蚂蚁提取物作为有效成分在制备化妆品中的应用

摘要

本发明公开了蚂蚁提取物作为有效成分在制备化妆品中的应用，属于日用化工领域。本发明的蚂蚁提取物能够抑制黑色素瘤细胞增殖，具有一定的祛斑美白作用；蚂蚁提取物还能保护皮肤成纤维细胞活力，显著增加皮肤中胶原蛋白和羟脯氨酸的分泌，增强皮肤弹性，具有一定的抗衰老作用；同时蚂蚁提取物能提升超氧化物歧化酶(SOD)活力并减少活性氧(ROS)的产生，具有一定的抗氧化作用。本发明的蚂蚁提取物具有生物活性稳定、水溶性良好等特点，可作为化妆品有效成分用于祛斑美白化妆品、抗衰老化妆品、抗氧化化妆品或其组合中。

说明书

技术领域

本发明涉及一种化妆品有效成分，具体涉及蚂蚁提取物作为有效成分在制备化 妆品中的应用，属于日用化工领域。

背景技术

目前，化妆品工业在人们的日常生活中占据着相当重要的地位。我国的日化行 业发展很快，新产品日新月异，市场呈现空前的繁荣景象。很多药用的植物和动物 陆续被应用于功能性化妆品生产，产生了较好的社会和经济效益。因此，应用传统 中药学理论和现代科学技术制备的含有特殊活性成分的化妆品在日化工业中越来 越多的受到高度重视。

天然药物在美容护肤的应用历史悠久，早在秦汉时期即已出现，到了唐代极为 盛行。天然药物中所含的有机酸、油脂、生物碱、鞣质、苷类、精油、粘液质、蛋 白质、氨基酸、维生素类、矿物质、微量元素、植物激素等物质均能够对人体皮肤 产生不同效应和影响。如鞣质具有收敛皮肤的作用、皂苷具有去污除垢功效、酸类 物质有消炎杀菌作用、粘多糖有保湿作用、氨基酸能营养皮肤减少皱纹产生、蛋白 质对增强皮肤弹性也有益处。随着科学技术的进步，天然药物中所含的众多活性成 分能够被提取分离出来，这也为天然药物在日化领域的应用创造了条件。

昆虫作为一种新型的保健品在世界范围内得到了较高的认可。联合国粮食和农 业组织对昆虫的营养价值也给予了较高的评价，认为昆虫蛋白是21世纪人类全营养 保健品。蚂蚁是人们最熟悉和最常见的昆虫之一，其种群数量庞大，分布广泛。蚂 蚁属节肢动物门昆虫纲翅目蚁科，具有使用和药用价值的蚂蚁主要有10多种。其中， 拟黑多刺蚁是国家食品卫生、医药管理部门批准的唯一的具有药、食两用价值的蚂 蚁。经过科学研究证实，拟黑多刺蚁具有抗炎、平喘、解痉、镇痛、护肝、养颜和 增强人体免疫功能的作用，堪称“微型动物营养宝库”和“天然药物加工厂”。

