结核分支杆菌Rv0901基因置换型打靶载体的构建

摘要

目的:对结核杆菌H37Rv的Rv0901基因进行体外扩增,构建基因打靶载体,利用基因打靶技术进行结核分支杆菌基因Rv0901功能的研究.方法:结核分支杆菌标准毒力株H37Rv体外培养,扩增目的基因,连接载体及目的片段,切除目的基因,筛选阳性克隆,酶切鉴定.结果:经酶切鉴定PCR产物及插入片段大小与预期值相符,鉴定证实PCR产物及插入片段为所需目的基因片段,成功切除靶片段.证实标记基因插入片段插入方向正确.结论:成功构建了用于结核分支杆菌基因打靶的置换型载体,为随后将进行的Rv0901基因敲除株的建立,Rv0901基因功能的研究奠定了基础.