МОЛЕКУЛЯРНОЕ КЛОНИРОВАНИЕ, СТРУКТУРНЫЙ АНАЛИЗ И ЭКСПРЕССИЯ ГЕНА ГЛИКОПРОТЕИНА ZP3 ZONA PELLUCIDA КИТАЙСКОГО ЦОКОРА Myospalax fontanierii

摘要

Белок zona pellucida 3 (ZP3) играет ключевую роль в иммунности репродуктивной системы. Используя быструю амплификацию концов кДНК с последующей полимеразной цепной реакцией (RACE-PCR) получили полную кДНК, кодирующую ZP3 китайского цокора Myospalax fontanierii. Эта кДНК содержит открытую рамку считывания из 1269 н., кодирующую полипептид из 422 аминокислотных остатков, высокогомологичный ZP3 хомячка (78%), мыши (76%) и крысы (74%). Xhol—Sacl-фрагменткДНК ZP3 размером 1158 пл., не кодирующий сигнальный пептид и домен, сходный с трансмембранным, клонировали под контроль промотора фага Т7-lac-оператора в вектор рЕТ-28а(+). Рекомбинантный белок pET-ZokorZP3 (r-ZP3) экспрессировали в штамме BL21(DE3) Escherichia coli в виде слитого с полиги-стидином белка.Оптимум экспрессии наблюдали через 2 ч после индукции 1 мМ IPTG при 28°С. Очищенный белок анализировали с помощью вестерн-блотинга.