具有增强的生物利用度的含姜黄素的水溶性组合物及其方法

摘要

本发明涉及可用于治疗抑郁的具有增强的生物利用度的水溶性组合物，其包含姜黄素、至少一种抗氧化剂、亲水性载体和脂肪的协同组合。本发明还公开了制备所述姜黄素组合物的方法，其包括以下步骤：将姜黄素、至少一种抗氧化剂、亲水性载体和脂肪在溶剂中溶解以形成均质团块；将得到的团块在25°C至60°C的温度范围加热4至8小时以得到干燥的湿团块；通过蒸发除去溶剂以形成干团块和将该干团块粉碎以形成细粉。

说明书

发明领域

本发明涉及具有增强的生物利用度的水溶性组合物及其方法。更 具体地，本发明涉及含姜黄素以及至少一种抗氧化剂、亲水性载体和 脂肪的新的水溶性组合物，其具有增强的生物利用度。

本发明的组合物通过缓解人的抑郁的症状可用于治疗抑郁。本发 明的具有增强的生物利用度的姜黄素的新的水溶性组合物特别可用于 配制为口服递药形式例如干混合物(dry mixes)、片剂、胶囊等。

发明背景

姜黄素[1,7-二(4-羟基-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮]是疏水 的多酚衍生物，为源自香料姜黄的强效的抗氧化剂。市售的姜黄素包 含约77%的双阿魏酰甲烷、17%的去甲氧基姜黄素和6%的二去甲氧 基姜黄素。姜黄素是姜黄的主要的活性成分，姜黄从远古时代开始已 经被使用。姜黄（Curcuma longa）(turmeric)是众所周知的天然草药。 它以其多种多种生物作用和药理活性为人所知，包括抗炎、抗氧化、 抗增殖、抗微生物、抗癌和抗血管生成性质。

当前，重性抑郁症，令人衰弱的精神障碍，被认为是最普遍的人 类疾病之一。其可由很多原因引起，所述原因包括社会、职业的、经 济和人际交往困难的持续。患有抑郁的人通常呈现悲伤情绪的状态和 对日常活动的厌恶，这通常影响人的想法、行为、感觉和身体健康。

已经处方开出了多种抗抑郁药用于缓解抑郁的症状。目前使用的 药物主要包括单胺氧化酶抑制剂(MAOIs)、三环抗抑郁药(TCAs)、四 环抗抑郁药(TeCAs)、选择性5-羟色胺再摄取抑制剂(SSRIs)和去甲肾 上腺素多巴胺再摄取抑制剂(NDRIs)。市场上可获得的指定用于治疗 抑郁症的一些重磅药物的商品名为Prozac、Norpramin、Effexor、 Serzone、Remeron、Desyrel、Zolsoft、paxil、Pamelor、Aventyl、 Surmontil等。功能性食品产品例如St Johns Wort也已经广泛用于抑 郁症。

然而，上述药物的治疗益处经常伴有不想要的副作用，且没有很 好的明白确切的作用机制。过多的伴随的副作用包括恶心、失眠、焦 虑、多动、减少的性冲动、头晕、体重增长或减少、震颤、出汗、嗜 睡、疲劳、口干、腹泻、便秘、头痛等。由于这些副作用和一些患者 对现有药物没有响应，所以着重需要更安全和更有效的治疗重性抑郁 症的药物。

因此，鉴定特别致力于安全和有效性问题的来自传统草药的或草 本来源的组合物藉此以缓解抑郁症状将是有用的。姜黄素是一种已经 在多种重性抑郁症的动物模型中显示出有希望的功效的此类分子。尽 管尚未完全明白姜黄素的抗抑郁作用的机制，假定其通过抑制单胺氧 化酶和调节5-羟色胺和多巴胺的释放而起作用。而且，已有证据显示 姜黄素增强神经发生，这一现象在脑额叶皮质和海马区中显著。(SK  Kulkarni等Potentials of Curcumin as an Antidepressant;Scientific  World Journal2009Nov1;9:1233-41)。

另一项研究证实姜黄素在强迫游泳实验中的抗抑郁作用，这表明 其抗抑郁作用可能通过在中枢单胺能神经递质系统中作用而介导。在 大鼠强迫游泳实验中使用口服1.25、2.5、5和10mg/kg的姜黄素剂量， 并使用姜黄素长期治疗14天显示减少了强迫游泳实验中的不动时间 (Ying Xu等Antidepressant effects of curcumin in the forced swim  test and olfactory bulbectomy models of depression in rats. Pharmacology Biochemistry and behaviour.82(1)2005.第200-206 页)。

