具有非特定主诉的患者的预后和风险评估

摘要

本发明涉及样品中标志物肽的水平的测定，所述样品源自于出现在急诊室的具有非特定主诉的对象的体液。

说明书

技术领域

本发明属于临床诊断学领域。具体来说，本发明涉及样品中标志 物肽的水平的测定，所述样品源自于出现在急诊室的具有非特定主诉 （non-specific complaint）的对象的体液。

背景技术

出现在急诊室（ED）的具有非特定主诉（NSC）的患者是公知但 不好界定的群体。受影响的个体通常抱怨“感觉不好”、“感觉虚弱”、 “疲倦”、感觉“头晕”或仅仅抱怨不能应付日常活动（van Bokhoven等，2008.J Clin Epidemiol;61:318-22）。某些患者可能不能回忆起他 们为何被送往ED。在NSC患者的护理期间，ED医生面临着从家庭护 理不足到急性的危及生命的病症的广泛差异的诊断（Gordon1986.Geriatrics41(4):75-80）。具有NSC的患者属于对ED医生最有挑战性 的患者（Chew和Birnbaumer1999.Emerg Med Clin North Am17(1):265-78）。此外，临床现象常常由于诸如合并症、多种药物疗法或精神 状态改变的因素而模糊不清。

Vanpee等证实，高达20%的出现在ED的老年个体具有非特定主 诉（Vanpee等，2001.Eur J Emerg Med8(4):301-4）。此外，50%的没 有特定主诉的老年个体患有急性医学问题（Rutschmann等，2005.Swiss  Med Wkly135(9-10):145-50）。ED老年群体是不良结果（例如机能减 退、依赖性和死亡）的特别高风险组（McCusker等，2001.J Am Geriatr  Soc49(10):1272-81）。必须更好地确定这些具有NSC的患者的需求， 并且开发有效且安全的决定和管理策略是必不可少的（Vanpee等，2001.Eur J Emerg Med8(4):301-4；Rutschmann等，2005.Swiss Med Wkly135(9-10):145-50；Sanders AB.《老年人的紧急护理》（Emergency Care  of the Elder Person），St.Louis:Beverly Cracom Publications ed.1996）。

急诊医学中的患者管理通常依赖于根据提出的主诉例如急性胸 痛、呼吸困难或胁腹痛而作出的诊断和治疗方案（Lee和Goldman2000.N Engl J Med342(16):1187-95；Gupta等，2002.Ann Emerg Med40(2):180-6；American Thoracic Society1999.Am J Respir Crit Care Med159(1):321-40；Wang等，2005.JAMA294(15):1944-56；Kartal等，2006.Emerg Med J23(5):341-4；《欧洲急诊医学课程》（European Curriculum  for Emergency Medicine），由欧洲紧急医学学会理事会（Council of the  European Society for Emergency Medicine）和UEMS紧急医学多学科联合委员会（UEMS Multidisciplinary Joint Committee on Emergency  Medicine）批准的EuSEM专责小组课程文件，2008）。对于NSC来说 还没有公布过可比的管理方案，这最可能是由于缺少对NSC的一致的 定义以及缺少关于该群体中的差异诊断和有效的病情检查策略的研究 （Rosendal等，2005.BMJ330(7481):4-5）。不确定性通常使诊断过程 伴有可能多余的证实性试验，以便排除隐伏的严重病症（Vanpee等，2001.Eur J Emerg Med8(4):301-4；Sanders AB.《老年人的紧急护理》（Emergency Care of the Elder Person），St.Louis:Beverly Cracom  Publications ed.1996）。这可能导致等待时间延长、鉴别分类低效和转 诊不充分（Sanders1992.Ann Emerg Med21(7):830-4；Knottnerus等，1986.Ned Tijdschr Geneeskd130(9):402-5）。

Nemec等提供了非特定主诉的严格定义，该定义被包含在此以作 参考（Nemec等，2010.Acad Emerg Med17(3):284-292）.

令人吃惊地发现，标志物肽或其片段或者标志物肽前体或其片段， 在出现在急诊室的具有非特定主诉的患者中是包括死亡和住院治疗的 严重病症的独立预测因子。

发明内容

本发明的主题是用于具有非特定主诉的患者的预测和风险评估的 方法，所述方法包括测定从所述对象获取的样品中的标志物肽或其片 段或者标志物肽前体或其片段，其具有至少12个氨基酸。

具体实施方式

本发明的主题是用于具有非特定主诉的患者的预测和风险评估的 方法，所述方法包括测定从所述对象获取的样品中的标志物肽或其片 段或者标志物肽前体或其片段，其具有至少12个氨基酸。

本发明的主题是用于具有非特定主诉的患者的风险评估或结果预 后或分级的方法，

所述方法包括下列步骤：

-提供来自于所述患者的体液的样品，

-测定所述样品中标志物肽的水平，所述标志物肽选自proANP、 proBNP、proAVP、proADM、proET-1、PCT、PRX-4或其包含长度为 至少12个氨基酸的片段，以及

-将所述标志物肽的水平与具有非特定主诉的患者中获得严重病 症和/或死亡的风险或获得严重病症和/或死亡的预后相关联。

在一种实施方式中，非特定主诉被定义为不是急诊医生（EP）作 出基于证据的管理方案所针对的一组特定主诉的一部分的主诉的病 种。

严重病症可以被定义为可能危及生命或需要早期干预以防止健康 状况恶化的病症。

在本发明方法的优选实施方式中，风险评估或预后或分级是指获 得包括死亡的严重病症的风险，或者将患者分级成可能获得严重病症 和/或死亡的患者组或不可能获得包括死亡的严重病症的患者组。患者 的分级可以按照他们病症的严重性分级为可能获得严重病症和/或死亡 的患者组或不可能获得包括死亡的严重病症的患者组。

在一种优选实施方式中，患者没有之前已被诊断的原发疾病。这 意味着在所述非特定主诉发生之前，患者被认为是健康的。

在另一种优选实施方式中，在所述非特定主诉发生时，患者患有 原发疾病，可能是已经诊断的原发疾病。选自proANP、proBNP、 proAVP、proADM、proET-1、PCT、PRX-4或其包含长度为至少12个 氨基酸的片段的标志物肽的水平的测定，使得能够通过将所述水平与 具有非特定主诉的患者中获得严重病症和/或死亡的风险或获得严重病 症和/或死亡的预后相关联，而对具有非特定主诉的患者进行风险评估 或结果预后或分级，其中所述严重病症和/或死亡可能与（a）所述（诊 断的）原发疾病或（b）可能已被诊断或未被诊断的第二种其他疾病相 关联。这些非特定主诉可以被认为是与所述原发疾病相关的早期但非 特定的症状，或者是已经获得的第二种其他疾病的早期但非特定的症 状。

一位具有非特定主诉的患者可能表现出数种共存疾病。因此，患 者可能表现出多种病态，因此具有一种以上合并症。被纳入到研究中 的某些患者表现出多达11种合并症，包括慢性高血压、冠状动脉疾病、 痴呆症、糖尿病、脑血管疾病、慢性酒精中毒、抑郁症、COPD、任何 实体肿瘤、慢性心力衰竭、白血病、在最近3个月内摔倒、任何精神 障碍。

在本发明的上下文中，“严重病症”被定义为任何可能危及生命 的病症（例如心肌梗塞）或需要早期干预以防止健康状况恶化而引起 可能的发病、残疾或死亡的任何病症（例如严重低钠血症）。显然， 根据该定义，不应等待隐伏的严重病症的自然进程。此外，在初始ED 出现的一定时间后例如3天、5天、7天、10天、14天、20天、3周、 4周、30天、45天、60天、90天、3个月、6个月、1年后发生死亡 的任何病症，都被判断为严重病症。

在本文中，术语“结果”是指例如在一定时间后例如3天、5天、 7天、10天、14天、20天、3周、4周、30天、45天、60天、90天、 3个月、6个月、1年后患者的存活或包括死亡的严重病症的出现。

根据所述方法，具有非特定主诉的患者被归于在出现ED后1年 内、更优选6个月内、甚至更优选3个月内、甚至更优选60天内、最 优选30天内具有获得包括死亡的严重病症的风险。