蚁疗，即以蚂蚁的药食两用的特质、融合蚂蚁滋补营养、健脾补肾、通经活络、 益气活血、养颜、双向调节免疫、抗病毒、抗炎、镇痛及镇静等功能，提高机体抗 疲劳能力及免疫力，发挥均衡机体营养和延缓衰老等保健养生功效。《本草纲目》 和《本草纲目拾遗》中亦有关于蚂蚁“益气力、泽颜色”功效的记载。目前，我国学 者常将蚂蚁与重要配伍制成组方，用于科学研究和疾病治疗。蚂蚁及其制剂有多方 面的药理作用，其中，蚂蚁的抗衰老作用和美容作用得到了较为广泛的关注。哈曼 于1956年提出，人体在生命活动中必然会产生一些自由基，能与体内某些成分发生 反应，对机体造成损害，引起人体衰老。血液中的过氧化脂质也会随年龄的增加而 增加，而这种物质是构成脂褐脂的核心物质，脂褐脂沉积在神经细胞中会使生物膜 蛋白质和脂质发生过氧化反应，导致其通透性改变，细胞分裂，功能丧失，加速细 胞衰老。而超氧化物歧化酶(SOD)能灭活过多的超氧阴离子，保护机体免遭超氧 化物自由基的损害。蚂蚁体内含有的多种生物活性成分能抗疲劳、增强体力、显著 清除自由基，延缓衰老，延长寿命。多项研究表明，蚂蚁水提液具有显著的抗疲劳、 耐低温、耐高温、耐缺氧的作用，可明显提高老龄小白鼠血浆及脑组织中的超氧化 物歧化酶(SOD)活性，降低老龄小白鼠血浆及脑组织中过氧化脂质及自由基水平 的作用。此外，机体免疫功能下降也是衰老的重要原因。随着年龄的增加，机体对 自身细胞与外源性细胞的区分能力减退，对外源性细胞的免疫反应减弱，免疫效应 大大损伤。蚂蚁水提液能使老龄小白鼠已退化的胸腺增生，胸腺皮质增厚，周围淋 巴细胞增多，明显促进老龄小白鼠淋巴细胞分裂，增加细胞DNA核RNA的含量，使 免疫活性细胞数增多。从中医学角度来看，衰老主要包括“失衡”和“虚损”两个方面， 即为阴阳失衡，气血失调，以致脏腑虚衰，精气得不到濡养，最终导致衰老。而研 究表明，蚂蚁能扶正固本，滋补肝肾，阴阳双补，气血双补，活血化瘀，开胃健脾。 因此，蚂蚁有延年益寿、养生美容、抗衰老的功效。目前在临床上主要用于免疫功 能失调、内分泌紊乱以及与衰老有关的疾病的实验治疗。

近代科学分析，拟黑多刺蚁体内含有70多种营养成分，其活性成分含量白百万 种动、植物中名列前茅。与蚂蚁养颜抗衰作用相关的成分主要包括：

1、蛋白质：蚂蚁中的蛋白质含量占42-67％。蚂蚁中含有特种昆虫活性优质蛋 白，服用后可使脸色白而红润，并能激活大脑细胞，延缓衰老。

2、氨基酸：蚂蚁中含有28种游离氨基酸，其中包括人体所必需的8种氨基酸， 有助于维持机体新陈代谢和能量供应。

3、维生素和微量元素：蚂蚁中含有维生素B1、B2、B12、C、D、E等及钙、 铁、磷、锰、硒、锌等20多种微量元素。其中硒能够抗氧化，清除体内自由基。蚂 蚁中的锌含量尤为令人瞩目。锌参与大脑细胞发育，提高免疫功能，促进人体生长 发育，延缓衰老，被医学家和营养学家誉为“生命之火花”。研究显示，锌亦可预防 眼疾，防皱，增强机体免疫力，从而为补肾健脾提供了可靠的物质基础。

4、三萜类化合物：蚂蚁中所含有的三萜类化合物具有止痛、镇静、抑制组胺 释放等作用，具有显著的降血压、降血脂和抗过敏等功效，对高血压、高血脂、失 眠和多种呼吸系统疾病具有治疗作用。

5、三磷酸腺苷：三磷酸腺苷是体内广泛存在的辅酶，是组织细胞所需能量的 主要来源，参与体内脂肪、蛋白质、糖、核酸、核苷酸等代谢过程，为吸收、分泌、 肌肉收缩及进行生化合成反应提供所需的能量，具有促进细胞修复和再生，增强细 胞代谢活性的功效。

