一种增加奶山羊X精子比率的饲喂方法及营养添加剂

摘要

本发明公开了一种增加奶山羊X精子比率的饲喂方法及营养添加剂，将雄性奶山羊在第6周断奶，然后将其生长过程分为以下5个生长阶段进行饲喂，在各个生长阶段每日喂养基础日粮，所述的基础日粮包括干草和混合精料，并以基础日粮中的混合精料为基准按补充比例进行叶酸、VB12和蛋氨酸的补充，补充比例自断奶后阶段到体成熟期阶段阶梯式递减。本发明可以直接利用外界营养因素增加奶山羊X精子比率，从而达到简便、快速地实现精子中X精子的分离，大幅度降低了分离成本，能够获得更多的雌性胚胎，从而有助于提高养殖业经济效益，同时也有利于性控技术在畜牧业领域的推广和应用。

说明书

技术领域

本发明属于动物繁育技术领域，涉及一种增加奶山羊X精子比率的饲喂 方法及营养添加剂。

背景技术

性别控制是一项能显著提高养殖业经济效益的技术。目前主要是通过 XY精子分离和早期胚胎性别鉴定来实现。关于XY精子分离最有效的方法 是流式细胞分离法,但该技术分离速度有限,分离成本昂贵，专门化的设备限 制了其在生产中的应用，远远不能满足生产上对性控精液的大量需求；与之 相比H-Y抗原分离法是一种简洁的精子分离方法,但由于H-Y抗原的特异 性较差，分离效果始终不能达到人们满意的要求。早期胚胎性别鉴定必须采 用分子生物学技术，对人员的要求较高，并且破坏胚胎的结构。

反刍动物对繁殖性能与营养因素有直接的关系，对于雄性反刍动物的繁 殖而言，性成熟前对营养的敏感程度要明显高于成年，这种营养对于睾丸的 组织学变化将是永久性的。营养对睾丸的这种影响是通过改变曲细静管的大 小和精子的生成从而影响繁殖性能。雄性动物出生时睾丸内含有大量精原细 胞，随着进一步发育到性成熟，精原细胞经过一系列分化的同时，有大量的 精细胞被降解和吸收，仅有部分形成生精。

发明内容

本发明解决的问题在于提供一种增加奶山羊X精子比率的饲喂方法及营 养添加剂，通过奶山羊的合理饲喂以提高X精子比率，从而简便、快速地获 得更多的雌性胚胎。

本发明是通过以下技术方案来实现：

一种增加奶山羊X精子比率的饲喂方法，包括以下操作：

将雄性奶山羊在第6周断奶，然后将其生长过程分为以下5个生长阶段 进行饲喂：第7～13周为断奶后、第14～19周为初情期、第20～25周为性 成熟期、第26～30周为初配期、第31周后为体成熟期；

在各个生长阶段每日喂养基础日粮，所述的基础日粮包括干草和混合精 料，并以基础日粮中的混合精料为基准按补充比例进行叶酸、VB12和蛋氨 酸的补充，补充比例自断奶后阶段到体成熟期阶段阶梯式递减；

以质量比计，断奶后阶段内叶酸的补充比例为混合精料的3.0～4.0‰， 补充比例自断奶后阶段到体成熟期阶段阶以0.5～1.0‰递减；

VB12的补充量为叶酸的1/60～1/40，蛋氨酸的补充量为叶酸的1/2～1/3。

进一步，自断奶后阶段到体成熟期阶段阶，所述的叶酸、VB12和蛋氨 酸的补充比例如下：

断奶后：3.0～4.0‰的叶酸、0.07～0.09‰的VB12和1.2～2.0‰的蛋氨 酸；

初情期：2.0～3.0‰的叶酸、0.05～0.06‰的VB12和0.8～1.5‰的蛋氨 酸；

性成熟期：1.5～2.5‰的叶酸、0.04～0.05‰的VB12和0.6～1.2‰的蛋 氨酸；

初配期：1.0～2.0‰的叶酸、0.03～0.04‰的VB12和0.5～0.8‰的蛋氨 酸；

体成熟期：0.8～1.2‰的叶酸、0.01～0.02‰的VB12和0.3～0.5‰的蛋 氨酸。

更进一步，自断奶后阶段到体成熟期阶段阶，叶酸的补充比例以0.5‰递 减，VB12的补充比例以0.01～0.015‰递减，蛋氨酸的补充比例以0.2～0.3‰ 递减。

