asn Asp Val Glu Ile Pro Val Glu Asp Pro Thr Met Met His Asp

        340                 345                 350ttc gca att act gag aac ttc gtc gtc att cct gat caa caa gtc gtt   1104Phe Ala Ile Thr Glu Asn Phe Val Val Ile Pro Asp Gln Gln Val Val

    355                 360                 365ttc aag atg tct gaa atg atc cgt gga ggt tca ccg gtg gtt tac gac   1152Phe Lys Met Ser Glu Met Ile Arg Gly Gly Ser Pro Val Val Tyr Asp

370                 375                 380aag aac aaa gtt tcc cga ttt ggt att ctg gat aag tac gcg aaa gat   1200Lys Asn Lys Val Ser Arg Phe Gly Ile Leu Asp Lys Tyr Ala Lys Asp385                 390                 395                 400ggg tct gat ttg aaa tgg gtt gaa gta cct gat tgt ttc tgt ttc cac   1248Gly Ser Asp Leu Lys Trp Val Glu Val Pro Asp Cys Phe Cys Phe His

            405                 410                 415ctc tgg aat gct tgg gaa gaa gca gaa aca gat gaa atc gtt gta att   1296Leu Trp Asn Ala Trp Glu Glu Ala Glu Thr Asp Glu Ile Val Val Ile

        420                 425                 430ggt tca tgt atg aca cca cca gac tcc att ttc aat gaa tgt gat gaa   1344Gly Ser Cys Met Thr Pro Pro Asp Ser Ile Phe Asn Glu Cys Asp Glu

    435                 440                 445ggg cta aag agt gtt tta tcc gaa atc cgt ctc aat ttg aaa aca ggg   1392Gly Leu Lys Ser Val Leu Ser Glu Ile Arg Leu Asn Leu Lys Thr Gly

450                 455                 460aaa tca aca aga aaa tcc ata atc gaa aac ccg gat gaa caa gtg aat   1440Lys Ser Thr Arg Lys Ser Ile Ile Glu Asn Pro Asp Glu Gln Val Asn465                 470                 475                 480tta gaa gct gga atg gtg aac cga aac aaa ctc gga agg aaa aca gag   1488Leu Glu Ala Gly Met Val Asn Arg Asn Lys Leu Gly Arg Lys Thr Glu

            485                 490                 495tat gct tat ttg gct atc gct gaa cca tgg cca aaa gtt tct ggt ttt   1536Tyr Ala Tyr Leu Ala Ile Ala Glu Pro Trp Pro Lys Val Ser Gly Phe

        500                 505                 510gca aaa gta aac ctg ttc acc ggt gaa gtt gag aaa ttc att tat ggt   1584Ala Lys Val Asn Leu Phe Thr Gly Glu Val Glu Lys Phe Ile Tyr Gly

    515                 520                 525gac aac aaa tat ggt ggg gaa cct ctt ttt tta cca aga gac ccc aac   1632Asp Asn Lys Tyr Gly Gly Glu Pro Leu Phe Leu Pro Arg Asp Pro Asn

530                 535                 540agc aag gaa gaa gac gat ggt tat att tta gct ttc gtt cac gat gag  1680Ser Lys Glu Glu Asp Asp Gly Tyr Ile Leu Ala Phe Val His Asp Glu545                 550                 555                 560aaa gaa tgg aaa tca gaa ctg caa att gtt aac gca atg agt ttg aag  1728Lys Glu Trp Lys Ser Glu Leu Gln Ile Val Asn Ala Met Ser Leu Lys

            565                 570                 575ttg gag gca act gtg aag ctt cca tca aga gtt cct tat gga ttt cat  1776Leu Glu Ala Thr Val Lys Leu Pro Ser Arg Val Pro Tyr Gly Phe His

        580                 585                 590gga aca ttc ata aac gcc aat gat ttg gca aat cag gca tga          1818Gly Thr Phe Ile Asn Ala Asn Asp Leu Ala Asn Gln Ala

