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法律状态信息
法律状态
2017-12-22
未缴年费专利权终止 IPC(主分类):G01N33/68 授权公告日:20151202 终止日期:20161105 申请日:20131105
专利权的终止
2015-12-02
授权
授权
2014-03-12
实质审查的生效 IPC(主分类):G01N33/68 申请日:20131105
实质审查的生效
2014-02-12
公开
公开
技术领域
本发明涉及采用ELISA方法检测东部马脑脊髓炎病毒抗体的试剂盒,尤指一种间 接ELISA检测IgM抗体的试剂盒,适用于对马科动物血清中的东部马脑脊髓炎病毒 IgM抗体进行检测,属于动物检验检疫领域。
背景技术
东部马脑脊髓炎病毒(Eastern equine encephalomyelitis virus,EEEV)是一种经节肢 动物传播的病毒,属于披膜病毒科甲病毒属。病毒可感染马、鸟以及人类,可经Aedes, Coquillettidia和Culiseta属的蚊虫叮咬传播。该病毒在蚊虫和鸟类之间循环传播。马匹 感染之后致死率可达到90%。本病的诊断方法包括临床检查,病理学检查,病毒分离和 血清学检测。但对于实验室而言,往往并不能得到有关临床方面的信息,仅仅是接到独 立的血清,有时仅凭抗体效价很难确定其感染情况。
血凝抑制试验(HI)和病毒中和实验(VN)是诊断疑似病例的标准方法,但在本病 的地方流行地区,马匹往往接种过相关疫苗,使得实验室的血清学检测工作复杂化。
研究表明,对于马而言,感染本病后3天就可检出IgM抗体,但中和抗体7天后才 能检出。而且IgM抗体可以持续30天左右。但IgG抗体可持续90天以上。因此检测 IgM抗体对于马匹早期感染以及鉴别免疫接种抗体有一定意义。研究表明,E2蛋白暴 露在病毒的表面,是决定病毒抗原性的主要成份,能够诱导动物产生中和抗体。
由于E2可诱生中和抗体,因此成为疫苗、诊断制剂研究的重点。本研究利用E2蛋 白富含抗原表位,具有种特异性这一特点,运用原核高效表达系统进行E2结构蛋白的 表达,以期获得大量纯化的E2重组蛋白,建立EEEV特异性IgM间接ELISA诊断方法, 可应用到国内疫情监测和进出口马属动物的检测,为我国EEEV检测提供新的检测方法, 同时为开发拥有自主知识产权的国产EEEV诊断试剂奠定基础。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种检测东部马脑脊髓炎病毒IgM抗体的ELISA 试剂盒,该试剂盒采用东部马脑脊髓炎病毒的E2重组蛋白作为包被抗原,可快速、准 确地对马科动物的东部马脑脊髓炎病毒IgM抗体作出评价。
为解决上述技术问题,本发明采用以下技术方案:
一种检测东部马脑脊髓炎病毒IgM抗体的ELISA试剂盒,其包括:包被东部马脑 脊髓炎病毒抗原的酶标反应板、洗涤液、样品稀释液、辣根过氧化酶标记的山羊抗马IgM 二抗、底物溶液和终止液,其中所述东部马脑脊髓炎病毒抗原为东部马脑脊髓炎病毒的 E2重组蛋白。该E2重组蛋白的氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO:1所示,其核苷酸 序列如序列表中SEQ ID NO:2所示。
进一步地,所述试剂盒还包括阳性对照和阴性对照。其中,阳性对照为东部马脑脊 髓炎病毒IgM阳性血清;阴性对照为东部马脑脊髓炎病毒抗体呈阴性的马血清。
进一步地,上述试剂盒中,所述洗涤液为PBST洗涤液(含0.5%Tween-20的 0.01mol/L、pH7.4的PBS溶液)。
所述样品稀释液为1%卵清蛋白溶液,取卵清蛋白1g,溶于100mL1×PBST缓冲液 中。
所述终止液为2mol/L H2SO4溶液。
所述底物溶液由5.0mL的TMB(1mg/mL),42.5mL的柠檬酸-醋酸缓冲液(0.1mol/L, pH5.0),和2.5mL尿素过氧化氢(3mg/mL)混合而成。