在悬尾实验和强迫游泳实验中口服施用姜黄水提物(140至560 mg/kg口服)14天显示了不动的减少。结果表明姜黄提取物在体内具 有特定抗抑郁作用(ZF Yu,LD Kong和Y Chen.Antidepressant  activity of aqueous extracts of Curcuma longa in mice.Journal of  ethnopharmacology.83(1-2)2002.第161-165页)。

研究显示诱导海马神经元的损伤的应激可能造成抑郁的病理生理 学。在慢性应激大鼠中施用姜黄素(10和20mg/kg，口服)增加海马神 经发生，其与经典的抗抑郁丙咪嗪治疗显示相似的活性(Ying Xu等 Curcumin reverses impaired hippocampal neurogenesis and increases  serotonin receptor1A mRNA and brain-derived neurotrophic factor  expression in chronically stressed rats.Brainsearch.1162(2007) 9-18)。

另一项研究调查姜黄素的抗抑郁活性与单胺能系统的牵涉，以及 胡椒碱(生物利用度增强剂)对姜黄素的生物利用度和生物效应的作 用。该研究表明施用姜黄素抑制不动时期，增加5-羟色胺(5-HT)以及 多巴胺水平，并在小鼠中抑制单胺氧化酶。胡椒碱与姜黄素的共施用 使得药理学、生物化学和神经化学活性增强(SK Kulkarni等 Antidepressant activity of curcumin:involvement of serotonin and  dopamine system.Psychopharmacology(2008)201:435-442)。

近来已经表明AC-cAMP第二信使通路在抑郁中起重要作用。因 此，调节信号通路的化合物可能具有作为抗抑郁药的潜力。已经在大 鼠中研究慢性轻度不可预见性应激(CUMS)和姜黄素对行为/偶联5-羟 色胺能受体AC-cAMP信号通路的作用。姜黄素增强了血小板和多个 脑区域中的AC活性和c-AMP水平，并在CUMS大鼠的海马、皮层 和下丘脑中正调节AC亚型AC2、AC8的mRNA表达和cAMP反应 元件结合蛋白(CREB)。在CUMS大鼠中姜黄素的强效的抗抑郁特性 可能是由于其经由抑制中枢5-HT(1A/1B/7)受体改善AC-cAMP通路 以及CREB(YC Li等Antidepressant-like effects of curcumin on  serotonergic receptor-coupled AC-cAMP pathway in chronic  unpredictable mild stress of rats.Prog Neuropsychopharmacol Biol  Psychiatry.2009Apr30;33(3):435-49)。

除了上述研究之外，还有多项涉及姜黄素在人中的功效的临床研 究。虽然显示强的内在活性的临床数据显示了姜黄素用作治疗剂的潜 力，但姜黄素在治疗包括重性抑郁症的多种精神失调中的临床应用受 限于其弱的胃肠道吸收。

任何活性剂在体内的降低的生物利用度的原因可归因于内在活性 低、吸收弱、代谢速度快、代谢产物无活性和/或从身体迅速消除和清 除。涉及姜黄素的吸收、分布、代谢和排泄的对姜黄素的研究已经揭 示姜黄素的弱的吸收和迅速的代谢严重地降低其生物利用度。

WO2007/103435公开了具有增强的生物利用度的姜黄色素 (curcuminoid)制剂，其包含姜黄色素、抗氧化剂、葡萄糖醛酸化抑制 剂和水溶性的可药用抑制剂，可用于治疗阿尔茨海默病和其它与年龄 有关的疾病。

WO2008/113177公开了多个化合物和含多不饱和脂肪酸单酸甘 油酯和及其衍生物的组合物。这些化合物已经表明可用于增强多种活 性剂的溶解度并增强它们的生物利用度。

印度专利申请1776/DEL/2008公开了具有较高载药能力、改善的 生物利用度的药物组合物，其具有作为自纳米乳组合物的足够的物理 和化学稳定性。

再一个印度专利申请1827/DEL/2008提供了姜黄素纳米粒和与脱 乙酰壳多糖纳米粒结合的姜黄素及其制备方法。姜黄素在这些制剂中 的生物利用度显示改善了超过10倍。

这些组合物有一些缺陷，例如姜黄素在肠内由于细胞色素的过度 损害，血清中的姜黄素水平的降低(由于肝中连续代谢)导致形成功效 较低的姜黄素葡糖苷酸和硫酸酯及穿过血脑屏障的困难。对于这些原 因，目前的技术均未能作为精神抑郁的治疗法或作为情绪改善剂 (mood elevator)在商业上获得成功。