    595                 600                 605<210>16<211>605<212>PRT<213>番茄<400>16Met Ala Thr Thr Thr Ser His Ala Thr Asn Thr Trp Ile Lys Thr Lys  1               5                  10                  15Leu Ser Met Pro Ser Ser Lys Glu Phe Gly Phe Ala Ser Asn Ser Ile

         20                  25                  30Ser Leu Leu Lys Asn Gln His Asn Arg Gln Ser Leu Asn Ile Asn Ser

     35                  40                  45Ser Leu Gln Ala Pro Pro Ile Leu His Phe Pro Lys Gln Ser Ser Asn

 50                  55                  60Tyr Gln Thr Pro Lys Asn Asn Thr Ile Ser His Pro Lys Gln Glu Asn 65                  70                  75                  80Asn Asn Ser Ser Ser Ser Ser Thr Ser Lys Trp Asn Leu Val Gln Lys

             85                  90                  95Ala Ala Ala Met Ala Leu Asp Ala Val Glu Ser Ala Leu Thr Lys His

        100                 105                 110Glu Leu Glu His Pro Leu Pro Lys Thr Ala Asp Pro Arg Val Gln Ile

    115                 120                 125Ser Gly Asn Phe Ala Pro Val Pro Glu Asn Pro Val Cys Gln Ser Leu

130                 135                 140Pro Val Thr Gly Lys Ile Pro Lys Cys Val Gln Gly Val Tyr Val Arg145                 150                 155                 160Asn Gly Ala Asn Pro Leu Phe Glu Pro Thr Ala Gly His His Phe Phe

            165                 170                 175Asp Gly Asp Gly Met Val His Ala Val Gln Phe Lys Asn Gly Ser Ala

        180                 185                 190Ser Tyr Ala Cys Arg Phe Thr Glu Thr Glu Arg Leu Val Gln Glu Lys

    195                 200                 205Ala Leu Gly Arg Pro Val Phe Pro Lys Ala Ile Gly Glu Leu His Gly

210                 215                 220His Ser Gly Ile Ala Arg Leu Met Leu Phe Tyr Ala Arg Gly Leu Phe225                 230                 235                 240Gly Leu Val Asp His Ser Lys Gly Thr Gly Val Ala Asn Ala Gly Leu

            245                 250                 255Val Tyr Phe Asn Asn Arg Leu Leu Ala Met Ser Glu Asp Asp Leu Pro

        260                 265                 270Tyr His Val Lys Val Thr Pro Thr Gly Asp Leu Lys Thr Glu Gly Arg

    275                 280                 285Phe Asp Phe Asp Gly Gln Leu Lys Ser Thr Met Ile Ala His Pro Lys

290                 295                 300Leu Asp Pro Val Ser Gly Glu Leu Phe Ala Leu Ser Tyr Asp Val Ile305                 310                 315                 320Gln Lys Pro Tyr Leu Lys Tyr Phe Arg Phe Ser Lys Asn Gly Glu Lys

            325                 330                 335Ser Asn Asp Val Glu Ile Pro Val Glu Asp Pro Thr Met Met His Asp

        340                 345                 350Phe Ala Ile Thr Glu Asn Phe Val Val Ile Pro Asp Gln Gln Val Val

    355                 360                 365Phe Lys Met Ser Glu Met Ile Arg Gly Gly Ser Pro Val Val Tyr Asp

370                 375                 380Lys Asn Lys Val Ser Arg Phe Gly Ile Leu Asp Lys Tyr Ala Lys Asp385                 390                 395                 400Gly Ser Asp Leu Lys Trp Val Glu Val Pro Asp Cys Phe Cys Phe His

            405                 410                 415Leu Trp Asn Ala Trp Glu Glu Ala Glu Thr Asp Glu Ile Val Val Ile

        420                 425                 430Gly Ser Cys Met Thr Pro Pro Asp Ser Ile Phe Asn Glu Cys Asp Glu