本发明还提供了上述检测东部马脑脊髓炎病毒IgM抗体的ELISA试剂盒的制备方 法,该方法包括以下步骤:
(1)东部马脑脊髓炎病毒抗原的制备:从东部马脑脊髓炎病毒总RNA中扩增获得 了E2基因片段,构建原核表达载体,在基因工程菌中高效表达,并将表达的E2重组蛋 白纯化;
(2)将步骤(1)得到的东部马脑脊髓炎病毒的E2重组蛋白包被于酶标反应板;
(3)试剂盒组装:将步骤(2)制备的包被东部马脑脊髓炎病毒的E2重组蛋白的 酶标反应板与洗涤液、样品稀释液、辣根过氧化酶标记的山羊抗马IgM二抗、底物溶液 和终止液组装成试剂盒。
上述步骤中,E2重组蛋白包被于酶标反应板的具有方法为:将纯化的E2重组蛋 白用包被液(pH9.6的碳酸盐缓冲液)稀释为0.20μg/mL,100μL/孔加入酶标反应板, 包被条件为37℃1h,然后于4℃条件下过夜,然后弃去孔内液体,然后用洗涤液洗涤, 拍干反应板,加入1%卵清蛋白,100μL/孔,37℃封闭2h,弃去孔内液体,然后用洗涤 液洗涤,拍干反应板,然后真空包装,存于4℃备用。
本发明的优点是:本发明选择东部马脑脊髓炎病毒保守的E2糖蛋白作为目标,经 重组表达获得了E2蛋白,以重组蛋白作为抗原建立了间接ELISA检测方法并研制出试 剂盒,取得了优异的技术效果:
1)简便快速:可快速的对马科动物的东部马脑脊髓炎病毒IgM抗体作出评价。
2)特异:与西部马脑脊髓炎病毒IgM阳性血清及委内瑞拉马脑脊髓炎病毒IgM阳 性血清不发生交叉反应。
3)稳定:重复性试验结果显示所建立方法的稳定性良好。
4)安全:不接触病毒,不具有生物安全问题。
下面结合说明书附图和具体实施方式对本发明作进一步说明。
附图说明
图1为EEEV-E2基因片段RT-PCR扩增产物电泳结果,M,DL2000分子量标准;1, 阴性对照;2,EEEV-E2基因RT-PCR扩增产物。
图2为pET32a-EEEV-E2菌液PCR扩增产物的电泳结果,M,DL2000分子量标准; 1~2,菌液PCR阳性结果;3,菌液PCR阴性结果。
图3为重组蛋白EEEV-E2的SDS-PAGE分析,M,蛋白质分子量;1,重组菌未诱 导表达产物;2,重组菌诱导表达菌液上清;3,重组菌诱导表达4h产物;4,重组菌诱 导表达6h产物。
图4为重组蛋白EEEV-E2纯化前后的SDS-PAGE分析,M,蛋白质分子量;1、2, His·Bind Kits纯化前蛋白;3,纯化的重组蛋白。
图5为EEEV E2重组蛋白的western blotting鉴定。M,蛋白质分子量标准;1,pET32a 空载体表达菌;2,重组表达菌未诱导产物;3,重组表达菌诱导6h表达产物。
具体实施方式
实验材料
TRIZOL,购自Invitrogen公司;
限制性内切酶EcoR I、Hind III,购自TaKaRa公司;
One-step RNA RT-PCR试剂盒,购自TaKaRa公司;
胰蛋白胨及酵母粉:购自Oxiod公司;
IPTG,X-Gal等:购自TaKaRa公司;
T4DNA连接酶:购自TaKara公司;
DNA快速纯化回收试剂盒,Mini-BEST质粒提取试剂盒,DL2000Maker,Ex HS Taq,6×loading buffer,均购自TaKaRa公司;
三羟甲基氨基甲烷(Tris-碱)、甘氨酸:购自上海生物工程公司;
N’N’—二甲基甲叉双丙稀酰胺、丙烯酰胺:购自华美生物工程公司;
BugBuster Protein Extraction Reagent,购自Novagen公司;
HIS.BIND蛋白纯化试剂盒,购自Novagen公司;
山羊抗马IgM二抗辣根过氧化物酶(HRP)标记,KPL公司产品。
底物TMB(Sigma)、BSA(MP Biomedicals)、明胶(MP Biomedicals)、脱脂奶(BD), 购自中科科奥生物科技有限公司。
96孔平底聚苯乙烯酶标板,美国corning公司产品。