当前使用的抗抑郁药物有许多限制。除在治疗期间需要持续的医 学监督的处方药之外，它们具有严重的副作用。选择性5-羟色胺再摄 取抑制剂具有副作用，例如恶心、腹泻、激动、性冲动丧失等。三环 抑制剂具有副作用，例如口干、视力模糊、头晕、震颤等。单胺氧化 酶抑制剂具有副作用，例如肝炎、心脏病发作、卒中、癫痫发作(seizures) 等。来自膳食来源的姜黄素没有此类严重的副作用。

发明目的

因此，本发明主要目的是提供用作人抗抑郁剂的具有增强的生物 利用度的新的水溶性组合物。

本发明的另一个目的是提供具有增强的生物利用度的含姜黄素的 新的水溶性组合物，其可采用口服施用形式。

本发明的又一个目的是提供用作人抗抑郁剂的具有增强的生物利 用度的含姜黄素的新的水溶性组合物，其对于人消耗而言更安全，没 有任何副作用。

本发明的另一个目的是提供用作人抗抑郁剂的具有增强的生物利 用度的含姜黄素的新的水溶性组合物，其相比于常规的抗抑郁药具有 更好的功效。

本发明的另一个目的是提供用于制备用作人抗抑郁剂的具有增强 的生物利用度的含姜黄素的新的水溶性组合物的方法。

本发明基于我们的发现而开发，其归功于我们进行的持久的研发， 归因于这一事实：当姜黄素与抗氧化剂、亲水性载体和脂肪与组合时， 令人惊讶地增强姜黄素的生物利用度。导致增强的生物利用度的可用 于缓解抑郁的症状的该组合迄今不为人所知。

发明概述

因此，本发明提供了可用于治疗抑郁的具有增强的生物利用度的 新的水溶性组合物，其包含姜黄素、至少一种抗氧化剂、亲水性载体 和脂肪的协同组合。

根据本发明的另一个方面提供了制备可用于治疗抑郁的具有增强 的生物利用度的新的水溶性组合物的方法，其包括:

(i)将姜黄素、至少一种抗氧化剂、亲水性载体和脂肪在溶剂中溶 解以形成均质团块;

(ii)将得到的团块在25°C至60°C的温度范围加热4至8小时以 得到干燥的湿团块;

(iii)通过蒸发除去溶剂以形成干团块和

(iv)将该干团块粉碎以形成细粉。

发明详述

用于步骤(i)的姜黄素可以是含量范围为85-96%的商购获得的姜 黄素。还可以是富含姜黄素的姜黄的提取物。所添加的姜黄素的量可 足以产生具有1-55%姜黄素的检测含量的水溶性姜黄素。

步骤(i)中使用的抗氧化剂可选自天然维生素E、棕榈酸抗坏血酸 酯、迷迭香提取物、表没食子儿茶素没食子酸酯、儿茶素、抗坏血酸 及其混合物。使用的抗氧化剂的量的范围可以为1-10%。

步骤(i)中使用的亲水性载体可以选自可溶性淀粉、羟丙基甲基纤 维素、羧甲基纤维素钠、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇200-20000、甘 油、山梨醇、甘露醇、葡萄糖、糖及其混合物。所添加的亲水性载体 的量的范围可以为10-90%。

步骤(i)中使用的脂肪可选自乳脂肪、中链甘油三酯、长链甘油三 酯、氢化植物油及其混合物。使用的脂肪的量的范围可以为1-25%。

步骤(i)中用于溶解的溶剂可选自异丙醇、丙酮、甲醇、乙醇及其 混合物。用于得到均质团块所保持的温度的范围为环境温度至70°C； 优选为25°C至60°C。

步骤(ii)中的溶剂的除去可以使用真空蒸馏或蒸发技术或通过喷 雾干燥进行。得到的干团块使用研钵和研棒、混合机-粉碎机、研磨机 (multi-mill)、球磨机、气流粉碎机等进行粉碎。

姜黄素的有益作用已经为人熟知。然而，当以口服形式给药时有 许多与姜黄素的生物利用度有关的问题。摄入的姜黄素的主要部分通 过未代谢的排泄物被排泄，被吸收的少部分转化为其它的代谢产物并 被排泄。姜黄素不容易穿过胃肠道，且受肝和其他肠内酶影响。由于 这些酶，体内的姜黄素被迅速代谢，由此降低其在体内的生物利用度。 进入血流的少量的姜黄素被肝和肾迅速代谢。因此，尽管姜黄素高度 亲脂(且非常容易穿过血脑屏障)，但只有非常少量的口服施用的姜黄 素到达血清和脑组织中。