在本发明中，术语“预后”是指预测对象（例如患者）的医学病 症将如何进展。这可以包括为所述对象估算恢复的几率或不良结果的 几率。

在本发明中，术语“风险评估”是指分配个体经历某些不良事件 的概率。由此，优选可以将个体归于某种风险类别，其中类别包括例 如高风险对低风险，或基于数值的风险类别例如风险类别1、2、3等。

在优选实施方式中，严重病症选自死亡、住院治疗或1CU收治。

在本文中提到时，在标志物肽及其前体的情形中，术语“片段” 是指可以从较大蛋白质或肽衍生的较小蛋白质或肽，因此，其包含较 大蛋白质或肽的部分序列。可以从较大蛋白质或肽通过将其一个或多 个肽键皂化来衍生所述片段。标志物肽proANP、proBNP、proET-1、 proADM、proAVP、过氧化物氧还蛋白-4（Peroxiredoxin-4）和PCT的 “片段”优选是指长度为至少12个氨基酸的片段。优选可以使用本文 中所描述的免疫测定法来检测这样的片段。

SEQ ID NO：l中示出了153个氨基酸的pre-pro-ANP的序列。在 切割掉N-端信号肽（25个氨基酸）和两个C-端氨基酸后，释放出proANP （SEQ ID NO：2）。该激素原被切割成28个氨基酸的成熟肽ANP、 也称为ANP（1-28）或α-ANP，以及氨基端片段ANP（1-98） （NT-proANP，SEQ ID NO：3）。中段proANP（MR-proANP）被定 义为NT-proANP或其包含proANP的至少第53-90位氨基酸残基（SEQ  ID NO：4）的任何片段。

在本发明方法的优选实施方式中，测定proANP前体片段 MR-proANP的水平。

SEQ ID NO：5中给出了肾上腺髓质素的前体肽（前肾上腺髓质素 原）的氨基酸序列。肾上腺髓质素原是指前肾上腺髓质素原的序列的 第22至185位氨基酸残基。SEQ ID NO：6中给出了肾上腺髓质素原 （pro-ADM）的氨基酸序列。MR-肾上腺髓质素原（MR-pro-ADM）是 指pre-pro-ADM的第45-92位氨基酸残基。SEQ ID NO：7中提供了 MR-pro-ADM的氨基酸序列。

在本发明方法的另一种优选实施方式中，测定proADM前体片段 MR-proADM的水平。

SEQ ID NO：8中给出了血管加压素的164个氨基酸的前体肽（前 血管加压素原）的序列。血管加压素原是指前血管加压素原的序列的 第29至164位氨基酸残基。SEQ ID NO：9中给出了血管加压素原的 氨基酸序列。血管加压素原被切割成成熟的血管加压素、后叶激素运 载蛋白II（Neurophysin II）和C-端血管加压素原（CT-proAVP或和肽 素）。和肽素是指前血管加压素原的第126至164位氨基酸残基。SEQ  ID NO：10中提供了和肽素的氨基酸序列。后叶激素运载蛋白II包含 前血管加压素原的第32至124位氨基酸残基，其序列被示出在SEQ ID  NO：11中。

在本发明方法的另一种优选实施方式中，测定proAVP前体片段 和肽素的水平。

SEQ ID NO：12中给出了内皮素-1的212个氨基酸的前体肽（前 内皮素原-1）的序列。Pro-ET-1是指pre-pro-ET-1的序列的第18至212 位氨基酸残基。SEQ ID NO：13中给出了pro-ET-1的氨基酸序列。 Pro-ET-1被切割成成熟的ET-1、big-ET-1和C-端proET-1 （CT-proET-1）。CT-proET-1是指pre-pro-ET-1的第168至212位氨 基酸残基。SEQ ID NO：14中提供了CT-proET-1的氨基酸序列。

在本发明方法的另一种优选实施方式中，测定proET-1前体片段 CT-proET-1的水平。

SEQ ID NO：15中给出了脑利钠肽的134个氨基酸的前体肽 （pre-pro-BNP）的序列。Pro-BNP是指pro-pro-BNP的第27至134位 氨基酸残基。SEQ ID NO：16中示出了pro-BNP的序列。Pro-BNP被 切割成N-端pro-BNP（NT-pro-BNP）和成熟的BNP。NT-pro-BNP包 含第27至102位氨基酸残基，其序列被示出在SEQ ID NO：17中。SEQ  ID NO：18示出了BNP的序列，其包含pre-pro-BNP肽的第103至134 位氨基酸残基。

在本发明方法的另一种优选实施方式中，测定proBNP前体片段 NT-proBNP的水平。

降钙素原是降钙素和钙抑肽的前体。SEQ ID NO：19中给出了PCT 1-116的氨基酸序列。

在本发明方法的另一种优选实施方式中，测定由第1至116或2 至116或3至116位氨基酸构成的PCT的水平。

PRX-4的氨基酸序列被显示在SEQ ID NO：20中。测定PRX-4 涵盖测定PRX-4和/或PRX-4的同源多聚体和/或PRX-4与一种或多种 其他过氧化物氧还蛋白的异源多聚体和/或PRX-4的片段。

在本发明方法的另一种优选实施方式中，测定所述样品中选自以 下的标志物肽的水平：proANP、proBNP、proAVP、proADM、proET-1、 PRX-4或其包含长度为至少12个氨基酸的片段。

在本发明方法的另一种优选实施方式中，测定至少两种选自 MR-proANP、和肽素、MR-proADM、CT-proET-1、PRX-4、NT-proBNP 和PCT的标志物肽的水平。

在本发明方法的另一种优选实施方式中，测定和肽素与PRX-4的 水平。

在本发明方法的另一种优选实施方式中，测定至少一种选自 MR-proANP、和肽素、MR-proADM、CT-proET-1、PRX-4、NT-proBNP 和PCT的标志物肽的水平，并与一种或多种选自以下的临床或实验室 参数或患者特征相组合：C反应蛋白（CRP）、肌酸酐、白蛋白、尿素、 肾小球滤过率（GFR）、白细胞计数（WBC）、肌钙蛋白、髓过氧化 物酶、新喋呤、GDF-15、ST2、胱抑素C、查尔森合并症指数（CCI）、 Katz ADL、年龄和性别。

在本发明方法的另一种优选实施方式中，测定和肽素与PRX-4的 水平，并与年龄和/或性别相组合。

在本发明方法的另一种优选实施方式中，测定和肽素与PRX-4的 水平，并与查尔森合并症指数相组合。

在本发明方法的另一种优选实施方式中，测定和肽素与PRX-4的 水平，并与Katz ADL相组合。

根据本发明的方法的一种优选实施方式，患者的分级是指患者的 管理，其包括决定收治到医院或重症监护病房、决定将患者转移到专 科医院或专科医院部门、决定将患者转移到专科医院或专科医院部门、 评估从重症监护病房或医院早期出院、或资源（例如医生和/或护理人 员、诊断工具、治疗工具）的分配。

查尔森合并症指数（CCI）预测可能患有各种合并病症例如心脏病、 AIDS或癌症（总共22种病症）的患者的1年死亡率（Charlson等，1987.J Chronic Dis40(5):373-83）。每种病症根据与该病症相关的死亡 风险而被分配有1、2、3或6的分值。然后将分值相加并给出预测死 亡率的总分值。

日常生活活动中的Katz独立性指数（Katz Index of Independence in  Activities of Daily Living）通常被称为Katz指数或Katz ADL，作为患 者独立执行日常生活活动的能力的度量，是评估功能状态的最适合的 工具。临床医生通常使用该工具来检测在执行日常生活活动中的问题 并据此来计划护理。该指数对在洗浴、穿衣、如厕、移动、节制和进 食6种功能中的表现的充分性进行等级排列。将患者在6种功能中的 每一种中的独立性评分为是/否。分值为6表示功能完全，4表示中度 受损，2以下表示严重功能受损（Katz和Akpom1976.Med Care14(5Suppl):116-8；Katz等，1970.Gerontologist10:20-30）。