实施例1包被抗原E2重组蛋白的获得
1、方法
1)EEEV E2编码基因的序列分析
运用DNAMAN6.0,DNASTAR7.0,VECTOR NTI Advance10.0软件包对东部马脑 脊髓炎病毒E2蛋白的基本特性(包括分子量,等电点及潜在糖基化位点)进行预测。
2)EEEV E2基因特异性引物的设计与合成
分析GenBank数据库中的EEEV ssp.North American variant株结构蛋白基因E2, 通过序列比对,采用Oligo6.0软件,设计了1对包含E2完整基因的引物,命名为 EEEV-E21和EEEV-E22,并在引物中引入酶切位点,旨在将E2基因克隆入表达载体 pET32a,构建原核表达质粒pET32a-EEEV-E2。
引物编号、长度等见表1,其中斜体下划线表示引入的酶切位点。
表1EEEV结构蛋白基因E2引物编号、序列、目的片段长度及引入的内切酶
以EEEV-E21和EEEV-E22为上下游引物扩增EEEV完整的结构蛋白基因E2,预 期扩增产物长度为1279bp,经双酶切克隆至原核表达载体pET32a,构建重组表达质粒 pET32a-EEEV-E2,可表达一含607氨基酸、分子量约67kDa、N端带有His-tag的融合 蛋白。
3)EEEV E2基因的RT-PCR扩增
EEEV购自军事医学科学院,通过现有技术中已知的RNA提取方法获得总RNA, 然后采用一步法扩增包含东部马脑脊髓炎病毒完整的E2蛋白基因片段。反应条件:50 ℃30min,94℃2min;94℃/30s,55℃/30s,72℃/150s,共33循环。
表2RT-PCR一步法扩增体系
反应结束后,用1.0%琼脂糖凝胶电泳检查PCR扩增产物。EEEV结构蛋白基因E2 的RT-PCR结果见图1。电泳结果显示RT-PCR目的片段大小与预期结果一致。
4)pET32a-EEEV-E2原核表达重组质粒的构建
目的基因PCR产物与表达载体质粒pET32a的双酶切,利用限制性内切酶Sac I/Hind III分别对目的基因PCR产物和表达载体质粒pET-32a37℃过夜双酶切。
回收PCR产物和酶切后的目的基因及表达载体DNA参照TaKaRa DNA Frangment Purification KitVer.2.0说明书操作:取适量PCR反应液,加入3倍量的DB Buffer,均匀。将试剂盒中的Spin Colum安置于Collection Tube上,将PCR与DB的混 合溶液转移到Spin Colum中,12,000r/min离心1min,弃滤液。将500μL的Rinse A加 入Spin Colum中,12,000r/min离心30s,弃滤液。将700μL的Rinse B加入Spin Colum 中,12,000r/min离心30s,弃滤液,并重复洗涤一次。最后,将Spin Colum安置于新的 1.5mL离心管上,在Spin Colum膜中央处加入25~30μL灭菌水,室温静至1min,然后 12,000r/min离心1min洗脱DNA。
目的基因与载体DNA的连接与转化按顺序加入下列试剂建立10μL的连接体系, 将纯化回收后的PCR产物与表达载体1连接:
离心混匀于管底,16℃连接2h。
从-80℃冰箱取出冰冻的Top10感受态细胞(100μL/管)于冰上融化,轻弹管壁使 其混匀。将10μL连接液加入上述盛有感受态细胞的离心管中;轻弹管外壁使其混匀, 冰浴30min;42℃水浴热激60s后立即冰浴2min;加入900μL LB培养液,150r/min, 37℃培养60min;取100μL菌液涂布于Amp/LB平板,37℃培养过夜,利用抗性筛选重 组转化体。
重组表达质粒的鉴定:重组质粒pET32a-EEEV-E2的菌液PCR鉴定结果见图2。电 泳结果显示扩增片段的大小与预期结果一致,初步说明得到阳性重组表达质粒。
5)基因工程重组菌的诱导表达
