(11β,16β)-21-(乙酰氧基)-11-羟基-2'甲基-5'H-孕甾-1,4-二烯并17,16-D噁唑-3,20-二酮的制备方法

摘要

一种制备式Ⅰ化合物(11β,16β)－21－(乙酰氧基)－11－羟基－2’－甲基－5’H－孕甾－1,4－二烯并[17,16－d]噁唑－3,20－二酮(地夫可特)的方法,该方法包括(11β,16β)－11,21－二羟基－2’－甲基－5’H－孕甾－1,4－二烯并[17,16－d]噁唑－3,20－二酮与乙酸酐在合适的有机溶剂中在碱性催化剂和水存在下反应。

说明书

本发明涉及制备化合物(11β，16β)-21-(乙酰氧基)-11-羟基-2’-甲基-5’H-孕甾-1，4-二烯并[17，16-D]噁唑-3，20-二酮，也已知为，后面称为，INN名(国际非专有名)地夫可特(deflazacort)的新方法。地夫可特由下式Ⅰ表示

地夫可特从几年前开始被作为钙-缺乏的类皮质激素剂用于治疗。

此化合物属于更一般类型的孕甾烯并-噁唑啉，对于这些化合物，已经报道了其抗炎，糖皮质激素和激素类药理活性。上述化合物的例子，包括地夫可特，披露于US 3413286中，其中地夫可特被称作11β-21-二羟基-2’-甲基-5’βH-孕甾-1，4-二烯并[17，16-d]噁唑-3，20-二酮21-乙酸酯。

根据US 3413286披露的方法，地夫可特从5-孕甾烷-3β-醇-11，20-二酮-2’-甲基噁唑啉通过用Br₂-二恶烷2，4-二溴化而得到，在LiBr-LiCO₃存在下加热产物得到1，4-二烯，并将后者转化为21-碘化合物，然后转化为想要的21-乙酰氧基化合物。通过地夫可特的水解，得到式Ⅱ的11β-21-二羟基-2’-甲基-5’βH-孕甾-1，4-二烯并[17，16-d]噁唑-3，20-二酮：

式Ⅱ的化合物优选地根据在EP-B-322630中公开的发酵法得到；在所说的专利中，式Ⅱ化合物被称为11β-21-二羟基-2’-甲基-5’βH-孕甾-1，4-二烯并[17，16-d-]噁唑啉-3，20-二酮。

本发明提供通过将式Ⅱ化合物乙酰化，用于得到地夫可特的新的优秀的一步法。

更具体地，本发明的方法包括式Ⅱ的化合物与乙酸酐在合适的有机溶剂中在碱性催化剂和水存在下反应。

式Ⅱ的原料根据本专业已知的方法得到，例如根据在上面引用的，本文引作参考的EP-B-322630中公开的发酵法。所说的专利公开了用于得到式Ⅱ化合物的发酵法，其中2’-甲基-4-孕甾烯-21-醇-[17α，16α-d-]噁唑啉基-3，20-二酮与Curvularia菌株和Arthrobacter菌株连续生长的混合培养物接触。更具体地，根据优选的方案，上述化合物在接种12-24小时之后被加入C．lunata NRRL 2380在合适的发酵培养基中的生长培养物中，并且，在接种48-72小时后，将18-36小时的A．simplex ATCC 6946的生长培养物加入混合物中并进一步温育40-55小时；发酵在浸没的条件下进行，温度保持在27℃至32℃之间，pH在6至8之间；式Ⅱ的发酵产物根据本专业已知的工艺回收。

适合于本发明的方法的有机溶剂是那些能够至少部分溶解原料，而对反应过程没有负作用的溶剂。合适的有机溶剂的例子有卤代(C₁-C₄)烃，(C₁-C₄)羧酸的(C₁-C₄)烷基酯，二甲基甲酰胺，乙腈，丙酮等等。优选的溶剂是(C₁-C₄)羧酸的(C₁-C₄)烷基酯，如甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，2-甲基丙基或叔丁基甲酸酯；甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，2-甲基丙基或叔丁基乙酸酯；甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，2-甲基丙基或叔丁基丙酸酯；甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，2-甲基丙基或叔丁基丁酸酯；甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，2-甲基丙基或叔丁基异丁酸酯。特别优选的是乙酸乙酯。

反应温度可以根据其它反应参数在约-15℃至30℃变化；优选地温度被设定为-5℃至10℃，特别优选地是约5℃。

乙酸酐优选地以相对于化学计量摩尔过量的量与式Ⅱ化合物反应；优选地，式Ⅱ化合物与乙酸酐之间的摩尔比为约1．0／1．2至约1．0／2，特别优选地摩尔比约1．0／1．4。