当在本文中用于指称诊断和预后标志物的使用时，术语“相关联” 是指将患者中标志物的存在或量，与已知患有给定病症或已知具有给 定病症的风险的人中标志物的存在或量进行比较。可以将患者样品中 的标志物水平与已知与特定诊断相关的水平进行比较。样品的标志物 水平据称已经与诊断相关联；也就是说，技术人员可以使用该标志物 水平来确定患者是否具有特定类型的诊断，并做出相应应答。可选地， 可以将样品的标志物水平与已知与良好结果（例如不存在疾病等）相 关的标志物水平进行比较。在优选实施方式中，将一组标志物水平与 总体概率或特定结果相关联。

在本发明的情形中，术语“水平”是指从患者样品获取的标志物 肽的浓度（优选表示成重量/体积；w/v）。

非特定主诉的定义

特定的主诉通常提供关键信息，并允许产生工作诊断（working  diagnosis）或遵从预定的诊断方案。特定主诉本身在文献中是公认的， 并诊断方案通常是适用的（Marx JA,Hockberger R,Walls R.《Rosen急诊医学：概念与临床》（Rosen's Emergency Medicine:Concepts and  Clinical），第六版，St Louis主编，Mosby，2005；Siegenthaler W.《内科学中的差异诊断：从症状到诊断》（Differential Diagnosis in Internal  Medicine:From Symptom to Diagnosis），New York:Thieme MedicalPublishers;2007）.

与特定主诉相反，我们将NSC定义为不是一组特定主诉或体征的 一部分或者不能建立初始工作诊断的所有主诉的病种。有必要将NSC 定义为排除特定主诉后的剩余项，这是由于主动定义需要几乎无休止 地列举可能的非特定主诉。这种长且复杂的定义可能会将某些NSC患 者排除在外，因为他们的症状不能与预定义的清单精确匹配。对于患 者表现出NSC的情形，我们在我们的NSC定义的上下文中使用了术语 工作诊断，然而鉴于就医时的事实和发现，诊断是可能的。

图1以程序性方式概述了这种定义。在最优选实施方式中，非特 定主诉被定义为按照图1而被纳入的主诉。这意味着本发明的患者不 表现出下列主诉之一：疼痛（胸痛、腹痛、头痛、腿痛、关节痛、背 痛），呼吸困难，咳嗽，虚弱（局部），中风样症状，四肢（腿、手 臂）肿胀，腹泻，排尿困难，GCS<14，混乱，中毒，癫痫发作，出 血，晕厥，焦虑，精神病症状，自杀念头，皮肤病变，过敏性皮肤反 应，发热，眩晕，心悸，恶心伴有呕吐，外伤。此外，是否存在初始 评估（病史、体格检查、ECG读取）后引起标准化的病情检查或治疗 的主诉的问题，答案为否。此外，在所述患者中生命体征（体温、脉 搏率或心率、血压和呼吸率）都未超出范围。此外，在初始评估后不 能、特别是不能以足够的确定性建立工作诊断。

非特定主诉：定义端点

由于隐伏在表现出NSC之下的可能疾病的宽广范围，狭窄的疾病 特异性端点定义是不适合的。在具有NSC的患者中，ED医生更关心 病例鉴定任务，即将严重与不严重的结果或病症区分开。因此，我们 将严重病症定义为任何可能危及生命的病症（例如心肌梗塞）或需要 早期干预以防止健康状况恶化而引起可能的发病、残疾或死亡的任何 病症（例如严重低钠血症）。显然，根据该定义，不应等待隐伏的严 重病症的自然进程。此外，在初始ED出现的30天内发生的任何死亡， 都被判断为严重病症。

因此，我们的严重病症定义涵盖了详尽的清单（表1），该清单 是事先确定的，并在三项试点研究期间使用改进的Delphi技术对该清 单进行进一步的精选，在所述试点研究中积累了关于严重病症的经验。 如果在NSC的发展与结果检测之间存在密切的时间关系，则特别可能 存在NSC与潜在的严重病症之间的关联性。

阈值水平可以例如从Kaplan-Meier分析获得，在所述分析中，将 疾病的发生或严重病症和/或死亡的概率与群体中相应标志物的四分位 数相关联。根据该分析，标志物水平高于第75百分位数的对象获得本 发明的疾病的风险明显升高。该结果得到了对经典风险因子进行调整 的Cox回归分析的进一步支持。最高四分位数相比于所有其他对象， 与获得本发明疾病的风险或严重病症和/或死亡的概率的增加的关联性 显著更高。

其他优选的截止值是例如正常群体的第90、第95或第99百分位 数。通过使用比第75百分位数更高的百分位数，人们减少了鉴定到的 假阳性对象的数量，但人们可能错过对处于中度但仍然增加的风险中 的对象的鉴定。因此，人们可以根据以同时鉴定到“假阳性”为代价 来鉴定到大多数有风险的对象被认为更适合，还是以错过数个有中度 风险的对象为代价来主要鉴定到高风险的对象被认为更合适，来采纳 截止值。

通过使用个体的标志物水平值和其他实验室和临床预后参数来计 算个体风险的其他数学概率为例如NRI（净重新分类指数）或IDI（综 合鉴别指数）。所述指数可以按照Pencina的方法进行计算（Pencina MJ等，“评估新标志物的增加的预测能力：从ROC曲线下面积到重新分类及其他）（Evaluating the added predictive ability of a new marker:from area under the ROC curve to reclassification and beyond），Stat Med.2008:27:157-172）。

根据所述方法，当所述测定的标志物肽水平高于预定阈值水平时， 具有非特定主诉的患者被归于具有获得包括死亡的严重病症的风险。

优选情况下，标志物肽PCT的预定阈值水平在0.02ng/mL与0.5 ng/mL之间，更优选在0.02ng/mL与0.25ng/mL之间，甚至更优选在 0.02ng/mL与0.1ng/mL之间，甚至更优选在0.02ng/mL与0.06ng/mL 之间，最优选在0.02ng/mL与（低于）0.05ng/mL之间。在优选实施 方式中，当所述测定的PCT水平高于0.1ng/mL、优选高于0.05ng/mL、 更优选高于0.025ng/mL时，具有非特定主诉的患者被归于具有获得严 重病症的风险。

优选情况下，标志物肽PRX-4的预定阈值水平在3U/mL与11 U/mL之间，更优选在3U/mL与8U/mL之间，甚至更优选在3U/mL 与6U/mL之间，甚至更优选在3U/mL与5U/mL之间，最优选在3U/mL 与低于5U/mL之间。在优选实施方式中，当所述测定的PRX-4水平高 于11U/mL、优选高于6U/mL、更优选高于3U/mL时，具有非特定主 诉的患者被归于具有获得严重病症的风险。

优选情况下，标志物肽MR-proANP的预定阈值水平在80pmol/L 与430pmol/L之间，更优选在80pmol/L与330pmol/L之间，甚至更 优选在80pmol/L与185pmol/L之间，甚至更优选在80pmol/L与140 pmol/L之间，最优选在80pmol/L与低于140pmol/L之间。在优选实 施方式中，当所述测定的MR-proANP水平高于430pmol/L、优选高于 185pmol/L、更优选高于80pmol/L时，具有非特定主诉的患者被归于 具有获得严重病症的风险。

优选情况下，标志物肽和肽素的预定阈值水平在5pmol/L与80 pmol/L之间，更优选在5pmol/L与40pmol/L之间，甚至更优选在5 pmol/L与30pmol/L之间，甚至更优选在5pmol/L与20pmol/L之间， 最优选在5pmol/L与10pmol/L之间。在优选实施方式中，当所述测定 的和肽素水平高于80pmol/L、优选高于30pmol/L、更优选高于10 pmol/L、甚至更优选高于5pmol/L时，具有非特定主诉的患者被归于 具有获得严重病症的风险。

优选情况下，标志物肽MR-proADM的预定阈值水平在0.75 nmol/L与3nmol/L之间，更优选在0.75nmol/L与2.0nmol/L之间，甚 至更优选在0.75nmol/L与1.5nmol/L之间，最优选在0.75nmol/L与 1.0nmol/L之间。在优选实施方式中，当所述测定的MR-proADM水平 高于3nmol/L、优选高于2nmol/L、更优选高于1.5nmol/L、甚至更优 选高于1.0nmol/L、甚至更优选高于0.75nmol/L时，具有非特定主诉 的患者被归于具有获得严重病症的风险。