6、草体蚁醛：草体蚁醛是人工无法合成的具有多种生物活性的物质。草体蚁 醛能调节机体免疫功能，调节内分泌系统，增强机体免疫力，对病毒也具有较强的 清除能力。

7、白细胞介素-2：白细胞介素能增强机体免疫功能、活化细胞因子、遏制细胞 恶变及抗病毒。

8、甲壳素：蚂蚁外壳中含有的甲壳素是世界上唯一的含阳离子可食性动物纤 维，具有双向免疫调节作用，并能清除体内自由基，对亚健康状态具有理想的保健 预防作用。

9、蚁酸：蚂蚁中含有蚁酸具有强大的补益气血的功效，迄今为止发现的所有 物质都无法与之比拟，这也是蚂蚁自恐龙时代近2亿年能生存至今的源泉。

蚂蚁作为营养宝库和天然药物加工厂，以其丰富的营养成分和确切的疗效，有 望成为扶正而不留邪、祛邪而不伤正的具有显著祛斑美白、抗衰老以及抗氧化的理 想化妆品有效成分。本发明的蚂蚁提取物具有生物活性稳定、水溶性良好等特点， 可作为化妆品有效成分用于化妆品中。

发明内容

本发明的目的在于提供蚂蚁提取物的一种新的用途，即蚂蚁提取物作为有效成 分在制备化妆品中的应用。

其中，所述蚂蚁提取物能够抑制黑色素瘤细胞增殖，具有一定的祛斑美白作用； 所述蚂蚁提取物能保护皮肤成纤维细胞活力，显著增加皮肤中胶原蛋白和羟脯氨酸 的分泌，增强皮肤弹性，具有一定的抗衰老作用；所述蚂蚁提取物能提升超氧化物 歧化酶(SOD)活力并减少活性氧(ROS)的产生，具有一定的抗氧化作用。

本发明中，优选的，所述蚂蚁提取物用于抑制黑色素瘤细胞增殖，起到祛斑美 白作用的最低有效浓度为10^-4g/mL；所述蚂蚁提取物用于保护皮肤成纤维细胞活力， 显著增加皮肤中胶原和羟脯氨酸的分泌，增强皮肤弹性，起到抗衰老作用的最低有 效浓度为10^-4g/mL；所述蚂蚁提取物用于提升超氧化物歧化酶(SOD)活力并减少 活性氧(ROS)的产生，起到抗氧化作用的最低有效浓度为10^-4g/mL。

本发明中，优选的，所述的蚂蚁为拟黑多刺蚁(Polyrhachis vicina Roger)。

本发明中，优选的，所述的蚂蚁提取物的制备方法为：

(1)采用真空冷冻干燥机干燥拟黑多刺蚁后将拟黑多刺蚁粉碎；

(2)采用40％乙醇超声提取15～90min；

(3)将得到的提取液过滤，收集滤液，采用旋转蒸发器浓缩并收集浓缩液；

(4)浓缩液-80℃预冷后采用真空冷冻干燥机将浓缩液进行干燥，即得最终提 取物，置于4℃保存备用。

本发明中，优选的，所述化妆品选自祛斑美白化妆品、抗衰老化妆品、抗氧化 化妆品或其组合。

本发明中，优选的，所述化妆品形式为香皂、洗面奶、沐浴露、柔肤水、护肤 啫喱、护肤乳液、护肤霜、精华液、眼霜、面膜、气雾或喷雾。

附图说明

图1为蚂蚁提取物对黑色素瘤细胞增殖的抑制作用图(*：与空白对照组相比， P<0.05；**：与空白对照组相比，P<0.01)；

图2为蚂蚁提取物对皮肤成纤维细胞活力的保护作用图(**：与空白对照组相 比，P<0.01)；

图3为蚂蚁提取物对皮肤成纤维细胞分泌羟脯氨酸的促进作用图(*：与空白对 照组相比，P<0.05)；

图4为蚂蚁提取物对皮肤成纤维细胞分泌胶原的促进作用图(*：与空白对照组 相比，P<0.05)；

图5为蚂蚁提取物增强皮肤成纤维细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活力作用图 (*：与空白对照组相比，P<0.05)；

