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贵州省第二届硕博论坛

贵州省第二届硕博论坛

  • 召开年:2015
  • 召开地:贵阳
  • 出版时间: 2015-12-10

主办单位:;贵州省人民政府学位委员会;;

会议文集:贵州省第二届硕博论坛论文集

会议论文
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  • 摘要:目的:为了避免贵州宽叶缴草药用植物的枯竭,势必要对药材进行规范化栽培种植(GAP)。采用正交设计法安排RAPD体系优化试验,建立可用于黔产宽叶缘草RAPD分析的最佳反应体系,并进行遗传多样性分析. 方法:采用L16(45)正交设计,确立宽叶缬草最佳RAPD反应体系;通过对宽叶缬草基因组DNA样本进行RAPD扩增,分析样本Nei's多样性指数(H)、Shannon's多样性指数(Ⅰ)以及Jaccard遗传相似性系数(GS),并对其进行聚类分析. 结果:25μL最适宽叶缬草RAPD反应体系为2.0U Taq DNA聚合酶、0.4mmol/L dNTPs、4.0mmol/L Mg2+、4.0μmol/L随机引物、60ng模板DNA;从40条随机引物中筛选了13条对20份样本进行RAPD扩增,共扩增出102条清晰条带,其中88条具多态性,多态率(PPB)为86.27%;20份宽叶缬草样本的Nei's多样性指数(H)和Shannon's多样性指数(Ⅰ)分别为0.3030和0.4537,Jaccard遗传相似系数(GS)介于0.4118~0.8824之间;通过UPGMA聚类可将宽叶缬草的20份样本聚为两类,来自剑河地区的13份样本聚为一类,江口地区的7份样本聚为一类,且剑河地区的栽培样本与野生样本又分为2个明显的分支. 结论:黔产宽叶缬草种水平上具有较高的遗传多样性,所得RAPD标记可用于宽叶缬草遗传多样性研究,并为今后开发宽叶缬草的选种与育种奠定基础.
  • 摘要:目的:研究清解益肺汤及胶囊剂抗小鼠lewis肺癌生长转移并探讨其相关机制. 方法:建立C57BL/6J雄性小鼠lewis肺癌模型,并随机分为模型对照组,清解益肺汤高、中、低剂量组,顺铂组、顺铂+清解益肺汤中剂量组、清解益肺胶囊组.每组10只,连续给药14天.观察lewis肺癌小鼠的肿瘤生长情况,肺转移瘤节结数,采用ELISA法检测小鼠血清中血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达,Western Blotting印记法检测lewis肺癌小鼠肿瘤组织CD34蛋白表达并计数微血管密度(MVD). 结果:清解益肺汤及胶囊能减少小鼠lewis肺癌瘤重和肺转移灶数,并能降低其血清VEGF水平以及肿瘤组织CD34蛋白(MVD)表达,中药组中以高剂量组和胶囊组效果最佳,联合组效果明显优于其他各组. 结论:清解益肺汤及胶囊能抗小鼠lewis肺癌生长与转移,其机制可能与该药能降低VEGF表达和肿瘤组织微血管密度(MVD),抑制肿瘤血管生成有关.
  • 摘要:目的:应用噬菌体展示技术构建重组白细胞介素4受体(IL-4R)噬菌体单链抗体(scFv)库,并从抗体库中进行筛选. 方法:利用重组人IL-4R(rhIL-4R)蛋白免疫BALB/c小鼠,提取总RNA,反转录PCR扩增VH和VL基因,经重叠延伸PCR扩增出带有限制性酶切位点的scFv,用限制性内切酶SfiⅠ和NotⅠ分别双酶切scFv和pCANTAB5E载体,利用T4DNA连接酶进行连接,转入感受态细菌E.coli TG1中制备转化子;在培养基中培养得到噬菌体单链抗体库;通过3轮富集和筛选,选择抗原亲和力最强的克隆进行测序分析. 结果:经过3轮筛选,构建了库容为2×108的rhIL-4R单链抗体库,测序结果显示anti-rhIL-4R蛋白scFv基因全长741bp,编码247个氨基酸.通过VBASE2数据库分析,anti-rhIL-4R蛋白的VH和VL基因序列都存在3个互补决定区和4个骨架区. 结论:成功构建了抗rhIL-4R蛋白噬菌体scFv库.