细胞色素P450是I期代谢同工酶，代谢毒性化学物质、例如杂环 胺以诱导形成导致癌发生的DNA加合物需要细胞色素P450。当摄入 体内时，姜黄素进入胃肠道，且被发现抑制细胞色素P450。如上文所 提及，已经有过当与胡椒碱一起使用时提高姜黄素的生物利用度的研 究。胡椒碱是生物利用度增强剂(bioenhancer)，其抑制细胞色素P450， 且由此防止体内姜黄素的代谢。本发明的组合物被认为增强生物利用 度而不存在任何另外的生物利用度增强剂。

本发明的姜黄素的水溶性组合物包含抗氧化剂、亲水性载体和脂 肪。与姜黄素一起的抗氧化剂抑制细胞色素P450。另一方面，包裹组 合物的脂肪的存在防止组合物受到肝微粒体或其他肠内酶的攻击，因 为这些酶只攻击水性化合物。因此抗氧化剂和脂肪在姜黄素生物利用 度的增强中起至关重要的作用。

以下给出的实施例中描述了本发明的细节，实施例为阐述本发明 而提供，且因此不应当被解释为限制本发明的范围。

实施例1

将18g姜黄素(95%)、0.75g棕榈酸抗坏血酸酯、含0.55g EGCG 的1.1g绿茶提取物、0.8G天然维生素E、10g HPMC、265g聚乙烯 吡咯烷酮(K30)和30g中链甘油三酯混悬于600g异丙醇中，得到均质 团块。然后将得到的均质团块加热至70°C，得到干燥的湿团块，然后 将其减压蒸馏(600mm Hg)以除去异丙醇，得到干团块。然后将干团 块在混合机-粉碎机中粉碎，形成含5.8%的姜黄素的黄色的水溶性细 粉。

实施例2

将72g姜黄素(95%)、8g天然维生素E、6g棕榈酸抗坏血酸酯、 18g羟丙基甲基纤维素、15g氢化豆油和200g甘露醇混悬于500g 乙醇中，得到混合物。然后将该混合物匀化，并在60°C加热，得到 均质团块。将该均质团块在真空下蒸发以除去乙醇，得到317g干团 块。然后将得到的干团块在研钵中用研棒粉碎，得到具有20.1%的姜 黄素的黄色粉末。

实施例3

将275g姜黄素(95%)、5g含50%EGCG的绿茶提取物、10g 棕榈酸抗坏血酸酯、30g中链甘油三酯、20g氢化豆油和175g聚乙 烯吡咯烷酮混悬于500g乙醇中。将该混合物匀化，并在60°C加热。 然后将得到的混合物在真空下蒸发以除去乙醇，得到520g干团块。 然后将得到的干团块在研钵中用研棒粉碎，得到具有51.3%的姜黄素 的黄色粉末。

实施例4

将274g姜黄素(95%)、5.1g含50%EGCG的绿茶提取物、10.6g 棕榈酸抗坏血酸酯、31g中链甘油三酯、20g氢化豆油和175g聚乙 二醇6000混悬于500g丙酮中。将该混合物匀化，并在55°C加热， 得到均质团块。将得到的混合物在真空下蒸发除去丙酮，得到523g 干团块。然后将该团块在研钵中用研棒粉碎，得到具有50.6%的姜黄 素的黄色粉末。

实施例5

姜黄素的抗抑郁活性

测试操作

动物:雄性Laca小鼠

方法:Porsolt强迫游泳测试(也称为行为绝望测试)

这是用于测试抗抑郁药物对实验室动物、特别是大鼠或小鼠的行 为的作用的测试。使动物进行两次试验，期间强迫它们在装有水的丙 烯酸玻璃圆筒中游泳，且动物不能从该圆筒中逃脱。第一次试验持续 15分钟。然后在24小时后，进行第二次试验，持续5分钟。测定动 物在第二次试验中不动所持续的时间。抗抑郁药减少该不动时间。

在标准实验室条件下饲养雄性laca小鼠，自由获取食物和水，将 其置于含有15cm保持在24±1°C的水的矩形玻璃缸(25x12x25cm³) 中。一段时间后，小鼠放弃从水中逃脱的尝试，并平静下来进入不动 状态。测定不动的持续时间。当动物在水中以略微拱起的但直立的姿 态保持消极的漂浮(鼻子在水面上)时认为其处于不动状态。已经显示 当许多抗抑郁药施用于小鼠时，缩短了不动的持续时间。借助秒表记 录6-分钟测试期间的总的不动时间。