图6为蚂蚁提取物降低皮肤成纤维细胞中活性氧(ROS)产生的作用图(**：与 空白对照组相比，P<0.01)，其中，0g/mL组为空白对照组。

具体实施方式

下面通过实验并结合实施例对本发明做进一步说明，应该理解的是，这些实施 例仅用于例证的目的，决不限制本发明的保护范围。

实施例1蚂蚁提取物的制备

拟黑多刺蚁，购买自哈药集团世一堂中药饮片有限责任公司。

拟黑多刺蚁先用真空冷冻干燥机干燥，干燥后立即粉碎，准确称取60g蚂蚁粉， 加入蚂蚁粉体积2～6倍的40％乙醇溶液，在频率为30～50KHZ的超声波作用下进 行提取，提取温度为40～90℃，提取时间为15～90min，得到提取液，将得到的提 取液进行过滤，收集滤液，用旋转蒸发器浓缩(50rpm，40℃)并收集浓缩液。浓 缩液-80℃预冷2小时，放入真空冷冻干燥机干燥、称量，即得最终提取物，置于4℃ 保存备用。

实施例2蚂蚁提取物体外抑制黑色素瘤细胞增殖的药效学研究

1.将人黑色素瘤细胞(M14)置于96孔板中，调整细胞浓度为每孔1×10⁴， 并在每孔加入200μL培养液，恒温37℃培养过夜；

2.将蚂蚁提取物以培养液溶解至浓度分别为10^-3g/mL、10^-4g/mL、10^-5g/mL、 10^-6g/mL、10^-7g/mL，并加入至上述细胞培养板中培养24h；

3.将MTT储备液加入至上述细胞培养液中，于37℃在黑暗处培养4h；

4.移去培养液并加入一定量的DMSO后，室温下震荡15min，并于490nm处测 定各样品的吸收。

结果见图1，由图1可知，蚂蚁提取物可抑制黑色素瘤细胞的增殖，且该作用 在一定范围内呈剂量依赖性，蚂蚁提取物抑制M14增殖的有效浓度为10^-4g/mL(*： 与空白对照组相比，P<0.05；**：与空白对照组相比，P<0.01)。

实施例3蚂蚁提取物体外保护皮肤成纤维细胞活力的药效学研究

1.将人皮肤成纤维细胞(HSF)置于96孔板中，调整细胞浓度为每孔1×10⁴， 并在每孔加入200μL培养液，恒温37℃培养过夜；

2.将蚂蚁提取物以培养液溶解至浓度分别为10^-4g/mL、10^-5g/mL、10^-6g/mL， 并加入至上述细胞培养板中培养24h；

3.以H₂O₂处理细胞1h，诱导细胞氧化损伤；

4.将MTT储备液加入至上述细胞培养液中，于37℃在黑暗处培养4h；

5.移去培养液并加入一定量的DMSO后，室温下震荡15min，并于490nm处 测定各样品的吸收。

结果见图2，由图2可知，蚂蚁提取物可抑制由H₂O₂诱导的HSF凋亡，且该 保护作用在一定范围内呈剂量依赖性，蚂蚁提取物保护HSF细胞活力的有效浓度为 10^-5g/mL(**：与空白对照相比，P<0.01)。