  • 摘要:目的:探讨富氢水对创伤性脑损伤(TBI)大鼠核因子E2相关因子2(Nrf2)表达及氧化损伤的影响. 方法:将90只雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组(SO组)、TBI组、富氢水干预组(HW组),每组30只.采用改良Feeney法自由落体撞击制作TBI模型,HW组制模后腹腔注射富氢水5mL/kg,每日1次,共5d;SO组和TBI组给予等量生理盐水.各组分别于术后6、12、24、48h和5d时取6只大鼠进行神经功能缺损评分(NSS),活杀后取脑组织备检.分光光度法检测过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量;实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测Nrf2mRNA和核蛋白表达;苏木素-伊红(HE)染色观察脑组织病理学改变. 结果:①NSS评分:HW组术后12、24、48h和5d时NSS评分(分)较TBI组明显下降(均P<0.05).②TBI术后CAT、GSH-Px明显低于假手术组,MDA明显高于假手术组,以24h时最为明显[均P<0.01];HW组各指标均明显改善,接近SO组水平.③RT-qPCR:3组各时间点Nrf2mRNA表达差异均无统计学意义(P>0.05).④Western Blot:TBI组术后脑组织Nrf2核蛋白表达(灰度值)较SO组明显上升,24h达高峰(P<0.05);HW组术后Nrf2核蛋白表达明显高于TBI组,以24h时最为明显(P<0.05).⑤HE染色:SO组脑组织结构完整;TBI组各时间点出现不同程度的脑损伤,以24h时损伤最为明显;HW组损伤较TBI组明显减轻. 结论:富氢水可上调TBI大鼠脑组织Nrf2表达,减轻脑组织氧化应激损伤,其机制可能与Nrf2诱导其下游抗氧化物酶表达有关.
  • 摘要:为了摸清贵州稻水象甲Lissorhoptrus oryzophilus Kuschel危害与水稻产量损失的关系,明确贵州稻水象甲的防治指标,本文采用田间笼罩接虫法系统的研究不同密度的稻水象甲成虫与水稻各指标的关系.稻水象甲成虫密度与水稻被害叶率和幼虫密度呈正相关关系;稻水象甲的危害明显减少水稻分蘖数和穗数,但对穗粒数和千粒重的影响不大.建立了产量损失率与被害叶率、成虫密度、幼虫密度的回归方程,计算获得了插秧后的第5天、10天、15天、20天的叶片被害率的防治指标为59.65%、52.97%、50.96%、48.52%,成虫的防治指标为20头/m2(1头/丛),幼虫的防治指标为130头/m2(6.5头/丛).该结果对贵州省稻水象甲的预测预报及防治具有重要的指导意义.
  • 摘要:建立虎耳草水提取物高效液相色谱法(HPLC)指纹图谱及其抗前列腺增生作用之间的谱效关系.用HPLC建立24批不同产地虎耳草水提取物HPLC指纹图谱,在相似度分析、聚类分析、及其18个共有峰面积基础上筛选出9批差异较大的药材用于其抗前列腺增生作用研究.采用丙酸睾酮诱导去势小鼠前列腺增生模型,以前列腺指数(PI)、血清双氢睾酮(DHT)浓度、血清酸性磷酸酶(ACP)活性、血清前列腺酸性磷酸酶(PACP)浓度和血清5α还原酶浓度为评价指标,对虎耳草提取物治疗前列腺增生作用进行药效学研究.在化学指纹图谱结果与药效学实验结果基础之上,采用灰关联度分析法和偏最小二乘法对虎耳草化学指纹图谱与其抗前列腺增生作用谱效关系研究.结果在建立的虎耳草水提物指纹图谱中指认出18个共有峰,所选出的9批不同产地虎耳草药材对前列腺增生小鼠均有不同程度的治疗作用.其中第14号峰(绿原酸)、17号峰(槲皮素-3-O-β-L-鼠李糖苷)、18(槲皮素-5-O-β-D-葡萄糖苷)号峰与抗前列腺增生作用呈高度正相关,可能为虎耳草抗前列腺增生作用主要化合物.本研究通过建立虎耳草水提取物HPLC指纹图谱与其抗鼠前列腺增生作用的谱效关系,以期为发现虎耳草中抗前列腺增生作用主要化合物奠定科学基础.