测试物质:使用以下药物:

1.常规姜黄素粉末(C-C),

2.通过实施例1至5中阐述的方法制备本发明的组合物。给出的 实施例中使用的干燥营养系统(下文称为DNS)组合物中姜黄素的百分 比为5%、20%和50%，且在实施例5至6中表示如下-DNS5%表 示为2502-DNS-5B(C-5)；DNS20%表示为2502-DNS-20B(C-20)且 DNS50%表示为2502-DNS-50B(C-50)，由申请人提供；

3.其它商购可得的抗抑郁测试药物，例如氟西汀；文拉法辛、地 昔帕明和反苯环丙胺。

A.姜黄素的抗抑郁活性的测试

使用常规的姜黄素(C-C)和本发明的更新的组合物(即 2502-DNS-5B(C-5)；2502-DNS-20B(C-20)和2502-DNS-50B(C-50)) (三种剂量-50mg/kg、100mg/kg和200mg/kg)以及10mg/kg氟西汀 (Flx)进行了姜黄素抗抑郁活性的测试。下文给出的表1、表2和表3 提供了当分别以50mg/kg、100mg/kg和200mg/kg的剂量施用时动 物不动期的数据和动物不动下降的百分比。将从表1、2和3中得到的 不动期数据分别相对于图1、图2和图3中的施用剂量作图，如本说 明书附图所示。

测试物质:50mg/kg姜黄素(常规)和本发明的组合物 2502-DNS-5B(C-5)；2502-DNS-20B(C-20)和2502-DNS-50B(C-50)。

动物:雄性Laca小鼠。

测试操作:Porsolt强迫游泳测试。将含有15cm的水的矩形玻璃 缸(25x12x25cm³)保持在24±1°C。

表1

*p<0.05，与介质治疗的对照相比

测试物质:100mg/kg姜黄素(常规)和更新的制剂2502-DNS-5B (C-5)；2502-DNS-20B(C-20)和2502-DNS-50B(C-50)。

动物:雄性Laca小鼠。

测试操作:Porsolt强迫游泳测试。将含有15cm的水的矩形玻璃 缸(25x12x25cm³)保持在24±1°C。

表2

*p<0.05，与介质治疗的对照相比

测试物质:200mg/kg姜黄素(常规)和更新的制剂2502-DNS-5B (C-5)；2502-DNS-20B(C-20)和2502-DNS-50B(C-50)。

动物:雄性Laca小鼠。

测试操作:Porsolt强迫游泳测试。将含有15cm的水的矩形玻璃 缸(25x12x25cm³)保持在24±1°C。

表3

*p<0.05，与介质治疗的对照相比

以上的研究显示，在强迫游泳测试(FST)中在45和60分钟姜黄素 化合物C-5、C-20和C-50显示与常规姜黄素(C-C)相似的最大响应(不 动时间的缩短)。因此，在进一步的研究中将45分钟作为时间间隔， 所述研究用于调查这些药物与通过不同的作用机制起作用的几种类型 的抗抑郁药物的相互作用。50mg/kg的所有这些制剂显示与C-C一致 的不动期。100和200mg/kg时C-20和C-50比C-5和C-C更有效。 该剂量时，不动期与氟西汀(10mg/kg)所产生的不动期相似。

与不同的抗抑郁药的组合的研究

使用商购可得的不同的抗抑郁药进行姜黄素的组合研究。从这些 研究中获得的比较数据在表4-7中列表显示。表4、表5、表6和表7 提供了当姜黄素(以50mg/kg的剂量施用)分别与氟西汀(5mg/kg，腹 膜内)、文拉法辛(2mg/kg，腹膜内)、地昔帕明(5mg/kg，腹膜内)和反 苯环丙胺(5mg/kg，腹膜内)一起施用时动物的不动期和动物不动的下 降百分比的比较数据。将表4、5、6和7中得到的不动期数据分别相 对于图4、图5、图6和图7中的施用剂量作图，如本说明书附图所示。

与亚有效剂量的氟西汀的组合(表4)

测试物质:氟西汀(5mg/kg，腹膜内)与50mg/kg更新的制剂， 2502-DNS-5B(C-5)；2502-DNS-20B(C-20)和2502-DNS-50B(C-50)和 常规的姜黄素(C-C)