实施例4蚂蚁提取物体外促进皮肤成纤维细胞中羟脯氨酸分泌的药效学研究

1.将人皮肤成纤维细胞(HSF)置于6孔板中，调整细胞浓度为每孔1×10⁵，并 在每孔加入2mL培养液，恒温37℃培养过夜；

2.将蚂蚁提取物以培养液溶解至浓度分别为10^-4g/mL、10^-5g/mL，并加入至上 述细胞培养板中培养24h；

3.取各组细胞上清液作为待测样品进行检测；

4.按羟脯氨酸试剂盒说明书对各待测样品中的羟脯氨酸含量进行检测(羟脯氨 酸试剂盒由南京建成生物工程研究所提供)。

结果见图3，由图3可知，蚂蚁提取物可促进HSF中羟脯氨酸的分泌，蚂蚁提取 物促进羟脯氨酸分泌的有效浓度为10^-4g/mL(*：与模型组相比，P<0.05)。

实施例5蚂蚁提取物体外增加皮肤成纤维细胞中胶原含量的药效学研究

1.将人皮肤成纤维细胞(HSF)置于6孔板中，调整细胞浓度为每孔1×10⁵，并 在每孔加入2mL培养液，恒温37℃培养过夜；

2.将蚂蚁提取物以培养液溶解至浓度分别为10^-4g/mL、10^-5g/mL，并加入至上 述细胞培养板中培养24h；

3.将细胞用RIPA裂解液裂解后，13500rpm离心5min，取上清液100μL作为待 测样品；

4.按胶原含量检测ELISA试剂盒说明书对各待测样品中的胶原含量进行检测 (胶原检测ELIS试剂盒由Uscn Life Science Inc公司提供)。

结果见图4，由图4可知，蚂蚁提取物可增加HSF中胶原的含量，蚂蚁提取物增 加胶原含量的有效浓度为10^-5g/mL(*：与空白对照组相比，P<0.05；**：与空白对 照相比，P<0.01)。

实施例6蚂蚁提取物体外增加皮肤成纤维细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活力 的药效学研究

1.将人皮肤成纤维细胞(HSF)置于6孔板中，调整细胞浓度为每孔1×10⁵，并 在每孔加入2mL培养液，恒温37℃培养过夜；

2.将蚂蚁提取物以培养液溶解至浓度分别为10^-4g/mL、10^-5g/mL，并加入至上 述细胞培养板中培养24h；

3.将细胞用RIPA裂解液裂解后，13500rpm离心5min，取上清液20μL作为待 测样品；

4.按总SOD活性检测试剂盒(WST-8)说明书对各待测样品中的SOD活性进行 检测(总SOD活性检测试剂盒(WST-8法)由碧云天生物技术研究所提供)。

结果见图5，由图5可知，蚂蚁提取物可增强HSF中SOD的活性，蚂蚁提取物增 加SOD活性的有效浓度为10^-4g/mL(*：与空白对照组相比，P<0.05)。

实施例7蚂蚁提取物体外减少皮肤成纤维细胞中活性氧(ROS)生成的药效学 研究

1.将人皮肤成纤维细胞(HSF)置于25cm²培养瓶中，调整细胞浓度为每瓶1 ×10⁶，并在每瓶加入5mL培养液，恒温37℃培养过夜；

2.将蚂蚁提取物以培养液溶解至浓度分别为10^-4g/mL、10^-5g/mL，并加入至上 述细胞培养瓶中培养24h；

3.将细胞消化成悬浮状态，1000rpm离心5min，去除细胞培养液；

4.按照1:1000的比例，用无血清培养液稀释DCFH-DA活性氧检测探针，使其浓 度为10μM；

5.离心后的细胞每瓶加入5mL稀释好的DCFH-DA使其重新悬浮，于37℃培养 20min，并用无血清培养液洗涤3次，以去除未进入细胞内的DCFH-DA；

6.将离心后的细胞重新以无血清培养液悬浮，调整细胞浓度使样品组与对照组 相一致。使用荧光酶标仪于激发波长488nm和发射波长525nm处测定吸收。

结果见图6，由图6可知，蚂蚁提取物可减少HSF中ROS的生成，蚂蚁提取物减 少ROS生成的有效浓度为10^-4g/mL(**：与空白对照组相比，P<0.01)。

以上所述仅为本发明的优选实施例，对本发明而言仅是说明性的，而非限制性 的；本领域普通技术人员理解，在本发明权利要求所限定的精神和范围内可对其进 行许多改变，修改，甚至等效变更，但都将落入本发明的保护范围内。