一种中华绒螯蟹NKCC基因及其克隆方法和表达分析方法

摘要

本发明公开了一种中华绒螯蟹NKCC基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1。还公开了该基因的克隆方法，包括：对不同物种NKCC氨基酸序列比对后设计引物，中华绒螯蟹腮总RNA反转录成cDNA并经PCR扩增，获取NKCC基因核心片段；根据核心片段设计3’和5’端引物，将提取的总RNA反转录成3’和5’cDNA第一链，以此为模板RACE，获取3’和5末端RACE片段；将3’和5末端RACE片段分别与核心片段连接，得到NKCC全长序列。还公开了该基因的表达分析方法，显示在肠中表达量最高；通过盐胁迫实验推测该基因在渗透压调节中起重要作用。本发明为研究离子通道在中华绒螯蟹渗透调节中的作用机制提供了理论基础。