  • 摘要:目的:观察饮用水有机提取物致L02细胞炎症损伤中核因子-κB(nuclear factorκB,NF-κB)信号通路的激活情况及其调控作用. 方法:利用固相萃取法提取饮用水中有机污染物.将L02细胞分别暴露于培养液(空白对照)、0.1%DMSO(溶剂对照)和0.3125、0.6250、1.2500、2.5000、5.0000L/mL饮用水有机提取物中24h、48h、72h.采用免疫印迹(Western blot)方法观察NF-κB信号通路的激活情况;并使用酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞培养液上清中白介素(interleukin,IL)8、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α的含量. 结果:(1)随有机物浓度的增加及时间的延长,在24h、48h和72h时点,0.6250L/mL以上剂量组NF-κB抑制蛋白(inhibitor of NF-κB,IκB)表达水平均明显降低(P<0.05),而p65蛋白表达水平则明显升高(P<0.05).(2)有机提取物染毒L02细胞24h和48h后,0.6250L/mL以上处理组的IL-8水平均明显升高(P<0.05);而在72h,低剂量组(0.3125L/mL)的IL-8水平即已升高明显(P<0.05);(3)处理24h后,1.2500L/mL以上处理组的TNFα水平明显升高(P<0.05);而在48h和72h染毒组,TNF-α水平在0.6250L/mL以上处理组即显著升高(P<0.05).(4)与24h染毒组比较,48h、72h各处理组的IL-8与TNF-α水平均明显升高(P<0.05). 结论:饮用水有机提取物可剂量-依赖性及时间-依赖性地激活NF-κB信号通路,诱导IL-8及TNF-α的分泌,调控肝细胞炎症反应的发生.
  • 摘要:目的:研究氧化苦参碱(OMT)对醛固酮(ALD)诱导心肌成纤维细胞(CFs)增殖的作用,并分析其对p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)表达的影响. 方法:采用胰酶消化法和差速贴壁法分离纯化1~3d新SD生大鼠CFs做原代培养,建立ALD诱导CFs增殖模型.ALD诱导CFs量效实验分为:空白组(无血清DMEM)、ALD1×10-10ALDmol·L-1、1×10-9ALDmol·L-1、1×10-8ALDmol·L-1及1×10-7ALDmol·L-1组.ALD诱导CFs时效实验分为:空白组(无血清DMEM)和ALD组(1×10-7ALDmol·L-1),作用时间分别为12h、24h、36h、48h.OMT抑制ALD诱导CFs增殖实验分为空白组(无血清DMEM),ALD组(1×10-7ALDmol·L-1),OMT低、高剂量组(3.78×10-4,7.57×10-4ALDmol·L-1).倒置显微镜下观察原代CFs.波形蛋白DAB染色法联合免疫细胞化学染色SP法鉴定CFs.采用噻唑蓝(MTT)法分析ALD对CFs增殖的量效与时效关系和OMT的抑制作用.实时荧光定量PCR分析p38MAPK mRNA的表达.Western blot分析p-p38MAPK,p38MAPK的蛋白表达. 结果:MTT结果提示1×10-7mol·L-1ALD能够诱导CFs的增殖,且在24h时增殖作用显著,7.57×10-4mol·L-1OMT可显著抑制CFs增殖.OMT对p38MAPK mRNA的水平未见显著影响.OMT能够抑制p-p38MAPK蛋白的表达. 结论:OMT可抑制ALD诱导CFs增殖的作用,其机制可能与抑制p38MAPK磷酸化有关.