当在本文中提到时，“测定法”或“诊断测定法”可以是在诊断 学领域中应用的任何类型的测定法。这样的测定法可以基于待检测被 分析物与一种或多种具有一定亲和性的捕获探针的结合。对于捕获分 子与靶分子或目标分子之间的相互作用来说，亲和常数优选大于10⁸M^-1。

在本发明的情形中，“捕获分子”是可用于结合来自样品的靶分 子或目标分子、即被分析物（例如，在本发明的情形中是心血管肽） 的分子。因此，捕获分子必须在空间上和表面特征例如表面电荷、疏 水性、亲水性、路易斯供体和/或受体是否存在等方面进行适当塑造， 以特异性结合靶分子或目标分子。因此，例如可以由捕获分子与靶分 子或目标分子之间的离子、范德华、π-π、σ-π、疏水或氢键相互作用或 两种以上上面提到的相互作用的组合来介导所述结合。在本发明的情 形中，捕获分子例如可以选自核酸分子、糖类分子、PNA分子、蛋白 质、抗体、肽或糖蛋白。优选情况下，捕获分子是抗体，包括与靶分 子或目标分子具有足够亲和性的抗体片段，并包括重组抗体或重组抗 体片段，以及所述抗体或源自于其长度为至少12个氨基酸的变体链的 片段的化学和/或生物化学修饰的衍生物。

优选的检测方法包括各种形式的免疫测定法，例如放射免疫测定 法（RIA）、化学发光和荧光免疫测定法、酶联免疫测定法（ELISA）、 基于Luminex的珠子阵列、蛋白质微阵列测定法，以及快速检测形式 例如免疫层析试纸条试验。

测定法可以是均相或非均相测定法、竞争和非竞争性测定法。在 特别优选的实施方式中，测定法是夹心测定法的形式，其是非竞争性 免疫测定法，其中待检测和/或定量的分子与第一抗体结合，并与第二 抗体结合。第一抗体可以被结合到固相例如珠子、孔或其他容器的表 面、芯片或试纸条上，并且第二抗体是例如标记有染料、放射性同位 素或反应性或催化活性部分的抗体。然后通过适合的方法测定与被分 析物结合的标记抗体的量。“夹心测定法”所涉及的通用组合物和步 骤是已确立的，并且是技术人员已知的。（《免疫测定手册》（The  Immunoassay Handbook），David Wild主编，Elsevier LTD,Oxford;第三版（2005年5月），ISBN-13:978-0080445267；Hultschig C等，Curr  Opin Chem Biol.2006Feb;10(1):4-10.PMID:16376134，在此引为参 考）。

在特别优选的实施方式中，测定法包含两种捕获分子，优选为抗 体，它们都作为分散体存在于液体反应混合物中，其中第一标记组分 连接于第一种捕获分子，其中所述第一标记组分是基于荧光或化学发 光淬灭或扩增的标记系统的一部分，并且所述标记系统的第二标记组 分连接于第二种捕获分子，使得当两种捕获分子与被分析物结合后产 生可测定的信号，允许对在包含样品的溶液中形成的夹心复合物进行 检测。

在甚至更优选的情况下，所述标记系统包含稀土穴状化合物或稀 土螯合物与荧光染料或化学发光染料特别是花青类型的染料的组合。 在本发明的情形中，基于荧光的测定法包含使用染料，所述染料例如 可以选自FAM（5-或6-羧基荧光素）、VIC、NED、荧光素、荧光素 异硫氰酸酯（FITC）、IRD-700/800、花青染料例如CY3、CY5、CY3.5、 CY5.5、Cy7、呫吨、6-羧基-2’,4’,7’,4,7-六氯荧光素（HEX）、TET、 6-羧基-4’,5’-二氯-2’,7’-二甲氧基荧光素（JOE）、N,N,N',N'-四甲基-6- 羧基罗丹明（TAMRA）、6-羧基-X-罗丹明（ROX）、5-羧基罗丹明-6G （R6G5）、6-羧基罗丹明-6G（RG6）、罗丹明、罗丹明绿、罗丹明红、 罗丹明110、BODIPY染料例如BODIPY TMR、俄勒冈绿、香豆素类 例如伞形酮、苯甲亚胺类例如Hoechst33258；菲啶类例如德克萨斯红、 亚基马黄、Alexa Fluor、PET、溴化乙锭、吖啶染料、咔唑染料、吩噁 嗪染料、卟啉染料、聚甲炔染料等。

在本发明的情形中，基于化学发光的测定法包含使用基于化学发 光材料的物理原理的染料，所述原理被描述在Kirk-Othmer的《化学技术百科全书》（Encyclopedia of chemical technology）第四版，J.I.Kroschwitz执行主编，M.Howe-Grant编辑，John Wiley&Sons,1993,vol.15,p.518-562中，在此引为参考，包括在551-562页中的引用文献。 优选的化学发光染料是吖啶酯。

当在本文中使用时，术语“样品”是指出于对目标对象例如患者 进行诊断、预后或评估的目的而获得的体液样品。优选的测试样品包 括血液、血清、血浆、脑脊液、尿液、唾液、痰液和胸腔积液。此外， 本领域的技术人员将会认识到，某些测试样品在分级或纯化步骤例如 将全血分离成血清或血浆组分后，可以更容易地进行分析。

因此，在本发明的优选实施方式中，样品选自血液样品、血清样 品、血浆样品、脑脊液样品、唾液样品和尿液样品，或上面提到的任 何样品的提取物。优选情况下，样品是血液样品，最优选为血清样品 或血浆样品。

优选情况下，通过使可能含有PRX-4的血细胞与血浆或血清定量 分离的方式来获得血浆或血清样品。这可以通过例如将血液样品以至 少3.000g离心至少20分钟来实现。

实施例

巴塞尔非特定主诉研究（BANC研究）

研究设计

BANC研究是延迟型横断诊断研究。实施了30天至6个月的前瞻 性随访以鉴定、确定和指定最可能引起NSC的隐伏病症（Knottnerus2002.J Clin Epidemiol55(12):1201-06）。研究方案得到当地伦理委员 会的批准（EKBB73/07）。

研究设置和群体

本研究在瑞士巴塞尔大学医院（University Hospital of Basel, Switzerland）的急诊室进行。该医院是700张床位的一级和三级护理大 学医院，该ED每年收治超过41000位具有典型ED病例混合的患者。 对从2007年5月至2007年11月被巴塞尔大学医院的ED收治的所有 患者进行连续登记，以便获得具有NSC的ED自参比和参比患者的源 群体的样品。

研究方案

对所有急诊严重性指数（ESI）为2或3的成年无外伤患者（Gilboy等，2005.《急诊严重性指数》第四版《执行手册》（Emergency Severity  Index,Version4:Implementation Handbook.）Rockville:Agency for  Healthcare Research and Quality）进行筛查以供纳入（图1）。ESI为4 或5的患者被排除，因为根据定义，他们的资源利用率低。此外，在 ESI4和ESI5患者中，通常不执行详尽的病情检查，因为在大多数情 况下可以产生工作诊断。排除具有特定主诉（例如胸痛）或具有提示 ED医生可以使用基于证据的管理方案进行管理的工作诊断的临床表现 的患者（Laifer和Bingisser2009.Notfall-Standards,Notfallstation,Basel.5.Auflage ISBN978-3-033-02315-4；《EuSEM专责小组，欧洲急诊医疗课程》（EuSEM  Task Force.European Curriculum for Emergency Medicine），由欧洲紧急医学学会理事会（Council of the European Society for Emergency  Medicine）和UEMS紧急医学多学科联合委员会（UEMS  Multidisciplinary Joint Committee on Emergency Medicine）批准的EuSEM专责小组课程文件，2008，可以在 http://www.eusem.org/downloads/pdfs/Emergency_Medicine_curruculum_ final_draft.pdf.处获得）。在这样的排除的情况下，要求医生将“特定 主诉”或“工作诊断”与它们适用的相应的管理方案一起标出（Laifer和Bingisser2009.Notfall-Standards,Notfallstation,Basel.5.Auflage ISBN978-3-033-02315-4）（图1）。 在收治时表现出最近外部实验室结果或特定ECG变化（例如STEMI） 的任何患者都是不合格的。类似地，被ED收治并可能在接下来的30 天内死亡的具有已知终端医学病症（例如末期癌症）的患者也是不合 格的。如果患者的血流动力学不稳定或者如果关键参数明显超出正常 范围（例如收缩压<90mmHg，心率>120/min，体温>38.4或<35.6 ℃，呼吸速率>30/min），则所述患者被排除，因为对于该患者组存在 管理方案（ESI1）。此外，从其他医院转诊的所有患者都被排除。