将鉴定后的重组表达质粒pET32a-EEEV-E2转化E.coli Rosseta感受态细胞,涂布 于Amp/LB平板,37℃培养过夜,利用氨苄抗性筛选重组转化菌。挑取阳性重组菌的单 菌落,接种于3mL氨苄抗性的LB培养基中,37℃活化过夜后,1:100稀释到相应抗性 的LB中,37℃、230r/min振摇培养至对数生长期(OD600=0.6~1.0),加入终浓度为1 mmol/L的IPTG,于37℃、230r/min振摇诱导培养2~6h。分别于诱导前和诱导后不同 时间取出1.5mL,5000r/min离心5min收集菌体,弃上清后加入2×SDS上样缓冲液, 煮沸5min,用12%的聚丙烯酰胺凝胶进行SDS-PAGE检查表达情况。重组蛋白的表达 量随诱导时间的延长而增加,在诱导后4h表达量即达到高峰。薄层扫描结果表明, pET32a-EEEV-E2表达量可达到45%,结果见图3。
6)亲和层析纯化His-EEEV-E2融合蛋白
大肠杆菌的裂解:使用Novagen的BugBuster Protein Extraction Reagent,可以温和 的破碎大肠杆菌细胞壁来释放表达蛋白。操作步骤如下:
收集菌泥沉淀,称量菌体湿重。按照每克菌体湿重加入5mLBugBuster试剂和5μL (即5×25单位)Benzonase核酸酶(用于降解核酸和降低抽提物粘度)室温重悬菌体, 吹打或轻柔漩涡混匀,将混匀物置于水平摇床上室温下孵育10~20min。将孵育后的细 胞抽提物离心,分别收集上清和不溶性沉淀。上清为可溶性蛋白,沉淀即为包涵体。
将包涵体沉淀重悬于BugBuster试剂中(仍按照1:5的体积),吹打或漩涡彻底均匀。
加入6倍体积1:10稀释的BugBuster试剂,漩涡1min,离心收集包涵体。
再将包涵体沉淀重悬于1:10稀释的BugBuster试剂,漩涡均匀1min,离心,收集 包涵体沉淀。同条件重复重悬、混匀、离心一次,收集包涵体沉淀。
重悬包涵体沉淀于含有6mol/L盐酸胍的1×结合缓冲液中,充分涡旋混匀,冰浴孵 育1h,彻底溶解蛋白。16,000g离心30min以除去不溶性成份,0.45微米滤膜过滤上清, 再进行后续蛋白的纯化操作。
包涵体蛋白的纯化
树脂的准备与平衡:His·Bind Kits试剂盒中使用的树脂是IDA琼脂糖(His·Bind Resin)。将一支Novagen加样柱套在色谱柱上,首先向空色谱柱中加2~3mL灭菌去离 子水,使液体浸湿滤芯部分,能够正常流动。将小瓶His·Bind树脂轻柔颠倒彻底重悬树 脂。用一扩口吸头将所需悬液的量加入色谱柱中(1mL悬液含0.5mL树脂,完全沉降后 柱床体积为0.5mL),待树脂在重力作用下自然沉降。当树脂沉降、保存液的液面将至 树脂表面时,按以下顺序清洗、离子化和平衡色谱柱:①3倍体积的灭菌去离子水;② 5倍体积的1×离子化缓冲液;③3倍体积的1×结合缓冲液。
柱层析:待结合缓冲液下降至树脂表面,小心加入制备好的包涵体溶液,并缓慢滴 加10倍体积的1×结合缓冲液(含6mol/L盐酸胍变性剂)。然后缓慢加入6倍体积的1× 漂洗缓冲液(含6mol/L盐酸胍变性剂)。再缓慢加入6倍体积的1×洗脱缓冲液(含6mol/L 盐酸胍变性剂)洗脱结合蛋白。洗脱可按需要分段收集。将蛋白收集液进行SDS-PAGE, 检测蛋白的洗脱效果以及洗脱蛋白的纯度和浓度。结果显示得到了高纯度的E2重组蛋 白,见图4,经分光光度计测定,蛋白浓度为0.476mg/mL。
EEEV-E2重组蛋白的超滤(除盐、浓缩)