    435                 440                 445Gly Leu Lys Ser Val Leu Ser Glu Ile Arg Leu Asn Leu Lys Thr Gly

450                 455                 460Lys Ser Thr Arg Lys Ser Ile Ile Glu Asn Pro Asp Glu Gln Val Asn465                 470                 475                 480Leu Glu Ala Gly Met Val Asn Arg Asn Lys Leu Gly Arg Lys Thr Glu

            485                 490                 495Tyr Ala Tyr Leu Ala Ile Ala Glu Pro Trp Pro Lys Val Ser Gly Phe

        500                 505                 510Ala Lys Val Asn Leu Phe Thr Gly Glu Val Glu Lys Phe Ile Tyr Gly

    515                 520                 525Asp Asn Lys Tyr Gly Gly Glu Pro Leu Phe Leu Pro Arg Asp Pro Asn

530                 535                 540Ser Lys Glu Glu Asp Asp Gly Tyr Ile Leu Ala Phe Val His Asp Glu545                 550                 555                 560Lys Glu Trp Lys Ser Glu Leu Gln Ile Val Asn Ala Met Ser Leu Lys

            565                 570                 575Leu Glu Ala Thr Val Lys Leu Pro Ser Arg Val Pro Tyr Gly Phe His

        580                 585                 590Gly Thr Phe Ile Asn Ala Asn Asp Leu Ala Asn Gln Ala

    595                 600                 605<210>17<211>1617<212>DNA<213>拟南芥<220><221>CDS<222>(1)..(1617)<400>17atg gcg gag aaa ctc agt gat ggc agc atc atc atc tca gtc cat cct  48Met Ala Glu Lys Leu Ser Asp Gly Ser Ile Ile Ile Ser Val His Pro  1               5                  10                  15aga ccc tcc aag ggt ttc tcc tcg aag ctt ctc gat ctt ctc gag aga  96Arg Pro Ser Lys Gly Phe Ser Ser Lys Leu Leu Asp Leu Leu Glu Arg

         20                  25                  30ctt gtc gtc aag ctc atg cac gat gct tct ctc cct ctc cac tac ctc  144Leu Val Val Lys Leu Met His Asp Ala Ser Leu Pro Leu His Tyr Leu

     35                  40                  45tca ggc aac ttc gct ccc atc cgt gat gaa act cct ccc gtc aag gat  192Ser Gly Asn Phe Ala Pro Ile Arg Asp Glu Thr Pro Pro Val Lys Asp

 50                  55                  60ctc ccc gtc cat gga ttt ctt ccc gaa tgc ttg aat ggt gaa ttt gtg  240Leu Pro Val His Gly Phe Leu Pro Glu Cys Leu Asn Gly Glu Phe Val 65                   70                  75                 80agg gtt ggt cca aac ccc aag ttt gat gct gtc gct gga tat cac tgg  288Arg Val Gly Pro Asn Pro Lys Phe Asp Ala Val Ala Gly Tyr His Trp

             85                  90                  95ttt gat gga gat ggg atg att cat ggg gta cgc atc aaa gat ggg aaa  336Phe Asp Gly Asp Gly Met Ile His Gly Val Arg Ile Lys Asp Gly Lys

        100                 105                 110gct act tat gtt tct cga tat gtt aag aca tca cgt ctt aag cag gaa   384Ala Thr Tyr Val Ser Arg Tyr Val Lys Thr Ser Arg Leu Lys Gln Glu

    115                 120                 125gag ttc ttc gga gct gcc aaa ttc atg aag att ggt gac ctt aag ggg   432Glu Phe Phe Gly Ala Ala Lys Phe Met Lys Ile Gly Asp Leu Lys Gly

130                 135                 140ttt ttc gga ttg cta atg gtc aat atc caa cag ctg aga acg aag ctc   480Phe Phe Gly Leu Leu Met Val Asn Ile Gln Gln Leu Arg Thr Lys Leu145                 150                 155                 160aaa ata ttg gac aac act tat gga aat gga act gcc aat aca gca ctc   528Lys Ile Leu Asp Asn Thr Tyr Gly Asn Gly Thr Ala Asn Thr Ala Leu