ED住院医生通过讲座和现场培训接受关于如何正确应用BANC 方案的研究前训练。用于纳入程序的清单被公开展示在我们的ED中。 然后将所有可能合格的患者进行前瞻性筛查以进行登记。筛查起始于 由认证的ED鉴别分类护士进行ESI鉴别分类和生命体征评估，由ED 住院医生进行病史获取、体格检查和心电图读取。在筛查时实验室或 成像结果不可用。为了调查BANC纳入程序，所有被纳入的患者由 BANC专家组医生进行检查和证实。

患者数据

获得下列患者数据作为ED收治期间的患者数据，并将其登记在 患者的病例报告表上：人口统计基线数据，鉴别分类数据，主诉，生 命体征，格拉斯哥昏迷量表评估，医疗史，体格检查和心电图读取结 果。通过病床边患者访谈获得关于根据Katz指数的日常生活活动（Katz和Akyom1976.Med Care14（5Suppl）:116-8）、最近活动的下降或降 低、最近一年期间的住院治疗、体重指数和体重减轻、酒精饮料的消 耗和认知（Sunderland等，1989.J Am Geriatr Soc37（8）:725-9）的 信息。数种附加变量包括合并症的完整清单（Charlson等，1987.J  Chronic Dis40（5）:373-83）和药物的使用，其从初始医生报告收集 到。患者接受大范围病情检查，并由负责的ED医生酌情治疗。

患者随访和结果确定

我们从患者的一级护理医生或当住院治疗超过30天和6个月时间 长度时从出院报告分别获得30天和6个月的随访数据。两位对患者的 基线数据不知情的内科认证医生（结果评估者）检查所有结果数据。 主要目标结果是在30天随访期间发生的严重病症。此外，我们对组进 行细分类：“急性新病症”被定义为新诊断的疾病（例如肺炎）。“慢 性病症恶化”被定义为先前存在的疾病的恶化，最终导致进一步药物 治疗或其他干预（例如慢性心力衰竭的恶化）。“慢性病症中的急性 事件”被定义为先前存在的病症的意料之外的急性事件或并发症（例 如患有已知癌症的患者中的肺栓塞）。如果症状提示是医源性的或由 公知的药物副作用引起的，我们将它们细分为“医源性”或“疗法诱 导的”，而不论治疗是由医生还是患者开始或中断。最后，如果在出 院和完成随访后没有身体疾病能够解释患者的NSC，则选择非器官或 功能性的分类。

结果评估者定期检查所有患者记录，以便按照《国际疾病分类和 相关健康问题》第10版（10th international classification of diseases and  related health problems）（ICD-10）建立最终诊断。根据这些指南，“主 要病症”被选择为与患者的初始表象最紧密相关、接受最大量治疗资 源的病症。如果不能做出诊断，则使用描述性诊断例如在ICD-10的R 章中所描述的，选择主要症状或异常发现作为“主要病症”。

在两位结果评估者的判断不一致的情况下，在BANC专家组中对 患者的记录进行检查并寻求共识。专家组由在内科学领域具有至少10 年经验的委员会认证的两位医生构成。

巴塞尔非特定主诉研究III（BANC研究III）

研究设计

BANC研究是延迟型横断诊断研究。实施了30天的前瞻性随访。 研究方案得到当地伦理委员会的批准。

研究设置和群体

本研究在瑞士巴塞尔大学医院（University Hospital of Basel, Switzerland）的急诊室进行（参见BANC研究）。对从2009年4月至 2010年12月被巴塞尔大学医院的ED收治的所有患者进行连续登记， 以便获得具有NSC的ED自参比和参比患者的源群体的样品。

研究方案/患者数据/患者随访和结果确定

研究方案、结果确定、获得的患者数据和患者的随访（30天）， 与在BANC研究的相应部分中所描述的相同。

标志物测定

MR-proANP

使用新的全自动夹心免疫测定系统在B.R.A.H.M.S KRYPTOR （B.R.A.H.M.S GmbH,Hennigsdorf/Berlin，德国）上检测MR-proANP。 这种随机存取分析仪使用灵敏的时间分辨扩增穴状化合物发射（Time  Resolved Amplified Cryptatc Emission）（TRACE）技术，该技术基于 两个荧光团即铕穴状化合物与XL665之间的非放射活性转移。该自动 化测定法基本上是基于夹心化学发光测定法，夹心化学发光测定法已 在别处进行详细描述（Morgenthaler等，2004.Clin Chem50:234-6）， 并且已被用于其他研究中（Khan等，2008.J Am Coll Cardiol51:1857-64；Gegenhuber等，2006.Clin Chem52：827-31）。

对于MR-proANP检测来说，将14μl患者血清温育14分钟。测 定范围是0-10000pmol/L，检测限是2.1pmol/L，定量限是4.5pmol/L。 测定的内部CV是1.2%，实验室间CV为5.4%。该测定法使用与参比 测定法（Morgenthaler等，2004.Clin Chem50：234-6）相同的抗体对， 并且两种测定系统之间的相关性为r=0.99。

MR-proADM

使用新的全自动夹心免疫测定系统在B.R.A.H.M.S KRYPTOR （B.R.A.H.M.S GmbH,Hennigsdorf/Berlin，德国）上检测MR-proADM （Caruthel等，2009，Clin Biochem42:725-8）。这种随机存取分析仪 使用灵敏的时间分辨扩增穴状化合物发射（Time Resolved Amplified  Cryptatc Emission）（TRACE）技术，该技术基于两个荧光团即铕穴状 化合物与XL665之间的非放射活性转移。该自动化测定法基本上是基 于夹心化学发光测定法，夹心化学发光测定法已在别处进行详细描述 （Morgenthaler等，2005Clin Chem51:1823-9），并且已被用于其他研 究中（Khan等，2007.J Am Coll Cardiol49：1525-32；Gegenhuber等，2007.J Card Fail13:42-9）。

对于MR-proADM检测来说，将26μl血清温育29分钟。测定范 围是0-100nmol/L，检测限和定量限分别为0.05和0.23nmol/L。测定 的内部CV是1.9%，实验室间CV为9.8%。该测定法使用与在别处详 细描述的（Morgenthaler等，2005.Clin Chem51：1823-9）相同的抗体 对，并且两种测定系统之间的相关性为r=0.99。

CT-proET-1

可以使用检测下限为0.4pmol/L的化学发光夹心免疫测定法来测 定CT-proET-1水平（Papassotiriou等，2006.Clin Chem52：1144-51）。 在326位健康个体（150位男性和176位女性）中，CT-proET-1值符合 高斯分布，平均值（SD）为44.3（10.6）pmol/L，范围为10.5-77.4pmol/L。 男性和女性中CT-proET-1平均浓度没有显著差异，但与年龄显著相关。 测定的内部不精确性（CV）<5%，实验室间CV<10%。

和肽素

使用检测下限为1.7pmol/L的化学发光夹心免疫测定法来测定 CT-proAVP（和肽素）水平（Morgenthaler等，2006.Clin Chem52:112-9）。 在359位健康个体（153位男性和206位女性）中，CT-proAVP水平的 中位数为4.2pmol/L，范围为1.0-13.8pmol/L。在男性和女性之间 CT-proAVP的浓度中位数显著不同。在CT-proAVP水平与年龄之间没 有关联性。对于>2.25pmol/L的样品来说，实验室间CV<20%，测定 的内部CV<10%。