纯化后的蛋白存在于含有6mol/L盐酸胍变性剂的溶液中,采用超滤的方法进行蛋 白的除盐和浓缩:将蛋白样品用50mmol/L Tris-HCl缓冲液(PH8.0)进行4倍稀释(参 考蛋白的浓度),将稀释好的蛋白样品分装到超滤管(Vivaspin500,10K)中,每管0.5mL 样品,14,000r/min,4℃离心10min。向第一次过滤后的超滤管内再加入0.5mLTris-Cl 缓冲液,14,000r/min,4℃离心10min。向第二次过滤后的超滤管内再加入0.5mL Tris-Cl 缓冲液,14,000r/min,4℃离心10min。如次反复稀释、离心共3~5次,最后一次适当 延长离心时间,将蛋白样品适当浓缩。收集除盐浓缩后的蛋白样品,用少量缓冲液冲洗 滤膜,收集残余蛋白,与样品合并。最后,混匀超滤后的蛋白样品,测定浓度,分装, 作好标记,冻存于-80℃。该E2重组蛋白的氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO:1所 示,其核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO:2所示。
实施例2、E2重组蛋白抗原的抗原性分析
1、材料
马EEEV IgM阳性血清,由美国NVSL提供
2、方法
Western Blotting鉴定
电转印将基因工程诱导菌和对照菌全菌体蛋白经SDS-PAGE电泳分离后,按如下 操作进行电转印:裁剪大小与凝胶面积一致的Whatman增厚滤纸2张和NC转印膜1 张,并将NC膜在转移缓冲液中平衡15min。在半干转印槽的阳极上制备“三明治”,从 负极到正极依次放置增厚滤纸1、凝胶、NC膜、增厚滤纸2,放置时用玻棒轻轻滚动赶 除气泡,并倒上少量转印缓冲液保持湿润;固定好阴极平板,合上安全盖,连接电泳仪, 恒流20mA转印40min。
免疫检测转印结束后,取出NC膜在蒸馏水中漂洗一下,然后放到装有封闭液的 平皿中,在脱色摇床上室温孵育1.5h进行封闭。倾去封闭液,用洗涤液PBST洗膜3次, 每次5min。然后将NC膜转入适量的一抗溶液(以封闭液1:40稀释的IgM阳性血清) 中,室温下振荡1~2h;PBST洗膜3次,每次5min。再将NC膜转入适当稀释的酶标二 抗溶液(以封闭液1:1000稀释的HRP-Anti-horse IgM),室温振荡1~1.5h;PBST洗 膜3次,每次5min。使用增强型HRP-DAB底物显色试剂盒进行显色反应,待条带清晰 后迅速用蒸馏水终止反应。结果见图5。图中显示纯化的融合蛋白在66kDa处出现清晰 的特异性反应条带,而对照菌没有反应,表明E2重组蛋白在大肠杆菌中得到了正确表 达并保留了与EEEV IgM阳性血清反应的抗原性。
实施例3、试剂盒的配制和使用
1、试剂盒的组成见表3。
表3试剂盒配制组成
其中,包被东部马脑脊髓炎病毒抗原的酶标反应板的制备方法为:将实施例1纯化 的E2重组蛋白用包被液(pH9.6的碳酸盐缓冲液)稀释为0.20μg/mL,100μL/孔加入酶 标反应板,包被条件为37℃1h,然后于4℃条件下过夜,然后弃去孔内液体,然后用 洗涤液洗涤,排干反应板,加入1%卵清蛋白,100μL/孔,37℃封闭2h,弃去孔内液体, 然后用洗涤液洗涤,排干反应板,然后真空包装,存于4℃备用。
阳性对照为东部马脑脊髓炎病毒IgM阳性血清,用样品稀释液稀释至用本方法检 测的OD值为1.0+/-0.1的范围内。阴性对照为东部马脑脊髓炎病毒抗体呈阴性的马血清, 用样品稀释液作1:100稀释。
所述洗涤液为PBST洗涤液(含0.5%Tween-20的0.01mol/L、pH7.4的PBS溶液)。
所述样品稀释液为1%卵清蛋白溶液,取卵清蛋白1g,溶于100mL1×PBST缓冲 液中。
所述终止液为2mol/L H2SO4溶液。
所述底物溶液由5.0mL的TMB(1mg/mL),42.5mL的柠檬酸-醋酸缓冲液 (0.1mol/L,pH5.0),和2.5mL的尿素过氧化氢(3mg/mL)混合而成]
2、试剂盒的使用方法
1)用样品稀释液100倍稀释被测样品(例如:10μL样品加990μL样品稀释液)。 不稀释阳性和阴性对照。取每个样品后都要更换吸头,准确记录每个样品在板上的位置。 每个样品应在添加到包被板前混匀。
2)使用前所用试剂应恢复至室温。试剂应轻轻旋转或振荡予以混合。浓缩洗涤液 使用前应恢复至室温,并摇动使沉淀盐溶解。使用前浓缩洗涤液应用蒸馏水或去离子水 10倍稀释。