            165                 170                 175gta tat cac cat gga aaa ctt cta gca tta cag gag gca gat aag ccg   576Val Tyr His His Gly Lys Leu Leu Ala Leu Gln Glu Ala Asp Lys Pro

        180                 185                 190tac gtc atc aaa gtt ttg gaa gat gga gac ctg caa act ctt ggt ata   624Tyr Val Ile Lys Val Leu Glu Asp Gly Asp Leu Gln Thr Leu Gly Ile

    195                 200                 205ata gat tat gac aag aga ttg acc cac tcc ttc act gct cac cca aaa   672Ile Asp Tyr Asp Lys Arg Leu Thr His Ser Phe Thr Ala His Pro Lys

210                 215                 220gtt gac ccg gtt acg ggt gaa atg ttt aca ttc ggc tat tcg cat acg   720Val Asp Pro Val Thr Gly Glu Met Phe Thr Phe Gly Tyr Ser His Thr225                 230                 235                 240cca cct tat ctc aca tac aga gtt atc tcg aaa gat ggc att atg cat   768Pro Pro Tyr Leu Thr Tyr Arg Val Ile Ser Lys Asp Gly Ile Met His

            245                 250                 255gac cca gtc cca att act ata tca gag cct atc atg atg cat gat ttt   816Asp Pro Val Pro Ile Thr Ile Ser Glu Pro Ile Met Met His Asp Phe

        260                 265                 270gct att act gag act tat gca atc ttc atg gat ctt cct atg cac ttc   864Ala Ile Thr Glu Thr Tyr Ala Ile Phe Met Asp Leu Pro Met His Phe

    275                 280                 285agg cca aag gaa atg gtg aaa gag aag aaa atg ata tac tca ttt gat   912Arg Pro Lys Glu Met Val Lys Glu Lys Lys Met Ile Tyr Ser Phe Asp

290                 295                 300ccc aca aaa aag gct cgt ttt ggt gtt ctt ccg cgc tat gcc aag gat   960Pro Thr Lys Lys Ala Arg Phe Gly Val Leu Pro Arg Tyr Ala Lys Asp305                 310                 315                 320gaa ctt atg att aga tgg ttt gag ctt ccc aac tgc ttt att ttc cac   1008Glu Leu Met Ile Arg Trp Phe Glu Leu Pro Asn Cys Phe Ile Phe His

            325                 330                 335aac gcc aat gct tgg gaa gaa gag gat gaa gtc gtc ctc atc act tgt   1056Asn Ala Asn Ala Trp Glu Glu Glu Asp Glu Val Val Leu Ile Thr Cys

        340                 345                 350cgt ctt gag aat cca gat ctt gac atg gtc agt ggg aaa gtg aaa gaa   1104Arg Leu Glu Asn Pro Asp Leu Asp Met Val Ser Gly Lys Val Lys Glu

    355                 360                 365aaa ctc gaa aat ttt ggc aac gaa ctg tac gaa atg aga ttc aac atg   1152Lys Leu Glu Asn Phe Gly Asn Glu Leu Tyr Glu Met Arg Phe Asn Met

370                 375                 380aaa acg ggc tca gct tct caa aaa aaa cta tcc gca tct gcg gtt gat   1200Lys Thr Gly Ser Ala Ser Gln Lys Lys Leu Ser Ala Ser Ala Val Asp385                 390                 395                 400ttc ccc aga atc aat gag tgc tac acc gga aag aaa cag aga tac gta   1248Phe Pro Arg Ile Asn Glu Cys Tyr Thr Gly Lys Lys Gln Arg Tyr Val

            405                 410                 415tat gga aca att ctg gac agt atc gca aag gtt acc gga atc atc aag   1296Tyr Gly Thr Ile Leu Asp Ser Ile Ala Lys Val Thr Gly Ile Ile Lys

