マルチプレックスPCR法による動物由来病原性大腸菌の病原遺伝子同時検出法

摘要

動物由来の病原性大腸菌は，子牛，子豚の大腸菌性下痢，子牛の出血性腸炎，豚の浮腫病などの発生に関与し，幼獣期における最も危害の高い感染症の原因菌のひとつである。 またO157：H7に代表されると卜の腸管出血性大腸菌感染症の原因となる病原性大腸菌は，公衆衛生学的見地からも予防対策の確立が求められてきた。 病原性大腸菌は腸管毒素原性大腸菌（ETEC），Vero毒素産生性大腸菌（VTEC），腸管接着性微絨毛消滅性大腸菌（AEEC）など多様なカテゴリーに区分され，その診断法は生物学的，免疫学的検出法に加え，DNAプローブ法，PCR法などの遺伝子検出法も活用されてきた。しかし，PCR法の場合，複数存在する標的病原遺伝子の検出を単独のプライマーを用いてそれぞれ行うことば，労力，時間および経費の点で問題があった。 また，病原性大腸菌のPCR診断にはヒト用の混合プライマーセット（日本商事）も市販され，迅速診断に応用されているが，豚のETECの耐熱性毒素（STII）など動物特有の病原遺伝子や近年，新たに重要性が認識された腸管障害に関与するeaeAなどは検出できなかった。今回，筆者らは複数組のプライマー対を1回のアツセイで同時に検出する方法であるマルチプレックスPCR法に着目し，特異性が高く，迅速で“Readytouse"が可能な系によるPCR法を検討した結果，良好な成績を得たので，その概要を報告する。