所述的基础日粮中的混合精料包括玉米、麦麸、菜籽粕、豆饼、鱼粉、 食盐和预混料，并在断奶后阶段、初情期阶段补充骨粉；

断奶后阶段基础日粮包括500g的干草、200g的混合精料，并配以300g 的全奶；自断奶后阶段到体成熟期阶段，每阶段的基础日粮增加500g的干草、 50g的混合精料；自初情期阶段开始补充0.5个鸡蛋，并在以后的每个阶段增 加0.5个鸡蛋。

以质量分数计，所述的混合精料构成如下：

断奶后：45%的玉米、25%的麦麸、15%的菜籽粕、5%的豆饼、5%的鱼 粉、1%的食盐和1%的预混料，并配以3%的骨粉；

初情期：50%的玉米、22%的麦麸、12%的菜籽粕、5%的豆饼、5%的鱼 粉、1%的食盐和2%的预混料，并配以3%的骨粉；

性成熟期：55%的玉米、20%的麦麸、10%的菜籽粕、7%的豆饼、5%的 鱼粉、1%的食盐和2%的预混料；

初配期：55%的玉米、20%的麦麸、10%的菜籽粕、7%的豆饼、5%的鱼 粉、1%的食盐和2%的预混料；

体成熟期：60%的玉米、15%的麦麸、10%的菜籽粕、7%的豆饼、5%的 鱼粉、1%的食盐和2%的预混料。

所述在达到初配期或体成熟后，分别采集雄性奶山羊的精液，先进行X/Y 精子比率分析，然后分离X精子并进行体外受精。

一种增加奶山羊X精子比率的营养添加剂，由叶酸、VB12和蛋氨酸构 成的第1段营养添加剂，以质量分数计，包括1段基准量的3.0～4.0‰的叶 酸、0.07～0.09‰的VB12和1.2～2.0‰的蛋氨酸，1段基准量为180～200g。

还包括第2段营养添加剂；以质量分数计，所述的第2段营养添加剂包 括2段基准量的2.0～3.0‰的叶酸、0.05～0.06‰的VB12和0.8～1.5‰的蛋 氨酸；2段基准量为220～250g；

还包括第3段营养添加剂；以质量分数计，所述的第3段营养添加剂包 括3段基准量的1.5～2.5‰的叶酸、0.04～0.05‰的VB12和0.6～1.2‰的蛋 氨酸；3段基准量为300～350g。

还包括第4段营养添加剂、第5段营养添加剂；以质量分数计：

所述的第4段营养添加剂包括4段基准量的1.0～2.0‰的叶酸、0.03～ 0.04‰的VB12和0.5～0.8‰的蛋氨酸；4段基准量为450～500g；

所述的第5段养剂包括5段基准量的0.8～1.2份的叶酸、0.01～0.02份 的VB12和0.3～0.5份的蛋氨酸；5段基准量为500～550g。

与现有技术相比，本发明具有以下有益的技术效果：

本发明提供的增加奶山羊X精子比率的饲喂方法及营养添加剂，可以直 接利用外界营养因素增加奶山羊X精子比率，从而达到简便、快速地实现精 子中X精子的分离，大幅度降低了分离成本，能够获得更多的雌性胚胎，从 而有助于提高养殖业经济效益，同时也有利于性控技术在畜牧业领域的推广 和应用。

本发明提供的增加奶山羊X精子比率的饲喂方法，将断奶后的雄性奶山 羊生长过程分为断奶后、初情期、性成熟、初配期和体成熟5个阶段。各个 阶段在基础日粮的基础上添加叶酸、蛋氨酸和VB12作为营养添加剂。在初 配和体成熟阶段分别人工采集精液，发现在初配阶段精子活力在82%以上， X精子含量为77.5～80.0%,受精率在84.4%以上，体外受精后雌性胚胎比率 为93.4%，发育到囊胚的比率为56.9%；在体成熟后精子活力在84%以上，X 精子含量为73.1～76.1%,受精率在88.2%以上，体外受精后雌性胚胎比率为 93.2%，发育到囊胚的比率在55.4%以上。该方法饲喂雄性奶山羊能显著提高 X精子比率，从而获得更多的雌性胚胎。