  • 摘要:目的: 血管平滑肌细胞(Vascular Smooth muscle cells, VSMCs)是血管壁的重要构成成分,主要位于中膜层。研究显示,VSMCs增殖和迁移在动脉粥样硬化(atherosclerosis , As)病变形成过程中起关键作用。研究Ⅰ、ⅣfimA基因型牙龈卟啉单胞菌脂多糖(P.gingivalis-LPS)对人脐动脉平滑肌细胞(HUASMCs)增殖和迁移能力的影响,探讨慢性牙周炎与As之间可能的相关机制。 方法:在人脐静脉内皮细胞(HUVECs)与HUASMCs共培养体系中加入不同浓度和不同fimA基因型P.gingivalis-LPS,2h、8h、24h、48h后采用CCK-8法、Transwell迁移小室分别检测HUASMCs的增殖及迁移能力. 结果:Ⅰ、ⅣfimA基因型P.gingivalis-LPS均可使HUASMCs发生增殖和迁移,促迁移作用发生时间(2h)早于增殖(24h及48h).高浓度(5、10μg/ml)ⅣfimA基因型P.gingivalis-LPS刺激HUASMCs发生增殖及迁移的能力强于IfimA基因型P.gingivalis-LPS. 结论:P.gingivalis-LPS可刺激HUASMCs发生增殖及迁移,且fimA基因型的差异可导致P.gingivalis-LPS的刺激能力不同.
  • 摘要:目的:建立UPLC-MS/MS法同时测定羊耳菊药材中东莨菪苷、1,3-O-二咖啡酰基奎宁酸、木犀草苷、3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸6个成分的含量. 方法:采用Waters BEH C18(2.1mm×100mm,1.7μm)色谱柱,用0.1%甲酸乙腈溶液-0.1%甲酸水溶液作流动相,梯度洗脱,电喷雾电离源(ESI),以多反应离子监测(MRM)检测. 结果:6种成分分别在0.058~42.000、0.178~129.630、0.087~63.400、0.288~69.930、0.172~125.500、0.184~134.130μg/mL浓度范围线性良好,平均回收率为97.84%~105.67%(RSD<1%).稳定性,重复性及精密度良好. 结论:本方法能简便、快捷、有效的测定羊耳菊药材中多种成分含量,为羊耳菊药材的全面质量控制提供了新的方法.
  • 摘要:目的:探讨葛根芩连汤对抗生素相关性腹泻模型肠道中乳酸杆菌属的调理作用. 方法:运用氨苄青霉素灌胃建立巴马猪抗生素性腹泻(ADD)动物模型,用葛根芩连汤进行治疗,处死巴马猪并收集不同位置的肠道内容物(包括包括十二指肠、空肠、回肠、盲肠和结肠)作为检测样品;通过建立定量检测乳酸杆菌属的实时荧光定量PCR方法,对葛根芩连汤治疗前后肠道内乳酸杆菌的动态变化进行检测. 结果:与正常对照组相比,模型组肠道内乳酸杆菌属含量显著降低(P<0.01);与模型组相比,葛根芩连汤治疗组乳酸杆菌在各个肠段中数量明显上升(P<0.05). 结论:长期使用抗生素会引起肠道内优势杆菌乳酸杆菌属数量明显减少;葛根芩连汤对AAD模型肠道乳酸杆菌属具有调理作用.
  • 摘要:目的:本研究模拟病区世居儿童多代持续氟铝暴露,探讨妊娠期和哺乳期持续染毒对子二代大鼠海马组织内环磷酸腺苷(cAMP)-蛋白激酶A(PKA)-环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)信号通路的影响. 方法:将36只健康成年清洁级SD孕鼠随机分为9组,分别为对照(自来水)组和氟化钠(100、200mg/L)、氯化铝(500、1000mg/L)单独染毒组及氟化钠+氯化铝联合染毒组,每组4只.采用自由饮水方式进行染毒,母鼠从妊娠第0天至子一代大鼠出生第21天(postnatal day21,PND21);子一代大鼠于PND90(性成熟)每组随机选取6只(雌∶雄=2∶1)并进行合笼,从其PND22(断乳后)至子二代大鼠PND21继续染毒;每组随机选取子二代8只(雌雄各半),自PND22(断乳后)~PND60(成年)继续染毒.采用酶联免疫吸附法检测海马组织中cAMP蛋白的含量,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)方法检测海马组织中PKA和CREB mRNA表达水平,采用免疫组织化学方法检测脑组织中PKA和p-CREB蛋白的表达水平. 结果:氟铝联合染毒对子二代大鼠海马组织中cAMP蛋白的含量和脑组织中PKA、p-CREB蛋白的表达水平及PKA、CREB mRNA的表达水平均存在拮抗作用(P<0.05). 结论:氟铝联合暴露可能通过抑制子二代大鼠海马cAMP-PKA-CREB信号通路导致学习记忆能力受损,且具有拮抗作用.