动物:雄性Laca小鼠。

测试操作:Porsolt强迫游泳测试。将含有15cm的水的矩形玻璃 缸(25x12x25cm³)保持在24±1°C。

表4

*p<0.05，与介质治疗的对照相比

与亚有效剂量的文拉法辛的组合研究(表5)

测试物质:文拉法辛(2mg/kg，腹膜内)与50mg/kg更新的制剂 C-5(2502-DNS-5B),C-20(2502-DNS-20B);和C-50(2502-DNS-50B)和 常规的姜黄素

动物:雄性Laca小鼠。

测试操作:Porsolt强迫游泳测试。将含有15cm的水的矩形玻璃 缸(25x12x25cm³)保持在24±1°C。

表5

*p<0.05，与介质治疗的对照相比

与亚有效剂量的地昔帕明的组合研究(表6)

测试物质:地昔帕明(5mg/kg，腹膜内)与50mg/kg更新的制剂、 2502-DNS-5B(C-5)；2502-DNS-20B(C-20)和2502-DNS-50B(C-50) 和常规的姜黄素(C-C)。

动物:雄性Laca小鼠。

测试操作:Porsolt强迫游泳测试。将含有15cm的水的矩形玻璃 缸(25x12x25cm³)保持在24±1°C。

表6

*p<0.05，与介质治疗的对照相比

与亚有效剂量的反苯环丙胺的组合研究(表7)

测试物质:反苯环丙胺(5mg/kg，腹膜内)与50mg/kg更新的制 剂、2502-DNS-5B(C-5)；2502-DNS-20B(C-20)和2502-DNS-50B(C-50) 和常规的姜黄素(C-C)。

动物:雄性Laca小鼠。

测试操作:Porsolt强迫游泳测试。将含有15cm的水的矩形玻璃 缸(25x12x25cm³)保持在24±1°C。

表7

*p<0.05，与介质治疗的对照相比

结论

将50mg/kg作为用于与不同的抗抑郁药的组合研究的亚有效剂 量。与亚有效剂量的氟西汀(5mg/kg，选择性5-羟色胺再摄取抑制剂) 一起，所有的50mg/kg的本发明的姜黄素制剂在FST中加强了不动 时间的缩短。与亚有效剂量的文拉法辛(2mg/kg，5-羟色胺和去甲肾 上腺素的双重再摄取抑制剂)一起，C-20和C-50更有效，并显示了类 似于使用C-C所观测到的加强的抗抑郁作用，与C-C相比，C-20的 情况中不动时间的抑制百分比增加10%，且在C-50该百分比增加 20%。在该测试中，C-5与文拉法辛一起不显示任何加强作用。与亚 有效剂量的地昔帕明(5mg/kg，三环抗抑郁药)一起，所有的三种更新 的制剂姜黄素即C-5、C-20和C-50显示加强的抗抑郁活性。亚有效 剂量的C-C与地昔帕明一起不显示任何增强作用。与亚有效剂量的反 苯环丙胺(5mg/kg，非特异性MAO抑制剂)一起，没有更新的姜黄素 制剂(C-5、C-20、C-50)或C-C显示加强的作用。

B.化合物的HPLC数据

将100mg/kg剂量的所有的更新的姜黄素制剂即C-5、C-20、C-50 及常规的姜黄素C-C注射至动物，并将其在45分钟处死以使用HPLC 研究生物胺水平的变化。

测试物质:氟西汀、标准常规的姜黄素(100mg/kg)、更新的姜黄 素制剂(各100mg/kg)

动物:雄性Laca小鼠。

测试操作:在药物施用45分钟之后将动物处死，该时间类似于行 为观测的时间。

HPLC-ECD检测仪:流动相-磷酸盐缓冲液:乙腈(87:13),pH 4.5，柱-ODS-3C-18柱(250x4.6mm I.D.；5μm粒度)

表8

表9

表10

表11

结论

与对照相比，C-5显示多巴胺水平的显著的增加(20.99%)。与C-C 相比，在C-5、C-20和C-50的情况中，多巴胺水平的增加分别为71.13、 51.73和33.02。与对照相比，C-5和C-20显示5-HT水平的显著的增 加(51.63和59.19)。与C-C相比，在C-5、C-20和C-50的情况中， 5-HT水平的增加分别为41.98、49.05和31.13。与对照相比，C-5和 C-20显示去甲肾上腺素水平的显著的增加(63.17和41.84)。去甲肾上 腺素水平的增加与C-C治疗组中所观测到的相似。