3)取出抗原包被板,在记录表上记录样本的位置。在A1孔内分别加入100μL没 有稀释的阴性对照。在B1的孔内分别加入100μL没有稀释的阳性对照。在其余孔内分 别加入100μL已稀释好的样本。
4)37℃下孵育1小时(湿盒内)。
5)吸取各孔的液体弃入废液筒。用大约350μLl洗涤液洗涤板孔,重复4次。每次 洗涤后应吸去孔内的液体。注意应避免包被板孔干燥。在最后一次洗涤液吸去后,将每 块板中残留的洗涤液扣拍到吸水材料上。
6)稀释酶标二抗,酶标二抗用样品稀释液作1:2000稀释。每孔加入100μL稀释好 的辣根过氧化物酶标记的二抗。
7)37℃下孵育45min(湿盒内)。重复上面的步骤5)。
8)每孔加入100μL底物液,室温下孵育15分钟。每孔加入100μL终止液,使反 应终止。测量并且记录样本和对照的OD值(450nm)。
9)结果判定。符合下列条件,实验方能有效:阳性对照的值必须大于或等于0.5, 阴性对照值必须小于或等于0.250。如果试验无效,试验中的操作值得怀疑,试验应重 做,并应全面的仔细核对各组份。EEEV IgM抗体的临界值为计算为阴性对照+0.3。如 果测定的OD值低于临界值,样品应判为EEEV IgM抗体阴性。如果测定的OD值高于 临界值,样品应判为EEEV抗体阳性。
实施例4、试剂盒对临床样品的检测
1、材料
马EEEV IgM阳性血清,由美国NVSL提供;
2000年以来184份进口马阴性血清进行检测
2、间接ELISA方法阴阳性临界值的确定
应用试剂盒检测30份进口马阴性血清,每份血清重复2孔,按照已确立的ELISA 程序进行ELISA测定,读出OD450nm值,计算出30份血清的OD450nm值的平均值和 标准方差,阴阳性临界值等于阴性血清OD450nm值的平均值+3×标准方差,从而算出 阴阳性临界值。根据统计学原则,OD450nm值>X+3SD时,可以在99.9%的水准上判定 为阳性,故可得出实验结果的判断标准。
表4EEEV-E2-ELISA检测30份阴性马血清的结果
经上表数据可计算出阴性血清OD450nm平均值=0.172,标准差=0.040,所以阴阳 性临界值=阴性样本OD450nm平均值+3×标准方差(3SD)=0.172+3×0.040=0.292,为 了判断方便,把临界值定为0.3。在规定的实验条件下,血清样本作1:100稀释,其 OD450nm值大于临界值,即待检血清样本OD450nm值>0.3,判为阳性;若待检血清样 本OD450nm值<0.3,判为阴性;当OD450nm值等于0.3,判为可疑样本,需要重复检 测,并根据样本来源及背景综合判定。
3.间接ELISA方法的特异性试验
将6种其他马虫媒病阳性血清包括西部马脑脊髓炎IgM阳性血清、委内瑞拉马脑 脊髓炎IgM阳性血清、西尼罗热阳性血清、非洲马瘟阳性血清、水泡性口炎印第安纳型 阳性血清以及水泡性口炎新泽西型阳性血清作1:100稀释,同时作EEEV IgM阳性血清 作对照,每份血清重复2孔,作ELISA测定,结果见表5。
表5特异性试验结果
结果表明,这6种马虫媒病的阳性血清的OD450nm值均小于0.3,为阴性,说明 与纯化的EEEV E2重组蛋白抗原没有交叉反应。从交叉反应的试验结果可看出,本方 法的特异性良好。
4.间接ELISA方法对已知阴阳性血清的检测
本发明建立的试剂盒对2份EEEV阳性血清和184份进口马阴性血清进行检测,与 预期结果一致。从此结果也可以看出,进口血清中尚无东部马脑脊髓炎病毒抗体。
机译: 纯化的单体多肽多聚体,预防或治疗肝炎和哺乳动物病毒感染的疫苗组合物,肝炎病毒感染和生物学样品的诊断试剂盒,肝炎病毒感染和哺乳动物的体外诊断方法,抗肝炎总抗体的体外检测方法病毒和生物样品,抗肝炎病毒和生物样品的igg抗体的体外检测方法以及抗肝炎病毒和生物样品的igm抗体的体外检测方法
机译: ELISA试剂盒,用于早期检测人血清或血浆中的IGM抗体是否对基孔肯雅病
机译: ELISA试剂盒,用于早期检测人血清或血浆中的IGM抗体是否存在于奇异基因中