具体实施方式

下面结合具体的实施例对本发明做进一步的详细说明，所述是对本发明 的解释而不是限定。

哺乳动物精原细胞在减数分裂起始，为防止某些酶类与性染色体发生作 用，两条性染色体高度浓缩形成性体，保护性染色体不被破坏，并且关闭了 性染色体特异基因的表达。

而对奶山羊睾丸精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞进行转录组分 析，结果表明在前两个阶段都表达的Y染色体特异性基因有Sry，在次级精 母细胞阶段表达的有Ubely；X染色体特异性基因在精原细胞和初级精母细 胞都表达的只有Xist，而在次级精母细胞阶段还可以检测到Ube1x和 MHR6A。

由于含有X或Y染色体的精子命运决定于第一次减数分裂之前即初级精 母细胞的形成。此外，Sry基因的表达在减数分裂时有个峰值，是决定精母 细胞正常分化成Y型精子细胞的前提，它必须在第一次减数分裂一个关键的 时间点发挥作用。而关于营养、表观遗传修饰及功能之间的研究是以甲基化 修饰为主，可以根据表观遗传学原理，在次级精母细胞形成前后对Sry基因 的活性进行干预，从而促进含Y染色体精母细胞的降解和吸收，增加含X染 色体精子的比率是可行的。

为了从营养方面对Sry基因的活性进行干预，采用叶酸、蛋氨酸和VB12 进行营养添加：

叶酸、钴胺素(VB12)和蛋氨酸等参与一碳代谢，增加腺苷甲硫氨酸的量， 为甲基化的进行提供原始甲基供体（-methyl）。腺苷甲硫氨酸对DNA甲基化 是调控基因表达的一种主要表观遗传方式，在DNA上表现为CpG岛上的胞 嘧啶甲基化。蛋氨酸和叶酸在甲基化过程中为主要的一碳供体，钴胺素为主 要的辅助因子。

因此给出以下饲喂方法及营养添加剂。

一种增加奶山羊X精子比率的饲喂方法，包括以下操作：

将雄性奶山羊在第6周断奶，然后将其生长过程分为以下5个生长阶段 进行饲喂：第7～13周为断奶后、第14～19周为初情期、第20～25周为性 成熟期、第26～30周为初配期、第31周后为体成熟期；

在各个生长阶段每日喂养基础日粮，所述的基础日粮包括干草和混合精 料，并以基础日粮中的混合精料为基准按补充比例进行叶酸、VB12和蛋氨 酸的补充，补充比例自断奶后阶段到体成熟期阶段阶梯式递减；

