超声提取蒙药漏芦花总皂苷的方法

摘要

本发明公开了一种超声提取蒙药漏芦花总皂苷的方法，具体包括步骤：称取蒙药漏芦花粉末，加入石油醚加热回流，过滤，干燥至无石油醚味，加入蒸馏水，浸泡30min，超声处理，过滤，滤液用水饱和正丁醇萃取。

说明书

技术领域

本发明属于药物有效成分提取领域，特别地，涉及漏芦花总皂苷 提取。

背景技术

漏芦花，蒙名为洪古乐-珠日，是祁州漏芦的干燥花。祁州漏芦 Rhaponticum unifLorum（L.）DC属于菊科管状花亚科祁州漏芦属植 物。祁州漏芦的根为常用中药，具有清热解毒、消痈肿、下乳汁的功 效。蒙医用祁州漏芦的干燥花，认为其具有杀“粘”，止刺痛、清热、 解毒、解表等功效，主治感冒、心热痢疾、血热、麻疹及传染性热症 等，在蒙医临床中有较长的使用历史。药理研究发现皂苷具有广泛的 心血管药理活性，表现为提高浆膜的渗透性、正性肌力、抗心律失常、 舒张血管、降低血压、止痛、抗高胆固醇和保护毛细血管等作用；抗 微生物作用；抗真菌作用；免疫调节作用；有些还有去痰作用及促子 宫收缩作用；抗炎、抗肿瘤、抗凝血等重要药理活性。此外，皂苷还 具有镇静、抗病毒、免疫调节、提高学习记忆能力、保护脑损伤及心 肌缺血损伤、抗衰老及抗疲劳等多方面的功能。因此,对蒙药漏芦花 皂苷的开发与利用具有十分重要的现实意义。超声提取法是利用超声 波的空化作用、机械作用、热效应等以增大物质分子的运动频率和速 度,增加溶剂穿透力,从而提高目标成分的浸出率，该法适用于对热 敏感、在较高温度易被酶水解破坏的有效成分的提取，并以提取温度 低、提取率高、提取时间短、设备廉价等特点广泛应用于中蒙药材和 各种动植物有效成分的提取中。

发明内容

本发明提供了一种超声提取蒙药漏芦花总皂苷的方法，具体包括 步骤：称取蒙药漏芦花粉末，按重量体积比1：10加入石油醚于50℃ 水浴加热回流2h，过滤，干燥至无石油醚味，按重量体积比1：40 （料液比）加入蒸馏水，浸泡30min，超声温度60℃，超声功率140W， 超声15min，过滤，滤液用水饱和正丁醇以等体积萃取。

本发明提供了一种新的高效的漏芦花总皂苷的提取方法，同时发 明人发现，料液比、超声功率、超声时间、超声温度四个因素对提取 效率有着重大的影响，因此创造性的确定了最佳的提取工艺，同时发 明人还发现，发明也发现石油醚回流、缓冲液浸泡等工艺步骤对于提 取效率也有一定的影响，也同时确定了最佳的技术参数。

附图概要说明

图1，对照品与供试品光谱叠加图

图2，标准曲线图

图3，超声功率对漏芦花总皂苷提取率的影响

图4，超声时间对漏芦花总皂苷提取率的影响

图5，超声温度对漏芦花总皂苷提取率的影响

图6，料液比对漏芦花总皂苷提取率的影响

具体实施方式

实施例1

精密称取蒙药漏芦花粉末1.0g，加10mL石油醚于50℃水浴加热 回流2h,过滤，干燥至无石油醚味，将其置于锥形瓶中，加入蒸馏水 40mL（即料液比1:40），浸泡30min，超声温度60℃，超声功率140W， 超声15min。过滤，滤液与水饱和正丁醇以等体积萃取，萃取三次， 合并滤液，挥干，用无水乙醇洗出，定容至25mL。

实施例2，工艺优选参数的确定

1仪器与试剂

1.1仪器

电热鼓风干燥箱（上海一恒科学仪器有限公司）；电子恒温不锈 钢水浴锅（余姚市上通温控仪表厂）；AB135-S分析天平（Made in  Switzerland)；恒温水浴锅(上海亚荣生化仪器厂)；旋转蒸发仪(郑州 长城科工贸有限公司)；循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公 司)；TU-1901型双光束紫外分光光度计（北京普析通用有限责任公 司）；LX-07A多功能粉碎机（上海江信科技有限公司)；旋转蒸发仪 （上海亚荣生化仪器厂）；KH5200DE型高功率数控超声清洗器(昆山 禾创超声仪器有限公司)；BSA124S型电子天平（北京赛多利斯科学 仪器有限公司)

