重组鼠干扰素α4在毕赤酵母中的表达与鉴定

摘要

目的 本研究旨在获得稳定、高表达的重组鼠干扰素α4.方法 通过密码子优化对天然的鼠干扰素α4进行优化,采用全基因合成方法合成了rmIFNα4,构建了pPIC9k-rmIFNα4质粒,DNA测序无误后转至毕赤酵母GS115中,经蛋白表达筛选获得了稳定、高表达的基因工程菌.经离子交换柱层析及疏水凝胶层析纯化可获得rmIFNα4试制品.结果 质谱和N端氨基酸测序结果显示试制品为糖基化的mIFNα4,其生物学活性为4.59×108,略高于标准品.结论 建立了重组鼠干扰素α4基因工程菌,纯化后的试制品表达量高、活性好,为规模化制备和进一步研究应用提供了坚实的基础.