一种金边虎尾兰离体培养一步成苗培养基及培养方法

摘要

一种金边虎尾兰离体培养一步成苗培养基及培养方法，属于植物组织培养技术领域。本发明解决金边虎尾兰常规繁殖方法系数低，生长缓慢，难以形成规模化生产的问题。所述方法是按下述步骤进行的：步骤一、培养基消毒灭菌；步骤二、金边虎尾兰叶片幼苗消毒灭菌；步骤三、将步骤二消毒灭菌过的外植体接种到苗培养基中，置于温度25±2℃条件下进行培养，光照时间每天12-14小时，光照强度为2000-3000lx；步骤四、光照40-50天后，得虎皮兰再生植株。本发明用于金边虎尾兰离体的组织培养。

说明书

技术领域

本发明涉及一种金边虎尾兰离体培养一步成苗培养基及培养方法，属于植物组织 培养技术领域。

背景技术

虎尾兰(Sansevieria trifasciata var.harnii)又称虎皮兰、千岁兰，是龙舌兰科 虎尾兰属，多年生常绿肉质草本植物。原产非洲热带和印度，是一种能净化室内环境 的草本观叶植物。其叶色美丽,似箭形的叶挺拔向上，适应性强。

金边虎尾兰常见的繁殖方式有叶插法、分株法等,这些常规的繁殖方法繁殖系数 低,培养周期较长，而且不易获得大量的植株，且会出现品种退化现象，金边虎尾兰 金边性状易消失，影响观赏质量。组织培养已成为金边虎尾兰保持其优良性状且快速 繁殖的方法。具有繁殖系数高、保持原品种金边性状、避免种性分离、种苗不带病毒、 生长一致等优点，从而使种苗生产达到规模化、标准化和工厂化的目标。

传统的组织培养的步骤一般是先诱导出愈伤组织，通过继代，建立能传代的愈伤 组织体系，然后诱导生芽、生根，形成完整幼苗。一步成苗法是指外植体在形成愈伤 组织后,不需要转移到分化培养基上,而是直接在原培养基上分化,分化的顺序通常是 先根后芽,直至形成健壮的全苗。它能在一步成苗培养基上直接分化出可移栽苗，简 化了育苗程序，缩短了育苗周期，提高了培养效率。

发明内容

本发明为了解决问题，进而提供了一种金边虎尾兰离体培养一步成苗培养基及培 养方法。

本发明为解决上述技术问题采取的技术方案是：方案一：以MS为基本培养基，添 加不同浓度的2，4-二氯苯氧乙酸、萘乙酸、激动素组合，其中2，4-二氯苯氧乙酸 的浓度为0.2mg/L、0.4mg/L或0.6mg/L，萘乙酸的浓度为0.0mg/L、0.1mg/L或0.2mg/L， KT的浓度为0.5mg/L、1.0mg/L或1.5mg/L。

方案二：步骤一、配制虎尾兰一步成苗培养基，并进行灭菌处理；

步骤二、取幼嫩无病虫害的虎皮兰叶片，用流水冲洗1h，75％酒精浸泡15s, 0.1％HgCl₂的消毒剂处理5min,无菌水冲洗多次后,用解剖刀切成1cm×1cm块状；

步骤三、将步骤二消毒灭菌过的外植体接种到苗培养基中，置于温度25±2℃条 件下进行培养，光照时间每天12-14小时，光照强度为2000-3000lx；

步骤四、光照40-50天后，得虎皮兰再生植株。

本发明的有益效果是：本发明的培养基使虎尾兰叶片在形成愈伤组织后，不需要 转接到分化培养基上，而是直接在原培养基上分化成苗，为虎尾兰的快速繁殖提供了 一条有效的途径。

附图说明

图1是是驯化移栽成功的组培苗。

具体实施方式

具体实施方式一：本实施方式以下结合具体实施例对本发明做进一步描述和说明。

一种金边虎尾兰离体培养一步成苗培养基，以MS为基本培养基，添加不同浓度的 2，4-二氯苯氧乙酸、萘乙酸、激动素组合，其中2，4-二氯苯氧乙酸的浓度为0.2mg/L、 0.4mg/L或0.6mg/L，萘乙酸的浓度为0.0mg/L、0.1mg/L或0.2mg/L，KT的浓度为 0.5mg/L、1.0mg/L或1.5mg/L。

培养基最优配方为2，4-二氯苯氧乙酸的浓度为0.2mg/L，萘乙酸的浓度为 0.1mg/L，KT的浓度为1.0mg/L。

或培养基最优配方为2，4-二氯苯氧乙酸的浓度为0.2mg/L，萘乙酸的浓度为 0.2mg/L，KT的浓度为1.5mg/L。

培养基40-50d后就可直接发育成完整植株,植株一次成苗率达到60％,，芽苗健 壮，根多而粗壮，移栽后成活率高。缩短了培养周期、简化了培养程序,提高了出 苗率、降低了生产成本。

