一种用于检测胎儿肺成熟度的薄层色谱测试法

摘要

一种用于检测胎儿肺成熟度的薄层色谱展开剂及其方法，其特征在于采用氯仿、甲醇和水为展开剂，用甲醇、氯仿处理的硅胶薄层色谱板进行一维展开，对照标准卡方式判断胎儿的肺成熟度，经大量临床测定，结果表明，临床符合率98.7％，操作简单，重复性好。本发明用于临床推广，可在优生优育、提高人口质量方面发挥积极的作用。

说明书

本发明涉及一种色谱分析方法，具体地说是提供一种利用薄层色谱分析方法来检测胎儿肺成熟度的色谱测试方法。

为判别胎儿的健康状态，在妇产科学中近几年有报导采用薄层色谱技术，测定L/S比值来预测胎儿肺成熟度。至今做得最好的是采用两维薄层色谱法，即将样品点加在硅胶板的一个角上，经垂直方向上的两次展开后，利用碘蒸所显色，测斑点长、宽。计算斑点面积和L/S比值。这种方法除很麻烦外，在双向展开体系中，痕量磷脂化合物不可能测准。另外，量面积测定L/S比值的结果误差很大，易差别错误。也有报导用一次展开，同时测定卵磷脂，鞘磷脂和磷脂酰甘油，碘蒸气量色，量面积半定量。但这些报导一般都是研究中的实验结果，并未形成用于临床分析的标准化方法。

本发明的目的是建立一种用于检测胎儿肺成熟度的薄层色谱分析方法，利用这种方法可以简便、准确、可靠地对胎儿肺成熟状态进行测试，在临床上推广，可在优生优育，提高人口质量方面发挥积极地作用。

本发明的测定胎儿肺成熟度的方法是采用薄层色谱法（单板一维薄层色谱法）测定羊水中卵磷脂与鞘磷脂比值（L/S），磷脂酰甘油（PG）和磷脂酰乙醇胺（PE），以判定胎儿肺成熟度，其特征在于该测定中采用硅胶薄层板和甲醇、氯仿和水体系配制成的展开剂，进行一维色谱展开，完成测试。再利用测试结果与标准图卡对照进行判定。具体地测试方法按下述步骤：

1.硅胶薄层板预处理：

用甲醇、氯仿清洗液处理硅胶薄层板。清洗液中甲醇含量为30～70%（wt）。其余为氯仿。

2.展开剂的配制：

展开剂为含有甲醇、氯仿和水体系组成，其各组分重量份比含量为：氯仿∶100份，甲醇：15～40份;水1～5份。在展开剂体系中也可以加入其它辅助溶剂，例如按重量份比：5～20份乙醇，20～30份乙酸，85～100份丙醇、乙酸乙酯或三乙胺，且辅助溶剂可以加入一种或几种。同时作为展开剂组分中的水也可以用浓度为0.2～0.5%（重量）的KCl水溶液代替。配制展开剂时，只需按上述展开剂各组分的重量配比，以氯仿为基准（100份），秤取各组分，再混合即可配制成展开剂。

3.被测试样样品处理：

向羊水（被测样品）中依次加入甲醇、氯仿、混合进行离心，取氯仿层，吹干，再加入小量氯仿溶解残留物作为待测试样。

4.薄层色谱分析：

首先将上述3处理的试样点加到经过1处理的薄层板上，再将薄层板放入倒入展开剂的展开缸中，上行展开至上沿，取出薄层板，吹干溶剂;最后，将展开好的薄层板放入显色缸进行碘蒸气显色，完成色谱分析。

利用上述所得色谱分析结果与标准对照色谱图进行对照，并进行判别。从大量临床统计结果得出：若L/S比值大于3，胎儿肺成熟的可能性为90～95%;若L/S比值大于3，且PG存在，胎儿肺成熟的可能性为95～98%;若L/X比值大于3，PG存在，且PE/S比值大于2，则胎儿肺成熟的可能性在99%以上。

本发明的薄层色谱分析方法，可以通过计算机直接给出定量分析结果。其判别过程也可以利用微机进行处理，自动完成。

下面列举实施例对本发明作进一步说明：

实施例1：

取一块硅胶薄层板，放入已加有10ml甲醇和氯仿（1∶1重量份），展开至上沿，取出，凉干，在110℃下烘15分钟，冷却备用。

抽取羊水5ml，于2000rpm以离心10分钟。取清液2ml，注入离心试管。加入甲醇3ml，振摇，加氯仿4ml，充分振摇。在2500rpm离心15分钟。取最下氯仿层溶液2ml，注入另一离心试管中。吹干后，加氯仿100μl，溶解残留物，用于点样。

用微量注射器取样液10μl，每次2μl，分五次点加于薄层板的同一样品点。

将点好样的薄层板放入已加入15ml展开溶剂（按氯仿∶甲醇∶水＝100∶55∶3重量比）的展开缸中，展开至上沿。取出，吹干。

将展开过的薄层板放入已放入少量碘晶体的显色缸中。待薄层板上出现明显的亮黄色斑点后取出。用标准卡对照判别，L/S≈2.0，PG（-）。

给孕妇注射地塞米松后72小时，再抽取羊水，重复如上步骤分析得L/S≈5.0，PG（+）。新生儿未发生呼吸塞迫症（RDS）。

实施例2：

同实施例1步骤。其中，洗板溶剂为氯仿-甲醇1∶1.5（重量份），展开溶剂为氯仿-甲醇-正丙醇-乙酸乙酯-0.25%KCl水溶液100∶52∶100∶100∶5（重量份）。

结果：L/S≈9.0，PG（-）。

注射地塞米松手72小时，再抽取羊水，分析结果：L/S≈11.0，PG（+）。

新生儿未发生RDS症。

实施例3：

同实施例1步骤。其中，洗板溶剂为甲醇-氯仿1.5∶1（重量份），展开溶剂为氯仿-甲醇-乙醇-乙酸-水100∶30∶20∶30∶2（重量份）。结果：L/S≈4.0，PG（-）。

注射地塞米松后72小时，再抽取羊水，分析结果：L/S≈5.0，PG（+）。

新生儿未发生RDS症。

实施例4：

同实施例1步骤。其中，洗板溶剂为氯仿-甲醇1∶1.3（重量份），展开溶剂为氯仿-甲醇-异丙醇-三乙胺-水100∶22∶85∶85∶3（重量份）。

结果：L/S≈4.0，PG（-）。

注射地塞米松后72小时，再抽取羊水，分析结果：L/S≈6.0，PG（+）。

由上述实例和大量临床检验表明利用本发明的方法测定胎儿肺成熟度的测定，其操作十分简单，所选用的展开剂体系对磷脂化合物分离效率高，重复性好，可靠性高。易于在临床上推广应用。