        420                 425                 430ttt gat ctg cat gca gaa gct gag aca ggg aaa aga atg ctg gaa gta   1344Phe Asp Leu His Ala Glu Ala Glu Thr Gly Lys Arg Met Leu Glu Val

    435                 440                 445gga ggt aat atc aaa gga ata tat gac ctg gga gaa ggc aga tat ggt   1392Gly Gly Asn Ile Lys Gly Ile Tyr Asp Leu Gly Glu Gly Arg Tyr Gly

450                 455                 460tca gag gct atc tat gtt ccg cgt gag aca gca gaa gaa gac gac ggt  1440Ser Glu Ala Ile Tyr Val Pro Arg Glu Thr Ala Glu Glu Asp Asp Gly465                 470                 475                 480tac ttg ata ttc ttt gtt cat gat gaa aac aca ggg aaa tca tgc gtg  1488Tyr Leu Ile Phe Phe Val His Asp Glu Asn Thr Gly Lys Ser Cys Val

            485                 490                 495act gtg ata gac gca aaa aca atg tcg gct gaa ccg gtg gca gtg gtg  l536Thr Val Ile Asp Ala Lys Thr Met Ser Ala Glu Pro Val Ala Val Val

        500                 505                 5l0gag ctg ccg cac agg gtc cca tat ggc ttc cat gcc ttg ttt gtt aca  1584Glu Leu Pro His Arg Val Pro Tyr Gly Phe His Ala Leu Phe Val Thr

    515                 520                 525gag gaa caa ctc cag gaa caa act ctt ata taa                      1617Glu Glu Gln Leu Gln Glu Gln Thr Leu Ile

530                 535<210>18<211>538<212>PRT<213>拟南芥<400>18Met Ala Glu Lys Leu Ser Asp Gly Ser Ile Ile Ile Ser Val His Pro  1               5                  10                  15Arg Pro Ser Lys Gly Phe Ser Ser Lys Leu Leu Asp Leu Leu Glu Arg

         20                  25                  30Leu Val Val Lys Leu Met His Asp Ala Ser Leu Pro Leu His Tyr Leu

     35                  40                  45Ser Gly Asn Phe Ala Pro Ile Arg Asp Glu Thr Pro Pro Val Lys Asp

 50                  55                  60Leu Pro Val His Gly Phe Leu Pro Glu Cys Leu Asn Gly Glu Phe Val 65                  70                  75                  80Arg Val Gly Pro Asn Pro Lys Phe Asp Ala Val Ala Gly Tyr His Trp

             85                  90                  95Phe Asp Gly Asp Gly Met Ile His Gly Val Arg Ile Lys Asp Gly Lys

        100                 105                 110Ala Thr Tyr Val Ser Arg Tyr Val Lys Thr Ser Arg Leu Lys Gln Glu

    115                 120                 125Glu Phe Phe Gly Ala Ala Lys Phe Met Lys Ile Gly Asp Leu Lys Gly

130                 135                 140Phe Phe Gly Leu Leu Met Val Asn Ile Gln Gln Leu Arg Thr Lys Leu145                 150                 155                 160Lys Ile Leu Asp Asn Thr Tyr Gly Asn Gly Thr Ala Asn Thr Ala Leu

            165                 170                 175Val Tyr His His Gly Lys Leu Leu Ala Leu Gln Glu Ala Asp Lys Pro

        180                 185                 190Tyr Val Ile Lys Val Leu Glu Asp Gly Asp Leu Gln Thr Leu Gly Ile

    195                 200                 205Ile Asp Tyr Asp Lys Arg Leu Thr His Ser Phe Thr Ala His Pro Lys

210                 215                 220Val Asp Pro Val Thr Gly Glu Met Phe Thr Phe Gly Tyr Ser His Thr225                 230                 235                 240Pro Pro Tyr Leu Thr Tyr Arg Val Ile Ser Lys Asp Gly Ile Met His

            245                 250                 255Asp Pro Val Pro Ile Thr Ile Ser Glu Pro Ile Met Met His Asp Phe