  • 摘要:目的:观察针刺不同经脉经穴对慢性稳定型心绞痛(stable angina pectoris,SAP)患者血清MMP-9、TIMP-1的影响及其在双源CT(dual source computed tomography,DSCT)中对动脉粥样硬化斑块值的影响. 方法:采用中央随机法将40例SAP患者随机分成循经取穴组、他经取穴组、非经非穴组、等待治疗组(研究期间不对受试者进行针刺干预),每组10例.各组患者均在基础药物治疗的前提下进行针刺治疗,针刺均双侧取穴,各穴进针后,在距此针约2mm位置(近心端)再针刺一针,两针连接LH200型电针仪,选择疏波,频率2Hz,电流强度在0~2mA以内,以患者耐受为度,定时30min,隔日1次,治疗疗程为4周,每周3次,共治疗12次.评估治疗前后患者动态心电图ST-T变化、DSCT表现以及患者血清中MMP-9与TIMP-1的含量变化. 结果:(1)两组患者在治疗前一般基线情况比较,包括年龄、病程、ST-T变化及血清MMP-9与TIMP-1含量变化比较差异均无统计学意义(P>0.05),具有可比性.(2)24h动态心电图显示,循经组及他经组治疗后ST段分钟数及ST段下移幅度均得到改善(P<0.05).(3)循经组血清MMP-9含量治疗后与治疗前比较,差异有统计学意义(P<0.01).各组TIMP-1含量治疗后与治疗前比差异均无统计学意义(P>0.05).(4)DSCT显示循经针刺有改善患者斑块数值变化的趋势,患者的CACP体积、CACP当量块、CACS均呈现下降趋势. 结论:证实针刺手厥阴心包经的内关穴、手少阴心经的通里穴抗心肌缺血具有循经特异性;循经针刺治疗有稳定动脉粥样硬化斑块的作用.
  • 摘要:目的:比较循经针刺与他经、非穴针刺治疗慢性稳定型心绞痛(stable angina pec-toris,SAP)的临床疗效. 方法:采用中央随机法将40例SAP患者随机分成循经取穴组、他经取穴组、非经非穴组、等待治疗组(研究期间不对受试者进行针刺干预),每组10例.各组患者均在基础药物治疗的前提下进行针刺治疗,针刺均双侧取穴,各穴进针后,在距此针约2mm位置(近心端)再针刺一针,两针连接LH200型电针仪,选择疏波,频率2Hz,电流强度在0~2mA以内,以患者耐受为度,定时30min,隔日1次,治疗疗程为4周,每周3次,共治疗12次.分别于入组0周、4周、8周、12周、16周进行随访.对比观察各组患者治疗前、治疗后、第1次随访、第2次随访、第3次随访多个时间点心绞痛4周内发作次数、VAS评分及硝酸甘油片服用量;评估治疗前后动态心电图ST-T变化. 结果:4组患者在治疗前一般基线情况比较,包括年龄、性别、病程、心绞痛发作次数、VAS评分、硝酸甘油片服用量、ST-T变化比较均无统计学意义(P>0.05),具有可比性.循经组治疗后心绞痛发作次数、VAS评分结果、硝酸甘油片用量、24小时动态心电图ST段分钟数、ST段下移幅度均有明显改善,效果较、他经取穴组及非经非穴组明显. 结论:循经取穴治疗慢性稳定型心绞痛的近期、远期疗效均显著优于他经取穴治疗及非经非穴治疗.