过氧化物氧还蛋白-4

使用最近描述的新开发的化学发光夹心免疫测定法来测定过氧化 物氧还蛋白-4（PRX-4）（Schulte等，2010.Clin Chim Acta411:1258-1263）。功能测定灵敏度（测定间CV<20%）为0.51arb.U/L。 在272位健康献血者（44%男性）中，PRX-4水平的中位数为0.71 arb.U/L，范围为0.15-5.1arb.U/L。在男性和女性之间存在弱的显著差 异，并且在Prx-4水平与年龄之间没有关联性。

降钙素原

使用功能测定灵敏度为0.007ng/mL的可商购的超灵敏试验系统 来测定PCT，所述试验系统被描述在Morgenthaler等中（Morgenthaler等，2002.Clin Chem48:788-790）。

数据分析

执行描述性分析以概述研究群体的基线特征并描述隐伏在严重或 非严重病症之下的疾病表象。为连续变量给出的描述性统计数据是中 位数（范围），对于类别变量来说，我们报告了n（百分数）。使用单 个标志物值的盒须图来概述标志物值在特定亚组中的分布。为了预测 30天或6个月内的死亡，使用了Cox回归模型。为了说明不同标志物 的死亡率预测能力，我们计算了Kaplan-Meier存活曲线，并通过标志 物的三分位数对患者进行分级。此外，进行了时间依赖性受试者工作 特征（ROC）作图。对于二元结果（死亡、严重病症等）来说，当其 截止值变化时，受试者工作特征是灵敏度对（1-特异性）的图。对于所 有其他结果来说，执行逻辑回归模型以及ROC分析和作图。为所选的 截止值计算灵敏度（通过生物标志物被正确鉴定为真阳性的真阳性比 例）和特异性（被正确鉴定的阴性的比例）。

结果

研究群体（BANC研究）：

研究中纳入了总共438位患者。这些患者中的28位（6.4%）和 53位（12.1%）分别在30天和6个月内死亡。256位患者在30天内具 有如表1中所定义的严重结果（58.4%）。177位患者住院治疗≥30天 （40.4%），所有患者中有188位被重症监护病房（ICU）收治≥10天 （42.9%）。

研究群体的基线特征被显示在表2中。年龄中位数为80岁（范围 为22-101岁），85.6%的对象年龄超过64岁。研究群体的几乎三分之 二（65%）是女性。研究患者的合并症中位数为5，并且每日服用5种 不同的药物。查尔森合并症指数的中位数为2（Charlson等，1987.JChronic Dis.40:373-383），并且43.4%的研究群体在至少一种日常生 活活动（ADL）中是依赖性的（Katz等，1970.Gerontologist10:20-30）。 大部分（97.7%）患者被分类为ESI3，因此在ED中需要一种以上的外 部资源。

用于预测30天内死亡的单个标志物值的盒须图被示出在图2至5 中。在非存活者中与存活者中相比，相应的MR-proANP、和肽素、PCT 和PRX-4浓度显著更高（Kruskal-Wallis检验，对于所有四种标志物肽 来说p<0.001）。

单个标志物的受试者工作特征被示出在图6至9（用于预测30天 内死亡）、图14至17（用于预测30天内包括死亡的严重结果）和图 18至21（用于预测6个月内死亡）中。使用不同的截止值为每种标志 物确定相应的灵敏度和特异性，以分别预测30天和6个月内的死亡， 以及预测30天内的严重结果（表8至11）。

为了说明标志物肽的预后价值，为每种单个标志物计算了 Kaplan-Meier存活曲线，将患者根据相应的标志物浓度分成三分位数。 Kaplan-Meier存活曲线分别被示出在图10至13（用于30天内死亡） 和图22至25（用于6个月内死亡）中。如图10至13中所示，当出现 在ED时的MR-proANP、和肽素、PCT和PRX-4浓度分别处于第三三 分位数中时，与第一和第二三分位数相比，观察到更高的30天内死亡 率。类似地，如图22至25中所示，当出现在ED时的MR-proANP、 和肽素、PCT和PRX-4浓度分别处于第三三分位数中时，与第一和第 二三分位数相比，观察到更高的6个月内死亡率。

使用单变量和多变量Cox回归分析评估了标志物肽的总体预后准 确性（表3至7）。在单变量模型中，每种标志物肽被用于a）预测在 出现后30天内的死亡（表3），b）预测在出现后30天内严重病症的 发生（表4），c）预测在出现后30天内ICU收治（在ICU停留至少 10天）（表5），d）预测在出现后住院治疗至少30天（表6），以及 预测在出现后6个月内的死亡（表7）。

例如，为了预测患者出现在ED后30天内的死亡，PRX-4（C-指 数=0.749）与和肽素（C-指数=0.724）相比显示出更好的预测（表3）。 包括PRX-4与和肽素的双变量模型（C-指数=0.783）能够得到比单变 量PRX-4模型（p<0.001）与和肽素模型（p<0.001）显著更好的预测。 除了年龄和性别之外还包括PRX-4与和肽素的模型，比仅使用两种标 志物肽的模型显著更好（增加的χ²为4.65）。此外，向Katz ADL或查 尔森合并症指数（CCI）的单变量模型添加两种标志物肽PRX-4与和肽 素，给出了比单独或组合使用两种标志物肽显著更好的结果，其中 PRX-4、和肽素与CCI相组合的模型的C-指数为0.788，PRX-4、和肽 素与Katz ADL相组合的模型的C-指数为0.807（表3）。

研究群体（BANC研究III）：

研究中纳入了总共504位患者。年龄中位数为82岁，196位患者 （38.9%）是男性。这些患者中的33位（6.5%）在30天内死亡。276 位患者在30天内具有如表1中所定义的严重结果（54.8%）。所有患 者中有203位被重症监护病房（ICU）收治≥10天（40.3%）。

研究群体的基线特征被显示在表12中。年龄中位数为82岁（范 围为75-87岁），88.9%的对象年龄超过64岁。研究群体的几乎三分之 二（61.1%）是女性。查尔森合并症指数的中位数为2（Charlson等，1987.J Chronic Dis.40:373-383），并且54.5%的研究群体在至少一种 日常生活活动（ADL）中是依赖性的（Katz等，1970.Gerontologist10:20-30）。

用于预测30天内死亡的单个标志物值的盒须图被示出在图26至 30中。在非存活者中与存活者中相比，相应的MR-proANP、和肽素、 PCT、PRX-4和MR-proADM浓度显著更高（Kruskal-Wallis检验，对 于所有五种标志物肽来说p<0.001）。

单个标志物的受试者工作特征，对于30天内死亡的预测来说被示 出在图31至35中，对于30天内包括死亡的严重结果的预测来说被示 出在图41至45中。使用不同的截止值为MR-proADM确定相应的灵 敏度和特异性，以预测30天内的死亡以及预测30天内的严重结果（表 13）。用于分别为MR-proANP、和肽素、PCT和PRX-4确定相应的灵 敏度和特异性以预测30天内的死亡和严重结果的截止值，与在BANC 研究中获得的值相似（数据未示出）。

为了说明标志物肽的预后价值，为每种单个标志物计算了 Kaplan-Meier存活曲线，将患者根据相应的标志物浓度分成三分位数。 Kaplan-Meier存活曲线被示出在图36至40中（用于30天内死亡）。 如图36至40中所示，当出现在ED时的MR-proANP、和肽素、PCT、 PRX-4和MR-proADM浓度分别处于第三三分位数中时，与第一和第 二三分位数相比，观察到更高的30天内死亡率。

使用单变量和多变量Cox回归分析评估了标志物肽的总体预后准 确性（表14、15和16）。在单变量模型中，每种标志物肽被用于a） 预测在出现后30天内的死亡（表14），b）预测在出现后30天内ICU 收治（在ICU停留至少10天）（表15），以及c）预测在出现后30 天内严重病症的发生（表16）。