1.2药材及试剂

漏芦花（采自呼和浩特市大青山，经内蒙古医科大学药学院药用 植物教研室乔俊缠教授鉴定为菊科管状花亚科祁州漏芦属植物的干 燥花），石油醚、无水乙醇、高氯酸、香草醛、冰醋酸，以上试剂均 为分析纯，薯蓣皂苷元标准品(中国药品生物制品检定所,批号： 111539-200001)

2方法

2.1对照品溶液的制备

精密称取薯蓣皂苷元5.0mg，置于25mL容量瓶中，用无水乙醇 溶解，定容，摇匀，即得浓度为200μg/mL的薯蓣皂苷元对照品溶液， 避光放置备用。

2.2供试品溶液的制备

精密称取漏芦花粉末1.0g，加10mL石油醚于50℃水浴加热回流 2h，过滤，干燥至无石油醚味，将其置于锥形瓶中，超声，过滤，滤 液用水饱和正丁醇以等体积萃取，萃取三次，合并滤液，挥干，用无 水乙醇洗出，定容至25mL，在提取工艺研究中改变相应参数。

2.3测定波长的选择

精密量取对照品及供试品溶液0.5mL于10mL具塞试管中，挥干 溶剂，加入新配制的5%香草醛-冰醋酸0.2mL，高氯酸0.8mL，于60℃ 水浴下反应20min，冷却后加入冰醋酸定容至10mL，于200-600nm 进行波长扫描，结果显示对照品和供试品均410nm处有最大吸收， 故选择410nm为测定波长。结果见图1。

2.4标准曲线的制备

精密量取0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL对照品溶液于10mL 具塞试管中，按2.3项下显色，在410nm处测量吸光度，以吸光度为 横坐标，浓度为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程 Y=0.025X+0.004(r=0.9999,n=6)，浓度在4.176-20.88μg/mL内与吸光 度呈良好的线性关系。结果见表1及图2。

表1回归方程表

2.5单因素试验及正交实验

2.5.1超声功率的单因素试验

精密称取蒙药漏芦花1.0g，在超声时间30min，料液比1:30，温 度为30℃的条件下，超声功率分别为120W,140W,160W,180W,200W, 按2.2项下操作及2.3项下显色方法，测其吸光度，计算总皂苷含量。 结果见表2

表2超声功率单因素试验结果

2.5.2超声时间的单因素试验

精密称取蒙药漏芦花1.0g，在超声功率200W，料液比1:30，温 度为30℃的条件下，超声时间分别为15min,20min,25min,30min,35min, 按2.2项下操作及2.3项下显色方法，测其吸光度，计算总皂苷含量。 结果见表3

表3超声时间单因素试验结果

2.5.3温度的单因素试验

精密称取蒙药漏芦花1.0g，在超声功率200W，超声时间为30min， 料液比1:30的条件下，温度分别为30℃,40℃,50℃,60℃,70℃，按2.2 项下操作及2.3项下显色方法，测其吸光度，计算总皂苷含量。结果 见表4

表4温度单因素试验结果

2.5.4料液比的单因素试验

精密称取蒙药漏芦花1.0g，在超声功率200W，超声时间为30min 的条件下，料液比分别为1:25,1:30,1:35,1:40,1:45,按2.2项下操作及 2.3项下显色方法，测其吸光度，计算总皂苷含量。结果见表5

表5料液比单因素试验结果

2.5.5正交试验

由单因素试验图3—图6可知，随着超声功率的增加，蒙药漏芦 花总皂苷的提取率呈上升趋势，但当超声提取功率上升到140W后， 皂苷提取率随着提取功率上升反而下降，故选定超声功率 120W,140W,160W三个较优的水平做正交试验；随着超声时间的增 加，蒙药漏芦花总皂苷的提取率呈上升趋势，但当超声时间增加到 20min后，总皂苷提取率随着提取时间上升反而下降，故选定超声时 间15min,20min,25min三个较优的水平做正交试验；随着超声温度的 增加，蒙药漏芦花总皂苷的提取率呈上升趋势，但当超声温度上升到

