一种针对COPD患者的原代支气管上皮细胞的分离培养方法

摘要

本发明提供了一种针对COPD患者的原代支气管上皮细胞的分离培养方法，所述细胞分类命名COPD患者原代支气管上皮细胞DHBE‑001，保藏编号为CCTCC NO：18169。该方法为，获取组织去除多余的结缔组织，解剖呼吸道，切成片段、清洗，将组织在离心管中消化并摇晃过夜；结束消化后将组织倒入组织培养皿中，加入胎牛血清至终浓度为10%，终止消化；用PBS缓冲液冲洗后收集到离心管中离心；加入组织消化液Ⅱ后静置直到看到组织块分离；加入FBS将溶液离心，弃上清，加入DMEM/F12培养基重悬后进行细胞计数；将离心沉淀的细胞置于含有BEGM培养基的培养皿中培养完成分离；本方法的细胞分离率高，纯度高，活力好，分离成功的原代支气管上皮细胞在体外培养5‑10代以内均能保持良好的细胞形态及活力。