        260                 265                 270Ala Ile Thr Glu Thr Tyr Ala Ile Phe Met Asp Leu Pro Met His Phe

    275                 280                 285Arg Pro Lys Glu Met Val Lys Glu Lys Lys Met Ile Tyr Ser Phe Asp

290                 295                 300Pro Thr Lys Lys Ala Arg Phe Gly Val Leu Pro Arg Tyr Ala Lys Asp305                 310                 315                 320Glu Leu Met Ile Arg Trp Phe Glu Leu Pro Asn Cys Phe Ile Phe His

            325                 330                 335Asn Ala Asn Ala Trp Glu Glu Glu Asp Glu Val Val Leu Ile Thr Cys

        340                 345                 350Arg Leu Glu Asn Pro Asp Leu Asp Met Val Ser Gly Lys Val Lys Glu

    355                 360                 365Lys Leu Glu Asn Phe Gly Asn Glu Leu Tyr Glu Met Arg Phe Asn Met

370                 375                 380Lys Thr Gly Ser Ala Ser Gln Lys Lys Leu Ser Ala Ser Ala Val Asp385                 390                 395                 400Phe Pro Arg Ile Asn Glu Cys Tyr Thr Gly Lys Lys Gln Arg Tyr Val

            405                 410                 415Tyr Gly Thr Ile Leu Asp Ser Ile Ala Lys Val Thr Gly Ile Ile Lys

        420                 425                 430Phe Asp Leu His Ala Glu Ala Glu Thr Gly Lys Arg Met Leu Glu Val

    435                 440                 445Gly Gly Asn Ile Lys Gly Ile Tyr Asp Leu Gly Glu Gly Arg Tyr Gly

450                 455                 460Ser Glu Ala Ile Tyr Val Pro Arg Glu Thr Ala Glu Glu Asp Asp Gly465                 470                 475                 480Tyr Leu Ile Phe Phe Val His Asp Glu Asn Thr Gly Lys Ser Cys Val

            485                 490                 495Thr Val Ile Asp Ala Lys Thr Met Ser Ala Glu Pro Val Ala Val Val

        500                 505                 510Glu Leu Pro His Arg Val Pro Tyr Gly Phe His Ala Leu Phe Val Thr

    515                 520                 525Glu Glu Gln Leu Gln Glu Gln Thr Leu Ile

530                 535<210>19<211>27<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：人工合成序列<400>19attgaattca tgccttcagc ttcaaac                                           27<210>20<211>31<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：人工合成序列<400>20attggatccc aaaagctaca cgctggtccc c                                      31<210>21<211>38<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：人工合成序列<400>21atatatctag aatgccttca tcagcttcaa acacttgg                               38<210>22<211>36<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：人工合成序列<400>22atataggatc cctccggcac cggcgcgaag ttcccg                                36<210>23<211>29<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：人工合成序列<400>23cccgggatcc ctcaagcctc tctataccg                                        29<210>24<211>31<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：人工合成序列<400>24cccgggatcc tttatacgga ttctgaggga g                                     31<210>25<211>33<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：人工合成序列<400>25attgaattca tggactctgt ttcttcttct tcc                                   33<210>26<211>34<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：人工合成序列<400>26attgaattct taaagcttat taaggtcact ttcc                                  34<210>27<211>35<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：人工合成序列<400>27aagaattcat ggcggagaaa ctcagtgatg gcagc                                 35<210>28<211>35<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：人工合成序列<400>28aaaagaattc ggcttatata agagtttgtt cctgg                                 35<210>29<211>39<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：人工合成序列<400>29cgggatccat gcaacactct cttcgttctg atcttcttc                             39<210>30<211>40<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：人工合成序列<400>30cgggatcctc agaaaacttg ttccttcaac tgattctcgc                           40<210>31<211>32<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：人工合成序列<400>31attgaattca tggcttcttt cacggcaacg gc                                   32<210>32<211>17<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：人工合成序列<400>32gttttcccag tcacgac                                                    17