  • 摘要:该实验以落新妇苷为内参物,研究一测多评法同时测定黔产侗药"钻更"中落新妇苷、黄杞苷的含量.在HPLC和UPLC的2个平台上,通过不同型号仪器相对校正因子的考察,探讨不同色谱体系之间所建立的相对校正因子的互用性,再根据相对校正因子计算黄杞苷的含量,并与外标一点法、外标工作曲线法进行比较,以验证一测多评法的准确性.结果在不同色谱体系中,落新妇苷与黄杞苷的相对校正因子及保留时间比值的重复性良好,RSD分别为2.0%和1.8%,均小于3.0%,"钻更"药材中黄杞苷的一测多评法计算值与外标一点法、外标工作曲线法的相对偏差为1.6%~3.9%,RSD为2.0%~0.80%,符合相关要求,Pearson相关系数为0.9998(P<0.01).研究表明,采用一测多评法分析黔产侗药"钻更"中落新妇苷、黄杞苷的含量信息,该方法准确、可靠、重复性良好,可较好地控制该药材的内在质量.
  • 摘要:为配合猪场进行猪瘟与猪伪狂犬病的净化,建立一步法区分野毒与疫苗毒的多重PCR方法(mPCR),本实验通过参照GenBank中CSFV shimen株、弱毒疫苗C株等18株基因序列和PRV闽A株等10株相关基因序列并进行对比分析,并设计可区分猪瘟与猪伪狂犬野毒感染和疫苗毒株的2对特异性CSF引物和3对PR特异性引物.结果表明,本研究建立了鉴别猪瘟和猪伪狂犬野毒与疫苗毒株的5重PCR方法,该方法对PCV2、PRRSV、JEV和BVDV扩增结果均为阴性,表明特异性良好;敏感性结果表明,构建的5重PCR最低核酸检测量分别为6.2pg(CSFV野毒株)、21.3pg(CSFV-C株疫苗毒)、5.8pg(PR Guizhou-DY)、20.8pg(Bartha-K61)和8.6pg(SA215);采用该方法对134份可疑临床样品进行检测结果表明:CSF和PR疫苗毒与野毒在能繁母猪、育肥猪、保育猪和哺乳仔猪中的5重感染率分别为2.6%(1/38)、7.7%(2/26)、8.3%(3/36)和8.8%(3/34),实现了DNA病毒及RNA病毒的同步检测.该5重PCR方法的建立为从病原学方面快速鉴别CSF和PR疫苗毒与野毒提供了新的技术支撑,为规模化猪场实现猪瘟与猪伪狂犬的净化提供一种新方法.
  • 摘要:目的:利用大鼠在体循环灌流模型,采用UPLC-ESI-MS/MS测定灌流液中头花蓼提取物主要活性指标成分没食子酸、原儿茶酸、杨梅苷、金丝桃苷和槲皮苷的含量,并计算出吸收速率常数和累积吸收百分率. 方法:分别考察不同药物浓度、不同肠段、胆汁及p-糖蛋白抑制剂对头花蓼提取物中没食子酸等成分在大鼠体内的吸收机制的影响. 结果:头花蓼提取物中没食子酸、原儿茶酸、杨梅苷、槲皮苷在高浓度下存在饱和现象(P<0.05);胆汁对原儿茶酸的吸收具有显著的抑制作用(P<0.05),对杨梅苷和金丝桃苷的吸收具有促进作用(P<0.05);p-糖蛋白抑制剂维拉帕米能显著增加原儿茶酸的吸收(P<0.05);各成分的吸收总体趋势为小肠优于结肠. 结论:头花蓼提取物在大鼠肠道的吸收符合一级动力学特征.几种成分在整个肠段都有吸收,主要吸收部位在小肠,原儿茶酸可能是转运蛋白P-gp的底物.
  • 摘要:目的:基于中医传承辅助系统软件,应用数据挖掘技术对"国医大师"刘尚义教授治疗脑梗的临床用药特点进行分析.方法:将2014年1月到2015年10月就诊于刘尚义教授国医堂门诊脑梗患者信息输入系统中,对患者的用药频次进行描述统计,采用关联规则阿Apriori算法、复杂系统熵聚类等无监督数据挖掘方法,探讨刘尚义教授治疗脑梗的用药特点.结果:82例患者首方剂中使用频次在20次以上的药物一共有12味,出现频次由高到低前3位的药物组合分别是"胆南星、白附片","胆南星、蜈蚣","川芎、胆南星".结论:挖掘出刘尚义教授治疗脑梗的常用药物、药物组合,并从中反映了脑梗的病机治法,为总结名老中医经验开辟新的方法.