例如，为了预测患者出现在ED后30天内的死亡，PRX-4（C-指 数=0.719）与和肽素（C-指数=0.723）相比显示出相似的预测（表14）。 包括PRX-4与和肽素的双变量模型（C-指数=0.76）能够得到比单变量 PRX-4模型（p<0.001）与和肽素模型（p<0.001）显著更好的预测。向 Katz ADL的单变量模型添加两种标志物肽PRX-4与和肽素，给出了比 单独或组合使用两种标志物肽显著更好的结果，其中C-指数为0.819。

附图说明

图1：在BANC研究和BANC研究III中具有非特定主诉的患者 的鉴定。

图2：在用于预测具有NSC的患者在30天内死亡的MR-proANP 值的盒须图（BANC研究）。

图3：在用于预测具有NSC的患者在30天内死亡的和肽素值的盒 须图（BANC研究）。

图4：在用于预测具有NSC的患者在30天内死亡的PCT值的盒 须图（BANC研究）。

图5：在用于预测具有NSC的患者在30天内死亡的PRX-4值的 盒须图（BANC研究）。

图6：在用于预测具有NSC的患者在30天内死亡的MR-proANP 的ROC图（AUC=0.67）（BANC研究）。

图7：在用于预测具有NSC的患者在30天内死亡的和肽素的ROC 图（AUC=0.71）（BANC研究）。

图8：在用于预测具有NSC的患者在30天内死亡的PCT的ROC 图（AUC=0.70）（BANC研究）。

图9：在用于预测具有NSC的患者在30天内死亡的PRX-4的ROC 图（AUC=0.73）（BANC研究）。

图10：由具有NSC的患者的MR-proANP的三分位数产生的 Kaplan-Meier存活曲线（30天内死亡）（BANC研究）。

图11：由具有NSC的患者的和肽素的三分位数产生的 Kaplan-Meier存活曲线（30天内死亡）（BANC研究）。

图12：由具有NSC的患者的PCT的三分位数产生的Kaplan-Meier 存活曲线（30天内死亡）（BANC研究）。

图13：由具有NSC的患者的PRX-4的三分位数产生的 Kaplan-Meier存活曲线（30天内死亡）（BANC研究）。

图14：用于预测具有NSC的患者在30天内的严重结果的 MR-proANP的ROC图（AUC=0.61）（BANC研究）。

图15：用于预测具有NSC的患者在30天内的严重结果的和肽素 的ROC图（AUC=0.64）（BANC研究）。

图16：用于预测具有NSC的患者在30天内的严重结果的PCT的 ROC图（AUC=0.67）（BANC研究）。

图17：用于预测具有NSC的患者在30天内的严重结果的PRX-4 的ROC图（AUC=0.59）（BANC研究）。

图18：用于预测具有NSC的患者在6个月内死亡的MR-proANP 的ROC图（AUC=0.59）（BANC研究）。

图19：用于预测具有NSC的患者在6个月内死亡的和肽素的ROC 图（AUC=0.66）（BANC研究）。

图20：用于预测具有NSC的患者在6个月内死亡的PCT的ROC 图（AUC=0.62）（BANC研究）。

图21：用于预测具有NSC的患者在6个月内死亡的PRX-4的ROC 图（AUC=0.68）（BANC研究）。

图22：由具有NSC的患者的MR-proANP的三分位数产生的 Kaplan-Meier存活曲线（6个月内死亡）（BANC研究）。

图23：由具有NSC的患者的和肽素的三分位数产生的 Kaplan-Meier存活曲线（6个月内死亡）（BANC研究）。

图24：由具有NSC的患者的PCT的三分位数产生的Kaplan-Meier 存活曲线（6个月内死亡）（BANC研究）。

图25：由具有NSC的患者的PRX-4的三分位数产生的 Kaplan-Meier存活曲线（6个月内死亡）（BANC研究）。

图26：用于预测具有NSC的患者在30天内死亡的MR-proANP 值的盒须图（BANC研究III）。

图27：用于预测具有NSC的患者在30天内死亡的和肽素值的盒 须图（BANC研究III）。

图28：用于预测具有NSC的患者在30天内死亡的PCT值的盒须 图（BANC研究III）。

图29：用于预测具有NSC的患者在30天内死亡的PRX-4值的盒 须图（BANC研究III）。

图30：用于预测具有NSC的患者在30天内死亡的MR-proADM 值的盒须图（BANC研究III）。

图31：用于预测具有NSC的患者在30天内死亡的MR-proANP 的ROC图（AUC=0.697）（BANC研究III）。

图32：用于预测具有NSC的患者在30天内死亡的和肽素的ROC 图（AUC=0.723）（BANC研究III）。

图33：用于预测具有NSC的患者在30天内死亡的PCT的ROC 图（AUC=0.69）（BANC研究III）。

图34：用于预测具有NSC的患者在30天内死亡的PRX-4的ROC 图（AUC=0.719）（BANC研究III）。

图35：用于预测具有NSC的患者在30天内死亡的MR-proADM 的ROC图（AUC=0.732）（BANC研究III）。

图36：由具有NSC的患者的MR-proANP的三分位数产生的 Kaplan-Meier存活曲线（30天内死亡）（BANC研究III）。

图37：由具有NSC的患者的和肽素的三分位数产生的 Kaplan-Meier存活曲线（30天内死亡）（BANC研究III）。

图38：由具有NSC的患者的PCT的三分位数产生的Kaplan-Meier 存活曲线（30天内死亡）（BANC研究III）。

图39：由具有NSC的患者的PRX-4的三分位数产生的 Kaplan-Meier存活曲线（30天内死亡）（BANC研究III）。

图40：由具有NSC的患者的MR-proADM的三分位数产生的 Kaplan-Meier存活曲线（30天内死亡）（BANC研究III）。

图41：用于预测具有NSC的患者在30天内的严重结果的 MR-proANP的ROC图（AUC=0.706）（BANC研究III）。

图42：用于预测具有NSC的患者中在30天内的严重结果的和肽 素的ROC图（AUC=0.722）（BANC研究III）。

图43：用于预测具有NSC的患者在30天内的严重结果的PCT的 ROC图（AUC=0.73）（BANC研究III）。

图44：用于预测具有NSC的患者在30天内的严重结果的PRX-4 的ROC图（AUC=0.694）（BANC研究III）。

图45：用于预测具有NSC的患者在30天内的严重结果的 MR-proADM的ROC图（AUC=0.732）（BANC研究III）。

表

表1：严重病症的判断标准（在BANC研究和BANC研究III中）

表2：患者的基线特征（BANC研究）

特征 n（%） 总数 438 男性 154（35%） 女性 284（65%） 年龄，中位数（范围） 80（22-101） 年龄≥65 375（85.6%） ESI类别   2 10（2.3%） 3 428（97.7%） 合并症；中位数（范围） 5（0-11） 查尔森合并症指数；中位数（范围） 2（0-13） 每日服用药物的数量；中位数（范围） 5（0-17）

Katz后ADL；中位数 6 Katz指数<6 190（43.4%）

表3：30天内死亡的预测（BANC研究）

表4：30天内严重病症的预测（BANC研究）

表5：30天内ICU收治（在ICU停留≥10天）的预测（BANC研究）

表6：住院治疗（≥30天）的预测（BANC研究）

表7：6个月内死亡的预测（BANC研究）

表8：在具有NSC的患者收治时测定的不同MR-proANP截止值对30 天/6个月内死亡的预测和30天内包括死亡的严重病症的预测的灵敏度 和特异性（单位为%）（BANC研究）

表9：在具有NSC的患者收治时测定的不同和肽素截止值对30天/6个 月内死亡的预测和30天内包括死亡的严重病症的预测的灵敏度和特异 性（单位为%）（BANC研究）

表10：在具有NSC的患者收治时测定的不同PCT截止值对30天/6个 月内死亡的预测和30天内包括死亡的严重病症的预测的灵敏度和特异 性（单位为%）（BANC研究）

表11：在具有NSC的患者收治时测定的不同PRX-4截止值对30天/6 个月内死亡的预测和30天内包括死亡的严重病症的预测的灵敏度和特 异性（单位为%）（BANC研究）