实施例6

比较生物利用度研究

应申请人要求，生物利用度研究在Amala癌症研究所（Amala  Cancer Institute）(特里苏尔,喀拉拉)（Thrissur,Kerala）进行。招 募12名健康的受试者用于实验目的。在研究期间要求所有的志愿者戒 除富含姜黄素的食品。所选择的研究设计是平衡的、开放标签的、二 次治疗（two-treatment）、两阶段的、单次剂量的生物利用度研究。

招募12名受试者用于研究，并要求他们在每个阶段之前24小时 避免进食含丰富姜黄粉或提取物的食品。研究使用单次剂量的姜黄素 胶囊(相当于1gm姜黄色素)。为研究目的使用以下的补充剂:

将补充剂1(含姜黄素提取物粉末95%，即C-C(相当于1gm姜 黄色素的500mg胶囊)，OmniActive Health Technologies Ltd.，印度) 以单次剂量的两粒500mg的姜黄素提取物粉末95%胶囊施用。

补充剂2(含姜黄素Ultrasol干燥营养系统50%，即C-50(相当于 1gm姜黄色素的250mg胶囊)，OmniActive Health Technologies Ltd.， 印度)以单次剂量的四粒姜黄素Ultrasol干燥营养系统50%250mg胶 囊施用。

在每个阶段将各补充剂与240ml水一起施用。

方法学:

该研究的首要目标是比较在健康人类受试者中施用单次剂量的两 粒姜黄素提取物粉末95%(相当于1gm姜黄色素的500mg胶囊)与 单次剂量的四粒姜黄素Ultrasol干燥营养系统50%、即C-50(相当于 1gm姜黄色素的250mg胶囊)之后的姜黄素的生物利用度。

该研究的第二个目的是当在12位健康人类受试者中施用时，监测 单次剂量的1g姜黄色素的安全性和耐受性。

研究设计是开放标签的、二次治疗、两阶段的、单次剂量的、生 物利用度研究。在该研究中招募了12位受试者，且他们全部完成了研 究。要求受试者在每个阶段之前24小时避免进食含丰富姜黄粉或提取 物的食品。在每个阶段将相当于1gm姜黄色素的单次剂量的姜黄素 胶囊:补充剂1或补充剂2与240ml水一起施用。在两次施用之间， 有至少两周的清除期。

在即将施用开始之前以及施用后的1、2、4、6、8和24小时从每 位受试者抽血。每位受试者的总的失血为约70ml，在整个研究期间， 每个时间点总共有14份5ml的血液样本。将在不同时间间隔抽取的 血液样本离心，并通过HPLC技术测定血浆中的姜黄素。

该研究中测定主要功效变量是Cmax、AUC0-t和AUC0-∞，且次 要功效变量为如下的Tmax、T1/2和Kel。通过Winnonlin软件5.0.1 版完成统计评价。结果变量:绘制血浆样品分析时间对比浓度曲线， 由其可计算Cmax(体内姜黄素的最大浓度)。从得到的峰计算24小时 的AUC。还记录了Tmax和T1/2，并对两种产品进行比较。

分析方法:

标准储备液(157489.2ng/ml)的制备

标准名称:姜黄标准化提取物，且标准纯度为96.03%(来自 Kancor，安加马尔伊，喀拉拉)。

在100ml的容量瓶中称重16.4mg的姜黄标准化提取物。将其溶 解，并用甲醇补足体积。

标准溶液A的制备(15748.92ng/ml):取10.0mL标准储备液，并 用甲醇稀释至100mL。

标准溶液B的制备(787.446ng/ml):取1.0mL标准溶液A，并用 甲醇稀释至20mL。

最终标准溶液C的制备(393.723ng/ml):取5.0mL标准溶液B， 并用甲醇稀释至10mL。

标准溶液D的制备(3149.784ng/ml):取5.0mL溶液A，并用甲 醇稀释至25mL。

示踪(spiking)标准溶液E的制备(1574.892ng/ml):取5.0mL溶液 D，并用甲醇稀释至10mL。

空白溶液的制备(使用标准溶液E示踪):使空白血浆样品达到室 温。将1.0ml的空白血浆样品和100μl示踪标准溶液E在洁净的玻璃 试管中混合。然后将该示踪空白溶液使用与对于样品相同的操作提取。

标准品的制备(使用标准溶液E示踪):将900μl空白血浆和100μl 标准溶液D吸取至洁净的玻璃试管中。向其中加入100μl示踪标准 溶液E，并混合。然后该示踪的标准品使用与对于样品相同的操作提 取。