  • 摘要:目的:比较和分析多位点测序分型技术(MLST)和基质辅助激光解吸—飞行时间质谱技术(MALDI-TOF-MS)在Cryptococcus podzolicus及与之邻近的其他种或属的分类研究的稳定性和可靠性,探讨适合隐球菌相关菌属分类研究的各种分子分类方法的可行性. 方法:挑选以Cryptococcus podzolicus为主及与之相邻的其他种和属的菌株共20株及一株outgroup模式菌株,运用酵母菌基因组提取试剂盒提取其DNA,PCR扩增5个管家基因(ITS,D1/D2,rpb1,rpb2,tef1),测序,以Bayesian法(MrBayes3.2.1)、最大似然法、邻接法(MEGA6.0软件)分别构建5个管家基因及D1/D2基因序列的系统发育树.应用MALDI-TOF-MS采集蛋白指纹图谱,在BrukerDaltonics数据库(BDAL)和CBS真菌保藏中心数据库信息的基础上,对20株菌进行聚类分型,构建聚类分型树状图. 结果:三种方法所得到的图在种间的层面上,均出现了a、b、c三个分支,而在种内的层面上,特别是a这一分支,均为Cryptococcus podzolicus,单一D1/D2区域所构建的系统发育树分化程度不大,各菌株间无明显的分类多样性,而MLST及MALDITOF MS所得到的树状图在种内均出现了明显的分类多样性及亲缘关系的差异性. 结论:MLST及MALDI-TOF MS均可作为隐球菌属中菌株分类鉴别中有效的辅助鉴别的分子生物学方法,相比于传统的生理生化试验及间隔区和核糖体大亚基序列,能更可靠地揭示隐球菌属中各菌种的种间及种内的遗传进化关系;相比于MLST技术较长的实验周期及某些基因扩增和测序的不确定性,MALDI-TOF-MS技术则更为快捷准确.
  • 摘要:目的:对化风丹进行血清药物化学研究,探讨其体内直接作用物质.方法:利用UHPLC-Q-TOF技术建立化风丹、药母、全方缺药母样品给药后大鼠含药血清指纹图谱,通过比较化风丹提取物、含药血清和空白血清的指纹图谱,确认灌胃后大鼠血中移行成分及其代谢产物.结果:化风丹给药后在正负模式下含药血清中共发现有26个药源性成分,其中6个为原型成分,20个为代谢产物.结论:血中移行成分及代谢产物可能为化风丹的体内直接作用物质,对其进行深入研究将为明确化风丹药效物质基础及其作用机理提供科学依据.
  • 摘要:目的:动脉粥样硬化 (atherosclerosis , AS )是一种常见的血管疾病,血管内皮受损为其起始环节。研究阿司匹林(Aspirin,1mM)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人主动脉内皮细胞(HAEC)损伤的保护作用并探讨其对p-Akt/eNOS信号系统的影响. 方法:体外传代培养HAECs,3-6代HAECs用于实验研究.实验分为空白对照组(Control)、模型组(Model)及阿司匹林组(Asp.).建立氧化低密度脂蛋白(ox-LDL,150mg/L,24h)诱导的HAECs细胞损伤模型,损伤率达30%左右.阿司匹林组细胞用阿司匹林预保护1h后,再给ox-LDL诱导损伤.HAECs不同给药处理后,采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测HAECs存活率、乳酸脱氢醇(LDH)外漏试剂盒分析细胞膜损伤情况,一氧化氮(NO)总量测定试剂盒(格里斯试剂法)测定细胞培养上清液中NO含量,蛋白印迹(Western blotting)法检测p-Akt、eNOS蛋白表达,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分析法测定p-Akt、eNOS基因的表达. 结果:与空白对照组比较,ox-LDL诱导HAECs损伤后细胞存活率显著降低,LDH外漏量明显增加,培养上清液中NO分泌与释放减少,p-Akt、eNOS的蛋白及mRNA表达均下调.阿司匹林预保护后细胞存活率升高,LDH外漏量明显降低,上清液中NO含量升高,p-Akt、eNOS的蛋白及mRNA表达均显著增加. 结论:阿司匹林对氧化低密度脂蛋白诱导的人主动脉内皮细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与其调控激活p-Akt/eNOS信号通路密切相关.
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