用于本发明方法的碱性催化剂是三级有机脂肪或非环状胺如三甲胺，三乙胺，N-甲基吡咯烷或杂环碱如吡啶，4-(N，N-二甲基氨基)吡啶，4-(N，N-二乙基氨基)吡啶，可力丁，甲基吡啶，等等。优选地，使用4-(N，N-二甲基氨基)吡啶。催化量取决于所用的具体催化剂；一般为式Ⅱ化合物摩尔量的约0．05至约0．30倍。优选地其摩尔量为式Ⅱ化合物摩尔量的约0．05至约0．10倍；具体地，当地夫可特醇和乙酸酐之间的摩尔比为约1．0／1．4，而且4-(N，N-二甲基氨基)吡啶被选作催化剂时，其摩尔量为式Ⅱ化合物摩尔量的约0．06倍。

一般地，式Ⅱ化合物摩尔量3至20倍的水存在于反应混合物中，优选地5至15倍。在上述优选的条件下，即式Ⅱ化合物／乙酸酐／催化剂的比例为约1．0／1．4／0．06，相对于式Ⅱ化合物，水的摩尔过量将为约10倍。

反应时间将随上述反应参数和条件而变化。一般情况下，反应在4至15小时内完成。在任何情况下，反应进程都可以根据本专业已知的标准技术，如HPLC或TLC容易地跟踪，通常跟踪最终产物地夫可特的形成。因此，在这些分析结果的基础上，熟练的人员可以估价何时停止反应，开始回收所需的产物。

反应产物根据本专业已知的常用方法回收；例如反应混合物用合适的缓冲溶液(如磷酸，碳酸等等，pH6-8)洗涤，然后最终产物在合适的溶剂中结晶。根据优选的方案，当(C₁-C₄)羧酸的(C₁-C₄)烷基酯被用作反应溶剂时，尤其是用乙酸乙酯时，最终产物可以直接在相同的反应溶剂中结晶，不需要加入用于结晶的不同溶剂。

为了更好地说明本发明，给出下列实施例。

实施例1

C．lunata和A．simplex的连续生长Ⅰ)斜面培养基

萨布罗(Sabouraud)培养基(用于C．lunata)

抗生素琼脂No．1(用于A．simplex)Ⅱ)植物性的和预-培养的培养基

a)用于C．lunata

大豆粗粉                      13g／l

KH₂PO₄                      5g／l

葡萄糖                        10g／l

蛋白胨                        5g／l高压灭菌之前将pH调节至6．5-7．5

b)用于A．simplex

葡萄糖                        1．0g／l

大豆粗粉                      5．0g／l

蛋白胨                        5．0g／l

Basamin Busch                 3．0g／l

KH₂PO₄                    5．0g／l

NaCl                          5．0g／l

聚硅氧烷                      0．1ml／l高压灭菌之前将pH调节至6．5-7．5。Ⅲ)发酵培养基

具有相同组成的用于C．lunata的预-培养的发酵培养基已在上面叙述过。Ⅳ)发酵工艺

斜面被分别用于接种500ml烧瓶，在100ml上面指出的植物性培养基存在下在约28℃培养约12-24小时(C．lunata)或18-36小时(A．simplex)。这些接种物被用于下述工艺：

在上面得到的C．lunata培养物的等分试样(约1至5％)被转移到含有上述的发酵培养基的8升培养器中并在29-32℃温育24小时。

然后加入2’-甲基-4-孕甾烯-21-醇-[17α，16α-d-]-噁唑啉基-3，20-二酮，从接种开始连续发酵36-72小时。

以后，A．simplex的18-36小时培养物被加入其中，继续发酵40-55小时。

反应进程通过如本专业已知的TLC或优选地HPLC通过跟踪原料的消失和／或最终产物的出现而监测。作为进一步的控制，中间体的出现消失也可以被跟踪。HPLC转化产率：70-75％。回收

加入A．simplex 40-55小时之后，转化一般可以被认为已完成，而发酵物可以被处理以分离所需的式Ⅰ化合物。

发酵混合物通过过滤分离，菌丝体反复用氯仿(3×11)洗涤，滤液用氯仿(3×11)萃取。合并的氯仿洗涤液和萃取液在减压下部分浓缩，用活性炭脱色。然后浓缩为油状残余物。加入石油醚，形成沉淀，将其用83倍乙醚洗涤，过滤收集给出3g式Ⅱ化合物。

实施例2

地夫可特的制备

在5℃，搅拌下往(11β，16β)-11，21-二羟基-2’-甲基-5’H-孕甾-1，4-二烯并[17，16-D]噁唑-3，20-二酮(10g，0．025mol)在300ml含有4．5g(0．25mol)水的乙酸乙酯中的溶液中加入3．32ml(0．035mol)乙酸酐和0．2g(0．0016mol)4-(N，N-二甲基氨基)吡啶。反应通过在硅胶上的TLC跟踪，用氯仿／甲醇9／1的混合物作为洗脱剂。6小时后，反应被认为已经完成。

实施例3

地夫可特的回收

当实施例1的反应完成后，反应混合物的温度达到室温，并在1小时内加入85ml磷酸缓冲液(pH7．5)。丢弃水层，有机层用80ml水洗涤，过滤并浓缩至约30ml。晶体的悬浮液保持在5℃2小时；过滤并干燥后，得到10g结晶产物。通过进一步浓缩母液至5ml并冷却至5℃，再得到0．4g产物，总共10．4g，总产率94％(纯度＞98％)。