人喉鳞状细胞癌相关基因SKA3真核表达蛋白质单体制备方法

摘要

本发明提供一种人喉鳞状细胞癌相关基因SKA3真核表达蛋白质单体的制备方法，其方法是将人喉鳞状细胞癌相关基因SKA3插入PGEX‑4T‑1载体，获得PGEX‑4T‑1‑SKA3原核表达载体；再通过PCR获得融合片段GST‑SKA3并插入pCMV‑HA载体，获得带HA及GST标签的SKA3真核表达载体pCMV‑HA‑GST‑SKA3；培养转染了该真核表达载体的喉鳞状癌细胞Hep‑2，然后纯化获得重组GST融合蛋白。具体包括如下步骤：(1)原核表达载体PGEX‑4T‑1‑SKA3的构建与验证；(2)真核表达载体pCMV‑HA‑GST‑SKA3的构建与验证；(3)喉鳞状细胞癌Hep‑2细胞中真核表达及纯化。本发明选择GST标签可提高蛋白表达的可溶性和表达量；利用真核表达载体pCMV‑HA表达蛋白，表达时形成稳定的二硫键，对表达的蛋白进行正确折叠，并进行复杂糖基化修饰，蛋白活性接近于天然蛋白，不需去除内毒素。