样品的制备(使用标准溶液E示踪):使冷冻的血浆样品达到室温。 吸取1000μl血浆样品，并掺加100μl示踪标准溶液E。将该溶液涡 流1分钟，并向以上溶液中加入3.0ml乙酸乙酯(HPLC级)。借助旋 转混合器将该溶液再次涡流1分钟，并将其在室温放置。

吸取1.5ml上层的乙酸乙酯层，并真空蒸发至干燥。使用旋涡混 合器将干燥的样品溶于600μl甲醇(HPLC级)中。将该溶液经0.2微米 薄膜滤纸过滤。将100μl这些滤过的溶液进样至HPLC(带有2996 PDA检测器的Waters Alliance System，恒组成溶剂模式)。使用的柱 为LiChrospher100RP-18(250x4.6mm5μΜ粒度)，以甲醇作为流动 相，且检测波长为为420nm。为鉴定和量化血浆中的姜黄色素，将色 谱峰与标准溶液对比。

结果:

将从如上文所述进行的研究获得的数据制表。以下的表12至17 显示获得的数据。

表12-姜黄素提取物粉末95%个体浓度表(ng/mL)

ND–在血浆中未检出

表13-姜黄素提取物粉末(最少95%姜黄色素)的平均浓度表

表14–姜黄素提取物粉末(最少95%姜黄色素)的PK参数

ND-未检出

表15-UltraSol营养系统(50%姜黄色素)的个体浓度表(ng/mL)

ND-未检出

表16-UltraSol营养系统(50%姜黄色素)的平均浓度表

表17–UltraSol营养系统(50%姜黄色素)的PK参数

ND-未检出

结论

现有工艺表明姜黄素口服施用后吸收差。口服施用3.6g姜黄素， 在血浆中可检出约11ng/ml。在血浆中检测较低剂量的姜黄素需要特 殊的努力/技术。然而，在目前的研究中，在两阶段中所有的受试者口 服施用两种补充剂的1g姜黄素。如上文所提及，该1gm的剂量对于 在血浆样品中检测姜黄素而言非常低，将血浆样品外部掺入25ng姜 黄素以助于其HPLC检测。在血浆中的姜黄素量化之后，将色谱图的 总面积减去25ng的外部掺入的姜黄素的面积，以得到姜黄素浓度。

生物分析结果显示在姜黄素补充给药组中在大多数的血液取样时 间点不存在姜黄素。在UltraSol DNS姜黄素补充组中在几乎所有的取 样时间点可检测到姜黄素，测得高至21ng/ml的平均血药浓度。姜黄 素提取物粉末95%(实际姜黄色素含量95.2%)的姜黄色素含量比 UltraSol DNS姜黄素50%粉末(实际姜黄色素含量48.17%)高1.98倍。 在两种姜黄素补充剂中，姜黄色素含量相等，即1gm。

姜黄素Ultrasol营养系统50%的平均AUC为541.93ng/ml*h， 且对于姜黄素提取物粉末95%该值为80.43ng/ml*h，如图8所示。与 姜黄素提取物粉末95%相比，姜黄素Ultrasol营养系统50%AUC显 示6.74倍的增加，这表示与姜黄素提取物粉末95%相比，Ultrasol营 养系统具有较高的生物利用度(6.74倍)。

在与Biocurcumax的比较中，生物利用度显示高于姜黄素粉末 6.93倍，该增加是使用2gm/d的剂量。但在目前的研究中，甚至使用 为Biocurcumax剂量一半的1gm/d的剂量的情况下，UltraSol DNS 姜黄素显示高出纯姜黄素粉末6.74倍的生物利用度。因此，在相同剂 量水平与姜黄素粉末95%相比，Ultrasol营养系统、姜黄素干粉50% 制剂显示更高的吸收。

Ultrasol DNS50%达到峰中值浓度即Tmax为2小时，而对于姜 黄素提取物粉末95%为3小时，这可表明Ultrasol DNS姜黄素具有比 姜黄素粉末提取物更快的起效时间。

安全性:给出的95%的粉末和Ultrasol DNS50%两种形式的1 gm姜黄素的剂量在所有受试者中均能良好耐受，且在整个研究期间 没有报道不良事件。

从上文给出的详细说明，可以观察到本发明的组合物不是仅仅为 混合产生集合了所使用的各组分的特性的组合物，而是由所使用的各 组分的协同作用所形成的组合物。

本发明的优势

本发明的新的水溶性组合物

1.显示增强的通常可用于缓解抑郁的生物利用度。

2.无毒性。

3.可以容易地配制为口服施用形式、例如片剂、胶囊、共混粉末 剂等。

4.可用于在例如抗抑郁药的应用中以高剂量口服递送姜黄素。