表12：患者的基线特征（BANC研究III）

表13：在具有NSC的患者收治时测定的不同MR-proADM截止值对30 天内死亡的预测和30天内包括死亡的严重病症的预测的灵敏度和特异 性（单位为%）（BANC研究III）

表14：30天内死亡的预测（BANC研究III）

表15：30天内ICU收治（在ICU停留≥10天）的预测（BANC研究III）

图16：30天内严重病症的预测（BANC研究III）

序列：

SEQ ID NO：1（pre-pro-ANP的氨基酸序列）：

1   MSSFSTTTVS FLLLLAFQLL GQTRANPMYN AVSNADLMDF KNLLDHLEEK

51  MPLEDEVVPP QVLSEPNEEA GAALSPLPEV PPWTGEVSPA QRDGGALGRG

101 PWDSSDRSAL LKSKLRALLT APRSLRRSSC FGGRMDRIGA QSGLGCNSFR

151 YRR

SEQ ID NO：2（pro-ANP的氨基酸序列）：

1   NPMYNAVSNA DLMDFKNLLD HLEEKMPLED EVVPPQVLSE PNEEAGAALS

51  PLPEVPPWTG EVSPAQRDGG ALGRGPWDSS DRSALLKSKL RALLTAPRSL

101 RRSSCFGGRM DRIGAQSGLG CNSFRY

SEQ ID NO：3（NT-proANP的氨基酸序列）：

1  NPMYNAVSNA DLMDFKNLLD HLEEKMPLED EVVPPQVLSE PNEEAGAALS

51 PLPEVPPWTG EVSPAQRDGG ALGRGPWDSS DRSALLKSKL RALLTAPR

SEQ ID NO：4（proANP的第53-90位氨基酸的氨基酸序列）：

1 PEVPPWT GEVSPAQRDG GALGRGPWDS SDRSALLKSK L

SEQ ID NO：5（pre-pro-ADM的氨基酸序列）：

1   MKLVSVALMY LGSLAFLGAD TARLDVASEF RKKWNKWALS RGKRELRMSS

51  SYPTGLADVK AGPAQTLTRP QDMKGASRSP EDSSPDAARI RVKRYRQSMN

101 NFQGLRSFGC RFGTGTVQKL AHQIYQFTDK DKDNVAPRSK ISPQGYGRRR

151 RRSLPEAGPG RTLVSSKPQA HGAPAPPSGS APHFL

SEQ ID NO：6（pro-ADM的氨基酸序列）：

1   ARLDVASEFR KKWNKWALSR GKRELRMSSS YPTGLADVKA GPAQTLIRPQ

51  DMKGASRSPE DSSPDAARIR VKRYRQSMNN FQGLRSFGCR FGTCTVQKLA

101 HQIYQFTDKD KDNVAPRSKI SPQGYGRRRR RSLPEAGPGR TLVSSKPQAH

151 GAPAPPSGSA PHFL

SEQ ID NO：7（MR-pro-ADM的氨基酸序列）：

1 ELRMSSSYPT GLADVKAGPA QTLTRPQDMK GASRSPEDSS PDAARIRV

SEQ ID NO：8（pre-pro-AVP的氨基酸序列）：

1   MPDTMLPACF LGLLAFSSAC YFQNCPRGGK RAMSDLELRQ CLPCGPGGKG

51  RCFGPSICCA DELGCFVGTA EALRCQEENY LPSPCQSGQK ACGSGGRCAA

101 FGVCCNDESC VTEPECREGF HRRARASDRS NATQLDGPAG ALLLRLVQLA

151 GAPEPFEPAQ PDAY

SEQ ID NO：9（pro-AVP的氨基酸序列）：

1   CYFQNCPRGG KRAMSDLELR QCLPCGPGGK GRCFGPSICC ADELGCFVGT

51  AEALRCQEEN YLPSPCQSGQ KACGSGGRCA AFGVCCNDES CVTEPECREG

101 FHRRARASDR SNATQLDGPA GALLLRLVQL AGAPEPFEPA QPDAY

SEQ ID NO：10（CT-pre-proAVP或和肽素的氨基酸序列）：

1 ASDRSNATQL DGPAGALLLR LVQLAGAPEP FEPAQPDAY

SEQ ID NO：11（后叶激素运载蛋白II的氨基酸序列）：

1  AMSDLELRQC LPCGPGGKGR CEGPSICCAD ELGCFVGTAE ALRCQEENYL

51 PSPCQSGQKA CGSGGRCAAF GVCCNDESCV TEPECREGFH RRA

SEQ ID NO：12（pre-pro-ET-1的氨基酸序列）：

1   MDYLLMIFSL LPVACQGAPE TAVLGAELSA VGENGGEKPT PSPPWRLRRS

51  KRCSCSSLMD KECCYFCHLD IIWVNTPEHV VPYGLGSPRS KRALENLLPT

101 KATDRENRCQ CASQKDKKCW NFCQAGKELR AEDIMEKDWN NHKKGKDCSK

151 LGKKCIYQQL VRGRKIRRSS EEHLRQTRSE TMRNSVKSSF HDPKLKGKPS

201 RERYVTHNRA HW

SEQ ID NO：13（pro-ET-1的氨基酸序列）：

1   APETAVLGAE LSAVGENGGE KPTPSPPWRL RRSKRCSCSS LMDKECVYFC

51  HLDIIWVNTP EHVVPYGLGS PRSKRALENL LPTKATDREN RCQCASQKDK

101 KCWNFCQAGK ELRAEDIMEK DWNNHKKGKD CSKLGKKCIY QQLVRGRKIR

151 RSSEEHLRQT RSETMRNSVK SSFHDPKLKG KPSRERYVTH NRAHW

SEQ ID NO：14（CT-pro-ET-1的氨基酸序列）：

1 RSSEEHLRQT RSETMRNSVK SSFHDPKLKG KPSRERYVTH NRAHW

SEQ ID NO：15（pre-pro-BNP的氨基酸序列）：

1   MDPQTAPSRA LLLLLFLHLA FLGGRSHPLG SPGSASDLET SGLQEQRNHL

51  QGKLSELQVE QTSLEPLQES PRPTGVWKSR EVATEGIRGH RKMVLYTLRA

101 PRSPKMVQGS GCFGRKMDRI SSSSGLGCKV LRRH

SEQ ID NO：16（pro-BNP的氨基酸序列）：

1   HPLGSPGSAS DLETSGLQEQ RNHLQGKLSE LQVEQTSLEP LQESPRPTGV

51  WKSREVATEG IRGHRKMVLY TLRAPRSPKM VQGSGCFGRK MDRISSSSGL

101 GCKVLRRH

SEQ ID NO：17（NT-pro-BNP的氨基酸序列）：

1 HPLGSPGSAS DLETSGLQEQ RNHLQGKLSE LQVEQTSLEP LQESPRPTGV 51

WKSREVATEG IRGHRKMVLY TLRAPR

SEQ ID NO：18（BNP的氨基酸序列）：

1 SPKMVQGSGC FGRKMDRISS SSGLGCKVLR RH

SEQ ID NO：19（PCT的氨基酸序列）：

1   APFRSALESS PADPATLSED EARLLLAALV QDYVQMKASE LEQEQEREGS

51  SLDSPRSKRC GNLSTCMLGT YTQDFNKFHT FPQTAIGVGA PGKKRDMSSD

101 LERDHRPHVS MPQNAN

SEQ ID NO：20（PRX-4的氨基酸序列）：

1   MEALPLLAAT TPDHGRHRRL LLLPLLLFLL PAGAVQGWET EERPRTREEE

51  CHFYAGGQVY PGEASRVSVA DHSLHLSKAK ISKPAPYWEG TAVIDGEFKE

101 LKLTDYRGKY LVFFFYPLDF TFVCPTEIIA FGDRLEEFRS INTEVVACSV

151 DSQFTHLAWI NTPRRQGGLG PIRIPLLSDL THQISKDYGV YLEDSGHTLR

201 GLFIIDDKGI LRQITLNDLP VGRSVDETLR LVQAFQYTDK HGEVCPAGWK

251 PGSETIIPDP AGKLKYFDKL N