利用dU耐受型高忠实性DNA聚合酶的基因克隆方法

摘要

本发明公开了一种利用dU耐受型高忠实性DNA聚合酶的基因克隆方法，包括步骤为：用dU修饰引物和dU耐受型高忠实性DNA聚合酶扩增目标基因和质粒载体；用尿嘧啶DNA糖苷酶处理，再进行碱裂解，得到3’端为单链的DNA产物；将产物混合，使目标基因和质粒载体的两端单链区发生配对连接起来，形成含目标基因的带缺口环状重组质粒载体；含目标基因的带缺口环状重组质粒载体转化大肠杆菌后，缺口被修复好，得到含目标基因的完整重组质粒载体。通过上述方式，本发明能用于基因工程领域，特别是重组DNA的构建与氨基酸定点突变方面的应用，同时本方法也可用于需要进行DNA文库构建的精准医疗、基因克隆等领域。