因为该培养基能较好的诱导虎尾兰叶片形成愈伤组织，愈伤组织淡黄绿色，小而 致密其诱导率高，而且一次成苗率达到60％，且芽苗健壮，根多而粗壮。

具体实施方式二：培养方法如下，步骤一、配制虎尾兰一步成苗培养基，并进行 灭菌处理；

步骤二、取幼嫩无病虫害的虎皮兰叶片，用流水冲洗1h，75％酒精浸泡15s, 0.1％HgCl₂的消毒剂处理5min,无菌水冲洗多次后,用解剖刀切成1cm×1cm块状；

步骤三、将步骤二消毒灭菌过的外植体接种到苗培养基中，置于温度25±2℃条 件下进行培养，光照时间每天12-14小时，光照强度为2000-3000lx；

步骤四、光照40-50天后，得虎皮兰再生植株。

采用下述试验验证本实施方式的效果：

以MS为基本培养基，采用三因素三水平L₉(3⁴)的正交试验设计，添加不同浓 度的2，4-二氯苯氧乙酸、萘乙酸、激动素组合，蔗糖浓度为3％,琼脂浓度为0.7％， pH值为5.8。2，4-二氯苯氧乙酸、萘乙酸、激动素各取三个水平，其中2，4-二氯 苯氧乙酸的浓度为0.2mg/L、0.4mg/L、0.6mg/L，萘乙酸的浓度为0.0mg/L、0.1mg/L、 0.2mg/L，KT的浓度为0.5mg/L、1.0mg/L、1.5mg/L，配制成9组不同的虎尾兰一步 成苗培养基，各组培养基激素配比见表1。

表1 虎尾兰一步成苗培养基配比正交实验设计表L₉(3⁴)

配好上述9种虎尾兰一步成苗培养基后分装到培养瓶中进行灭菌处理，灭菌温度 121℃，灭菌时间为15分钟。

晴天剪取生长健壮的虎尾兰叶片，用自来水冲洗1小时，在超净工作台用浓度 75％酒精溶液浸泡15s，无菌水冲洗3遍，再用0.1％HgCl₂的消毒剂处理5min， 无菌水洗5次，每次1min。将完成消毒的外植体置于铺有滤纸的无菌培养皿中， 用解剖刀切成1cm×1cm块状。

将消毒处理过的外植体分别接种于上述9种不同激素组合的培养基中，每个瓶中 接3个外植体，每个组合接种10瓶。每4周继代1次。培养条件为(25±1)℃，每 日光照12h，光强2000-3000lx。

叶片接种后,每隔2d观察1次,记录外植体的脱分化和再分化过程以及愈伤组织 的色泽、质地、根芽分化的先后顺序和试管苗的生长状况等性状,30d后统计愈伤组 织诱导率；50d后统计一次成苗率。

接种10天后，外植体开始上翘或拱起,切口端开始膨大,颜色变浅,约20d左右 形成淡黄色、结构松散的愈伤组织。30d后,可见从愈伤组织上出现白色绒毛状物, 随后绒毛状物中间伸出许多的突起,这些突起迅速伸长成为密被白色绒毛的细根。40 d后,在生根的愈伤组织表面分化出绿色的芽点,芽点后来增大，长成小苗,50d左右 形成了结构完整的再生植株。

表2 不同浓度激素配比对虎尾兰诱导一步成苗的影响

分析表2可知，各组虎尾兰一步成苗培养基均能较好的诱导虎尾兰叶片形成愈伤组 织，其诱导率均达到70％以上，第1，2，4，5，6均达到90.0％以上，再综合考虑一次 成苗率和苗的生长状况，第2，3组培养基较好，以第2组尤佳。所以诱导虎尾兰一步 成苗的MS+2，4D 0.2mg/L+KT1.0mg/L+NAA 0.1mg/L+3％蔗糖+0.7％琼脂。

实施例2：

利用所述的虎尾兰一步成苗培养基，使虎尾兰叶片离体培养一步成苗的培养方法，包 括以下步骤：

1)配制虎尾兰一步成苗培养基，每升培养基MS培养基中，加入2，4-二氯苯氧乙酸 0.2mg、萘乙酸0.1mg、激动素1.0mg,进行灭菌处理，灭菌温度为121℃，灭菌时间为 15分钟。

2)选取生长旺盛无病虫害的虎尾兰叶片，用流水冲洗1h,75％酒精浸泡15s,无菌水 冲洗多次，0.1％HgCl₂的消毒剂处理5min,无菌水冲洗多次后,用解剖刀切成1cm×1cm 块状。

3)将步骤(2)消毒处理过的叶片外植体接种到虎尾兰一步成苗最佳培养基中进行培 养，叶片正面朝上，培养温度为25℃，光照时间12-14h/d,光照强度2000-3000lx。

4)培养40-50天后，得金边虎尾兰组培再生植株。