50℃后，皂苷提取率随着提取温度上升反而下降，故选定超声温度

40℃,50℃,60℃三个较优的水平做正交试验；随料液比的增加，蒙药

漏芦花总皂苷含量增大，且料液比为1∶35时所测得的总皂苷含量与

料液比为1∶40时相差不大，因此选择料液比1:30,1:35,1:40作为正

交试验较优的3个水平，平行做3份，取平均值，结果见表6、7、8。

表6因素水平表

表7L9(34)正交试验结果表（1）

表8正交试验结果表（2）

表9方差分析表

由表9方差分析可知，料液比和超声温度对结果影响较大，而提 取时间和超声功率的影响较小。超声提取工艺正交试验结果表明，各 因素在所选水平上对漏芦花总皂苷提取效果的影响为：超声温度 （D）>料液比（A）>超声功率（B）>超声时间（C）。其提取工艺最 优组合为A3B2C1D3，即料液比1:40，超声功率140W，超声时间 15min，超声温度60℃。

2.6含量测定（工艺验证性试验）

按2.2项下的方法以最佳提取工艺（超声温度60℃，超声时间 15min,超声功率140W，料液比1:40）提取蒙药漏芦花总皂苷，按2.3 项下的方法显色，在410nm处测定吸光度，由回归方程计算总皂苷 含量为0.8712%，RSD为0.32％。验证试验的结果表明该工艺稳定可 行。结果见表10。

表10含量测定结果

3方法学考察

3.1稳定性试验

精密量取供试品溶液0.4mL，按2.3项下方法显色，在410nm处 每15min测定一次吸光度，测定2h。RSD为1.35%，结果表明供试 品溶液在2h内稳定性较好。

3.2精密度试验

精密量取同一供试液溶液6份,每份0.4ml，按2.3项下的显色方 法显色，以相应试剂为空白,于410nm处测定吸光度，计算总皂苷含 量。RSD为0.52%，表明精密度良好。

3.3重复性试验

精密称取蒙药漏芦花粉末1.0g，6份,按2.2项下方法操作，按2.3 项下方法显色，在410nm处测定吸光度，计算总皂苷含量，RSD为 0.32%，结果表明该方法重复性良好。

3.4加样回收试验

精密称取蒙药漏芦花粉末0.5g,6份,分别加入80%、100%、120% 的薯蓣皂苷元对照品各2份，按2.2项下供试品溶液的制备和2.3项 下显色方法,在410nm处测定吸光度,计算加样回收率,平均回收率为 97.19％，RSD为1.32％，结果表明本实验的加样回收率良好，结果 见表11。

表11加样回收率试验结果

4工艺放大试验

精密称取蒙药漏芦花6份，每份20g，按2.2项下方法以最佳 的提取工艺（超声温度60℃，超声时间15min,超声功率140W，料液 比1:40）提取总皂苷，按2.3项下方法显色，410nm处测定吸光度， 总皂苷含量分别为0.8741%，0.8725%，0.8693%，0.8721%，0.8684%， 0.8698%，平均含量为0.8710%，RSD为0.25%，结果表明该方法适 合于放大生产。结果见表12

表12工艺放大性试验结果

5、石油醚回流、缓冲液浸泡的影响

表13最佳工艺条件下，经石油醚回流、缓冲液浸泡含量结果

由以上最佳工艺条件下，经石油醚回流、缓冲液浸泡含量与未经 石油醚回流、缓冲液浸泡含量比较，前者为0.8712%后者为0.6770%。

6讨论

为使蒙药漏芦花总皂苷的提取更完全，在提取之前，必须首先破 坏脂类与其他非脂成分的结合，因此实验前须将药材用石油醚进行脱 脂处理。超声提取蒙药漏芦花皂苷时，若提取温度太高或功率过大将 增加各种杂质的溶出，也可能引起皂苷的热敏损失，反而不利于皂苷 的提取，超声在短时间内就可达到最大效率，提取次数对总皂苷的提 取率影响很小，故本试验未考虑提取次数。皂苷类化合物为蒙药漏芦 花中的主要成分之一，亦是其活性成分，若提取方法不当，会使测定 结果偏离真实值，影响对蒙药漏芦花质量的真实评价，而超声提取法 具有效率高、价格低、无污染、易获得等优点，在提取效果上具有产 量高，纯度好等特点。本试验采用超声提取蒙药漏芦花总皂苷，可保 证较高的提取效率，是目前较好的选择，为漏芦花总皂苷的提取研究 提供了理论指导，也为今后的研究奠定了基础。