以质量比计，断奶后阶段内叶酸的补充比例为混合精料的3.0～4.0‰， 补充比例自断奶后阶段到体成熟期阶段阶以0.5～1.0‰递减；

VB12的补充量为叶酸的1/60～1/40，蛋氨酸的补充量为叶酸的1/2～1/3。

进一步对叶酸、VB12和蛋氨酸的补充比例说明如下：

断奶后：3.0～4.0‰的叶酸、0.07～0.09‰的VB12和1.2～2.0‰的蛋氨 酸；

初情期：2.0～3.0‰的叶酸、0.05～0.06‰的VB12和0.8～1.5‰的蛋氨 酸；

性成熟期：1.5～2.5‰的叶酸、0.04～0.05‰的VB12和0.6～1.2‰的蛋 氨酸；

初配期：1.0～2.0‰的叶酸、0.03～0.04‰的VB12和0.5～0.8‰的蛋氨 酸；

体成熟期：0.8～1.2‰的叶酸、0.01～0.02‰的VB12和0.3～0.5‰的蛋 氨酸。

具体的，自断奶后阶段到体成熟期阶段阶，叶酸的补充比例以0.5‰递减， VB12的补充比例以0.01～0.015‰递减，蛋氨酸的补充比例以0.2～0.3‰递 减。

需要指出的是，上述的基础日粮可以参照现有的奶山羊的饲喂方法来进 行饲喂，只要按照所给出的营养添加剂的比例进行营养补充和干预即可。

下面给出具体的基础日粮、营养添加剂和动物实验。其中基础日粮、营 养添加剂是对本发明的进一步的说明而非限定。

1、实验动物

雄性奶山羊30匹，出生重为2.5±0.3kg。平均分为两组，对照组和实验 组。

2、材料

叶酸（食品级，含量99％以上）、钴胺素即VB12(食品级，含量99%以上)、 蛋氨酸（饲料级DL-蛋氨酸，含量98.5%以上）。

3、饲喂方法

1）奶山羊第6周断奶，然后将其生长过程分为断奶后（第7～13周）、初 情期（第14～19周）性成熟（第20～25周）、初配期（第26～30周）和体 成熟（第31周后）5个阶段。各个阶段基础日粮配方见表1。

表1各阶段基础日粮配方表

所述的预混料为：

断奶期1%的预混精料：含硫酸锌0.5mg，硫酸锰0.15mg，氧化镁0.4mg， 碘酸钾0.01mg，维生素A200国际单位，维生素D200国际单位，维生素E 10国际单位；

初情期、性成熟、初配期及体成熟期2%的预混精料：含五水硫酸铜 2.5mg、七水硫酸亚铁6mg、七水硫酸锌12mg、硫酸锰10mg、碘化钾0.01mg、 亚硒酸钠0.02mg、氯化钴0.03mg。

2）在各个生长阶段补充叶酸、VB12和蛋氨酸，补充量以基础日粮中混合精 料的量为基数，如表2所示。

表2.各生长阶段叶酸、VB12和蛋氨酸的添加量

3）精液的采集

初配期，连续采精3次，隔天一次；体成熟后连续采精3次，每天一次。 在达到初配期或体成熟后，分别采集雄性奶山羊的精液，先进行X/Y精子比 率分析，然后分离X精子并进行体外受精。对精子活力，X与Y精子含量及 受精能力检测结果如表3所示。

表3.人工采集鲜精，精子活力、Y/X精子含量及受精率等参数

注：N为实验羊只编号,C为对照组羊编号；受精率指体外受精后在培养箱中发育到2-细 胞阶段的胚胎占总胚胎百分比；X/Y精子采用流式细胞仪进行分离；受精后胚胎采用巢式 PCR进行性别检测。

结果表明将断奶后的雄性奶山羊生长过程分为断奶后、初情期、性成熟、 初配期和体成熟5个阶段。各个阶段在基础日粮的基础上添加叶酸、蛋氨酸 和VB12。在初配和体成熟阶段分别人工采集精液，发现在初配阶段精子活 力在82%以上，X精子含量为77.5～80.0%,受精率在84.4%以上，体外受精 后雌性胚胎比率为93.4%，发育到囊胚的比率为56.9%；在体成熟后精子活 力在84%以上，X精子含量为73.1～76.1%,受精率在88.2%以上，体外受精 后雌性胚胎比率为93.2%，发育到囊胚的比率在55.4%以上。该方法饲喂雄 性奶山羊能显著提高X精子比率，从而获得更多的雌性胚胎。

依据上述营养添加剂的添加和饲喂，提出以下增加奶山羊X精子比率的 营养添加剂，包括第1～5段营养添加剂，分别对应不同的生长阶段，以质量 分数计，具体为：

第1段营养添加剂，包括1段基准量的3.0～4.0‰的叶酸、0.07～0.09‰ 的VB12和1.2～2.0‰的蛋氨酸，1段基准量为180～200g。

第2段营养添加剂，包括2段基准量的2.0～3.0‰的叶酸、0.05～0.06‰ 的VB12和0.8～1.5‰的蛋氨酸；2段基准量为220～250g；

包括第3段营养添加剂，包括3段基准量的1.5～2.5‰的叶酸、0.04～ 0.05‰的VB12和0.6～1.2‰的蛋氨酸；3段基准量为300～350g。

第4段营养添加剂，包括4段基准量的1.0～2.0‰的叶酸、0.03～0.04‰ 的VB12和0.5～0.8‰的蛋氨酸；4段基准量为450～500g；

第5段养剂，包括5段基准量的0.8～1.2份的叶酸、0.01～0.02份的VB12 和0.3～0.5份的蛋氨酸；5段基准量为500～550g。